比阿培南凍幹製劑及其製備方法

2023-05-20 10:22:46

專利名稱：比阿培南凍幹製劑及其製備方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域，具體來說涉及一種注射用比阿培南凍幹脂質體製劑， 同時本發明還涉及一種比阿培南凍幹脂質體製劑的製備方法。
背景技術：
比阿培南，化學名稱為(-)6-[ [ (4R, 5S，6S) _2_羧基_6_[ (IR) 羥乙基]_4_甲 基-7-氧代-1-氮雜雙環[3. 2. 0]庚-2-烯-3-基]硫]-6，7-二氫-5H-吡唑[l，2_a][l， 2,4]三唑-4-鐺內鹽。比阿培南為碳青黴稀類合成抗生素，是新型甲基碳青黴稀類 抗生素，本品是在2位硫上有雙環三唑的1 β -甲基碳青黴稀，具有廣泛的抗菌譜，對革蘭氏 陰性菌、革蘭氏陽性菌、需氧菌和厭氧菌均有良好的殺菌作用；抗革蘭氏陰性菌，特別是抗 綠膿桿菌的活性比亞胺培南強；對需氧性革蘭陽性菌的抗菌活性稍低於亞胺培南；抗厭氧 菌的活性與亞胺培南相同。對本品敏感的菌株有葡萄球菌屬、鏈球菌屬、肺炎球菌、腸球菌 屬(屎腸球菌除外)、莫拉氏菌屬、大腸菌、檸檬酸菌屬、克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬、沙雷氏菌 屬、變形桿菌屬、流感嗜血桿菌、綠膿桿菌、放線菌屬、消化鏈球菌屬、擬桿菌屬、普氏菌屬、 梭形桿菌屬等。比阿培南藥代動力學性質優良，毒性低，對腎脫氫肽酶(DHP-I)和β -內醯胺酶較 其他已上市的碳青酶烯類抗生素穩定，無需與DHP-I抑制劑合用(eg.亞胺培南/西司他 丁)；該藥可用於治療並發性腹腔內感染、下呼吸道感染(包括細菌性肺炎)以及並發性尿 道感染，除此之外，由於具有良好的外膜滲透性，增強了抗菌活性，同時對腎臟、中樞神經系 統的毒性較亞胺培南輕，不誘發癲癇發作，因而還可用於細菌性腦膜炎的治療；本品抑制綠 膿桿菌和厭氧菌的活性比亞胺培南(Imipenem)強2 4倍，抑制耐藥綠膿桿菌活性比美羅 培南(Meropenem)強4 8倍，對不動桿菌、厭氧菌等比頭孢他定有效。可以預見它將成為 治療重症感染的新的一線藥物。目前比阿培南上市銷售的劑型為無菌分裝製劑，是由無菌原料藥直接分裝獲得的 粉針劑，該劑型對原料和環境要求較高，成本較大；而比阿培南在水溶液中穩定性又較差， 不適合做成水針製劑。中國發明專利(CN10054^95C)公開了一種氨曲南脂質體凍幹製劑，是將氨曲南 用含有抗氧劑的中性磷脂、負電荷磷脂和膽固醇形成的脂質體包封得到的凍幹製劑。這種 脂質體凍幹製劑質量穩定，並且由於採用脂質體將氨曲南進行包封，毒副作用相對減少，藥 效作用也並未降低。但採用該技術方案，其粒徑位於50-300nm間，其粒徑分布範圍大，不均 勻。

發明內容
為解決現有技術中存在的不足，本發明提供了一種粒徑分布均勻、且穩定性較高 的比阿培南凍幹脂質體製劑。為實現上述目的，本發明的比阿培南凍幹脂質體製劑，以2500ml注射液計，含有如下組分比阿培南50-150份；中性磷脂 200 800份；負電荷磷脂 100 400份；膽固醇 150-650份；抗氧化劑0. 5 2份。此外，還可在上述組分基礎上，進一步包括糖100 300份；緩衝劑65 155份。作為上述方式的最優選組分比阿培南100份衝性磷脂500份；負電荷磷脂 275份；膽固醇 300份；抗氧化劑1份；糖250份；緩衝劑128份。進一步講，上述的緩衝劑可以選自甘氨酸、精氨酸、琥珀酸、枸櫞酸鈉、穀氨酸鈉、 碳酸氫鈉、無水碳酸鈉和氫氧化鈉中的一種或幾種；所述的糖可以選自蔗糖、海藻糖、乳糖、 麥芽糖、葡萄糖和綿白糖中的一種或幾種；所述的中性磷脂可以選自蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃 卵磷脂、雙硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、雙軟脂酸卵磷脂和雙肉豆蔻酸卵 磷脂中的一種或幾種；負電荷磷脂可以選自雙肉豆蔻酸磷脂醯甘油、雙月桂酸磷脂醯甘油、 雙硬脂酸磷脂醯甘油、雙肉豆蔻算磷脂酸、雙硬脂酸磷脂酸、雙月桂酸磷脂酸、雙軟脂酸磷 脂酸、雙油酸磷脂醯絲氨酸或雙亞油酸磷脂醯肌醇中的一種或幾種；所述的抗氧劑優選為 維生素E。此外，本發明同時提供了一種比阿培南脂質體凍幹製劑的製備方法，其特徵在於 包括如下步驟(1)製備空白脂質體用適量的氯仿或氯仿-甲醇混合溶劑將所述量的中性磷脂、 負電荷磷脂、膽固醇和抗氧劑溶解成溶液，減壓旋轉蒸發除去溶液中的溶劑，製成均勻乾燥 的脂質薄膜；加入0.01 0. 5mol/L有機酸溶液來水化脂質薄膜，水化溫度在30°C 58°C 之間，得空白脂質體懸浮液；(2)均化脂質體用高壓均質機製備脂質體，將上述空白脂質體懸浮液在115MPa 壓力下通過濾膜，均質2次，所得脂質體的平均粒徑為100 llOnm，粒徑分布窄，在60 230nm之間；(3)製備含比阿培南的脂質體將比阿培南溶於注射用水中，加熱到30°C 58°C， 用0. 1 2. Omol/L鹼水溶液調節空白脂質體懸浮液至鹼性，再將比阿培南溶液和鹼性空白 脂質體懸浮液混合均勻並在30°C 58°C下保溫40分鐘；(4)製備比阿培南脂質體混懸液按重量比配製濃度為3% 10%的糖水溶液並 加入緩衝劑調節PH值至5. 5 6. 5，緩衝劑的含量為1 % 3 %，得脂質體分散液，然後用 本分散液洗滌含比阿培南的脂質體，利用滲析過濾法使比阿培南脂質體溶液置換為PH值 5. 5 6. 5的脂質體分散液，使比阿培南脂質體分散在與人體生理環境類似的糖水溶液中， 得比阿培南脂質體混懸液；(5)定容、除菌、分裝、凍幹加注射用水定容，將比阿培南脂質體懸浮液用微孔濾 膜過濾除菌，分裝，冷凍乾燥得成品。進一步講，上述步驟O)中脂質體的平均粒徑控制在100 llOnm。上述的有機酸為檸檬酸、琥珀酸、枸櫞酸、乙酸、草酸、葡萄酸、乳糖酸、葡萄糖醛酸 或半乳糖醛酸中的一種或幾種；步驟(3)中所述的鹼可以選自磷酸鈉、磷酸鉀、碳酸鈣、碳 酸鈉、碳酸氫鈉或氫氧化鈉中的一種或幾種。
本發明的技術方案是根據脂質體的特性，選用一定比例的磷脂混合物製備包裹比 阿培南的空白脂質體，加入膽固醇和抗氧劑來增加脂質體比阿培南的穩定性，通過凍幹形 成的脂質體凍幹製劑，可以通過靜脈給藥，其有效的解決了質量穩定性的問題，並且由於採 用脂質體將比阿培南進行包封，同時毒副作用也相對減少，藥效作用也並未降低。本發明提 供的比阿培南脂質體製劑，進行急性毒性試驗、慢性毒性試驗、異常毒性試驗和熱源檢查， 均符合規定，安全性得到證明。本發明中優選了比阿培南的重量份數為50-150份，脂質體工業化的最大障礙是 其體內外不穩定性和包封率低，而脂質體的不穩定性又易導致藥物滲漏，從而導致藥物包 封率更低。比阿培南的含量過於大，不能完全被脂質體包裹，包封率低，粒徑大且分布寬，會 影響藥物的靶向性及穩定性，降低生物利用度，增加毒副作用。而載藥量的大小直接影響到 藥物的臨床應用劑量，載藥量愈大，愈易滿足臨床需要。如果比阿培南的含量過小，不能達 到臨床所需劑量，將導致藥效不佳，所以最終優選了比阿培南的重量份數為50-150份這個 範圍。本發明中加入了重量百分比為150-650份的膽固醇，目的是提高包封率和穩定 性。因為適當比例的膽固醇可以增加脂質雙分子膜中脂質分子排列的緊密程度，有助於減 輕加熱時脂質分子排列的緊密程度和脂質分子彎曲度的增加，從而起到穩定脂膜和減少滲 漏作用。更優選的重量百分比是300份，製備的脂質體包封率最高，粒徑分布窄且均勻，產 品穩定性好。本發明採用低溫水化，需要嚴格控制溫度在58°C以下，以防止比阿培南溶液和鹼 性空白脂質體懸浮液混合時藥物發生聚合，保證產品的質量。這主要是由於比阿培南雖不 易在水溶液中聚合，但受熱後會產生高分子聚合物，而這種雜質正是β -內醯胺類抗生素 發生變態反應的根源所在，因而將水化溫度限定為30°C 58°C。本發明在高壓均質製備脂質體時，選擇在115Mpa壓力下均質2次，主要由於均質 壓力過低，粒徑不能達到要求，壓力過高，脂質體發生聚集，均質次數過多，會使脂質體發生 滲漏，導致包封率下降。最終優選了在115Mpa壓力下均質2次，所得脂質體的平均粒徑為 100 llOnm，粒徑分布窄，在60 230nm之間，包封率在90%以上。本發明中選擇最終調節比阿培南脂質體混懸液的pH範圍為5. 5-6. 5，是由於比阿 培南的PH值為4. 5-5. 8，使藥物處於一個與自身pH值接近的環境中，更穩定。粒徑圖顯示，脂質體粒徑位於60 200nm之間，大部分脂質體的粒徑聚集在 90-120nm範圍內，平均粒徑為lOOnm，分布窄且均勻，且藥物包裹率可達90%以上，包裹率 高、成本低，適宜進行工業化生產。


下面結合附圖及具體實施方式
對本發明作更進一步詳細說明圖1為本發明的粒徑分布圖。
具體實施例方式實施例1比阿培南50g
大豆卵磷脂200g
雙硬脂酸磷脂醯甘油120g
膽固醇160g
維生素E500mg
枸櫞酸鈉3. 5g
無水碳酸鈉3g
蔗糖IOOg
甘氨酸60g
注射用水2500ml
製備工藝
(1)根據配方將大豆卵磷脂、雙 更脂酸磷脂醯甘油、膽固醇和維生素E溶於氯仿中
混合均勻，用旋轉蒸發儀將溶液中溶劑減壓除去，形成脂質薄膜，配製0. 5mol/L的枸櫞酸 溶液，用枸櫞酸溶液來水化脂質薄膜，水化溫度一般在45°C 55°C之間，得空白脂質體懸 浮液。(2)水化完全後，用高壓均粒機製備脂質體，並在高壓下通過SO-IOOnm孔徑的濾 膜，將脂質體的平均粒徑控制在100 llOnm，脂質體粒徑和均勻度可用多角度納米粒子分 析器來檢測。(3)將比阿培南溶於新鮮的注射用水中，加熱到45°C 55，用lmol/L的無水碳酸 鈉水溶液調節空白脂質體懸浮液至7. 2，將比阿培南溶液和鹼性空白脂質體懸浮液混合均 勻並在45°C 55°C下保溫40分鐘。(4)按重量比配製9%的蔗糖水溶液並加入1.0%的甘氨酸，得脂質體分散液，然 後用本分散液洗滌含比阿培南的脂質體，利用滲析過濾法使比阿培南脂質體溶液置換為PH 值5. 5 6. 5的脂質體分散液。(5)加注射用水定容，將比阿培南脂質體懸浮液用微孔濾膜過濾除菌，分裝，冷凍 乾燥得成品。實施例2比阿培南蛋黃卵磷脂雙肉豆蔻酸磷脂醯甘油膽固醇維生素E琥珀酸碳酸氫鈉蔗糖精氨酸2200g注射用水50000ml製備工藝參照實施例1各步驟進行操作，(1)中用0. 25mol/L的琥珀酸溶液來水 化脂質薄膜；( 水化完全後用高壓均粒機製備脂質體，並在高壓下通過SO-IOOnm孔徑的 濾膜，將脂質體的平均粒徑控制在100 IlOnm ； (3)中用0. 25mol/L的碳酸氫鈉水溶液調
2000g IOOOOg 5500g 6000g 20g 200g 160g 5000g節空白脂質體懸浮液至PH值為7.6 ;(4)中配製5%的蔗糖水溶液並加入1.0%的精氨酸， 作為脂質體分散液。實施例3
比阿培南250g
氫化大豆卵磷脂1200g
雙硬脂酸磷脂醯甘油630g
膽固醇900g
維生素E4g
枸櫞酸28g
無水碳酸鈉25g
葡萄糖600g
甘氨酸250g
注射用水5000ml
製備工藝參照實施例1各步驟進行操作，(1)中用0. 3mol/L的枸櫞酸來水化脂質薄膜；(2)水化完全後用高壓均粒機製備脂質體，並在高壓下通過SO-IOOnm孔徑的濾膜，
將脂質體的平均粒徑控制在100 IlOnm ； (3)中用0. 5mol/L的無水碳酸鈉水溶液調節空 白脂質體懸浮液至7. 4 ； (4)中配製5%的葡萄糖水溶液並加入2. 0%的甘氨酸，作為脂質體
分散液。實施例4比阿培南IOOOg雙硬脂酸卵磷脂6000g雙硬脂酸磷脂醯甘油3200g膽固醇5000g維生素EIOg枸櫞酸IOOg氫氧化鈉80g乳糖2000g甘氨酸800g注射用水20000ml製備工藝參照實施例1各步驟進行操作，(1)中用0. 5mol/L的枸櫞酸溶液來水 化脂質薄膜；( 水化完全後用高壓均粒機製備脂質體，並在高壓下通過SO-IOOnm孔徑的 濾膜，將脂質體的平均粒徑控制在100 IlOnm ； (3)中0. 25mol/L的氫氧化鈉水溶液調節 空白脂質體懸浮液至7. 5 ； (4)中配製10%的乳糖水溶液並加入的甘氨酸，作為脂質體 分散液。實施例5質量研究考察對以上四個實施例中製得的樣品進行質量檢測，並同時進行高溫40°C、相對溼度 75% 士5%條件下加速試驗6個月和溫度25°C、相對溼度60% 士 10%條件下長期試驗18 個月，得到數據結果如下加速質量檢測結果如下表所示
權利要求
1.一種比阿培南凍幹製劑，其特徵在於以2500ml注射液計，含有如下組分比阿培南50-150份；中性磷脂 200 800份；負電荷磷脂 100 400份；膽固醇 150-650份；抗氧化劑0.5 2份。
2.根據權利要求1所述的比阿培南凍幹製劑，其特徵在於包括以下組分糖100 300份；緩衝劑65 155份。
3.根據權利要求2所述的比阿培南凍幹製劑，其特徵在於包括以下組分比阿培南100份衝性磷脂500份；負電荷磷脂 275份；膽固醇 300份；抗氧化劑1份；糖250份；緩衝劑1 份。
4.根據權利要求3所述的比阿培南凍幹製劑，其特徵在於所述的緩衝劑可以選自甘 氨酸、精氨酸、琥珀酸、枸櫞酸鈉、穀氨酸鈉、碳酸氫鈉、無水碳酸鈉和氫氧化鈉中的一種或 幾種；所述的糖可以選自蔗糖、海藻糖、乳糖、麥芽糖、葡萄糖和綿白糖中的一種或幾種；所 述的中性磷脂可以選自蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、雙硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化 大豆卵磷脂、雙軟脂酸卵磷脂和雙肉豆蔻酸卵磷脂中的一種或幾種；負電荷磷脂可以選自 雙肉豆蔻酸磷脂醯甘油、雙月桂酸磷脂醯甘油、雙硬脂酸磷脂醯甘油、雙肉豆蔻算磷脂酸、 雙硬脂酸磷脂酸、雙月桂酸磷脂酸、雙軟脂酸磷脂酸、雙油酸磷脂醯絲氨酸或雙亞油酸磷脂 醯肌醇中的一種或幾種；所述的抗氧劑優選為維生素E。
5.根據權利要求1-4任一項所述的比阿培南凍幹製劑的製備方法，其特徵在於包括如 下步驟(1)製備空白脂質體用適量的氯仿或氯仿-甲醇混合溶劑將所述量的中性磷脂、負電 荷磷脂、膽固醇和抗氧劑溶解成溶液，減壓旋轉蒸發除去溶液中的溶劑，製成均勻乾燥的脂 質薄膜；加入0. 01 0. 5mol/L有機酸溶液來水化脂質薄膜，水化溫度在30°C 58°C之間， 得空白脂質體懸浮液；(2)均化脂質體用高壓均質機製備脂質體，將上述空白脂質體懸浮液在115MI^壓力 下通過濾膜，均質2次，所得脂質體的平均粒徑為100 llOnm，粒徑分布窄，在60 230nm 之間；(3)製備含比阿培南的脂質體將比阿培南溶於注射用水中，加熱到30°C 58°C，用 0. 1 2. Omol/L鹼水溶液調節空白脂質體懸浮液至鹼性，再將比阿培南溶液和鹼性空白脂 質體懸浮液混合均勻並在30°C 58°C下保溫40分鐘；(4)製備比阿培南脂質體混懸液按重量比配製濃度為3% 10%的糖水溶液並加入 緩衝劑調節PH值至5. 5 6. 5，緩衝劑的含量為 3 %，得脂質體分散液，然後用本分 散液洗滌含比阿培南的脂質體，利用滲析過濾法使比阿培南脂質體溶液置換為PH值5. 5 6. 5的脂質體分散液，使比阿培南脂質體分散在與人體生理環境類似的糖水溶液中，得比阿 培南脂質體混懸液；(5)定容、除菌、分裝、凍幹加注射用水定容，將比阿培南脂質體懸浮液用微孔濾膜過 濾除菌，分裝，冷凍乾燥得成品。
6.根據權利要求5所述的比阿培南凍幹製劑的製備方法，其特徵在於步驟O)中脂 質體的平均粒徑控制在100 llOnm。
7.根據權利要求5所述的比阿培南凍幹製劑的製備方法，其特徵在於所述的有機酸 為檸檬酸、琥珀酸、枸櫞酸、乙酸、草酸、葡萄酸、乳糖酸、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸中的一種或幾種；步驟(3)中所述的鹼可以選自磷酸鈉、磷酸鉀、碳酸鈣、碳酸鈉、碳酸氫鈉或氫氧化 鈉中的一種或幾種。
全文摘要
本發明屬於醫藥技術領域，具體來說涉及一種注射用比阿培南凍幹脂質體製劑及其製備方法。該製劑包括比阿培南、中性磷脂、負電荷磷脂、膽固醇、抗氧化劑，使其平均粒徑為100nm，分布窄且均勻，且藥物包裹率可達90％以上，包裹率高、成本低，適宜進行工業化生產。
文檔編號A61K9/19GK102068413SQ20101062131
公開日2011年5月25日 申請日期2010年12月31日 優先權日2010年12月31日
發明者姚榮章, 杜鵑, 王燕燕, 董朝蓬, 郭慧娟, 馬慧麗 申請人:石藥集團中諾藥業(石家莊)有限公司