一種奧沙利鉑脂質體及其製備方法和用途的製作方法

2023-05-25 05:25:41 2

專利名稱：一種奧沙利鉑脂質體及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥物脂質體領域，尤其涉及一種奧沙利鉬脂質體及其製備方法和用 途。
背景技術：
奧沙利鉬是第三代鉬類抗癌藥，由瑞士Debi opharm公司研究開發，法國賽諾菲公 司生產銷售，1996年10月在法國率先上市。2004年FDA批准注射用奧沙利鉬與5-氟脲 嘧啶和亞葉酸聯合用於進展期結腸直腸癌的一線治療。現已上市的奧沙利鉬製劑有水針 和凍乾粉針。奧沙利鉬對中晚期結腸直腸癌療效顯著，但隨著奧沙利鉬在臨床上的大量應 用，其不良反應也被不斷發現和報告。神經毒性是奧沙利鉬最常見的劑量限制性毒性，約 85% -95%的患者在使用後發生急性短暫的神經毒性，在劑量為130mg/m2時比85mg/m2更 常發生。使用奧沙利鉬的劑量累積到780-850mg/m2後，約10% -15%患者逐步發展為誘發 的累積性神經毒性。此外，胃腸道反應、骨髓抑制也是奧沙利鉬常見的不良反應。脂質體是一種生物相容性好的給藥系統，作為抗腫瘤藥物的輸送載體，可提高藥 物的腫瘤靶向性，降低藥物毒性，因此受到人們的關注。將奧沙利鉬製成脂質體輸送至體 內，可將藥物更好的靶向至腫瘤部位，提高藥物的抗腫瘤作用，降低其毒性反應。奧沙利鉬為水溶性藥物，製備成脂質體之後，包封率不高且容易發生滲漏。既要保 持脂質體較高的包封率，又不能因此降低脂質體中的藥物濃度，這是製備奧沙利鉬脂質體 的一個難點。普通脂質體進入體循環之後，會很快的被巨噬細胞識別併吞噬，以至於不能到達 腫瘤組織。製備成長循環脂質體可避免這種吞噬，有助於實現藥物的腫瘤靶向。目前，制 備長循環脂質體的一個常用技術，是在脂質體的製備過程中加入PEG化磷脂(如聚乙二醇 2000- 二硬脂醯磷脂醯乙醇胺，簡稱PEG2000-DSPE)，以使脂質體具備長循環的功效。中國專利 200310124776. 6、200710025130. 0 和 W0/2007/099377 中公開了 奧沙利鉬長循環脂質體，它們都採用PEG2000-DSPE使脂質體具有長循環特性。其中 WCV2007/099377用反相膠束法提高奧沙利鉬脂質體的包封率先將陽離子型藥物奧沙利 鉬與帶負電荷的酸性磷脂——二棕櫚醯磷脂醯甘油(DPPG)製成共軛物反相膠束，再與空白 脂質體混合孵育，通過膜融合，將藥物_磷脂共軛物反相膠束包封於脂質體內，減少藥物向 外水相滲漏。該專利所採用的酸性磷脂為合成磷脂，價格昂貴；製得的藥物_磷脂共軛物反 相膠束在50°C以上才能保持穩定，低於50°C會迅速產生大量沉澱；反相膠束與空白脂質體 的膜融合過程條件苛刻，二者混合後極易產生沉澱。整個工藝流程的技術要求較高，普及性 不強。此外，楊美燕的博士論文《奧沙利鉬長循環熱敏脂質體研究》採用凍融循環工藝試圖 提高脂質體的包封率，但結果僅將包封率提高至30%，未能很好的解決包封率低的問題。因此，本領域迫切需要提供一種價廉、工藝簡單的製備奧沙利鉬脂質體的方法，並 且要求所獲得的脂質體包封率高、藥物濃度高。

發明內容
本發明旨在提供一種奧沙利鉬脂質體。本發明的另一個目的是提供所述奧沙利鉬脂質體的製備方法。本發明的再一個目的是提供所述奧沙利鉬脂質體的用途。本發明的第四個目的是提供一種含有所述奧沙利鉬脂質體的藥物組合物。在本發明的第一方面，提供了一種奧沙利鉬脂質體，所述奧沙利鉬脂質體含有奧 沙利鉬，磷脂，和膽固醇；所述磷脂以其總重量計，其中磷脂醯膽鹼(或稱卵磷脂，phosphatidylcholine, 簡稱PC)的重量百分含量為75-90%，磷脂醯甘油(phosphatidyl glycerols，簡稱PG)和 磷脂酸(phosphatidic acid，簡稱PA)的重量百分含量之和為10-25% ；奧沙利鉬和磷脂的重量比為1 3-20，膽固醇和磷脂的重量比為1 2-10。在另一優選例中，以所述脂質體的總體積計，奧沙利鉬的濃度為2_5mg/ml。在另一優選例中，所述奧沙利鉬脂質體的粒徑為120-140nm。在另一優選例中，奧沙利鉬和磷脂的重量比為1 3-20。在另一優選例中，所述奧沙利鉬脂質體還含有聚乙二醇2000-二硬脂醯磷脂醯乙 醇胺(PEG2000-DSPE)；所述聚乙二醇2000-二硬脂醯磷脂醯乙醇胺佔總脂質體的摩爾分數 為 5-9%。在另一優選例中，所述奧沙利鉬脂質體的粒徑為130-150nm。在另一優選例中，所述的磷脂是天然蛋黃磷脂。在另一優選例中，所述奧沙利鉬脂質體的包封率為85-99% ；較佳地，包封率為 91-95%。本發明的第二方面，提供了一種如上所述的本發明提供的奧沙利鉬脂質體的製備 方法，所述方法包括步驟(1)將膽固醇、磷脂和有機溶劑混合，得到有機相；(2)將奧沙利鉬和緩衝液混合，得到水相；(3)將步驟⑴和⑵得到的有機相和水相混合，得到反相膠束；和(4)除去有機溶劑得到如上所述的本發明提供的奧沙利鉬脂質體；所述磷脂以其總重量計，其中磷脂醯膽鹼(或稱卵磷脂，phosphatidylcholine, 簡稱PC)的重量百分含量為75-90%，磷脂醯甘油(phosphatidyl glycerols，簡稱PG)和 磷脂酸(phosphatidic acid，簡稱PA)的重量百分含量之和為10-25% ；奧沙利鉬和磷脂的重量比為1 3-20，膽固醇和磷脂的重量比為1 2-10 ；所述的有機溶劑選自氯仿、乙醚、或其混合。在另一優選例中，所述緩衝液pH5. 0-7. 4。在另一優選例中，所述緩衝液選自磷酸鹽緩衝液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩衝液、或醋 酸_醋酸鈉緩衝液；酸根離子的總濃度為0. 05-1M。在另一優選例中，所述有機溶劑是氯仿和乙醚的混合物，兩者的體積比為 1:4-4:1。在另一優選例中，所述有機相和水相的體積比為3-10 1。在本發明的第三方面，提供了一種如上所述的本發明提供的奧沙利鉬脂質體的用
5途，用於製備治療癌症的藥物。在本發明的第四方面，提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物中含有如上所 述的本發明提供的奧沙利鉬脂質體和藥學上可接受的載體。在另一優選例中，所述的藥物組合物是注射製劑。據此，本發明提供了一種價廉、工藝簡單的製備奧沙利鉬脂質體的方法，並且要求 所獲得的脂質體包封率高、藥物濃度高。


圖1顯示了實施例11和實施例15得到的奧沙利鉬脂質體III和長循環奧沙利鉬 脂質體III的體外釋放情況。
具體實施例方式發明人經過廣泛而深入的研究，意外地發現了一種與奧沙利鉬有高度親合力的、 價廉易得的磷脂，通過所述磷脂和奧沙利鉬之間的相互作用，可以得到穩定的反相膠束組 合物，該組合物在0-40°C範圍內可穩定存在至少30min，便於進一步處理；同時，在製得的 反相膠束組合物的基礎上，採用簡單易控的工藝流程，反相膠束自發的轉變為脂質體，避免 了條件苛刻的膜融合過程，製備得到穩定的、具備較高濃度、高包封率的奧沙利鉬脂質體。具體地，所述磷脂中，以該磷脂的總重量計，必需含有重量百分比為75-90% 的PC，同時，該磷脂中，以該磷脂的總重量計，其中的PG和PA的重量百分比之和必須在 10-25%。所述的磷脂優選天然蛋黃磷脂。如本文所用，「奧沙利鉬」的結構如式I所示 如本文所用，「天然蛋黃磷脂」是指一種從蛋黃中分離得到的混合物，其中含有磷 脂醯膽鹼(或稱卵磷脂，PC)、磷脂醯甘油(PG)和磷脂酸(PA)，可以使用本領域常規的方法 製備得到，例如但不限於，超臨界二氧化碳從蛋黃中提取；也可以通過商業渠道獲得，例如 但不限於，Lipoid公司，Degussa公司等。優選純度為75_90%的天然蛋黃磷脂，其中PG和 PA的重量百分含量之和為10% -25%。如本文所用，「天然蛋黃磷脂的純度」是指以其總重量計，其中PC的重量百分含量， 這也是本領域所常用的。在本領域中，如果不指明純度，一般表示天然蛋黃磷脂的純度是 99%或以上。如本文所用，磷脂醯膽鹼(或稱卵磷脂，phosphatidylcholine,簡稱PC)的結構 如式II磷脂醯甘油(phosphatidyl glycerols，簡稱PG)的結構如式III所示，磷脂酸 (phosphatidic acid，簡稱PA)的結構如式IV所示
如本文所用，「磷脂(phospholipid，PL)」是指具有由磷酸相連的取代基 團(含氨鹼或醇類)構成的親水頭(hydrophilic head)和由脂肪酸鏈構成的疏水尾 (hydrophobic tail)的物質。可以含有一種或一種以上所述結構的物質。優選甘油磷脂 (phosphoglyceride)0奧沙利鉬脂質體本發明提供的奧沙利鉬脂質體含有奧沙利鉬，磷脂，和膽固醇；所述磷脂以其總重 量計，其中PC的重量百分含量為75-90%，PG和PA的重量百分含量之和為10-25% ；奧沙 利鉬和磷脂的重量比為1 3-20，膽固醇和磷脂的重量比為1 2-10。本發明提供的奧沙 利鉬脂質體中奧沙利鉬的濃度為2-5mg/ml ；粒徑為120-140nm。本發明還提供一種可稱為長循環奧沙利鉬脂質體的奧沙利鉬脂質體，所述脂質體 中還含有PEG化磷脂，優選PEG2000-DSPE ；所述PEG2000-DSPE佔總脂質體的摩爾分數為 5-9% ；所述長循環奧沙利鉬脂質體的粒徑為130-150nm。本發明提供的奧沙利鉬脂質體或長循環奧沙利鉬脂質體的包封率為85-99% ；較 佳地，為91-95%。如本文所用，「包封率(encapsulation rate ；entrapment efficiency)，，是指月旨質 體能包裹活性物質(或稱藥物)的程度，脂質體是藥物載體，包封於其中的藥量與脂質體系 統(或稱系統，或稱脂質體)中總藥量之百分比稱為包封率。可以通過本領域熟知的方法 進行測定，例如但不限於，凝膠柱層析、離心超濾法、和透析法等，通過分離和測定未包封藥 物的量，並測定脂質體系統中總藥量，通過如下公式計算包封率。 0 ·，一系統中包封與未包封的總藥量一液體介質中未包封的藥量100 /
系統中包封與未包封的總藥量Χ 0製備方法本發明提供奧沙利鉬脂質體的製備方法，是在製備得到反相膠束組合物的基礎 上，通過去除其中的有機溶劑，使反相膠束自發轉變為脂質體。反相膠束的製備方法包括以下步驟(1)將膽固醇、磷脂和有機溶劑混合，得到有機相；
(2)將奧沙利鉬和緩衝液混合，得到水相；和(3)將步驟⑴和⑵得到的有機相和水相混合，得到反相膠束。奧沙利鉬和磷脂的重量比為1 3-20 ；膽固醇和磷脂的重量比為1 2-10; 所述的有機溶劑選自氯仿、乙醚、或其混合；氯仿和乙醚的混合物中兩者的體積比為 1:4-4:1。所述緩衝液ρΗ5. 0-7. 4，濃度為0. 05-1Μ。所述緩衝液選自磷酸鹽緩衝液、檸檬 酸_檸檬酸鈉緩衝液、或醋酸_醋酸鈉緩衝液。所述有機相和水相的體積比為3-10 1。可以使用本領域常規的方法除去反相膠束中的有機溶劑，例如但不限於，減壓蒸 發、常壓蒸發；然後通過本領域熟知的方法擠出一定粒徑的脂質體，並經過常規手段(如透 析)去除游離藥物得到本發明提供的奧沙利鉬脂質體。如果在轉變反相膠束的步驟(1)中 還加入PEG化磷脂，便能得到長循環奧沙利鉬脂質體。用途本發明提供的奧沙利鉬脂質體可用於治療癌症，可以將有效量的本發明提供的奧 沙利鉬脂質體和藥學上可接受的載體混合得到藥物組合物。如本文所用，術語「含有」或「包括」包括了「包含」、「基本上由......構成」、和
「由......構成」。如本文所用，術語「基本上由......構成」指在組合物中，除了含有必要成分或必
要組份之外，還可含有少量的且不影響有效成分的次要成分和/或雜質。例如，可以含有甜 味劑以改善口味、抗氧化劑以防止氧化，以及其他本領域常用的添加劑。如本文所用，術語「有效量」是指可對人和/或動物產生功能或活性的且可被人和 /或動物所接受的量。如本文所用，術語「藥學上可接受的載體」指用於治療劑給藥的載體，包括各種 賦形劑和稀釋劑。該術語指這樣一些藥劑載體它們本身並不是必要的活性成分，且施 用後沒有過分的毒性。合適的載體是本領域普通技術人員所熟知的。在Remington』 s Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co.，N. J. 1991)中可找到關於藥學上可接受的賦形 劑的充分討論。在組合物中藥學上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另 外，這些載體中還可能存在輔助性的物質，如填充劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、泡騰劑、潤溼 劑或乳化劑、矯味劑、PH緩衝物質等。本發明優選的藥物組合物是注射劑。使用藥物組合物時，是將安全有效量的奧 沙利鉬脂質體或長循環奧沙利鉬脂質體施用於哺乳動物，其中該安全有效量通常至少約 100mg/m2,而且在大多數情況下不超過約400mg/m2，較佳地該劑量是約100mg/m2-350mg/m2。當然，具體劑量還應考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫師技能範圍之內 的。本發明提到的上述特徵，或實施例提到的特徵可以任意組合。本案說明書所揭示 的所有特徵可與任何組合物形式並用，說明書中所揭示的各個特徵，可以任何可提供相同、 均等或相似目的的替代性特徵取代。因此除有特別說明，所揭示的特徵僅為均等或相似特 徵的一般性例子。本發明的主要優點在於1、本發明提供的奧沙利鉬脂質體或長循環奧沙利鉬脂質體包封率高，載藥量高。2、本發明提供了一種簡便、價廉的奧沙利鉬脂質體或長循環奧沙利鉬脂質體的制 備方法。下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明 而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條 件或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分數、比率、比例、或份數按
重量計。本發明中的重量體積百分比中的單位是本領域技術人員所熟知的，例如是指在 100毫升的溶液中溶質的重量。除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意 義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用於本發明方法中。文 中所述的較佳實施方法與材料僅作示範之用。下述實例中，奧沙利鉬購自Lipoid公司或Degussa公司，膽固醇購自國藥集團化 學試劑有限公司，PEG2000-DSPE購自Lipoid公司；下述實例中，天然蛋黃磷脂和天然大豆磷脂的純度都是以其總重量計，其中PC的
重量百分含量；下述實例中，反相膠束的穩定性檢測方法為水相和有機相的混合物經冰 浴超聲後，觀察是否形成澄清的單相分散體系或分散均勻的帶有乳光的分散體系 (Francis Szoka, JR. , Demetrios Papahadj opoulos, Procedure for preparation of liposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse-phase evaporation, Proc. Natl. Acad. Sci. USA,75(1978)，4194-4198)；下述實例中，包封率的測定方法為透析法、離心超濾法下述實例中，室溫是25 °C實施例1製備穩定的反相膠束I 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為90% )、膽固醇，置於茄型瓶中，加入 IOml氯仿/乙醚混合溶劑(4:1，ν/ν)使其溶解；稱取4. Omg奧沙利鉬，用醋酸-醋酸鈉 緩衝液(0.05M，pH5.0)lml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超聲，形 成穩定的反相膠束I，室溫下穩定存在30min以上。實施例2製備穩定的反相膠束II 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為75% )、膽固醇，置於茄型瓶中，加入 3ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取8. Omg奧沙利鉬，用檸檬酸-檸檬酸 鈉緩衝液(1Μ，ρΗ6. 2) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超聲，形 成穩定的反相膠束II，室溫下穩定存在30min以上。實施例3製備穩定的反相膠束III 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為80% )、膽固醇，置於茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取6. Omg奧沙利鉬，用磷酸鹽緩衝液 (0. 05Μ，ρΗ6. 5) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超聲，形成穩定 的反相膠束III，室溫下穩定存在30min以上。實施例4製備穩定的反相膠束IV 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為80%)、膽固醇、PEG2000-DSPE，置於茄 型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取6. Omg奧沙利鉬，用磷 酸鹽緩衝液(0. 05Μ, ρΗ6. 5) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超 聲，形成穩定的反相膠束IV，室溫下穩定存在30min以上。對比例1不穩定的反相膠束1 製法按處方量稱取天然大豆磷脂(純度>99% )、膽固醇，置於茄型瓶中，加入 5ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取6. Omg奧沙利鉬，用磷酸鹽緩衝液 (0. 05Μ，ρΗ6. 5) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超聲，得到的反 相膠束1在室溫下迅速分層、產生沉澱。對比例2不穩定的反相膠束2
製法按處方量稱取天然大豆磷脂(純度80% )、膽固醇，置於茄型瓶中，加入 5ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取6. Omg奧沙利鉬，用磷酸鹽緩衝液 (0. 05Μ，ρΗ6. 5) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超聲，得到的反 相膠束2在室溫下迅速分層、產生沉澱。對比例3不穩定的反相膠束3 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度50% )、膽固醇，置於茄型瓶中，加入 5ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取6. Omg奧沙利鉬，用磷酸鹽緩衝液 (0. 05Μ，ρΗ6. 5) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超聲，得到的反 相膠束在室溫下迅速分層、產生沉澱。實施例5-8分別將實施例2-5中各種物質的用量按比例調整增加1-9倍，同樣可得到穩定的 反相膠束V-VIII。實施例9製備奧沙利鉬脂質體I 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為90% )、膽固醇，置於茄型瓶中，加入 IOml氯仿/乙醚混合溶劑(4:1，ν/ν)使其溶解；稱取4. Omg奧沙利鉬，用醋酸-醋酸鈉 緩衝液(0.05M，pH5.0)lml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超聲，形 成穩定的反相膠束，室溫下穩定存在30min以上。室溫減壓旋轉蒸發(控制真空度為-0. 06-0. 065MPa)，緩慢去除有機溶劑，反相 膠束最終自發轉變為脂質體。經聚碳酸酯膜擠出(孔徑0.2um和0. Ium的聚碳酸酯膜各擠 出10次)，粒徑達120nm，經透析去除游離藥物，得到奧沙利鉬脂質體I。藥物濃度達2. Omg/ ml，包封率達93%。實施例10製備奧沙利鉬脂質體II 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為75% )、膽固醇，置於茄型瓶中，加入 3ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取8. Omg奧沙利鉬，用檸檬酸-檸檬酸 鈉緩衝液(1Μ，ρΗ6. 2) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超聲，形 成穩定的反相膠束，室溫下穩定存在30min以上。室溫減壓旋轉蒸發(控制真空度為-0. 06-0. 065MPa)，緩慢去除有機溶劑，反相 膠束最終自發轉變為脂質體。經聚碳酸酯膜擠出(孔徑0.2um和0. Ium的聚碳酸酯膜各 擠出10次)，粒徑達120nm，經透析去除游離藥物，得到奧沙利鉬脂質體II。藥物濃度達 3. Omg/ml，包封率達 95%。實施例11製備奧沙利鉬脂質體III 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為80% )、膽固醇，置於茄型瓶中，加入 5ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取6. Omg奧沙利鉬，用磷酸鹽緩衝液(0. 05M，pH6. 5) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超聲，形成穩定 的反相膠束，室溫下穩定存在30min以上。室溫減壓旋轉蒸發(控制真空度為-0. 06-0. 065MPa)，緩慢去除有機溶劑，反相 膠束最終自發轉變為脂質體。經聚碳酸酯膜擠出(孔徑0.2um和0. Ium的聚碳酸酯膜各 擠出10次)，粒徑達130nm，經透析去除游離藥物，得到奧沙利鉬脂質體III。藥物濃度達 4. Omg/ml，包封率達 91%。實施例12製備奧沙利鉬脂質體IV 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為80% )、膽固醇，置於茄型瓶中，加入 5ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取8. Omg奧沙利鉬，用磷酸鹽緩衝液 (0. 05Μ，ρΗ6. 5) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超聲，形成穩定 的反相膠束，室溫下穩定存在30min以上。室溫減壓旋轉蒸發(控制真空度為-0. 06-0. 065MPa)，緩慢去除有機溶劑，反相 膠束最終自發轉變為脂質體。經聚碳酸酯膜擠出(孔徑0.2um和0. Ium的聚碳酸酯膜各 擠出10次)，粒徑達140nm，經透析去除游離藥物，得到奧沙利鉬脂質體IV。藥物濃度達 5. Omg/ml，包封率達 91%。實施例13製備長循環奧沙利鉬脂質體I 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為90% )、膽固醇、PEG2000-DSPE，置於茄 型瓶中，加入IOml氯仿/乙醚混合溶劑(4 l，v/v)使其溶解；稱取4. Omg奧沙利鉬，用醋 酸-醋酸鈉緩衝液(0.05M，pH5.0) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時 冰浴超聲，形成穩定的反相膠束，室溫下穩定存在30min以上。室溫減壓旋轉蒸發(控制真空度為-0. 06-0. 065MPa)，緩慢去除有機溶劑，反相 膠束最終自發轉變為脂質體。經聚碳酸酯膜擠出(孔徑0.2um和0. Ium的聚碳酸酯膜各擠
14出10次)，粒徑達130nm，經透析去除游離藥物，得到長循環奧沙利鉬脂質體I。藥物濃度達 2. Omg/ml，包封率達 93%。實施例14製備長循環奧沙利鉬脂質體II 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為75%)、膽固醇、PEG2000-DSPE，置於茄 型瓶中，加入3ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取8. Omg奧沙利鉬，用檸 檬酸-檸檬酸鈉緩衝液(1Μ，ρΗ6. 2) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時 冰浴超聲，形成穩定的反相膠束，室溫下穩定存在30min以上。室溫減壓旋轉蒸發(控制真空度為-0. 06-0. 065MPa)，緩慢去除有機溶劑，反相 膠束最終自發轉變為脂質體。經聚碳酸酯膜擠出(孔徑0.2um和0. Ium的聚碳酸酯膜各擠 出10次)，粒徑達130nm，經透析去除游離藥物，得到長循環奧沙利鉬脂質體II。藥物濃度 達3. Omg/ml，包封率達95 %。實施例15製備長循環奧沙利鉬脂質體III 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為80% )、膽固醇、PEG2000-DSPE，置於茄 型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取6. Omg奧沙利鉬，用磷 酸鹽緩衝液(0. 05Μ, ρΗ6. 5) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴超 聲，形成穩定的反相膠束，室溫下穩定存在30min以上。室溫減壓旋轉蒸發(控制真空度為-0. 06-0. 065MPa)，緩慢去除有機溶劑，反相 膠束最終自發轉變為脂質體。經聚碳酸酯膜擠出(孔徑0.2um和0. Ium的聚碳酸酯膜各擠 出10次)，粒徑達140nm，經透析去除游離藥物，得到長循環奧沙利鉬脂質體III。藥物濃度 達4. Omg/ml，包封率達93 %。
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實施例16製備長循環奧沙利鉬脂質體IV 製法按處方量稱取天然蛋黃磷脂(純度為80% )、膽固醇、PEG 2000-DSPE，置於 茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶劑(1 4，ν/ν)使其溶解；稱取8. Omg奧沙利鉬，用 磷酸鹽緩衝液(0. 05Μ, ρΗ6. 5) Iml使其溶解，然後加至脂質溶液中。渦旋混勻後，短時冰浴 超聲，形成穩定的反相膠束，室溫下穩定存在30min以上。室溫減壓旋轉蒸發(控制真空度為-0. 06-0. 065MPa)，緩慢去除有機溶劑，反相 膠束最終自發轉變為脂質體。經聚碳酸酯膜擠出(孔徑0.2um和0. Ium的聚碳酸酯膜各 擠出10次)，粒徑達150nm，經透析去除游離藥物，得到奧沙利鉬脂質體IV。藥物濃度達 5. Omg/ml，包封率達 91%。實施例17奧沙利鉬脂質體的體外釋放特徵實施例11和實施例15分別製得奧沙利鉬脂質體III和長循環奧沙利鉬脂質體 III，再另外配製相同濃度、相同溶劑的奧沙利鉬水溶液。以5%葡萄糖為釋放介質，考察上 述三種製劑的體外釋放特徵。結果如圖1所示。結果表明，兩種奧沙利鉬脂質體均表現出緩慢釋放的特徵，而長循環奧沙利鉬脂 質體的藥物釋放更為緩慢。以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，並非用以限定本發明的實質技術內容範 圍，本發明的實質技術內容是廣義地定義於申請的權利要求範圍中，任何他人完成的技術 實體或方法，若是與申請的權利要求範圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將 被視為涵蓋於該權利要求範圍之中。
1權利要求
一種奧沙利鉑脂質體，其特徵在於，所述奧沙利鉑脂質體含有奧沙利鉑，磷脂，和膽固醇；所述磷脂以其總重量計，其中磷脂醯膽鹼(或稱卵磷脂，phosphatidylcholine，簡稱PC)的重量百分含量為75 90％，磷脂醯甘油(phosphatidyl glycerols，簡稱PG)和磷脂酸(phosphatidic acid，簡稱PA)的重量百分含量之和為10 25％；奧沙利鉑和磷脂的重量比為1∶3 20，膽固醇和磷脂的重量比為1∶2 10。
2.如權利要求1所述的奧沙利鉬脂質體，其特徵在於，以所述脂質體的總體積計，奧沙 利鉬的濃度為2-5mg/ml。
3.如權利要求1所述的奧沙利鉬脂質體，其特徵在於，所述奧沙利鉬脂質體的粒徑為 120-140nm。
4.如權利要求1所述的奧沙利鉬脂質體，其特徵在於，奧沙利鉬和磷脂的重量比為 1 3-20。
5.如權利要求1所述的奧沙利鉬脂質體，其特徵在於，所述奧沙利鉬脂質體還含有聚 乙二醇2000- 二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(PEG2000-DSPE)；所述聚乙二醇2000- 二硬脂醯磷脂 醯乙醇胺佔總脂質體的摩爾分數為5-9%。
6.如權利要求5所述的奧沙利鉬脂質體，其特徵在於，所述奧沙利鉬脂質體的粒徑為 130-150nm。
7.如權利要求1-6任一所述的奧沙利鉬脂質體，其特徵在於，所述的磷脂是天然蛋黃磷脂。
8.如權利要求1所述的奧沙利鉬脂質體，其特徵在於，所述奧沙利鉬脂質體的包封率 為 85-99% ο
9.如權利要求8所述的奧沙利鉬脂質體，其特徵在於，所述奧沙利鉬脂質體的包封率 為 91-95%。
10.一種如權利要求1-9任一所述的奧沙利鉬脂質體的製備方法，其特徵在於，所述方 法包括步驟(1)將膽固醇、磷脂和有機溶劑混合，得到有機相；(2)將奧沙利鉬和緩衝液混合，得到水相；(3)將步驟(1)和(2)得到的有機相和水相混合，得到反相膠束；和(4)除去有機溶劑得到如權利要求1-9任一所述的奧沙利鉬脂質體；所述磷脂以其總重量計，其中磷脂醯膽鹼(或稱卵磷脂，phosphatidylcholine，簡稱 PC)的重量百分含量為75-90%，磷脂醯甘油(phosphatidyl glycerols，簡稱PG)和磷脂酸 (phosphatidic acid，簡稱PA)的重量百分含量之和為10-25% ；奧沙利鉬和磷脂的重量比為1 3-20，膽固醇和磷脂的重量比為1 2-10;所述的有機溶劑選自氯仿、乙醚、或其混合。
11.如權利要求10所述的製備方法，其特徵在於，所述緩衝液pH5.0-7. 4。
12.如權利要求11所述的製備方法，其特徵在於，所述緩衝液選自磷酸鹽緩衝液、檸檬 酸_檸檬酸鈉緩衝液、或醋酸_醋酸鈉緩衝液；酸根離子的總濃度為0. 05-1M。
13.如權利要求10所述的製備方法，其特徵在於，所述有機溶劑是氯仿和乙醚的混合 物，兩者的體積比為1 4-4 1。
14.如權利要求10所述的製備方法，其特徵在於，所述有機相和水相的體積比為 3-10 1。
15.一種如權利要求1-9任一所述的奧沙利鉬脂質體的用途，其特徵在於，用於製備治 療癌症的藥物。
16.一種藥物組合物，其特徵在於，所述的藥物組合物中含有如權利要求1-9任一所述 的奧沙利鉬脂質體和藥學上可接受的載體。
17.如權利要求16所述的藥物組合物，其特徵在於，所述的藥物組合物是注射製劑。
全文摘要
本發明公開了一種奧沙利鉑脂質體及其製備方法和用途。所述奧沙利鉑脂質體含有奧沙利鉑，磷脂，和膽固醇；所述磷脂以其總重量計，其中磷脂醯膽鹼(PC)的重量百分含量為75-90％，磷脂醯甘油(PG)和磷脂酸(PA)的重量百分含量之和為10-25％；奧沙利鉑和磷脂的重量比為1∶3-20，膽固醇和磷脂的重量比為1∶2-10。
文檔編號A61K31/282GK101897668SQ20091005211
公開日2010年12月1日 申請日期2009年5月27日 優先權日2009年5月27日
發明者賀寧, 陶濤 申請人:上海醫藥工業研究院