一種代替陽性血清用作診斷試劑標準品的交聯複合物及其作為標準品的使用方法
2023-05-01 16:47:26 1
專利名稱：一種代替陽性血清用作診斷試劑標準品的交聯複合物及其作為標準品的使用方法
技術領域：
本發明屬於生物醫學領域，有關於一種新的可用作診斷試劑標準品的複合物及其作為診斷試劑標準品的使用方法，尤其有關於一種可以代替陽性血清用作診斷試劑標準品的抗原特異性抗體與人免疫球蛋白的交聯複合物及其作為診斷試劑標準品的使用方法。
背景技術：
抗體是在對抗原刺激的免疫應答中，由B淋巴細胞產生的一類糖蛋白，分子基本結構包括兩條完全相同的重鏈(H鏈)和兩條完全相同的輕鏈(L鏈)組成，輕、重鏈之間和兩重鏈之間由二硫鍵連接。根據重鏈恆定區的不同，抗體分為5類，即IgG、IgM、IgA、IgE和IgD，IgG的重鏈分子為γ鏈，IgM、IgA、IgE和IgD的重鏈分別為μ、α、ε和δ鏈，多肽重鏈不同，使得各類抗體在不同類型的免疫反應以及免疫應答過程中的特定時期發揮不同的作用。儘管有5種不同的重鏈，但輕鏈只有兩種，即κ和λ鏈(E.哈洛，D.萊恩.《抗體技術實驗指南》.)。
輕鏈大約有220個胺基酸殘基，分為兩個區，每區大約含有110個胺基酸殘基，靠近氨基端的區是異質性的可變區(V區)，靠近羧基端的是恆定區(C區)。IgG重鏈大約有440個胺基酸殘基，包括一個可變區和3個恆定區，每一個區域由110個胺基酸殘基組成，不同類的重鏈可能有不同數量的恆定區，如IgM有1個可變區和4個恆定區。
一條重鏈和一條輕鏈的可變區結合形成一個抗原結合部位。可變區的不均一性可以用來啟動有效的免疫反應，而形成龐大抗體種類。但是序列的不一致性並非隨機發生在所有可變區，而是集中分布在一些由5-10個胺基酸殘基組成的高變區，重鏈和輕鏈各有3個高變區，這些高變區組成了抗體和抗原結合的主要接觸殘基，而且位於與抗原相互作用的短胺基酸殘基環上。因為高變區是與抗原真正結合的部位，故又稱為互補決定區(complementarydetermining regions，CDRs)。可變區提高抗原結合位點和特異性，恆定區決定抗體的功能，在所有抗體的恆定區均提供了一系列的結合部位，發揮重要功能，如提供了和Fc受體細胞結合的功能區，促進了巨噬細胞和粒細胞的吞噬及促進了淋巴細胞和NK細胞發生抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用。還提供了結合補體鏈反應的重要區域，促進了外來入侵抗原的溶解。
抗原和抗體之間的高度特異性結合的特性，使得它們成為理想的臨床診斷試劑。據統計，現有臨床診斷中，50％的檢測項目是通過抗體或抗原的檢測實現的。免疫分析提供了快速和敏感的檢測傳染病原物、生理指標、過敏、自身免疫性疾病、癌症、藥物代謝等的實驗方法。手動和自動免疫分析通常使用特定抗體來檢測特異抗原或相關抗原。現在已經有了很多種免疫分析方法，但主要可以分為兩大類競爭性和非競爭性分析。抗體或抗原通過共價或非共價交聯於固相載體上，例如，多孔或無孔材料、乳膠顆粒、磁性材料、微載體、玻璃珠、膜、微孔和塑料管等。根據分析方法的特性決定固相材料和抗原/抗體標記方法。如，在一些免疫分析中，無需標記，如檢測可觀察到的血紅細胞表面的抗原時，可通過凝集反應判斷。另外，抗原-抗體反應也可生成可觀測的變化。在多數情況下，免疫檢測中都包括一種信號分子或「標記物」標記的抗原或抗體。這種信號分子或「標記物」自身是可以檢測的，或通過和其他一種/幾種其他化合物反應來產生可檢測信號。信號分子包括染料、同位素(如125I，131I，32P，3H，35S，14C)、螢光材料、化學發光材料、微粒(可見或螢光)、核酸、複合物或催化劑如酶等(如鹼性磷酸酶、酸性磷酸酶、辣根過氧化物酶、β-半乳糖苷酶等)。在使用酶標記時，還需要化學、螢光或可見光生成底物產生可檢測信號。時間分辨螢光分析法、內部反射螢光法、核酸擴增(PCR)和拉曼光譜分析法也有應用。
免疫分析已經用於體液如血漿、血清、腦脊髓液、唾液、淚液、鼻液或組織和細胞水溶液抽提物的檢測。兩種常用的形式用於人體特定抗體的檢測(1)抗原包被，人類的體液包含特定的抗體，可以和抗原起反應，然後，抗體結合包被的抗原，用標記的抗人抗體(抗抗體，又稱二抗)檢測；(2)抗體包被，人類的體液包括特定的抗原，可以和包被抗體起反應，然後，用標記的針對同一抗原不同表位的第二個抗體檢測；在這兩種方法中，抗體可以是單抗也可以是多抗。
抗體是機體對外來分子、微生物或者其他因子免疫應答產生的免疫球蛋白，在一定的條件下，免疫系統發生紊亂，也會針對自身抗原產生免疫應答，產生自身抗體，導致機體的自身組織和器官出現病理性改變並出現相應的臨床表現，這類疾病統稱為自身免疫性疾病。自身免疫性疾病在歐洲和北美的發病率高達5％，在美國總患病人數約為一千三百萬，自身免疫性疾病是繼癌症和心血管疾病的第三大類疾病，其中類風溼性關節炎的發病率為1％(Advances inthe Laboratory Diagnosis of Autoimmune Diseases，Business Briefing Global Health Care2002，Issue 3.)，這些疾病的診斷除了各自不同的臨床症狀之外，患者血清中的抗體的檢測是診斷的關鍵性指標。
因許多抗體的滴度和疾病的發生、發展和預後有很大關聯性，如抗肝細胞漿I型抗原抗體(Liver Cytosol Antigen type 1 Autoantibodies，LC-1)滴度與疾病活動程度、血清轉氨酶和丙種球蛋白水平明顯相關。高效價的抗-LC1隻在有著高活動度的慢性肝炎或肝硬化中檢測到(Lenzi M，Mantotti P，Muratori L，Cataleta M，et al.Liver cytosolic 1antigen-antibody system in type 2 autoimmune hepatitis and hepatitis C Virusinfection.Gut，1995，36749-754.)。抗-LC1對皮質類固醇和硫唑嘌呤的療效沒有預測意義，LC-1是反映疾病進程和治療效果的一個較好的血清免疫學指標。因此對自身抗體的定性，和進一步定量至關重要。對抗體的檢測，除了明確存在以外，還應對其類和亞類進行鑑定，一般來說，IgM類主要常見於急性感染性疾病，IgG4亞類主要見於器官特異性自身免疫病，而IgG1，IgG3主要見於器官非特異性自身免疫病(鄧安梅，仲人前，孔憲濤.自身免疫病患者可抽提核抗體譜與體液免疫的關係.中華醫學檢驗雜誌，1999，22299-300.)。
臨床診斷試劑盒一般都包括標準品或陰性和陽性對照品，定量自身抗體診斷試劑盒的標準品往往來自於抗體滴度較高的陽性血清的系列稀釋品，或直接使用不同滴度的病人血清。但用病人血清做標準品有很多缺點1)很難獲得具有高滴度，高特異性的病人血清；2)個體之間的抗體滴度和特異性差異性較大，難以標準化；3)由於血清是多抗，具有不同的抗體類型、親和性和特異性，限制了它的應用；4)價格昂貴，由於資源的限制，可能不能保證標準品的產量。因此，開發生產標準品的方法，用以檢測特異性抗體的水平具有重要意義。
人鼠嵌合抗體可以用於人血清抗體檢測的標準品，用於製備標準曲線(美國專利6,015,662)，但該方法具有很大的局限性1)工藝非常複雜，包括動物免疫，細胞融合，單抗的篩選，抗體基因克隆，人鼠嵌合基因工程抗體的構建和表達等，時間長，費用高；2)每次構建的抗體只包括一種抗體的恆定區，檢測其他抗體類型需要重新構建。
交聯抗體在標準品的使用方面具有很大的優勢，非人的非IgM和人的IgM交聯(美國專利5,478,753)，用作診斷IgM血清試劑盒標準品，交聯抗體非人的非IgM對檢測抗原特異，人的IgM可以和標記二抗結合，這些試劑盒很好的解決了傳染性疾病在急性感染階段IgM陽性血清來源的困難，使標準品的大規模生產成為可能。其它的交聯還包括抗體的一條重鏈和輕鏈通過二硫鍵和IgG的重鏈和輕鏈或Fc交聯(美國專利5,523,210)，構建的雙價抗體可用於酶等化學分析；兩個對不同抗原特異的抗體通過交聯劑交聯，(美國專利4,433,059)，異源交聯抗體可用於凝集分析。
發明內容
本發明的一個目的在於提供一種代替陽性血清用作診斷試劑標準品的抗原特異性抗體與人免疫球蛋白的交聯複合物，其能夠解決對某一種抗原特異性結合及與抗人免疫球蛋白抗體(抗人二抗)的反應。
本發明的另一目的在於提供一種交聯複合物，其中製備特異性抗體的抗體技術可以是單克隆抗體技術(雜交瘤技術，包括小鼠、大鼠和家兔雜交瘤等)技術為主製備的抗原特異性抗體，也可以用抗原免疫動物(如家兔、羊、馬、牛等)獲得的抗血清，再經抗原特異性親和層析製備的抗原特異性多克隆抗體。
本發明的另一目的在於提供一種交聯複合物，其中抗體複合物用於檢測人體針對某一種抗原產生的特異性抗體的水平時，可以作為標準品替代來源於人體的血清標準品或參照品。
本發明的另一目的在於提供一種交聯複合物，利用其檢測人體抗原特異性抗體水平的方法可以用於疾病診斷、疾病篩查，如感染性疾病(抗B肝抗體、抗C肝抗體、抗愛滋病抗體等)，自身免疫性疾病(類風溼因子、抗核抗體等自身抗體)，過敏性疾病(血清IgE水平等)，還可以用於血型檢測、組織配型和健康體檢等。
本發明的再一目的是提供一種抗原特異性抗體與人免疫球蛋白交聯複合物用作標準品的方法，使用本方法製備的標準品，抗體特異性和親和力均一，製備方法簡單，來源不受限制，可以大規模生產。
為了達到以上目的，本發明揭露了一種可以代替陽性血清用作診斷試劑標準品的複合物，其特徵是該複合物是抗原特異性抗體與人免疫球蛋白的交聯複合物，抗原特異性抗體是通過單克隆抗體技術或者通過抗原免疫動物獲得的抗血清製備的。
為了達到以上目的，本發明還揭露了一種方法，該方法至少包括如下步驟a.用抗原免疫動物，獲得的特異性抗體；b.用交聯劑將所述特異性抗體和所述人免疫球蛋白交聯；c.將所述交聯後的抗體梯度稀釋，繪製標準曲線；以及，d.所述交聯後的所述抗體作為標準品應用於定量診斷檢測方法中。
圖1為本發明較佳實施例的標準曲線。以及，圖2為本發明較佳實施例的統計結果圖。
具體實施例方式
本發明包括一種方法，該方法至少包括如下步驟(a).用抗原免疫動物，獲得的特異性抗體；(b).用交聯劑將所述特異性抗體和所述人免疫球蛋白交聯；(c).將所述交聯後的抗體梯度稀釋，繪製標準曲線；以及，(d).所述交聯後的所述抗體作為標準品應用於定量診斷檢測方法中。
本發明的一種較佳實施例是製成用於抗環瓜氨酸肽(CCP)抗體類風溼關節炎診斷的試劑盒。該試劑盒是用於定量測定病人血清中抗CCP IgG型抗體的酶聯免疫檢測試劑盒。抗CCP IgG型抗體的檢測能夠輔助診斷類風溼性關節炎。在96孔反應板上包被CCP抗原，將稀釋後的待檢血清和對照品陽性血清加入反應板孔中，如果被檢血清中存在抗CCP抗原成分的抗體，經溫育後，則血清中的特異性抗體與固相CCP抗原結合，形成固相抗原抗體複合物。洗去未結合的抗體成分，加入酶標記抗人IgG抗體(抗人二抗)溫育，固相抗原抗體複合物再與酶標記抗IgG抗體結合。洗去未結合的酶標抗體成分，再加入酶的底物。底物被酶催化成為有色產物，可以通過酶標儀檢測讀取標本和對照品陽性血清的顏色反應的數值。用不同滴度的陽性品對照血清，作出一條酶標儀檢測顏色反應數值和對照品陽性血清抗CCP抗體滴度之間相互關聯的標準曲線，根據待檢血清酶標儀檢測數值在標準曲線上的位置，就可以判斷出待檢血清中相應的抗CCP抗體水平。
該診斷試劑盒中作為繪製標準曲線的標準品陽性血清，是試劑盒最關鍵的成分。目前標準品陽性血清取自抗CCP抗體水平增高的病人，這樣會有很多問題。一是陽性血清是取自用已有診斷試劑盒檢測抗CCP抗體水平增高的病人，現有診斷試劑盒陽性血清取自符合類風溼診斷標準的病人，而符合類風溼診斷標準的未必都有抗CCP抗體增加。二是病人陽性血清抗CCP抗體水平會隨病情變化而變化，因此「標準品」並不標準。三是每個病人血清來源有限，可能每個批號的的血清來源均不相同，標準品批間有差異，因此對同一病人的同一份血清，用不同批次的診斷試劑盒檢測會有不同的結果。而利用抗CCP單克隆抗體與人IgG的交聯物代替陽性血清作為試劑盒的標準品則不會產生如上所述的缺點。
在步驟(a)中，CCP與牛血清白蛋白(BSA)交聯方法參照E.哈洛，D.萊恩所著《抗體技術實驗指南》。選用6-8周齡Balb/c小鼠，取1-100μg交聯後的CCP與等量完全福氏佐劑充分乳化後腹腔注射。以後每隔2周以同樣劑量抗原加等量不完全福氏佐劑充分乳化後腹腔注射，共3-5次。融合前3天腹腔或靜脈注射無佐劑抗原50-100μg加強免疫一次。
取完成免疫的小鼠，摘眼球取血，分離血清備用。拉頸處死小鼠，浸泡於75％的酒精中3-5分鐘。無菌操作取出脾臟，製備脾細胞懸液。取處於對數生長期的P3-653細胞與小鼠脾細胞按1∶5-1∶10的比例混合，加入20ml RPMI-1640液，1000r/min，5分鐘離心，棄上清。輕輕敲打離心管底部，使沉澱細胞分散，將離心管置37℃水浴中，取1ml 37℃預溫的50％PEG緩緩滴入離心管內，1分鐘內加完。37℃靜置2分鐘，在5分鐘內滴加50mLRPMI-1640液終止PEG作用。800r/分鐘，8分鐘離心，棄上清。將沉澱細胞輕輕懸浮於所需容積的HAT培養基內，接種於96孔培養板中。將培養板放入37℃5％CO2培養箱中培養。7-10天後，換HT培養基。換液後三天吸取培養上清，做ELISA檢測。挑出陽性孔細胞，用有限稀釋法將細胞鋪單克隆，即做細胞計數，使細胞的濃度為50個/ml，於96孔板接種三排，用培養液做倍比稀釋，鋪滿1塊96孔板。培養7-10天後，選取單個克隆做ELISA檢測，挑出陽性孔細胞，再一次進行克隆。一般需要反覆克隆3-5次，直達100％陽性孔即可將細胞擴大培養，凍存。
將篩選完成的雜交瘤細胞用無血清培養基作懸浮培養，收集培養上清以備進一步純化。
用ProteinG或ProteinA Sepharose做親和層析，純化抗體。參照(E.哈洛，D.萊恩.《抗體技術實驗指南》)。最後進行抗體篩選。
本發明的步驟(b)是鼠抗CCP單克隆抗體與人免疫球蛋白(IgG)的交聯。稱取人IgG 25mg溶於0.5ml含1.25％戊二醛的pH 7.2 0.1mol/L PBS中，於2-8℃靜置過夜。反應後的溶液在pH 7.2 0.1mol/L PBS中充分透析，除去多餘的戊二醛，加pH 7.2 0.1mol/L PBS至1.5ml。放置25ml小燒杯中，緩慢攪拌。將鼠抗CCP抗體12.5mg用pH 7.2 0.1mol/L PBS稀釋至0.5ml，攪拌下逐滴加入到小燒杯中。加入1mol/L PH 9.6碳酸鹽緩衝液中，繼續攪拌3-4小時。最後加入0.25mL 0.2mol/L的賴氨酸溶液，室溫置2小時。反應後的溶液經SephacrylS-300HR層析柱，用PH7.2 0.1mol/L PBS洗脫，收集第一出峰，此溶液就為鼠抗CCP抗體與人免疫球蛋白(IgG)的交聯物。
用含1.59g/L Na2CO3、2.93g/L NaHCO3的包被緩衝液(CBS溶液)將多克隆的抗人IgG稀釋為5μg/ml。然後將稀釋好的溶液加入酶標板的各孔中，每孔100μl；2-8℃過夜，之後取出酶標板，甩去包被液，洗板三次，拍幹，加入含1％牛血清白蛋白，8.7g/L NaCl，1.15g/L Na2HPO4·12H2O，0.2g/L NaH2PO4·2H2O，PH 7.4的封閉液，每孔200μl；置於37℃下2小時，之後取出酶標板，棄去封閉液，洗板三次，拍幹。將交聯後的CCP單抗進行對倍稀釋，稀釋比例還可以為1∶100，1∶200，直至1∶1000。將稀釋後的單抗加到包被板中的各孔中，每孔100μl，每個交聯單抗的稀釋度作復孔，室溫(18-25℃)反應30分鐘。反應結束後，包被板用洗液洗3遍，拍幹。每個反應孔中加入HRP標記的羊抗人IgG工作液100μl，室溫(18-25℃)反應30分鐘。反應結束後，包被板用洗液洗5遍，拍幹。每孔加入顯色液A(含檸檬酸35.8g/L，Na2HPO4·12H2O 9.34g/L，30％過氧化氫660μl)和顯色液B(含3，3，5，5，-四甲基聯苯氨0.2g/L，二甲基亞碸5ml/L，6N HCl 1ml/L)各50μl，混勻，室溫避光反應30分鐘。反應後每孔加入終止液(2N H2SO4)50μl，酶標儀OD450讀數。
因無抗CCP抗體的國際參考質控，按抗體的OD450值自定義其抗體的相對單位，OD450＝2.0-2.2時，其對應的稀釋度為1∶400，設定單位為400RU。其他稀釋度以此類推，如1∶800為200RU，1∶1600為100RU等。
本發明的步驟(c)是用交聯後的CCP單抗的不同稀釋度繪製標準曲線。
用包被緩衝液將CCP稀釋為5μg/ml。然後將CCP溶液加入酶標板的各孔中，每孔100μ1；置於2-8℃下17小時，之後取出酶標板，甩去包被液，洗板三次，拍幹，加入封閉液，每孔200μl；置於37℃下2小時，之後取出酶標板，棄去封閉液，洗板三次，拍幹；將酶標板板條放置在真空乾燥箱內進行真空抽乾並於真空箱內保存1小時；最後將酶標板條裝入鋁箔袋，真空封口機封口，貼標籤和加蓋批號。
將交聯後的CCP單抗進行對倍稀釋，起始濃度單位為400RU，共9個稀釋度。稀釋液是由1％牛血清白蛋白，8.7g/L NaCl，1.15g/L Na2HPO4·12H2O，0.2g/L NaH2PO4·2H2O，吐溫-20 0.5ml，PH 7.4組成。
對照血清是綜合研發和臨床結果確定的抗CCP抗體陽性血清，弱陽性血清(臨界值附近的血清)和陰性血清。將稀釋後的單抗和對照血清(1∶100稀釋)加到CCP包被板中的各孔中，每孔100μl，每個交聯單抗的稀釋度和對照血清作復孔，室溫(18-25℃)反應30分鐘。反應結束後，包被板用洗液洗3遍，拍幹。每個反應孔中加入HRP標記的羊抗人IgG工作液100μl，室溫(18-25℃)反應30分鐘。反應結束後，包被板用洗液洗5遍，拍幹。每孔加入顯色液A和顯色液B各50μl，混勻，室溫(18-25℃)避光反應30分鐘。反應後每孔加入終止液50μl，酶標儀OD450讀數。
計算交聯後的CCP單抗的不同稀釋度平行測定的OD450平均值，以每個稀釋度的OD450值為縱坐標，各自對應的濃度為橫坐標，繪製出標準曲線。
本較佳實施例的標準曲線如圖1所示。從曲線整個趨勢看，線性段為0-100RU，100RU以上，曲線已趨向於飽和。在線性段內取5個點(100RU、50RU、25RU、12.5RU、0)，以此作為試劑盒的標準曲線。計算三份血清樣本平行測定的OD450平均值，然後在標準曲線上讀出相應的單位。陽性血清對應的單位為65RU、弱陽性血清對應的單位為18RU，陰性血清對應的單位為2RU。從數據看出，三個對照品血清全落在線性範圍內，尤其是弱陽性血清(臨界值)落在線段的中部，說明此線段能覆蓋了整個陰陽性的檢測範圍，進一步說明此標準曲線可作為該試劑盒的定量曲線。從弱陽性血清對應的單位可定出試劑盒的臨界值為18RU，即大於等於18RU為陽性，小於18RU為陰性。
本發明的步驟(d)是將標準曲線應用於抗CCP抗體檢測試劑盒中。試劑盒測試200份正常人血清和200份RA病人血清，同時作以上五點的標準曲線，操作過程同上。計算樣本平行測定的OD450平均值，然後在標準曲線上讀出相應的單位。以18RU為臨界值，統計結果如圖2所示。
在該統計中，真陽性樣本指200份類風溼關節炎患者血清樣本用本試劑盒測試是陽性的樣本，假陰性樣本指200份類風溼關節炎患者血清樣本用本試劑盒測試是陰性的樣本。真陰性樣本指200份正常人血清樣本用本產品測試是陰性的樣本，假陽性樣本指200份正常人血清樣本用本產品測試是陽性的樣本。
權利要求
1.一種可以代替陽性血清用作診斷試劑標準品的複合物，其特徵是所述複合物是抗原特異性抗體與人免疫球蛋白的交聯複合物。
2.根據權利要求1所述的複合物，其特徵是，抗原特異性抗體是通過單克隆抗體技術製備的。
3.根據權利要求1所述的複合物，其特徵是，抗原特異性抗體是通過抗原免疫動物獲得的抗血清製備的。
4.根據權利要求1所述的複合物，其特徵是，所述人免疫球蛋白是人免疫球蛋白IgG。
5.根據權利要求1所述的複合物，其特徵是，所述人免疫球蛋白是人免疫球蛋白IgM。
6.根據權利要求1所述的複合物，其特徵是，所述人免疫球蛋白是人免疫球蛋白IgE。
7.根據權利要求1所述的複合物，其特徵是，所述人免疫球蛋白是人免疫球蛋白IgA。
8.根據權利要求1所述的複合物，其特徵是，所述人免疫球蛋白是人免疫球蛋白的全長。
9.根據權利要求1所述的複合物，其特徵是，所述人免疫球蛋白是人免疫球蛋白的恆定區。
10.根據權利要求1所述的複合物，其特徵是，所述人免疫球蛋白是人免疫球蛋白的Fc片段。
11.一種如權利要求1所述的複合物的使用方法，其特徵是該方法包括以下步驟a.用抗原免疫動物，獲得的特異性抗體；b.用交聯劑將所述特異性抗體和所述人免疫球蛋白交聯；c.將所述交聯後的抗體梯度稀釋，繪製標準曲線；以及，d.所述交聯後的所述抗體作為標準品應用於定量診斷檢測方法中。
12.根據權利要求11所述的方法，其特徵是，所述檢測方法是試劑盒。
13.根據權利要求11所述的方法，其特徵是，所述檢測方法是檢測試劑。
14.根據權利要求11所述的方法，其特徵是，所述檢測方法是儀器檢測。
15.根據權利要求11所述的方法，其特徵在於，步驟a所述的抗原特異性抗體是單克隆抗體。
16.根據權利要求11所述的方法，其特徵在於，步驟a所述的抗原特異性抗體是多克隆抗體。
17.根據權利要求11所述的方法，其特徵在於，步驟b所述的交聯劑是戊二醛和過碘酸鈉。
全文摘要
本發明涉及一種可以代替陽性血清用作診斷試劑標準品的複合物。該複合物是抗原特異性抗體與人免疫球蛋白的交聯複合物，抗原特異性抗體通過單克隆抗體技術或者通過抗原免疫動物獲得的抗血清製備的。本發明還揭露了一種該複合物的使用方法，該方法至少包括如下步驟a.用抗原免疫動物，獲得的特異性抗體；b.用交聯劑將所述特異性抗體和所述人免疫球蛋白交聯；c.將所述交聯後的抗體梯度稀釋，繪製標準曲線；以及，d.所述交聯後的所述抗體作為標準品應用於定量診斷檢測方法中。
文檔編號G01N33/53GK1924579SQ20051002747
公開日2007年3月7日 申請日期2005年7月4日 優先權日2005年7月4日
發明者楊子義, 倪健, 羅鵬, 魏國蘭, 陳聞卓, 司徒維娜 申請人:上海富純中南生物技術有限公司