免疫增強劑及其使用方法
2023-05-13 19:13:11
免疫增強劑及其使用方法
【專利摘要】本發明涉及一種免疫增強劑及其使用方法，該免疫增強劑包括蜂膠、海藻糖和香菇多糖，各組分的體積份數為蜂膠4～6份，海藻糖2～3份，香菇多糖2～3份；其使用方法包括配製、混合、免疫和檢測等步驟，本發明可縮短免疫程序、簡便免疫操作，並對免疫抗體產生顯著的效果。
【專利說明】免疫增強劑及其使用方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種免疫刺激添加劑，具體涉及一種免疫增強劑及其使用方法。
【背景技術】
[0002]佐劑是一類先於抗原或與抗原同時作用，能非特異性地改變或增強機體對抗原的特異性免疫應答的一種物質。抗原在免疫動物前，通常需要與佐劑混合併乳化，形成乳膠(Emulsion)的形式注射使用。乳膠有「油包水」和「水包油」兩種形式。前者有利於延長抗原在體內的存在時間和提高抗原的免疫原性，但對局部組織具有很強的刺激反應。後者有利於抗原的快速吸收，副作用小，但免疫反應可能弱且持續的時間短。
[0003]佐劑的作用原理主要包括三個方面，一是激活先天性免疫應答反應，如弗氏佐劑、免疫刺激複合物和CpG佐劑等。二是提高抗原對免疫系統的提呈和刺激作用，如脂質體類佐劑和免疫刺激複合物(ISC0M)。三是延長抗原(免疫原)在機體內的存在時間和保持對免疫系統的持續激活作用。很多佐劑中的礦物油成分主要是起到緩釋作用。除了弗氏佐劑兼具這三種特性以外，大多數佐劑在功能上都存在一定的缺陷。
[0004]弗氏佐劑是含油佐劑的一種，其最大的特點是具有較強的免疫增強效應，是應用最為廣泛的實驗用佐劑。弗氏佐劑包括弗氏完全佐劑(Freund』 s complete adjuvant,FCA)和弗氏不完全佐劑(Freun』 s incomplated adjuvant, FIA)。FCA除了含有礦物油等成分外，還含有滅活結核桿菌，對體液和細胞免疫系統具有很強的激活作用。佐劑與抗原的體積一般各佔50%。最終所形成的抗原佐劑混合物是典型的「油包水」乳膠混合體。FCA能夠刺激機體產生很強的體液免疫和細胞免疫應答，但也具有很強的副作用，特別是皮下注射時在注射部位引起很強烈的炎症和潰瘍。由於注射部位強烈的副反應，該佐劑只用於實驗目的的免疫研究，不適合用於製備疫苗。而FIA的起效較慢，通常需要進行8~10次免疫才能得到有實用價值的抗體，導致免疫程序長，免疫操作複雜，生產成本較高。
【發明內容】
[0005]發明目的:為了克服上述現有佐劑的不足，本發明提供一種操作簡單、起效快的免疫增強劑。
[0006]技術方案:為解決上述技術問題，本發明提供的免疫增強劑包括蜂膠、海藻糖和香菇多糖，各組分的體積份數為蜂膠4~6份，海藻糖2~3份，香菇多糖2~3份。
[0007]作為優選，各組分的體積份數為蜂膠5份，海藻糖2.5份，香菇多糖2.5份。
[0008]本發明同時提出上述免疫增強劑的使用方法，包括以下步驟:
O免疫增強劑的配製，將體積份數為蜂膠4~6份，海藻糖2~3份，香菇多糖2~3份混合得到免疫增強劑；
2)免疫增強劑與抗原的混合，將步驟I)所得免疫增強劑與抗原按照1:9的體積比混合得到抗原混合物；
3)乳化，將步驟2)所得抗原混合物與弗氏佐劑按照1:1的體積比混合，在攪拌器中以8000~1OOOOrpm的攪拌速度乳化I~2分鐘製成乳劑；
4)抗原的免疫，每次免疫採用10點注射法，在免疫動物每側腋下2點、每側腹股溝部位3點注射步驟3)所得乳劑，每個點皮下注射0.2ml，共計2.0ml，共計免疫6~8次，每次免疫的間隔時間為7~14天；
5 )效價檢測，不同時間採血，分離血清，檢測抗體效價。
[0009]其中步驟4)第I次免疫使用抗原混合物用弗氏完全佐劑乳化得到的乳劑，第2~8次免疫使用抗原混合物用弗氏不完全佐劑乳化得到的乳劑。
[0010]有益效果:本發明的免疫增強劑及其使用方法可以縮短免疫程序、簡便免疫操作，並對免疫抗體的增強具有顯著的效果。
【具體實施方式】
[0011]實施例:為驗證新型佐劑配方在動物上的免疫效果，採用本發明的免疫增強劑和使用方法進行大組試驗:一組抗原中加入本發明的免疫增強劑，另一組抗原中未加免疫增強劑。
[0012](一)含免疫增強劑的抗原乳劑製備:
1)免疫增強劑的配製，將體積份數為蜂膠5份，海藻糖2.5份，香菇多糖2.5份的三種原料混合；
2)免疫增強劑與抗原的混合，將步驟I)所得免疫增強劑與人載脂蛋白Al(ApoAl)抗原按照1:9的體積比混合；
3)乳化:將步驟2)的得到的免疫增強劑與抗原的混合物與弗氏佐劑按照1:1的體積比混合，在攪拌器中以8000~IOOOOrpm的攪拌速度乳化I~2分鐘製成乳劑。
[0013](二)不含免疫增強劑的抗原乳劑製備:
直接將人載脂蛋白Al(ApoAl)抗原與弗氏佐劑按照1:1的體積比混合，在攪拌器中以8000~IOOOOrpm的攪拌速度乳化I~2分鐘製成乳劑。
[0014](三)免疫，分兩組，第一組40頭羊，免疫步驟(一)所得含免疫增強劑的抗原乳劑；第二組10頭羊，免疫步驟(二)所得不含免疫增強劑的抗原乳劑。每次免疫採用10點注射法，即在每側腋下2點、每側腹股溝部位3點注射抗原乳劑，每個點皮下注射0.2ml，共計
2.0ml/羊，共計免疫6次；第I次免疫用弗氏完全佐劑乳化得到的乳劑，第2~6次免疫用弗氏不完全佐劑乳化得到的乳劑。第I次免疫後間隔14天進行第2次免疫，以後每次免疫間隔時間10天左右。
[0015](四)效價檢測，分別於第4、5、6次免疫後10天左右採血，分離血清，用瓊擴方法檢測抗體效價，得到以下相應的中間檢測記錄1、2、3。
[0016](五)試驗結果分析:
【權利要求】
1.一種免疫增強劑，其特徵在於包括蜂膠、海藻糖和香菇多糖，各組分的體積份數為:蜂膠4~6份，海藻糖2~3份，香菇多糖2~3份。
2.根據權利要求1所述的免疫增強劑，其特徵在於，各組分的體積份數為:蜂膠5份，海藻糖2.5份，香菇多糖2.5份。
3.根據權利要求1所述的免疫增強劑的使用方法，其特徵在於包括以下步驟: 1)免疫增強劑的配製，將體積份數為蜂膠4~6份，海藻糖2~3份，香菇多糖2~3份混合得到免疫增強劑； 2)免疫增強劑與抗原的混合，將步驟I)所得免疫增強劑與抗原按照1:9的體積比混合得到抗原混合物； 3)乳化，將步驟2)所得抗原混合物與弗氏佐劑按照1:1的體積比混合，在攪拌器中以8000~IOOOOrpm的攪拌速度乳化I~2分鐘製成乳劑； 4)抗原的免疫，每次免疫採用10點注射法，在免疫動物每側腋下2點、每側腹股溝部位3點注射步驟3)所得乳劑，每個點皮下注射0.2ml，共計2.0ml，共計免疫6~8次，每次免疫的間隔時間為7~14天； 5 )效價檢測，不同時間採血，分離血清，檢測抗體效價。
4.根據權利要求3所述的使用方法，其特徵在於:所述步驟4)中第I次免疫使用抗原混合物用弗氏完全佐劑乳化得到的乳劑，第2~8次免疫使用抗原混合物用弗氏不完全佐劑乳化得到的乳劑。
5.根據權利要求3所述的使用方法，其特徵在於:所述第I次免疫與第2次免疫的間隔時間為14天，以後每次免疫的間隔時間為10天。
【文檔編號】A61K39/39GK103463634SQ201310405668
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月9日 優先權日:2013年9月9日
【發明者】徐志偉 申請人:鎮江萬山紅遍農業園