中成藥小活絡丸內非法添加化學物質的快速檢測方法

2023-05-02 01:37:56 3

中成藥小活絡丸內非法添加化學物質的快速檢測方法
【專利摘要】本發明涉及一種中成藥小活絡丸內非法添加化學物質的快速檢測方法。首先製備對照品和供試品溶液，然後分別吸取對照品溶液，供試品溶液，點於同一塊矽膠薄層板上，以展開劑上行展開，取出晾乾，置紫外光燈下觀察薄層色譜，再噴上硫酸乙醇溶液，並置於烘箱中恆溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再分別置日光及紫外光燈下觀察薄層色譜，若與對照品相同比移值處有相同顏色的螢光淬滅斑點、螢光斑點或斑點同時出現，則可判定樣品結果為陽性。顯然，本發明操作簡便，快速，成本低，既解決了其中的假「陽性」幹擾的問題，也避免了傳統採用紅外光譜、HPLC-MS等測定所產生的昂貴費用和大量時間，使有效監控中成藥小活絡丸內是否非法添加化學物質成為可能。
【專利說明】中成藥小活絡丸內非法添加化學物質的快速檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥質量檢測領域，具體涉及一種中成藥小活絡丸內非法添加化學物質的快速檢測方法。
【背景技術】
[0002]小活絡丸是由膽南星、制川烏、制草烏、地龍、乳香(制)、沒藥(制)共6味中藥飲片組成的中藥製劑。主要功效是祛風散寒，化痰除溼，活血止痛。用於風寒溼邪閉阻、痰瘀阻絡所致的痺病，症見肢體關節疼痛，或冷痛，或刺痛，或疼痛夜甚、關節屈伸不利、麻木拘攣。其製備方法是將膽南星、制川烏、制草烏、地龍、乳香(制)、沒藥(制)分別粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g細粉加煉蜜120?130g製成大蜜丸。該中藥製劑成分複雜，臨床用於治療風溼性關節炎、類風溼性關節炎及骨質增生所致的腰痛、腿痛、頸痛、上肢痛等痺證，坐骨神經痛，十二指腸壅積症等。屬抗風溼類中成藥。為了追求經濟利益，一些不法分子在小活絡丸中非法添加具有解熱、抗炎、止痛作用的廉價化學物質，以達到快速顯效的效果。而患者在不知情的情況下過多攝入這些化學物質後，會對身體造成極大的危害。
[0003]抗風溼類中成藥內非法添加化學物質主要有兩大類:解熱鎮痛類和糖皮質激素類。目前，檢測抗風溼類中成藥內非法添加化學物質的方法均為不限定中成藥具體種類的通用方法。該通用方法涉及所有抗風溼類中成藥，範圍廣，但抗風溼類中成藥種類繁多，而每一種中成藥的組方都各不相同，極易產生假「陽性」幹擾，無法明確地判定結果，因此通用方法僅能做到粗篩。而且由於假「陽性」的幹擾，所檢測的化學物質僅限於解熱鎮痛類或糖皮質激素類中有限的幾種。如張鶴等「關於抗風溼類中藥製劑中非法添加化學藥品的檢測方法研究」(亞太傳統醫藥.2010.6 (6):31-32)先採用薄層色譜法進行粗篩，而後必須再進一步對其中的陽性樣品採用紅外光譜或高效液相色譜法進行驗證。但由於紅外光譜儀、HPLC-MS、GC-MS儀器昂貴，且必須由專業的技術人員操控，維護費用也極高，無法實現快速篩查達到監控的目的。顯然，完全針對小活絡丸內非法添加多種化學物質構建起能進行快速篩查的方法是非常必要的。因此，為了使在小活絡丸內非法添加化學物質的違法行為得到有效扼制，保障人民群眾用藥安全有效，亟需建立小活絡丸內非法添加化學物質的快速篩查方法。

【發明內容】

[0004]本發明的目的是提供一種中成藥小活絡丸內非法添加化學物質的快速檢測方法，以克服現有技術的不足。
[0005]本發明的另一目的是排除小活絡丸和非法添加化學物質的假「陽性」幹擾，實現多種非法添加化學物質的快速篩查，達到監控的普及可行。
[0006]小活絡丸是一個中藥製劑，雖然組方藥味不多，但化學成分十分複雜，加之非法添加化學物質，測定時極易出現假「陽性」幹擾。通常假「陽性」幹擾必須採用紅外光譜儀、HPLC-MS、GC-MS進行成分確證。研究發現，由於小活絡丸中所需篩查的10種化學物質均有溶於甲醇的性質，且甲醇對大蜜丸中的煉蜜溶解度低，因此利用該性質，選用甲醇作為提取溶劑。考慮到小活絡丸是大蜜丸，如不進行分散，該提取溶劑無法滲入到樣品中，不能充分提取待測的化學物質。因此取小活絡丸一丸(3g)，剪碎後，加硅藻土研磨，即可將大蜜丸充分分散。再加入甲醇，將樣品全部浸泡，並採用超聲處理，以有效地將這10種物質提取出來。既可避免小活絡丸中煉蜜的溶出，便於點樣，又可大大減少小活絡丸中其他成分對測定的幹擾。又因非法添加的化學物質在薄層板上吸附能力上的不同，再分別以展開劑篩查出中成藥小活絡丸中是否非法添加了 10種分為2組的化學物質。
[0007]本發明的快速篩查方法如下
[0008](I)對照品溶液的製備:分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，製成對照品溶液A ;另分別取對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，製成對照品溶液B。
[0009](2)供試品溶液的製備:取小活絡丸3g，剪碎，加硅藻土 2g，研勻，加甲醇，超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液。
[0010](3)進行篩查測定:分別吸取對照品溶液Al iil，供試品溶液5 iil，點於同一塊矽膠GF254薄層板上，以展開劑I上行展開，取出，晾乾，置紫外光燈(波長254nm)下觀察薄層色譜，然後再噴上10%硫酸乙醇溶液，並置於105°C烘箱中恆溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述二種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處如有相同顏色的螢光淬滅斑點或斑點同時出現，則可判定樣品結果為陽性。
[0011]另分別吸取對照品溶液BI ii I,供試品溶液5 ii I,點於同一塊娃膠GF254薄層板上，以展開劑II上行展開，取出，晾乾，置紫外光燈(波長254nm)下觀察薄層色譜，然後再噴以10%硫酸乙醇溶液，並置於105°C烘箱中恆溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再分別置日光及紫外光燈(波長365nm)下觀察薄層色譜。上述三種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處如有相同顏色的螢光淬滅斑點、螢光斑點或斑點同時出現，則可判定樣品結果為陽性。
[0012]上述的展開劑I為三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液=18: 6: 2: 0.1 (體積比)。
[0013]上述的展開劑II為正己烷-乙酸乙酯-甲醇=32: 18: 5 (體積比)。
[0014]上述超聲處理的條件為30分鐘，功率250W，頻率50kHz。
[0015]該方法從對照品溶液的製備到對樣品結果進行判定，全過程僅需I小時，而且能在同一塊矽膠GF254薄層板上篩查多個廠家的產品。顯然，本發明方法操作簡便，快速，成本低，既解決了小活絡丸成藥因成分複雜所導致的假「陽性」幹擾的問題，也避免了採用紅外光譜、HPLC-MS、GC-MS測定所產生的昂貴費用和大量時間，因此是有效監控中成藥小活絡丸內是否非法添加化學物質成為可能。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1:本發明的小活絡丸和潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松在展開劑I及紫外光燈(波長254nm)條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液A (斑點a:潑尼松龍；斑點b:氫化可的松；斑點c:潑尼松；斑點d:曲安奈德；斑點e:醋酸氫化可的松)。
[0017]圖2:本發明的小活絡丸和潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松在展開劑I及日光條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液A (斑點a:潑尼松龍；斑點b:氫化可的松；斑點c:潑尼松；斑點d:曲安奈德；斑點e:醋酸氫化可的松)。
[0018]上述的圖1、圖2中的小活絡丸陰性樣品的供試品溶液為不含潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松的小活絡丸樣品按照供試品溶液的製備方法製備的供試品溶液。小活絡丸陽性樣品的供試品溶液為含有潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松的小活絡丸樣品按照供試品溶液的製備方法製備的供試品溶液。
[0019]圖3:本發明的小活絡丸和對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德、保泰松在展開劑II及紫外光燈(波長254nm)條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液B (斑點a:對乙酸氨基酚；斑點b:地塞米松；斑點c:醋酸可的松；斑點d:醋酸曲安奈德；斑點e:保泰松)。
[0020]圖4:本發明的小活絡丸和對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德、保泰松在展開劑II及紫外光燈(波長365nm)條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液B (斑點b:地塞米松；斑點c:醋酸可的松；斑點d:醋酸曲安奈德；斑點e:保泰松)。
[0021]圖5:本發明的小活絡丸和對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德、保泰松在展開劑II及日光條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液B (斑點b:地塞米松；斑點c:醋酸可的松；斑點d:醋酸曲安奈德；斑點e:保泰松)。
[0022]上述的圖3、圖4、圖5中的小活絡丸陰性樣品的供試品溶液為不含對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德、保泰松的小活絡丸樣品按照供試品溶液的製備方法製備的供試品溶液。小活絡丸陽性樣品的供試品溶液為含有對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德、保泰松的小活絡丸樣品按照供試品溶液的製備方法製備的供試品溶液。
【具體實施方式】
[0023]下面給出詳細的實施例。
[0024]本發明採用:儀器與試藥:SartorisBP211D 電子天平；AUTO SCIENCEAS10200BT型超聲波清洗器；P/G2007型恆溫烘箱；薄層板:矽膠GF254薄層板(德國MERCK批號:HX929689規格:20X20cm);試劑均為分析純；潑尼松龍對照品(批號:100153-201004)、氫化可的松對照品(批號:100152-200206)、潑尼松對照品(批號:100199-201002)、曲安奈德對照品(批號=100055-201103)、醋酸氫化可的松對照品(批號:100013-200607)、對乙醯氨基酚對照品(批號:100018-200408)、地塞米松對照品(批號:100129_201105)、醋酸可的松對照品(批號=100123-200303)、醋酸曲安奈德對照品(批號:100125_201105)、保泰松對照品(批號:100481-200601),以上對照品均由中國食品藥品檢定研究院提供；小活絡丸(標示批號:130110、20130715、130401、120801、20121201、120012、2111105)。
[0025]色譜條件:展開劑1:三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液=18: 6: 2: 0.1(體積比)；展開劑I1:正己烷-乙酸乙酯-甲醇=32: 18: 5(體積比)；展開條件:溫度:23°C;相對溼度:59*% ;展距:10cm。
[0026]對照品溶液的製備:分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，製成對照品溶液A ;另分別取對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，製成對照品溶液B。
[0027]供試品溶液的製備:取小活絡丸成品3g，剪碎，加硅藻土 2g，研勻，加甲醇10ml，進行超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液。
[0028]上述的超聲處理條件為30分鐘，功率250W，頻率50kHz。
[0029]進行篩查測定:分別吸取對照品溶液Al yl，供試品溶液5 yl，點於同一塊矽膠GF254薄層板上，以展開劑I上行展開，取出，晾乾，置紫外光燈(波長254nm)下觀察薄層色譜，然後再噴上10%硫酸乙醇溶液，並置於105°C烘箱中恆溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述二種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處如有相同顏色的螢光淬滅斑點或斑點同時出現，則可判定樣品結果為陽性。檢出了 5種化學物質是潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松。對應的色譜圖如圖1、圖2。
[0030]另分別吸取對照品溶液BI ii I,供試品溶液5 ii I,點於同一塊娃膠GF254薄層板上，以展開劑II上行展開，取出，晾乾，置紫外光燈(波長254nm)下觀察薄層色譜，然後再噴以10%硫酸乙醇溶液，並置於105°C烘箱中恆溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再分別置日光及紫外光燈(波長365nm)下觀察薄層色譜。上述三種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處如有相同顏色的螢光淬滅斑點、螢光斑點或斑點同時出現，則可判定樣品結果為陽性。又檢出了 5種化學物質是對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松。對應的色譜圖如圖3、圖4、圖5。
[0031]結果表明，2組混合對照品分離效果良好，小活絡丸自身的所有成分對測定無幹擾，即供試品在對照品相同比移值處無幹擾成分存在。
[0032]綜上，本發明所建立的薄層色譜法可快速檢測中成藥小活絡丸中是否非法添加了潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松、對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松這10種化學物質，具有操作簡便，快速，低成本的特點，可以作為小活絡丸中成藥質量監控的普及方法。
【權利要求】
1.一種中成藥小活絡丸內非法添加化學物質的快速檢測方法，其特徵是首先分別製備各對照品溶液(I)和供試品溶液(2 )，然後進行篩查測定(3 ): (1)對照品溶液的製備:分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，製成對照品溶液A ;另分別取對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，製成對照品溶液B ； (2)供試品溶液的製備:取小活絡丸一丸，剪碎，加硅藻土，研勻，加甲醇，超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液； (3)進行篩查測定:分別吸取對照品溶液A，供試品溶液，點樣於同一塊矽膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液作為展開劑上行展開，取出，晾乾，置紫外光燈254nm下觀察薄層色譜，再噴以10%硫酸乙醇溶液，並置於105°C烘箱中恆溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜；若上述二種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處有相同顏色的螢光淬滅斑點或斑點同時出現，則可判定樣品結果為陽性，檢出了 5種化學物質是潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松； 另，分別吸取對照品溶液B，供試品溶液，點樣於同一塊矽膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇作為展開劑上行展開，取出，晾乾，置紫外光燈254nm下觀察薄層色譜，再噴以10%硫酸乙醇溶液，並置於105°C烘箱中恆溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再分別置日光及紫外光燈365nm下觀察薄層色譜；若上述三種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處有相同顏色的螢光淬滅斑點、螢光斑點或斑點同時出現，則可判定樣品結果為陽性，又檢出了 5種化學物質是對乙醯氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松。
2.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特徵是上述展開劑三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液的體積比為18: 6: 2: 0.1。
3.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特徵是上述展開劑正己烷-乙酸乙酯-甲醇的體積比為32: 18: 5。
4.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特徵是上述硅藻土重量為2g。
5.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特徵是上述權利要求1中的(2)的甲醇體積為 IOmlo
6.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特徵是上述各對照品溶液的點樣體積為Iyl0
7.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特徵是上述供試品溶液的點樣體積為5yl。
8.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特徵是上述超聲處理的條件為30分鐘，功率250W，頻率 50kHz。
【文檔編號】G01N30/90GK103743853SQ201410042641
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月28日 優先權日:2014年1月28日
【發明者】焦琦, 吳愛英, 張春輝 申請人:焦琦