一種斑馬魚胚胎急性毒性實驗的試劑盒的製作方法

2023-05-21 06:34:06

本實用新型涉及斑馬魚胚胎急性毒性毒性檢測
技術領域：
，具體地涉及一種斑馬魚胚胎急性毒性實驗的試劑盒。
背景技術：
：斑馬魚是一種常見的熱帶魚。斑馬魚體型纖細，成體長3-4cm，對水質要求不高。孵出後約3個月達到性成熟，成熟魚每隔幾天可產卵一次。卵子體外受精，體外發育，胚胎發育同步且速度快，胚體透明。發育溫度要求在25～31℃之間。斑馬魚由於個體小，養殖花費少，能大規模繁育，且具許多優點，吸引了眾多研究者的注意。經過30多年的研究應用和系統發展，已有約20個斑馬魚品系，斑馬魚基因資料庫裡有相關的資料可供查詢和下載，方便了研究。斑馬魚由於養殖方便、繁殖周期短、產卵量大、胚胎體外受精、體外發育、胚體透明，已成為生命科學研究的新寵。全球範圍內有超過1500個斑馬魚實驗室。利用斑馬魚，可以研究生命科學的基礎問題，揭示胚胎和組織器官發育的分子機理；可以構建人類的各種疾病和腫瘤模型，建立藥物篩選和治療的研究平臺；可以建立毒理學和水產育種學模型，研究和解決環境科學和農業科學的重大問題。斑馬魚的基因與人類基因相似度達到87％，這意味著在它身上得出的水質監測結果，多數情況下都適用於人類。因此對於某些毒性物質的反應也能更好與對人體的毒性反應類似，以試驗樣品濃度和相應濃度下斑馬魚胚胎的死亡率或畸形率為基礎建立正相關關係，並根據未添加試驗樣品的斑馬魚胚胎為參考，通過恆溫培養來快速的測出樣品的急性毒性，因此如果能結合此原理快速測定物質毒性，直觀的表徵方便快速的判斷，進行安全性評估，建立早期、靈敏及高通量篩選的急性毒預防系統，為進一步研發提供基礎數據和實驗依據。技術實現要素：本實用新型的目的是提供一種斑馬魚胚胎急性毒性實驗的試劑盒，設計科學、結果準確、使用方便，檢測效率高。本實用新型的技術方案為：一種斑馬魚胚胎急性毒性實驗的的試劑盒，試劑盒主要包括盒體和遮光蓋，所述的盒體內設置有胚胎培養卡槽、測試瓶卡槽、吸管、營養供給卡槽，所述的胚胎培養卡槽內置有胚胎瓶和培養液瓶，所述的胚胎瓶內盛放斑馬魚胚胎，所述的測試瓶卡槽內放置有多個測試瓶，測試瓶內裝有待測溶劑及對比實驗溶劑，所述的測試瓶包括24孔培養液瓶和培養皿，所述的培養液瓶和培養皿之間設有吸管。進一步的，所述的試劑盒的製備方法主要包括以下步驟：a.挑選適宜的斑馬魚進行培養，收集斑馬魚胚胎，製成胚胎瓶；b.製備胚胎培養液；c.製備試劑盒盒體，並將胚胎培養卡槽、測試瓶卡槽、吸管、營養供給卡槽進行生產組裝，即得到所述的斑馬魚胚胎急性毒性實驗的的試劑盒。進一步的，所述的遮光蓋通過旋轉合頁與盒體連接，對應的另一邊設置有卡扣，打開或關閉試劑盒的遮光蓋，遮光蓋的外表層膠粘有玻璃遮光膜，可以根據防止陽光或者其他光線對試劑盒的使用過程產生影響。進一步的，所述的營養供給卡槽設置於培養皿的下方，內置有用於斑馬魚培養過程中的餌料，根據不同的斑馬魚月齡需要來添加不同類別的餌料。進一步的，所述的培養皿下方是雙層結構，下層由水浴保溫材料製成，可以根據需要加入一定的溫度的水來進行水浴保溫培養。進一步的，所述的吸管為巴氏吸管。一種斑馬魚胚胎急性毒性實驗的的試劑盒的使用方法為：在25-30℃的環境下，將胚胎瓶中的斑馬魚胚胎用胚胎培養液清洗兩遍，移取胚胎至加有胚胎培養液的培養皿中，每孔5-10胚胎，將待測溶劑及對比實驗溶劑分別裝入24孔板的測試瓶中，打開吸管，將待測溶劑及對比實驗溶劑分別吸入對應的胚胎培養皿中，將培養皿放入恆溫培養箱內進行培養，然後在12-24小時觀察記錄斑馬魚胚胎發育的畸形率和死亡率，通過判斷和對比來確定待測溶劑的急性毒性。與現有技術相比，本實用新型的試劑盒的有益效果體現在：該試劑盒是將優選的斑馬魚健康胚胎直接進行急性毒性檢測，過程簡單，易操作，不易受外界其他因素影響，提高定性檢測效率，壓縮檢測數據，節省檢測時間，應用範圍廣，待測物質不僅僅局限於水質等其他液體，固體或不同狀態的物質也可以使用。附圖說明圖1是本發明的一種斑馬魚胚胎急性毒性實驗的的試劑盒的外部結構示意圖；圖2是本發明的一種斑馬魚胚胎急性毒性實驗的的試劑盒的內部結構示意圖；其中，1-盒體，2-遮光蓋，3-培養液瓶，4-胚胎瓶，5-培養皿，24孔培養液瓶6，7-營養供給卡槽，8-測試瓶卡槽，9-吸管。具體實施方式為便於對本實用新型的理解，下面將結合具體實施例為例做進一步的解釋說明，實施例並不構成對本實用新型實施例的限定。實施例1：一種斑馬魚胚胎急性毒性實驗的的試劑盒，試劑盒主要包括盒體1和遮光蓋2，盒體1內設置有胚胎培養卡槽、測試瓶卡槽8、吸管9、營養供給卡槽7，胚胎培養卡槽內置有胚胎瓶4和培養液瓶3，胚胎瓶4內盛放斑馬魚胚胎，測試瓶卡槽8內放置有多個測試瓶，測試瓶內裝有待測溶劑及對比實驗溶劑，測試瓶包括24孔培養液瓶6和培養皿5，培養液瓶6和培養皿5之間設有吸管9。試劑盒的製備方法主要包括以下步驟：a.挑選適宜的斑馬魚進行培養，收集斑馬魚胚胎，製成胚胎瓶4；b.製備胚胎培養液；c.製備試劑盒盒體1，遮光蓋2通過旋轉合頁與盒體1連接，對應的另一邊設置有卡扣，打開或關閉試劑盒的遮光蓋2，遮光蓋2的外表層膠粘有玻璃遮光膜，可以根據防止陽光或者其他光線對試劑盒的使用過程產生影響；營養供給卡槽7設置於培養皿5的下方，內置有用於斑馬魚培養過程中的餌料，根據不同的斑馬魚月齡需要來添加不同類別的餌料；培養皿5下方是雙層結構，下層由水浴保溫材料製成，可以根據需要加入一定的溫度的水來進行水浴保溫培養；吸管9為巴氏吸管；將胚胎培養卡槽、測試瓶卡槽8、吸管9、營養供給卡槽7進行生產組裝，即得到所述的斑馬魚胚胎急性毒性實驗的的試劑盒。一種斑馬魚胚胎急性毒性實驗的的試劑盒的使用方法為：在28.5℃的環境下，將胚胎瓶4中的斑馬魚胚胎用胚胎培養液清洗兩遍，移取胚胎至加有胚胎培養液的培養皿5中，每孔10胚胎，將待測溶劑及對比實驗溶劑分別裝入24孔板的測試瓶中，打開吸管9，將待測溶劑及對比實驗溶劑分別吸入對應的胚胎培養皿5中，將培養皿5放入恆溫培養箱內進行培養，然後在12小時觀察記錄斑馬魚胚胎發育的畸形率和死亡率，通過判斷和對比來確定待測溶劑的急性毒性。實驗例：用實施例1的製備的試劑盒來測試苯並黃素的急性毒性。每個試劑盒分成兩組：實驗組和對照組，其中每組10孔胚胎。苯並黃素母液：以助溶劑DMSO溶解苯並黃素粉末至澄清，用10ml注射器、0.22μm濾器單獨過濾兩次後，分裝至已滅菌的5ml的Eppendorf管，標記母液的名稱、濃度、配製時間等信息，儲存，備用。對照組使用的為所述的胚胎培養液。苯並黃素工作液：用胚胎培養液配製不同濃度的工作液，要求工作液內所含DMSO最終濃度為0.1％(V/V)。苯並黃素工作液進行試驗濃度為：100μM，震蕩搖勻，現配現用。在12h後進行觀察，測試的數據如下：分組胚胎數量死亡胚胎數量畸形胚胎數量死亡率畸形率備註實驗組100523452％34％對照組100121％2％結果發現：本實用新型的試劑盒靈敏度好，死亡率為52％，畸形率為34％，可快速的檢測出毒性。最後應說明的是：以上實施例僅用以說明本實用新型的技術方案，而非對其限制；儘管參照前述實施例對本實用新型進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特徵進行等同替換；而這些修改或者替換，並不使相應技術方案的本質脫離本實用新型實施例技術方案的精神和範圍。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp