長鏈脂肪醯胺類化合物及其應用的製作方法

2023-05-16 06:21:31

專利名稱：長鏈脂肪醯胺類化合物及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及長鏈脂肪醯胺類化合物及其應用，該化合物可作為神經保護劑，因而有可能被用於治療腦缺血、腦中風、阿爾茨海默病或帕金森病等神經疾病。
背景技術：
神經細胞是中樞神經系統的主體，神經元損傷是許多神經疾病的主要原因，腦卒中、阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)、帕金森病(Parkinson’s disease，PD)等神經外傷、感染、變性，皆因神經元受到損害，導致部分或全部神經功能喪失。因此，有效地保護神經元是治療多種神經疾病的一個著眼點。
一般認為，神經保護劑主要通過以下途徑發揮作用阻止鈣內流；調節興奮性胺基酸(EAAs)的興奮毒性；抗氧化及清除自由基；調節微血管炎症反應；阻斷細胞凋亡等。基於以上機制的神經保護劑研究是近年來神經精神藥物研究的熱點之一，但目前尚無特效的神經保護藥物用於臨床。
在文獻研究中注意到(1)許多中樞的神經活性物質(如甘氨酸Glysine、γ-氨基丁酸GABA、5-羥色胺5-HT、組胺Histamine等)為伯胺，分別作用於相應的受體；(2)某些內源性的長鏈脂肪醯胺(如N-花生四烯醯乙醇胺AEA、神經節苷脂GM1等)可能具有神經保護活性。
根據某些內源性神經保護因子如AEA、GM1的結構特點，可以設想如果將一些內源性胺基酸與硬脂酸作用，製備為相應的長鏈脂肪醯胺，其可能具有理想的中樞神經細胞保護活性。因為(1)長鏈脂肪醯胺脂溶性較強，易透過血腦屏障，適合作為作用於中樞的腦保護藥物的候選化合物；(2)此類脂肪醯胺的氨基部分與原伯胺具有結構相似性，可與原伯胺受體有一定的親和力，能有效地作用於含這些內源性伯胺受體的腦神經細胞。
N-硬脂醯胺基酸(N-stearoyl amino acids，NSAs)是硬脂酸的羧基與胺基酸的α-氨基結合形成的醯胺類化合物。早在五、六十年代，就有文獻報導了其合成方法。近年來，也有其藥理活性的研究報導，但目前尚此類化合物用於腦保護的系統研究報導。
(1)NSAs的合成方法NSAs的合成一般先將硬脂酸製成硬脂醯氯，提高醯化反應的活性；胺基酸與鹽酸-甲醇反應得胺基酸甲酯，以保護羧基。然後硬脂醯氯與胺基酸甲酯在吡啶溶液中發生醯化反應，生成N-硬脂醯胺基酸甲酯，再水解得NSAs(Zeelen，Havinga.Recl Trav Chim.1958，77，267-271)。
(2)NSAs的藥理活性研究抗菌作用此類化合物具有抗革蘭氏陰性菌(金黃色葡萄球菌、黃體小球菌和蠟樣芽孢桿菌)、革蘭氏陽性菌(大腸埃希桿菌和綠膿假單胞菌)的活性，其中N-硬脂醯脯氨酸的作用最強，其他化合物的作用活性取決於胺基酸的結構，一般來說，芳香族NSA＞酸性NSA＞鹼性NSA(Sivasamy A，Krishnaveni M，Rao PG.J Am Oil Chim Soc.2001，78(9)，897-902)。
抗病毒作用此類化合物能作為流感病毒神經氨酸酶(NA)的非N-乙醯神經氨酸酯類抑制劑，能有效抑制NA的活性，且呈劑量依賴性。在一系列NSAs衍生物中，N-羥基十四醯-D-半胱氨酸和N-十四醯-O-乙醯-D-絲氨酸作用活性最強，其作用機制為非競爭性方式抑制酶的活性。由於該類化合物不僅是病毒NA的選擇性抑制劑，而且對其它各種病毒的酶均有效(除了對霍亂V型及人胎盤病毒的酶不敏感)，因此，能作為抗流感病毒藥物的先導化合物(Kondoh，Mitsuyo，Furutani，et al.BiosciBiotechnol Biochem.1997，61(5)，870-874)。
然而，在本發明之前，還沒有出現本發明的化合物用於腦保護的公開報導。

發明內容
本發明要解決的技術問題之一是提供一種長鏈脂肪醯胺類化合物。
本發明要解決的技術問題之二是提供一種以上述長鏈脂肪醯胺類化合物為活性成分的藥物組合物。
本發明要解決的技術問題之三是提供上述長鏈脂肪醯胺類化合物在製備神經保護藥物中的應用。
本發明提供了用下述通式(I)表示的長鏈脂肪醯胺類化合物，
其中，R1表示H或可以被一個或多個取代基取代的C1-6的直鏈或帶有支鏈的烷基，所述取代基選自羥基、氨基、巰基、羧基、芳基、醯胺基、烷硫基和具有1-2個氮原子的5或7元雜環基；R2表示H或C1-4的烷基；R3表示C11-25的飽和或不飽和脂肪烴基。
上述C1-6的烷基是指具有1～6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基。優選具有1～4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，更優選具有1～2個碳原子的直鏈烷基。
上述取代基中，羥基包括醇羥基和酚羥基；具有1-2個氮原子的5或7元雜環基可選自咪唑基、四氫吡咯基和吲哚基。
上述C11-25的脂肪烴基是指具有11～25個碳原子的飽和或不飽和脂肪烴基，其中，飽和脂肪烴基是指直鏈或帶有支鏈的烷基、環烷基，如十二烷基、十八烷基、環十二烷基、環十八烷基等，而不飽和脂肪烴基是指鏈烯基、炔基或鏈二烯基，鏈烯基如1-十二烯基、2-十二烯基，炔基如1-十八炔基、2-十八炔基，鏈二烯基如1，3-十八烯基、7，9-十八烯基等。優選具有17～25個碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別優選具有17個碳原子的直鏈烷基。
R2優選為H。
以如下化合物為例
R1優選被羥基、芳基、四氫吡咯基和吲哚基取代的具有1～2個碳原子的烷基，更優選R1為被醇羥基、酚羥基、苯基、四氫吡咯基和吲哚基取代的具有1個碳原子的烷基，最優選R1為被酚羥基、醇羥基取代的具有1個碳原子的烷基。
特別優選R1為被酚羥基、醇羥基取代的具有1個碳原子的烷基，R2為H，R3為17個碳原子的直鏈烷基。
本發明的優選化合物為
(1)N-硬脂醯酪氨酸 (2)N-硬脂醯絲氨酸 通式(I)長鏈脂肪醯胺類化合物可與有機酸和無機酸形成可藥用酸加成鹽。通式(I)化合物的藥理上容許的酯衍生物、醚衍生物、氨基甲醯基的N-烷基衍生物及其可藥用酸加成鹽可通過本領域已知的方法製得。
本發明還提供一種藥物組合物，其包含治療有效量的上述通式(I)的長鏈脂肪醯胺類化合物，以及含有一種或多種藥學上可接受的載體。
上述可接受的載體是無毒的、能輔助施用並且對通式為(I)的化合物的治療益處沒有不利影響。此類載體可以是本領域的技術人員通常能得到的任何固體賦形劑、液體賦形劑、半固體賦形劑或者在氣霧劑組合物中可以是氣體賦形劑。固體藥物賦形劑包括澱粉、纖維素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、甘油硬脂醯酯、氯化鈉、無水脫脂乳等。液體和半固體賦形劑可以選自甘油、丙二醇、水、乙醇和各種油，包括那些源於石油、動物、植物或人工合成的油，例如，花生油、豆油、礦物油、芝麻油等、優選的液體載體，特別是用於可注射溶液的，包括水、鹽水、葡萄糖水溶液和甘醇。另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。
本發明的化合物以治療上的有效量施用，其施用方式可以是口服、全身施用(例如，透過皮膚的、鼻吸入的或者用栓劑)或腸胃外施用(例如，肌肉內、靜脈內或皮下)。優選的施用方式是口服，它可根據疾病程度調節。
本發明的化合物的實際施用量(即活性組分)依賴於許多因素，如待治療疾病的嚴重性、治療對象的年齡和相對健康程度、所使用的化合物的效能、施用途徑和形式，以及其他因素。具有本發明通式(I)的化合物在治療上的有效量可以是大約每天0.05-50mg/kg受體體重；優選約0.5-10mg/kg/day。因此，要給70kg體重的人施用，劑量範圍最優選約為每天35-700毫克。可以一次或多次施用。
本發明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學領域的常規方法製備。例如使該化合物(活性成分)與一種或者多種載體混合，然後將其製成所需的劑型，如片劑、藥丸、膠囊、半固體、粉末、緩釋劑型、溶液、混懸液、配劑、氣霧劑等等。
劑型中化合物的量可以在本領域技術人員所用的全部範圍內變動。通常，按重量百分比(wt％)記，劑型中含有佔總劑型約1-99wt％的具有通式(I)的化合物，並且還有一種或多種合適的藥物賦形劑作為平衡物。優選的，化合物以大約20-70wt％的比例存在。
本發明還提供上述長鏈脂肪醯胺類化合物在製備治療腦缺血、腦中風、阿爾茨海默病或帕金森病等神經疾病的藥物中的應用。
通過本發明的長鏈脂肪醯胺類化合物對體外孵育的大鼠腦片OGD損傷的作用研究，以及利用該化合物對沙土鼠短暫全腦缺血神經元保護作用的研究，實驗結果證實本發明的長鏈脂肪醯胺類化合物具有中樞神經細胞保護活性，可用於製備特效的神經保護藥物，以治療或預防腦缺血、腦中風、阿爾茨海默病或帕金森病等神經疾病。


圖1是本發明的N-硬脂醯胺基酸甲酯化合物預處理對皮層腦片OGD損傷的保護作用統計柱狀圖；圖2是本發明的不同構型的N-硬脂醯胺基酸化合物(即L-或DL-)預處理對皮層腦片OGD損傷的保護作用統計柱狀圖；圖3是本發明的N-硬脂醯胺基酸化合物預處理對皮層腦片OGD損傷的保護作用統計柱狀圖；圖4是本發明的三種不同的脂肪醯酪氨酸(NSTyr、NPTyr、NLTyr)預處理對皮層腦片OGD損傷的保護作用統計柱狀圖；圖5是本發明的化合物N-硬脂醯酪氨酸、N-硬脂醯絲氨酸對沙土鼠短暫全腦缺血海馬CA1區錐體細胞層存活率的影響；圖6是圖5的統計柱狀圖；圖7是本發明的腦片OGD損傷孵育過程示意圖。
具體實施例方式
實施例1長鏈脂肪醯胺類化合物的合成。
(1)胺基酸的保護——羧基甲酯化胺基酸與鹽酸-甲醇反應得胺基酸甲酯。硬脂酸與二氯亞碸加熱回流即得硬脂醯氯。
胺基酸甲酯溶於吡啶中，滴加上述硬脂醯氯，攪拌反應過夜。經萃取、重結晶等，製得硬脂醯胺基酸甲酯。然後鹼性條件下水解，得硬脂醯胺基酸。
(2)胺基酸去保護——硬脂酸先活化硬脂酸(SA)與N-羥琥珀醯亞胺(N-HOSu)反應生成活化酯，然後與胺基酸類化合物反應，即可得硬脂醯胺。
硬脂酸與N-羥琥珀醯亞胺在脫水劑DCC作用下，攪拌反應16小時，過濾，結晶，得N-硬脂醯琥珀醯亞胺(SA-OSu)。胺基酸與SA-ONSu攪拌反應，經酸化、提取、結晶得硬脂醯胺基酸。

所合成化合物的結構1.N-硬脂醯甘氨酸甲酯(NSGlyE) 2.N-硬脂醯穀氨酸甲酯(NSGluE) 3.N-硬脂醯苯丙氨酸甲酯(NSPheE) 4.N-硬脂醯苯丙氨酸(NSPhe、DL-NSPhe) 5.N-硬脂醯脯氨酸(NSPro) 6.N-硬脂醯酪氨酸(NSTyr) 7.N-硬脂醯半胱氨酸(NSCys) 8.N-硬脂醯組氨酸(NSHis) 9.N-硬脂醯色氨酸(NSTrp) 10.N-硬脂醯賴氨酸(NSLys)
11.N-硬脂醯絲氨酸(NESer) 12.N-硬脂醯亮氨酸(NSLeu) 化合物6白色固體，mp，106～108℃。1HNMR(500MHz，CDCl3，TMS)δppm7.0(2H，d，J＝10.2Hz，苯環上的H)；6.7(2H，d，J＝10.5Hz，苯環上的H)；5.9(1H，s，-NH-)；4.8(1H，m，-CH-NH-)；3.1(2H，m，-CH2-)，2.17(2H，t，-CH2-CONH-)；1.4(2H，m，-CH2-)；1.26(28H，m，-(CH2)n-)；0.88(3H，t，-CH3)。13CNMR(500MHz，CDCl3)δppm174.1(-CONH-)；173.9(-COOH)；155.3(苯環上連-OH的C)；130.5、130.3、127.6、121.8和115.8(苯環上另5個C)；53.4(-CH-NH-)；36.8(-CH2-CONH-)；36.6(-CH2-CHNH-)；32.0(-CH2-)；31.6～22.6(14×-CH2-)；14.0(-CH3-)。
以上數據證實該化合物為N-硬脂醯酪氨酸。
化合物11白色粉末，mp，100～102℃。1HNMR(300MHz，CD3OD，TMS)δppm4.48(1H，t，-CH-NH-)；3.8(2H，m，-CH2OH)；2.26(2H，t，-CH2-CONH-)；1.62(2H，m，-CH2-)；1.28(28H，m，-(CH2)n-)；0.89(3H，t，-CH3)。13CNMR(500MHz，CD3OD)δppm176.7(-CONH-)；173.8(-COOH)；63.3(-CH2OH)；56.3(-CH-NH-)；37.2(-CH2-CONH-)；33.3(-CH2-)；31.1～24.0(14×-CH2-)；14.7(-CH3-)。
以上數據證實該化合物為N-硬脂醯絲氨酸。
實施例2長鏈脂肪醯胺類化合物的結構修飾。
長鏈脂肪酸的改變[合成方法(2)] 合成化合物的結構13.N-月桂醯酪氨酸(NLTyr) 14.N-軟脂醯酪氨酸(NPTyr) 實施例3化合物對體外孵育的大鼠腦片OGD(缺氧缺糖)損傷的保護作用。
1.腦片的製備實驗前，將正常腦脊液(nACSF)分為兩份，分別在室溫(25℃)下和冰浴(0℃)中通入混合氧氣1小時，使其飽和備用。大鼠斷頭，迅速取出全腦，隨後浸入冰nACSF中，1分鐘後取出，沿冠狀面切去並修平端腦和腦幹端，502膠水粘貼在振動切片機託架上，用冰nACSF浸浴整個腦組織，混合氧氣持續通入。快速切取400μm厚腦片，用表面拋光的粗口管將腦片移至內置尼龍網罩的小燒杯裡，將其浸在混合氧氣飽和的nACSF內，室溫下恢復孵育90分鐘。
2.腦片OGD損傷實驗隨機取完成孵育的腦片，將其移入37℃混合氧氣飽和的nACSF中再孵育30min，再隨機分為①對照組37℃的nACSF中繼續孵育。②損傷組腦片在混合氮氣飽和的gfACSF中孵育10min(OGD損傷孵育)，再恢復nACSF正常孵育2h。③藥物組在損傷前30min，損傷時和正常孵育2h期間孵育液中分別加入所合成的長鏈脂肪醯胺類化合物(10μmol/L)。孵育結束後，所有腦片行TTC(2，3，5-三苯基氯化四氮唑)染色。
腦片OGD損傷孵育過程如圖7所示。
腦片孵育結束隨後浸入含2％TTC的nACSF中，在37℃水浴箱內避光染色，期間輕輕搖動，以防止腦片之間相互粘貼而影響染色。30分鐘後取出腦片，用生理鹽水漂洗兩次，濾紙吸去表面水分，稱重溼重，以1g∶20ml比例加入抽提液(乙醇∶DMSO＝1∶1)，抽提24小時，期間搖動數次，以保證所有腦片抽提完全。抽提結束後，按腦片200μl/孔的比例將抽提液加至96孔板上，酶標儀測定各孔在490nm波長處的吸光度(A值)。按以下公式計算組織損傷百分率＝(1-A490損傷/A490對照)×100％3.本發明的化合物預處理對皮層腦片OGD損傷的保護作用實驗結果(1)N-硬脂醯胺基酸甲酯預處理對皮層腦片OGD損傷的保護作用皮層腦片OGD損傷10min後恢復正常孵育2小時，腦片TTC染色程度降低，組織活性百分率(％)為52.3±0.79。預先給予NSGluE、NSGlyE、NSPheE(10μmol/L)與腦片孵育，不能明顯提高腦片損傷後的組織活性(見圖1)，說明N-硬脂醯胺基酸甲酯對OGD損傷的腦片無明顯保護作用。在圖1中，橫坐標代表所加入的本發明的N-硬脂醯胺基酸甲酯化合物，縱坐標指所測得的組織活性。
(2)N-硬脂醯胺基酸(L-或DL-)預處理對皮層腦片OGD損傷的保護作用皮層腦片OGD損傷10min後恢復正常孵育2小時，腦片TTC染色程度降低，組織活性(％)為38.3±5.3。預先給予NSPhe(L，左旋型)、NSPhe(DL，外消旋型)(10μmol/L)與腦片孵育，結果顯示NSPheE(L)、NSPhe(DL)均能提高腦片損傷後的組織活性，P＜0.05(見圖2)，說明胺基酸的構型對化合物活性無影響。在圖2中，橫坐標代表所加入的本發明的N-硬脂醯胺基酸不同構型的化合物，縱坐標指所測得的組織活性，「*」指p＜0.05。
(3)八種N-硬脂醯胺基酸對體外孵育的大鼠皮層腦片OGD損傷的影響皮層腦片OGD損傷10min後恢復正常孵育2小時，腦片TTC染色程度降低，組織活性(％)為40.2±6.3。預先給予NSCys、NSSer、NSHis、NSTrp、NSLys、NSTyr、NSPro、NSLeu(10μmol/L)與腦片孵育，其中NSTrp、NSPro能提高腦片損傷後的組織活性，p＜0.05；NSSer、NSTry能顯著提高腦片損傷後的組織活性，p＜0.01(見圖3)，說明化合物NSTyr、NSSer對OGD損傷的腦片的保護作用最明顯。在圖3中，橫坐標代表所加入的本發明的N-硬脂醯胺基酸化合物，縱坐標指所測得的組織活性，「*」指p＜0.05，「**」指p＜0.01。
(4)三種不同的脂肪醯酪氨酸(NSTyr、NPTyr、NLTyr)預處理對皮層腦片OGD損傷的保護作用預先給予NSTyr、NPTyr、NLTyr(10μmol/L)與腦片孵育，其中只有NSTry能明顯提高腦片損傷後的組織活性，p＜0.01(見圖4)，說明硬脂酸結構是長鏈脂肪酸中的優選結構。在圖4中，橫坐標代表所加入的三種不同的脂肪醯酪氨酸(NSTyr、NPTyr、NLTyr)，縱坐標指所測得的組織活性，「**」指p＜0.01。
實施例4化合物NSTyr、NSSer對沙土鼠短暫全腦缺血神經元的保護作用。
1.實驗方法(1)動物分組隨機分為假手術組(sham組)，缺血再灌注組(Isc/R組)，給藥組(1mg/kg、3mg/kg)。(每組3隻)(2)模型製作採用沙土鼠前腦缺血再灌注損傷模型。將沙土鼠ip10％水合氯醛溶(350mg/kg)麻醉，俯臥位固定。分別在正中矢狀線兩側2mm、前滷後2mm處鑽孔，經兩孔插入電極用於監測腦電圖。Isc/R組游離雙側頸動脈，予以微動脈夾分別夾閉5min，鬆開微動脈夾恢復腦血流。sham組僅游離暴露雙側頸動脈，不予微動脈夾夾閉。給藥組在術前三天、夾閉雙側頸動脈前30min以及術後4天分別按1mg/kg、3mg/kg劑量ip受試藥物SATyr。
(3)組織學觀察神經元計數沙土鼠短暫前腦缺血恢復再灌4天後，10％水合氯醛溶液(350mg/kg)ip麻醉，開胸，經升主動脈4％多聚甲醛灌注固定。取視交叉後1～4mm腦塊進行石蠟包埋，進行冠狀面切片，取齒狀回與海馬固定、脫水、包埋，切片厚10μm。切片經HE和Nissel染色，在200倍光鏡下計數海馬CA1中段100單位長度內存活神經元數目。
2.實驗結果如圖5所示，給藥組的海馬CA1中段100單位長度內存活神經元數目明顯多於缺血再灌注組的存活神經元數目，且統計柱狀圖6表明，本發明的化合物NSTyr、NSSer確實對沙土鼠短暫全腦缺血神經元具有明顯的保護作用，圖6中，「*」 指p＜0.05。
實施例5本發明的藥物組合物片劑製備採用親水型輔料(羥丙基纖維素和玉米澱粉)，在活性成分中加入適當的稀釋劑，再通過混合粉碎法的微粉化處理，使藥物表面覆蓋了一層親水性輔料，使微粒均勻分散，改善了其溶解特性，有助於提高藥物的生物利用度。然後將混合物壓片，每片重100mg，活性成分含量為70mg。一個具體的配方如下
N-硬脂醯酪氨酸70mg玉米澱粉 20mg滑石粉5mg羥丙基纖維素 5mg實施例6本發明的藥物組合物膠囊劑製備將活性成分與助劑混合，過篩，在合適的容器中均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊，每個膠囊重200mg，活性成分含量為10mg。一個具體的配方如下N-硬脂醯絲氨酸10mg乳糖 188mg硬脂酸鎂 2mg
權利要求
1.下述通式(I)化合物 其中，R1表示H或可以被一個或多個取代基取代的C1-6的直鏈或帶有支鏈的烷基，所述取代基選自羥基、氨基、巰基、羧基、芳基、醯胺基、烷硫基和具有1-2個氮原子的5或7元雜環基；R2表示H或C1-4的烷基；R3表示C11-25的飽和或不飽和脂肪烴基。
2.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，所述R1為可以被1-3個取代基取代的C1-4的直鏈或帶有支鏈的烷基，所述取代基選自羥基、氨基、巰基、羧基、芳基、醯胺基、烷硫基和具有1-2個氮原子的5或7元雜環基。
3.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，所述R2為H。
4.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，所述R3為C17-25的直鏈或帶有支鏈的烷基。
5.如權利要求4所述的化合物，其特徵在於，所述R3為C17的直鏈烷基。
6.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，所述R1為可以被1-3個取代基取代的C1-4的直鏈或帶有支鏈的烷基，所述取代基選自羥基、氨基、巰基、羧基、芳基、醯胺基、烷硫基和具有1-2個氮原子的5或7元雜環基；R2為H；R3為C17的飽和直鏈烷基。
7.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，具有如下結構式
8.如權利要求1、6或7所述的化合物，其特徵在於，所述化合物為具有如下結構式的N-硬脂醯酪氨酸。
9.如權利要求1、6或7所述的化合物，其特徵在於，所述化合物為具有如下結構式的N-硬脂醯絲氨酸。
10.一種藥物組合物，其特徵在於，該組合物包含安全有效量的權利要求1所述的化合物和藥學上可接受的載體。
11.權利要求1所述的化合物在製備神經保護藥物中的應用。
12.如權利要求11所述的化合物的應用，其特徵在於，用於製備治療腦缺血、腦中風、阿爾茨海默病或帕金森病等神經疾病的藥物。
全文摘要
本發明公開了通式(I)的長鏈脂肪醯胺類化合物及其應用，其中，R
文檔編號A61K31/16GK1974545SQ20051011088
公開日2007年6月6日 申請日期2005年11月29日 優先權日2005年11月29日
發明者姚莉韻, 陸陽, 陳紅專, 吳興軍, 鈕因堯, 張建華 申請人:上海第二醫科大學