逆轉、防止、延遲或穩定軟組織鈣化的方法

2023-05-13 16:35:46

專利名稱：：逆轉、防止、延遲或穩定軟組織鈣化的方法逆轉、防止、延遲或穩定軟組織鈣化的方法本申請要求於2006年1月30日提交的美國臨時申請號60/763,253和於2006年8月18日提交的PCT/US2006/032585的優先權。上述申請的全部內容和公開通過引用結合在本申請中。貫穿本申請，引用了多個參考文獻或出版物。這些參考文獻或出版物的公開內容通過引用完全結合在本申請中，以更充分地描述本發明所屬領域的狀況。
背景技術：
：據估計，在美國9個個體中有1個患有某些慢性腎病(CKD)的表現，從具有正常腎清除/功能的蛋白尿症到需要以透析或移植形式的腎替代治療的晚期腎衰竭的範圍，所述晚期腎衰竭通常稱為終末期腎病(ESRD)。美國心臟學會最近公布了一份科學聲明，詳細描述了支持應該將患有慢性腎病的個體包含在患有心血管病的高危組中並且因此應該接受侵入性預防措施以減少心血管病的流行和嚴重性的有利證據。心血管病死亡率是通過透析治療的患者中死亡的主要原因，儘管存在對性別、種族和糖尿病存在的層次化，其死亡率比一般群體高10到30倍。類似地，心血管病死亡率比在具有功能性腎移植的患者中比一般群體高2到5倍。這可能是由於(1)在血液透析患者中動脈粥樣硬化症、心臟衰竭和左心室衰竭的極高的流行，在40%到74%的經常透析的患者中觀察到，和(2)在急性心肌梗塞或心臟衰竭後的高病例致死率。在透析患者中冠狀動脈鈣化非常普遍。取決於檢查患者群體的年齡，在病例系列中54%到100%(平均83%)的透析患者具有某種程度的冠狀動脈鈣化，得分顯著高於一般群體。冠狀動脈鈣化也存在於患有慢性腎病的青少年和年輕成人中。當在透析患者中存在冠狀動脈鈣化時，在幾乎所有的研究中它快速發展，在腎移植後具有最小的或沒有發展。在正常生理條件下，血清鈣和磷被緊密地控制和平衡。然而，在腎病患者中退化的腎將不能充分響應調控系統，並且減少磷的排洩。隨著腎狀況的惡化和磷的積聚，甲狀旁腺將持續增加甲狀旁腺激素(PTH)的產生。高的PTH誘導鈣從骨釋放到血清中。結果，將發現大部分患有腎衰竭的患者具有升高的血清磷、鈣和PTH。高磷酸鹽血症，在血清中增加的鈣和磷(CaxP)產物，甲狀旁腺功能亢進和增加的鈣攝入已經被認為是心血管發病率和死亡率的顯著徵兆，其潛在地在尿毒症中作為不需要的鈣化的發展因素(Block禾卩Port(2000),Re-evaluationofrisksassociatedwithhyperphosphatemiaandhyperparathyroidismindialysispatients:recommendationsforachangeinmanagement(在透析患者中對與高磷酸鹽血症和甲狀旁腺功能亢進相關的危險的重新評估關於護理變化的推薦).AmericanJournalofKidneyDiseases(美國腎病雜誌)，35:1226-1237;Ketteler等.(2005)，Pathogenesisofvascularcalcificationindialysispatients(透析患者中的脈管鈣化的發病機理).Clin.Exp.(臨床實驗)9:265-270)。磷通過直接參與CaxP的變化和間接參與甲狀腺功能亢進的發病機理和發展而對脈管鈣化施加負面作用。在正常條件下，血清鈣和磷是亞穩的，這意味著，它們的濃度不足以產生自發的沉澱。然而，當鈣化過程開始時，所述濃度足以支持晶體增生。據信，異常高的鈣和磷濃度有助於機體內磷酸鈣的隨機被動沉澱。儘管完整的作用機制還處於研究中，但是最近的研究已經發現更複雜和積極的途徑，即，礦物質代謝的失調(高磷酸鹽血症和高鈣血症)似乎進一步誘導脈管平滑肌細胞中的遺傳變化，並且將所述細胞行為改變成有助於發展性鈣化的成骨細胞樣表型(Ketteler等.(2005)，Pathogenesisofvascularcalcificationindialysispatients.(透析患者中脈管鈣化的發病機理).Clin.Exp.(臨床實驗)9:265-270)。異常軟組織鈣化的程度隨著腎病程度增加而發展，並且可以在整個機體在器官如皮膚、關節、眼睛、心臟瓣膜、心肌、冠狀動脈、小動脈、月市、腎等中發生。在它們中，眼部鈣化是在血液透析患者中最經常觀察到的並且高度流行的軟組織鈣化之一(TilmanDrueke禾卩IsidroSalusky，TheSpectrumofRenalOsteodystrophy(腎骨營養不良的型譜).OxfordUniversityPress(牛津大學出版社).第345-357頁)。異位鈣化主要發生在結膜和角膜上由於瞼間裂縫暴露的邊緣區域上，並且出現為細小的白色沉澱，粗糙的粒狀晶體，或扁平斑。如果不進行很好地處理，在眼部區域的鈣化可以導致視力下降，刺激和可能加重到變得失去能力的程度的眼部不適。另外，鈣沉積可引起上皮和頑固的組織缺陷。最近的研究進一步研究了在透析患者中眼睛鈣化的嚴重性與脈管鈣化發生之間的關係，並且發現了眼部鈣化的程度和外骨骼鈣化的狀況之間的顯著相關性。該研究表明眼部鈣化的程度可以用作評估外骨骼鈣化諸如軟組織鈣化或任何其它器官鈣化的狀況的工具(Seyahi等.(2005),Associationofconjunctivalandcornealcalcificationwithvascularcalcificationindialysispatients(透析患者中結膜和角膜f丐化與脈管轉化的相關性).AmericanJournalofKidneyDisease(美國腎病雜誌)45:550-556)。心血管系統中鈣化的發展可以導致發展多種臨床顯著性併發症，諸如心肌缺血、心肌梗塞、損害的心肌功能、充血性心臟衰竭和心臟瓣膜不足。心血管疾病，特別是冠狀動脈病和慢性心臟衰竭的快速發展是患有終末期腎病的患者中死亡的主要原因。據報導，在透析患者中的每年全因死亡率(yearlyall-causemortality)在12%-25%範圍內。在它們之中，大約50%的這種額外死亡率是由於心血管起因(Kettder等，2005)。鈣化還向腎病患者之外擴張，並且可以包括超過40歲的任何人。儘管在美國死亡的主要原因是急性心肌梗塞和中風，但是高膽固醇血症只構成這類死亡中的15%，並且85%是由心室鈣化引起的。因此，存在對於處理或減少具有增加的發展脈管、內臟或軟組織f丐化的危險的受試者中的血清磷、鈣和磷產物(CaxP)與甲狀旁腺激素(PTH)水平的方法的需求。本發明提供滿足這種需求的使用新形式的鐵有機化合物的方法。發明概述依據本發明的這些和其它目的，描述本發明的簡述。在下述概述中可以進行一些簡化和省略，其意欲突出和引入本發明的一些方面，但不限於其範圍。在下一部分中接著的是優選示例性實施方案的詳細描述，所述實施方案足以允許本領域的普通技術人員實施和應用本發明的觀念。本發明提供治療受試者中的軟組織鈣化的方法，該方法包括給所述受試者施用有效量的鐵有機化合物。在一個實施方案中，所述鐵有機化合物具有至少約2mg/cmV分鐘的溶解速率。在一個實施方案中，所述鐵有機化合物依據下述方法製備，所述方法包括下列步驟(a)獲得鐵離子鹽；(b)在有效產生包括多晶型鐵氧化物的混合物的條件下，向所述鐵離子鹽中加入鹼金屬氫氧化物；(c)從所述混合物分離沉澱物；(d)向所述沉澱物中加入有機酸；(e)通過加熱所述有機酸和所述沉澱物而形成鐵有機酸溶液；和(f)通過有機溶劑從所述鐵有機酸溶液沉澱所述鐵有機化合物。一般地，受試者是人或動物。所述受試者可以患有慢性腎病或終末期腎病，正在進行腎透析或腎移植。所述鐵有機化合物可以通過口服或本領域通常已知的任何其它適當的途徑施用。所述鐵有機化合物的有效量可以由本領域的普通技術人員容易地確定，並且所述鐵有機化合物可以配製成本領域通常已知的多種形式。代表性的形式包括，但不限於，片劑、散劑、混懸液、乳劑、膠囊、錠劑、粒劑、藥片、丸劑、液體、醑劑或糖漿。在一個實施方案中，使用所述鐵有機化合物治療可以防止、逆轉、延遲、或穩定受試者中的軟組織鈣化，其中所述軟組織包括，但不限於，在皮膚、關節、眼睛、心臟瓣膜、心肌、冠狀動脈、肺、腎等中的軟組織。本發明還提供用於治療受試者中的軟組織鈣化的治療方案，所述治療方案包括含有可接受載體和有效量的鐵有機化合物的藥物組合物，其中所述藥物組合物以單或多劑量方案施用。在一個實施方案中，所述鐵有機化合物具有至少約2mg/cm々分鐘的溶解速率。鐵有機化合物的一個實例是檸檬酸鐵。本發明還提供用於治療受試者中的軟組織鈣化的藥物組合物，所述組合物包括有效量的鐵有機化合物，所述鐵有機化合物具有至少約2mg/cm2/分鐘的溶解速率。一般地，所述藥物組合物可以配製成片劑、散劑、混懸液、乳劑、膠囊、錠劑、粒劑、藥片、丸劑、液體、醑劑或糖漿。本發明還提供含有有效量的鐵有機化合物的藥物組合物在製備用於治療受試者中的軟組織鈣化的藥物中的應用。在一個實施方案中，所述鐵有機化合物(例如，檸檬酸鐵)具有至少約2mg/cm"分鐘的溶解速率。本發明的其它優點和方面在閱讀下述實施例後將變得顯而易見。附圖詳述圖1是概括製備本發明所述的新型鐵有機化合物的方法的示意圖。圖2是化學級和藥用級檸檬酸鐵的安全性能的比較。圖3是化學級和藥用級檸檬酸鐵的功效性能的比較。圖4顯示用6g/天的檸檬酸鐵治療的患者(患者編號2-01-1-029)的血清肌酸酐水平。圖5顯示用6g/天的檸檬酸鐵治療的患者(患者編號2-01-1-032)的血清肌酸酐水平。圖6顯示關於眼睛檢查的眼睛的不同區域。圖7顯示角膜鈣化的實例照片。圖8顯示眼睛檢查和計算角膜鈣化的實例。圖9顯示在沒有檸檬酸鐵治療的患者中加重的角膜鈣化的實例。患者ID:2-01-001;給藥安慰劑；治療時期77天。圖10顯示在檸檬酸鐵治療後在患者中改善的角膜鈣化的實例。患者ID:2-01-1-012;劑量檸檬酸鐵2g/天；治療時期28天。發明詳述製備新的鐵有機化合物如檸檬酸鐵的方法已經在美國臨時申請號60/763,253和PCT/US2006/032585中公開，其通過引用完全結合於此。這些鐵化合物比商購形式的檸檬酸鐵化合物或絡合物更可溶於更寬的pH範圍。此外，與商購形式的檸檬酸鐵化合物相比，本發明的鐵有機化合物具有更大的活性表面積。由於這些鐵有機化合物更可溶，它們可以更有效地口服遞送給患有響應使用鐵有機化合物如擰檬酸鐵治療的病況的患者。下文描述的結果表明使用本發明的檸檬酸鐵治療可以延遲或改善內臟、脈管和/或軟組織鈣化如角膜鈣化。因此，有效量的檸檬酸鐵可以用來逆轉、防止、延遲或穩定受試者中的內臟、脈管和/或軟組織鈣化。本發明不限於使用本文公開的檸檬酸鐵。通過遵循本發明的教導，其它的檸檬酸鐵化合物、或它們的鹽、衍生物、類似物、代謝物或適合用於本發明的方法中的製劑對於本領域的普通技術人員是容易地顯而易見的。此外，本發明的方法還包括使用按照本文所述的方法合成的其它鐵有機化合物。這些鐵有機化合物優選地具有或者包括下述特性結合磷的高親和性；在寬pH範圍的可溶性；不依賴於pH的快速結合；高溶解性；在整個機體中的低吸收；缺少毒性；可以口服施用；和/或生產廉價。考慮本文所述的數據，本領域的普通技術人員還將容易地認識到，本發明不限於使用按照本文公開的方法生產的鐵有機化合物。因此，對於本領域的普通技術人員將是容易地顯而易見的，本發明包括使用鐵有機化合物治療軟組織鈣化的方法，其中所述鐵有機化合物具有本文所述的某些特徵。在一個實施方案中，本發明的方法包括給受試者施用有效量的鐵有機化合物和適當的載體。當用於本文時，術語"適當的載體"包括，但不限於，本領域的普通技術人員已知的用於施用藥物化合物或組合物的任何適當的載體。載體的類型將取決於施用模式而變化。"可接受的或適當的載體"還可以包括，但不限於，液體、氣霧劑、膠囊、片劑、丸劑、散劑、凝膠、油膏、乳膏、粒劑、水、磷酸緩衝鹽水、林格溶液、葡萄糖溶液、含有血清的溶液、Hank's溶液、其它生理平衡的水溶液、油、酯、乙二醇、生物相容的聚合物、聚合物基質、膠囊、微膠囊、微顆粒、大丸劑製劑、滲透泵、擴散裝置、脂質體、脂質球(lipospheres)、細胞或細胞膜。可生物降解的微球體(例如，聚乳酸酯聚乙醇酸酯)也可以用作載體。關於用於腸胃外使用(例如，皮下注射)的化合物或組合物，術語適當的載體包括，但不限於，水、鹽水、醇、脂肪、石蠟或緩衝液。關於用於口服施用的化合物或組合物，術語適當的載體包括，但不限於，上述載體中的任一種或固體載體，諸如甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、和碳酸鎂。在一個實施方案中，本發明提供使用鐵有機化合物治療受試者中的軟組織鈣化的方法。一般地，所述受試者是人或動物。所述受試者可以患有慢性腎病或終末期腎病，或正在進行腎透析。所述鐵有機化合物按照本文所述合成。簡言之，所述合成方法包括下列步驟(a)獲得鐵離子鹽(例如，氯化鐵六水合物)；(b)以有效產生包括多晶型鐵氧化物的混合物的速率和溫度向所述鐵離子鹽中加入鹼金屬氫氧化物(例如，氫氧化鈉)；(c)從所述混合物分離沉澱物；(d)向所述沉澱物中加入有機酸；(e)通過加熱所述有機酸和所述沉澱物而形成鐵有機酸溶液；和(f)通過有機溶劑從所述鐵有機酸溶液中沉澱所述鐵有機化合物。本發明還提供治療受試者中的軟組織鈣化的方法，該方法包括給所述受試者施用有效量的鐵有機化合物。一般地，所述鐵有機化合物具有至少約2mg/cm2/分鐘的溶解速率，例如，從約2mg/cm2/分鐘到約4mg/cm2/分鐘。在一個實施方案中，所述鐵有機化合物按照包括下列步驟的方法製備(a)獲得鐵離子鹽；(b)在有效產生包括多晶型鐵氧化物的混合物的條件下向所述鐵離子鹽中加入鹼金屬氫氧化物；(c)從所述混合物分離沉澱物；(d)向所述沉澱物加入有機酸；(e)通過加熱所述有機酸和所述沉澱物而形成鐵有機酸溶液；和(f)通過有機溶劑從所述鐵有機酸溶液沉澱鐵有機化合物。在一個實施方案中，所述鹼金屬氫氧化物以小於20ml/分鐘、優選約10ml/分鐘到約20ml/分鐘的速率加入，並且在低於40。C、優選地在約10°C到約40°C的溫度下，將所述鹼金屬氫氧化物加入到所述鐵離子鹽中。在一個實施方案中，將所述有機酸和所述沉澱物加熱到約80°C到約90。C之間的溫度。通過向所述溶液中加入有機溶劑而從所述鐵有機酸溶液中沉澱所述鐵有機化合物包括在加入所述有機溶劑之前，將所述鐵有機酸溶液冷卻到低於30°C，優選地將所述鐵有機酸溶液冷卻到約10°C到約30。C之間的溫度。多種有機酸，如檸檬酸、乙酸、異檸檬酸、琥珀酸、延胡索酸、和酒石酸可以用於合成所述鐵有機化合物的方法中，其中可以使用多種有機溶劑，諸如乙醇、甲醇、丁醇、異丙醇、丙酮和四氫呋喃。所述鐵有機化合物可以以由本領域的普通技術人員確定的有效劑量施用。例如，所述鐵有機化合物的有效量可以通過在動物或適當的體外模型中的滴定實驗而確定。有效量的實例包括，但不限於，2-8gm/天鐵有機化合物，每天施用3次，6gm/天，持續14天或28天，或者所述鐵有機化合物每天相同地施用3次，或者所述鐵有機化合物在飯後10分鐘內施用。儘管不同的施用途徑，諸如靜脈內(i.v.)、腹膜內(i.p.)或皮內遞送，可以同樣作用，或者可以同樣有效，但是本發明的鐵有機化合物優選地口服施用。通常，所述鐵有機化合物可以配製成片劑、散劑、混懸液、乳劑、膠囊、錠劑、粒劑、藥片、丸劑、液體、醑劑、或糖漿。在一個實施方案中，使用所述鐵有機化合物治療可以防止、逆轉、延遲或穩定受試者中的軟組織鈣化，其中所述軟組織包括，但不限於，在皮膚、關節、眼睛、心臟瓣膜、心肌、冠狀動脈、小動脈中、或在內臟器官如肺和腎中的軟組織。本發明還提供用於治療受試者中的軟組織鈣化的治療方案，所述方案包括含有可接受的載體和有效量的鐵有機化合物的藥物組合物，其中所述藥物組合物以單或多劑量方案施用。在一個實施方案中，所述鐵有機化合物具有至少約2mg/cmV分鐘的溶解速率。鐵有機化合物的一個實例是檸檬酸鐵。'通常，所述藥物組合物的至少部分口服施用，例如，所述鐵有機化合物可以配製成片劑、散劑、混懸液、乳劑、膠囊、錠劑、粒劑、藥片、丸劑、液體、醑劑或糖漿。所述治療方案用於治療患有慢性腎病或終末期腎病的受試者。在一個實施方案中，使用所述治療方案的治療可以防止、逆轉、延遲、或者穩定受試者中的軟組織鈣化，其中所述軟組織包括，但不限於，在皮膚、關節、眼睛、心臟瓣膜、心肌、冠狀動脈、小動脈中或者在內臟器官如肺和腎中的軟組織。本發明還提供用於治療受試者中的軟組織鈣化的藥物組合物，所述組合物包括有效量的鐵有機化合物，所述鐵有機化合物具有至少約2mg/cm2/分鐘的溶解速率，例如，約2mg/cm々分鐘到約4mg/cmV分鐘。所述藥物組合物可以配製成上述各種形式，並且它用於治療上述的軟組織鈣化。本發明還提供包含有效量的鐵有機化合物的藥物組合物在製備用於治療受試者中的軟組織鈣化的藥物中的應用。在一個實施方案中，所述鐵有機化合物(諸如檸檬酸鐵)具有至少約2mg/cmV分鐘的溶解速率。得到的藥物可以配製成上述各種形式，並且它用於治療上述軟組織鈣化。通過參考下述實施例，將更容易理解綜合描述的本發明，所述實施例僅是出於舉例說明本發明的某些方面和實施方案的目的包含於此，並不意欲限制本發明。實施例l合成藥用級鐵有機化合物的通用方法合成鐵有機化合物的通用方法已經在PCT/US2006/032585和美國臨時申請號60/763,253中公開，其通過引用結合在本申請中。代表性的鐵有機化合物包括，但不限於，檸檬酸鐵。參考圖l，流程圖IO是合成可以用於本發明的鐵有機化合物或檸檬酸鐵化合物形式的通用方法。起始原料，如在方框20中所示，包括可溶的鐵離子鹽。所述可溶的鐵離子鹽可以包括氯化鐵六水合物(FeCl36H20)，如在方框21中所示，或任何其它適當的可溶鐵離子鹽。其次，鹼金屬氫氧化物(方框30)以特定速率和溫度加入到所述可溶的鐵離子鹽中。以特定速率優選約10ml/分鐘和約20ml/分鐘之間，和溫度範圍優選低於40°C加入鹼金屬氫氧化物導致形成均勻的多晶型鐵氧代膠質混懸液。所述鹼金屬氫氧化物可以包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、或任何其它適當的鹼金屬氫氧化物，如在方框31中所示。收集所述膠質混懸液沉澱物，並且用蒸餾水漂洗(方框40)，以去除任何可溶的雜質。在漂洗後，將沉澱物重懸，並且，如在方框50中所示，將晶態有機酸加入到所述沉澱物中，並且加熱到特定的溫度範圍，優選地在約80°C到約90°C之間。所述有機酸可以包括任何適當的有機酸。方框51列出了一些可以使用的可能有機酸，包括但不限於，檸檬酸、乙酸、異檸檬酸、琥珀酸、延胡索酸、和酒石酸。有機酸的加入允許所述酸與所述沉澱物在溶液中形成絡合物。在方框60，使用有機溶劑將所述鐵有機化合物從溶液中沉澱出來，以形成新形式的鐵有機化合物(方框70)。可以使用各種有機溶劑，包括但不限於，方框61中所述的溶劑，諸如乙醇、甲醇、丁醇、丙酮、異丙醇、四氫呋喃、或任何其它適當的有機溶劑。合成檸檬酸鐵在本發明的一個實施一方案中，所述鐵有機化合物是檸檬酸鐵。用於製備檸檬酸鐵的起始原料包括1.85M的氯化鐵六水合物(FeCl36H20)溶液。將產生1:3的鐵離子與氫氧離子比例所需要的5M氫氧化鈉的體積，以小於20ml/分鐘、優選在約10ml/分鐘到約20ml/分鐘之間的速率加入到所述氯化鐵六水合物溶液中。將所述混合物的溫度保持低於40。C，優選地在約10。C到約40。C之間，同時加入氫氧化鈉，以形成氫氧化鐵的多晶型鐵氧化物膠質混懸液。測定所述混懸液的pH，同時加入氫氧化鈉。當pH高於7.0時，將所述混懸液冷卻，直到其低於30°C，優選地在約10°C到約30°C之間。然後將所述混懸液通過lmm孔濾器過濾，以分離聚集物，並且然後去除氫氧化鐵沉澱物的大顆粒。然後將過濾的氫氧化鐵混懸液離心。棄掉上清，並且將沉澱的氫氧化鐵再次離心，以去除任何殘留的上清。然後用蒸餾水重懸所述氫氧化鐵沉澱物。再重複離心-重懸步驟兩次，以衝洗所述氫氧化鐵沉澱物並去除可溶於水的雜質。然後將得到的氫氧化鐵沉澱物均化處理。將產生1:1的鐵離子與檸檬酸鹽的比例所需要的擰檬酸的量加入到所述沉澱物中。將所述混合物在油浴中加熱到約80。C到約90。C之間，直到混合物的顏色從橙棕色變成透明的深棕色，或者直到所有的氫氧化鐵沉澱物溶解。冷卻反應物，直到其低於30°C，優選地在約10°C到約30°C之間，並且測量pH，以確定其在0.8和1.5之內。將反應物離心，並且收集上清。通過加入5體積的有機溶劑而將檸檬酸鐵從所述上清中沉澱出來。可以使用各種有機溶劑，包括乙醇、甲醇、丁醇、丙酮、異丙醇、或四氫呋喃、當加入溶劑時，攪拌所述混合物，直到淺褐色沉澱物形成。離心所述混懸液，並且棄掉上清。將沉澱物用所述溶劑再衝洗和離心兩次。然後將沉澱物在真空烤箱中在環境溫度下乾燥8-16小時，或者通過任何其它適合的工業方法如流化床乾燥而進行乾燥。將乾燥的沉澱物用研缽和研杵碾磨，並且再在環境溫度下乾燥8-24小時。將細碎的沉澱物通過磨製再次精細研磨，並且通過45目尺寸(35微米)篩過篩。將新形式的檸檬酸鐵粉末再在真空烤箱中乾燥或再在流化床中乾燥，並且在環境溫度下乾燥，直到1小時的乾燥導致小於0.25%的重量損失。實施例2關於檸檬酸鐵對患有終末期腎病(ESRD)的患者的血清磷酸鹽的影響的隨機化、雙盲、安慰劑對照的、劑量範圍研究目的(1)確定以每天2，4和6g的劑量，TID(每天三次)施用，持續28天的檸檬酸鐵對患有終末期腎病(ESRD)的患者中血清磷酸鹽(P04)水平的影響。(2)評估以每天2，4和6g的劑量，TID施用，持續28天的檸檬酸鐵在患有ESRD的患者中的安全性。研究藥物在美國系列號11/206,981和WO2004/07444中公開的檸檬酸鐵。研究方案隨機化、雙盲的、安慰劑對照的、劑量範圍研究，以評估檸檬酸鐵對患有ESRD進行血液透析的患者中的血清磷酸鹽濃度的影響。患者在研究的第14和28天進行評估，評估通過血清磷酸鹽濃度檢測的功效。也評估了接受一或多劑量的研究藥物的患者的安全性。研究持續時間8周(包括篩選時期，2周淘汰，4周治療)結果表明，以0,2,4和6gm/天(飯後立即，艮卩，IO分鐘內給藥，TID)降低了血清P04和Ca*P04。檸檬酸鐵口服施用，並且每天相等地給藥3次。檸檬酸鐵降低患有ESRD的患者中的血清磷酸鹽水平的能力得到證明。在使用安慰劑、2,4,和6gm/天的28天過程中，在血清轉水平中沒有觀察到顯著的變化。然而，CatP04水平下降，並且在第14和28天，對於6gm/天的劑量都是統計學顯著的。結果還表明鈣化可以在使用檸檬酸鐵治療後逆轉或穩定。下表總結本研究的數據。表l結果總結tableseeoriginaldocumentpage17表3血清「Cal(mg/dL)總結tableseeoriginaldocumentpage18*P<0.05，與安慰劑比較，基線變化的顯著差異表4血清fCainP041(mg/dU2的總結tableseeoriginaldocumentpage18*P<0.05，與安慰劑比較，基線變化的顯著差異表5tableseeoriginaldocumentpage19如在圖2和3中所示，使用藥用級檸檬酸鐵治療與化學級檸檬酸鐵相比提供一些優點。通常，儘管藥用級檸檬酸鐵表現出與化學級檸檬酸鐵的功效近似相等的功效，但是它獲得這一結果具有比化學級檸檬酸鐵更少的不利副作用。圖2還顯示與施用藥用級檸檬酸鐵相關的不利副作用和與安慰劑相關的那些沒有顯著差別。這種安全特性的優點在於，個體患者可以使他的藥用級檸檬酸鐵給藥在寬的劑量範圍內滴定，而更少考慮副作用。以這種方法，可以定製患者的個體治療以適合其特定的需要和耐受性。血清肌酸酐水平的下降腎小球濾過率(GFR)水平與結構性腎損失相關，並且用作測定腎功能的金標準。GFR可以通過生物標記血清肌酸酐進行評估。當腎功能惡化時，腎臟失去它有效排洩肌酸酐的功能，並且導致肌酸酐滯留在機體內。因此，血清肌酸酐的增加表明降低的GFR，並且是腎臟惡化的重要徵兆。在II期臨床研究"關於檸檬酸鐵對患有終末期腎病(ESRD)的患者的血清磷酸鹽的影響的隨機化、雙盲、安慰劑對照的、劑量範圍研究"的開放-標記延伸中，向一些患者施用26g/天的檸檬酸鐵，並且監測血清肌酸酐水平以評估腎功能。一些接受6g/天的檸檬酸鐵的患者似乎具有減少的血清肌酸酐水平的趨勢，其暗示檸檬酸鐵可以改善、延遲、停止或防止慢性腎病的發展。來自2名患者的結果顯示在圖4-5中。實施例3測量角膜鈣化的方法眼睛檢査通過使用與數位相機(NIKONE995)連接的裂隙燈顯微鏡進行。角膜中的鈣化在接近角膜邊緣的鼻和顳側發生，並且看起來像血鈣過多症的結合角膜病。觀察者拍照了內側(接近鼻)、外側(接近顳)，或拍攝了其中發現鈣化的角膜的全視圖(圖6)。因此，對於每隻眼睛拍攝了l-2幅圖片，並且得到每次檢查每名患者收集2-4張圖片。稱為"ImageJ"的圖像分析軟體用於數據分析。所述圖像分析軟體開發成顯示、編輯、分析、處理、保存並列印8-位、16-位和32-位的圖像。它可以計算使用者-確定的選擇的面積和像素值統計，測量距離和角度，並且生成密度柱狀圖和線面圖。它支持標準的圖像處理功能，如對比度操縱、銳化、平滑、邊緣檢測和中值濾波。該軟體在國立精神健康研究所(NationalInstituteofMentalHealth)的研究服務部開發，其為國立衛生研究所(NationalInstitutesofHealth)(NIH)的一個研究所。該軟體可以從NIH網站下載。所述圖像分析軟體能夠測量由使用者主觀確定的鈣化的面積和總角膜面積。為了估算鈣化的面積，觀察者首先將患者眼睛圖片上載到所述圖像軟體，切割特定的鈣化區域，並且所述軟體將因此測量該確定的部分(確定為在該區域有多少像素)。應該注意到，由於所述圖片通過聚焦在角膜的一側而拍攝，所述照片通常沒有捕獲角膜的完整圖像。為了估算完整角膜的大小，觀察者使用所述圖像軟體在所述圖片上所述可用的角膜區主觀切割90度的扇形區，然後讓所述軟體計算該扇形區的大小以代表完整角膜的1/4。通過將該數值乘以4，然後觀察者得到總角膜面積的估算。角膜鈣化的實例照片顯示在圖7中。基於由鈣化佔據的角膜表面的百分數，即，％內側鈣化+%外側鈣化，而評估角膜鈣化的嚴重性，其中內側或外側鈣化計算為(在內或外角膜上牽丐化面積/總角膜面積)x'lOO。參見圖8.一些因素可能影響角膜的鈣化測量(1)治療檢査後的不同的遲滯期可以導致由檢査者確定的受試者之間的差異。(2)攝影因素如環境的亮度、焦距、曝光時間、光亮度、光敏性(ISO值)、解析度、圖片對比度等不能控制。這些因素可能影響圖片之間的質量，並且因此影響醫師對準確確定不同照片之間的鈣化區域的判斷。(3)角膜區的成像不標準。大部分照片只包含角膜的局部視圖。為了估算總角膜面積的大小，觀察者主觀確定90度的扇形區，以通過將該值乘以4而外推完整角膜的大小。(4)在一些圖片中使用不同的相機用於基線角膜測量的相機意外出故障，另一個相機開始進行第二次角膜測量中的一些。(5)使用2-維面積估算角膜的球體結構上的3-維鈣化的本方法不是絕對準確的。所有上述因素構成角膜鈣化確定的誤差。然而，所述誤差已經通過下述事實而最小化所有的圖像由單一求值程序確定，每名患者作用為其自身的對照，並且檢驗了每名患者內的相對變化。實施例4檸檬酸鐵逆轉角膜鈣化上述II期研究結果表明檸檬酸鐵可以以劑量-依賴型方式減少血清CaxP，而具有最小的副作用。由於眼睛鈣化是最常觀察到的軟組織轉化之一，所以在II期研究終止後將使用檸檬酸鐵的治療延長為開放-標記延伸(OLE),以進一步研究檸檬酸鐵對眼角膜鈣化的影響以及其對軟組織^化的影響(implication)。在本研究中，在檸檬酸鐵治療之前和之後，患者到眼科進行眼睛檢查。所有的患者都在II期試驗的第一次給藥日之前幾天或當天進行他們的第一次眼睛檢査(角膜鈣化的基線值)。第二次眼睛檢查的時間不同。一些患者在II期研究後立即檢測，而一些患者在OLE期間檢査。但是，忽視第二次眼睛檢查是在何時進行的，它必須在確定的連續的檸檬酸鐵施用日後獲得，以便被認為是有效值，用於確定檸檬酸鐵對角膜鈣化變化的影響。來自檸檬酸鐵II期臨床試驗的所有患者都經過不同時間長度的無藥物期，然後一些患者參與所述開放-標記延伸治療期。每名參與的患者接受由眼科醫師進行的兩次眼睛檢查。取決於第一次和第二次眼睛檢查的日期以及相對應的藥物給藥期，不是所有參與的患者都可以產生可用的信息。接受的患者是已經接受連續給藥至少21天的那些。第一次和第二次眼睛檢查之間的時間至少與給藥期一樣長。由於第一次和第二次眼睛檢査之間的時間越長，角膜鈣化發展的可能性越高，而不是另一種方式，所以兩次眼睛檢査之間的實際時間間隔對於本評估的目的是無關的。因此，如果第一次和第二次檢查之間的時間間隔長於藥物治療期，那麼下述關於評估擰檬酸鐵對角膜鈣化變化程度的作用的結果實際上是保守的。產生符合評估的數據的總共12名患者和得到的數據在表6中列出。對每名患者檢測他們的左眼和右眼，因此產生24個角膜鈣化值。在這12名患者內，一名患者接受安慰劑，並且作為陰性對照。其餘11名患者接受不同的連續積極治療期(從28到57天)，並且產生22個左眼和右眼角膜鈣化值。在接受積極治療的ll名患者中，兩名(2)患者接受2g/天的檸檬酸鐵劑量水平，兩名(2)患者接受4g/天的檸檬酸鐵劑量水平，而七名(7)患者接受6g/天的檸檬酸鐵劑量水平。由於參與本評估的患者的有限數目，此處不需要正式的統計，使用概括統計。在第一次和第二次研究檢査之間的77天的時期內，發現接受安慰劑的患者角膜鈣化加重，以+6.55%的平均值(右眼加重+1.28%，左眼加重+11.81%)。在接受積極治療的那ll名患者中，他們的治療期平均為33天，並且在28-57天的範圍內。在第一次和第二次檢査之間的時期平均126天，並且在50-217天的範圍內。在這11名患者中，只有10個眼睛角膜f丐化值表現出加重的結果(平均+2.20%,在+0.08%到+6.98%範圍內〉。相反，一個眼睛角膜鈣化值保持不變，而11個眼睛角膜鈣化值表現出改善(平均-2.07%,在-0.08%至1」-10.21%範圍內)。加重或改善的角膜鈣化的實例顯示在圖9-10中。上述數據極其令人受鼓舞。檸檬酸鐵似乎延遲或者改善角膜鈣化病況。所述結果還暗示檸檬酸鐵治療可以改善軟組織鈣化的不同病況。可以進行進一步的臨床研究，以證實檸檬酸鐵對所有軟組織鈣化病況治療的功效。表6在接受檸檬酸鐵治療的終末期腎病患者中的角膜鈣化2-01-001安慰劑77774.19%4.32%5.47%16.13%I.28%II.81%右左2-01-1-0022g沃61280.00%3.90%0.00%3.75%0.00%-0.15%右左2-01-1-0122g沃662814.90%3.50%4.69%2.09%-10.21%-1.41%右左2-01-1-0484g沃186282.50%1.85%2.09%2.01%-0.41%0.16%右左2-01-1-0094g沃50280.51%1.16%1.00%0.00%0.49%-1.16%右左2-01-1-0506g沃198331.62%0.86%1.54%1.62%-0.08%0.76%右左2-01-1-022的沃217577.21%1.39%7.29%8.37%0.08%6.98%右左2-01-1-0686g沃202340.00%1.05%2.24%3.09%2.24%2.04%右左2-01-1德6g沃502832.43%50.95%29.27%50.36%-3.16%-0.59%右左2-01-1掘印沃78284.38。/02.50%2.20%1.10%-1.40%右左2-01-1-0186g沃752840.85%5.93%38.86%7.72%-1.99%1.79%右左2-01-1-0426g沃199420.49%0.67%3.73%4.91%3.24%4,24%右左受試者ID劑量(g沃)在第一次和第二次眼睛檢測之間的時間間隔沃)檸檬酸鐵治療期沃)第一次眼睛檢測角膜上的鈣化面積(%)第一次和第二次檢眼睛測之間的ID差異(％)眼角鈣^次測的積二檢上面第睛膜化權利要求1.一種治療受試者中的軟組織鈣化的方法，其包括給所述受試者施用有效量的鐵有機化合物。2.權利要求1的方法，其中所述鐵有機化合物具有至少約2mg/cm2/分鐘的溶解速率。3.權利要求2的方法，其中所述鐵有機化合物的溶解速率是從約2mg/cm2/分鐘到約4mg/cm2/分鐘。4.權利要求l-3任一項中的方法，其中所述鐵有機化合物是依據包括下列步驟的方法製備的a)獲得鐵離子鹽；b)在適於產生包括多晶型鐵氧化物的混合物的條件下，向所述鐵離子鹽中加入鹼金屬氫氧化物；c)從所述混合物分離沉澱物；d)向所述沉澱物中加入有機酸；e)加熱所述有機酸和所述沉澱物，從而形成鐵有機酸溶液；和f)通過有機溶劑從所述鐵有機酸溶液沉澱鐵有機化合物。5.權利要求4的方法，其中所述鹼金屬氫氧化物是氫氧化鈉或氫氧化鉀。6.權利要求4或5的方法，其中所述鹼金屬氫氧化物以小於20m1/分鐘的速率加入，並且所述鹼金屬氫氧化物在低於40°C的溫度下加入到所述鐵離子鹽中。7.權利要求4-6任一項中的方法，其中將所述有機酸和所述沉澱物加熱到約80°C到約90°C的溫度，並且通過有機溶劑從所述鐵有機酸溶液中沉澱所述鐵有機化合物包括在加入所述有機溶劑之前，將所述鐵有機酸溶液冷卻到低於30°C。8.權利要求4-7任一項中的方法，其中所述有機酸是以晶形的形式存在。9.權利要求4-8任一項中的方法，其中所述有機酸選自由下列各項組成的組檸檬酸、乙酸、異檸檬酸、琥珀酸、延胡索酸、和酒石酸。10.權利要求4-9任一項中的方法，其中所述有機溶劑選自由下列各項組成的組乙醇、甲醇、丁醇、異丙醇、丙酮、和四氫呋喃。11.權利要求4的方法，其中所述鐵離子鹽是氯化鐵六水合物，所述鹼金屬氫氧化物是氫氧化鈉，並且所述有機酸是晶形檸檬酸。12.權利要求l的方法，其中所述受試者是人或動物。13.權利要求12的方法，其中所述受試者患有慢性腎病或終末期腎病。14.權利要求13的方法，其中所述受試者正在進行腎透析或腎移植。15.權利要求l-14任一項中的方法，其中在所述受試者中的軟組織鈣化得到逆轉、防止、延遲或穩定。16.權利要求15的方法，其中所述軟組織是在關節、皮膚、眼睛、心臟瓣膜、心肌、冠狀動脈和小動脈、腎或肺中的組織。17.權利要求1的方法，其中所述鐵有機化合物是以適於口服施用的形式存在。18.權利要求17的方法，其中所述適用於口服施用的形式是片劑、散劑、混懸液、乳劑、膠囊、錠劑、粒劑、藥片、丸劑、液體、醑劑、或糖漿。19.權利要求1-18任一項中的方法，其中所述鐵有機化合物是擰檬酸鐵。20.—種用於治療受試者中的軟組織鈣化的治療方案，所述方案包括藥物組合物，所述藥物組合物包括可接受的載體和有效量的鐵有機化合物，其中所述藥物組合物以單或多劑量方案施用。21.權利要求20的治療方案，其中所述鐵有機化合物具有至少約2mg/cmV分鐘的溶解速率。22.權利要求21的治療方案，其中所述鐵有機化合物的溶解速率是從約2mg/cm2/分鐘到約4mg/cmV分鐘。23.權利要求20-22任一項中的治療方案，其中所述藥物組合物的至少部分通過口服施用。24.權利要求20-23任一項中的治療方案，其中所述鐵有機化合物配製成片劑、散劑、混懸液、乳劑、膠囊、錠齊IJ、粒齊U、藥片、丸劑、液體、醑劑、或糖漿。25.權利要求20的治療方案，其中所述受試者患有慢性腎病或終末期腎病。26.權利要求20-25任一項中的治療方案，其中在所述受試者中的軟組織鈣化得到逆轉、防止、延遲、或穩定。27.權利要求26的治療方案，其中所述軟組織是在關節、皮膚、眼睛、心臟瓣膜、心肌、冠狀動脈和小動脈、腎或肺中的組織。28.權利要求20-27任一項中的治療方案，其還包括腎透析或腹膜透析。29.按照權利要求20-28任一項中所述的治療方案，其中所述鐵有機化合物是檸檬酸鐵。30.—種用於治療受試者中的軟組織鈣化的藥物組合物，所述組合物包括有效量的具有至少約2mg/cm"分鐘溶解速率的鐵有機化合物。31.權利要求30的藥物組合物，其中所述鐵有機化合物的溶解速率是從約2mg/cm"分鐘到約4mg/cmV分鐘。32.權利要求30或31的藥物組合物，其中所述組合物是以適於口服施用的形式存在。33.權利要求32的藥物組合物，其中所述適於口服施用的形式是片劑、散劑、混懸液、乳劑、膠囊、錠劑、粒劑、藥片、丸劑、液體、醑劑、或糖漿。34.權利要求30-33任一項中的藥物組合物，其中所述鐵有機化合物是擰檬酸鐵。35.包括有效量的鐵有機化合物的藥物組合物在製備用於治療受試者中的軟組織鈣化的藥物中的應用。36.權利要求35的應用，其中所述鐵有機化合物具有至少約2mg/cm2/分鐘的溶解速率。37.權利要求35的應用，其中所述受試者患有慢性腎病或終末期腎病。38.權利要求35-37任一項中的應用，其中在所述受試者中的軟組織鈣化得到逆轉、防止、延遲或穩定。39.權利要求38的應用，其中所述軟組織是在關節、皮膚、眼睛、心臟瓣膜、心肌、冠狀動脈和小動脈、腎或肺中的組織。40.權利要求35-39任一項中的應用，其中所述鐵有機化合物是檸檬酸鐵。全文摘要本發明提供治療受試者中軟組織鈣化的方法，該方法包括給所述受試者施用有效量的鐵有機化合物如檸檬酸鐵的步驟。本申請的方法可以防止、逆轉、延遲或穩定患有慢性腎病的受試者中的軟組織鈣化。受影響的軟組織鈣化包括在關節、皮膚、眼睛中，在心血管系統如心臟瓣膜、心肌、冠狀動脈和小動脈中，或在內臟器官如腎和肺中的軟組織鈣化。文檔編號A01N55/02GK101374416SQ200780003983公開日2009年2月25日申請日期2007年1月26日優先權日2006年1月30日發明者姜壽山,湯竣鈞,陳桂恆申請人:環亞有限公司