靜態恆磁場在延長原代細胞維持時間中的應用的製作方法
2023-05-20 23:02:06 1
專利名稱：靜態恆磁場在延長原代細胞維持時間中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及靜態恆磁場在延長原代細胞維持時間中的應用，屬於細胞培養領域。
背景技術：
細胞體外培養是生物、醫學等多領域常用的研究工具，其中二倍體細胞、尤其原代 細胞的培養在相關領域中佔有重要位置。目前，多數原代細胞傳代培養困難，甚至不能傳代 (人胚肺體外可傳代50 60代)，一般體外培養的原代細胞維持時間為10 20d，再久則 細胞衰老，失去應用價值。因此，人們急需一種能夠延長細胞維持時間的方法。現有技術中，為了延長原代細胞存活時間，相關技術人員多採取降低培養溫度、降 低培養液中的營養成分(降低營養成分的培養液稱為維持液，比如含2%新生牛血清的MEM 培養基)等方法，未見有用靜態恆磁場延長原代細胞維持時間的報導。
發明內容
針對上述現有技術，為解決體外培養的原代細胞維持時間短的缺陷，本發明提供 了一種解決方案，即利用磁場來延長原代細胞的維持時間，本發明的方法可使細胞維持時 間超過30d，且細胞長勢旺盛，甚至沿立壁體生長。應用的方式為將細胞置於磁場中培養，磁場設置於貼近細胞的外壁上。具體為對於採用細胞培養板培養的細胞，則將磁場設置於細胞培養板的底部； 對於採用細胞培養瓶的細胞，則將磁場設置於細胞培養瓶的底部；對於採用轉瓶培養的細 胞，則將磁場設置於轉瓶外壁上(不妨礙轉動)。所述磁場為靜態恆磁場，磁力範圍為500 3000高斯。所述原代細胞為來源於包括人類的所有動物的組織細胞，比如肝細胞、腎細胞、晶 體細胞、睪丸細胞等。注意本發明的方法不適用於腫瘤細胞，因為腫瘤細胞往往表現為生長方式的改變。本發明採用在細胞培養環境中添加磁場的方式延長體外原代細胞的維持時間，可 使細胞維持時間超過30d，且細胞長勢旺盛，效果非常好。
圖1為人胚肺細胞的培養圖(200X)。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的說明。實施例1人胚肺細胞的培養1 原代人胚肺細胞的製備無菌條件下取胚胎肺組織，超淨臺中(局部百級)用 剪刀剪碎，加胰酶在37°C條件下消化20min，棄胰酶，加細胞培養液懸浮吹打，然後將懸浮液過100目紗網去掉組織塊，將濾液調整細胞濃度為105/ml，接種於細胞培養瓶中，置 37°C、5%二氧化碳、95%空氣環境中靜止培養，3日後長成單層，為原代人胚肺細胞。2:人胚肺細胞的傳代將已經長成單層的人胚肺細胞用平衡鹽水洗3次，去掉未貼壁細胞和組織塊，加 0.125%胰酶在室溫條件下消化3min，棄胰酶，加細胞培養液吹打懸浮，然後以1 2比例分 瓶傳代，置37°C、5% 二氧化碳、95%空氣環境中靜止培養，3日後長成單層，為次代人胚肺 細胞。3:人胚肺細胞的維持將已經長成單層的次代人胚肺細胞(4瓶)棄培養液，加含2%新生牛血清的MEM 加以維持，2瓶置入37°C、5%二氧化碳、95%空氣的靜態磁場(800高斯)的環境中靜止培 養，同時2瓶置無磁環境作為對照組(餘條件相同)，20d時觀察細胞狀況(中間未更換或添 加新的培養液)，發現所有細胞培養液已變為檸檬黃色，表明細胞處於酸性環境，對照組2 瓶細胞變得稀疏、脹大，出現遮光性顆粒，而磁場中2瓶細胞形態良好，繼續維持培養至35d 時終止試驗，觀察培養液呈黃色(PH呈酸性)，顯微鏡下觀察細胞呈纖維狀，平鋪排列呈致 密單層，未見明顯遮光性顆粒，無脫落，見圖1。表明靜態磁場環境延長了細胞存活時間。
權利要求
靜態恆磁場在延長原代細胞維持時間中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，應用方式為將細胞置於磁場中培養，磁 場設置於貼近細胞的外壁上。
3.根據權利要求2所述的應用，其特徵在於對於採用細胞培養板培養的細胞，則將磁 場設置於細胞培養板的底部；對於採用細胞培養瓶的細胞，則將磁場設置於細胞培養瓶的 底部；對於採用轉瓶培養的細胞，則將磁場設置於轉瓶外壁上。
4.根據權利要求1或2或3所述的應用，其特徵在於所述磁場為永久磁場，磁力強度 為500 3000高斯。
5.根據權利要求1或2或3所述的應用，其特徵在於所述原代細胞為貼壁二倍體細胞。
6.根據權利要求5所述的應用，其特徵在於所述原代細胞為人胚肺細胞。
全文摘要
本發明公開了靜態恆磁場在延長原代細胞維持時間中的應用，應用的方式為將細胞置於磁場中培養，磁場設置於貼近細胞的外壁上。具體為對於採用細胞培養板培養的細胞，則將磁場設置於細胞培養板的底部；對於採用細胞培養瓶的細胞，則將磁場設置於細胞培養瓶的底部；對於採用轉瓶培養的細胞，則將磁場設置於轉瓶外壁上。所述磁場為靜態恆磁場，磁力範圍為500～3000高斯。所述原代細胞為來源於包括人類的所有動物的組織細胞，比如肝細胞、腎細胞、晶體細胞、睪丸細胞等。本發明採用在細胞培養環境中添加磁場的方式延長體外原代細胞的維持時間，可使細胞維持時間超過30d，且細胞長勢旺盛，效果非常好。
文檔編號C12N13/00GK101892219SQ201010226998
公開日2010年11月24日 申請日期2010年7月15日 優先權日2010年7月15日
發明者孟紅, 張子毅 申請人:孟紅;張子毅