間質肺病毒株及其在疫苗製劑中以及用作抗原性序列表達載體的用途的製作方法

2023-05-02 08:07:41

專利名稱：間質肺病毒株及其在疫苗製劑中以及用作抗原性序列表達載體的用途的製作方法
間質肺病毒株及其在疫苗製劑中 以及用作抗原性序列表達栽體的用途
本發明請求2002年2月21日提交的美國臨時專利申請No. 60/358, 934的優先權，在此全文引入作為參考.與本申請同日提交 的同時待審且共同轉讓的美國專利申請，將Ronaldus Fouchier、 Bernadetta van den Hoogen、 Albertus Osterhaus、 Aurelia Haller 和Roderick Tang列為發明人，發明名稱為"重組副流感病毒表達系 統以及含有源自間質肺病毒的異種抗原的疫苗"，在此全文引入作為參考。
1. 介紹
本發明涉及一種分離的哺乳動物負鏈RM病毒，間質肺病毒 (metapneumovirus ) (MPV)，該病毒屬於副祐病毒科肺病毒亞科。本 發明還涉及一種分離的哺乳動物負鏈RNA病毒及其組分，該病毒從系 統發育學上可鑑定為對應或屬於間質肺病毒屬.本發明涉及哺乳動物 間質肺病毒，特別是人間質肺病毒的不同分離株的基因組核苷酸序 列。本發明涉及哺乳動物間質肺病毒不同分離林的序列信息在診斷和 治療方法中的應用。本發明涉及編碼間質肺病毒基因組或其部分的核 苷酸序列，所述間質肺病毒包括哺乳動物和禽類間質肺病毒.本發明 進一步涉及由所述核普酸序列編碼的嵌合或重組病毒。本發明還涉及 嵌合和重組的哺乳動物MPV，其中含有一種或多種非天然或異源序列。 本發明進一步還涉及疫苗製劑，其中含有哺乳動物或禽類間質肺病 毒，包括所述病毒的重組或嵌合形式。本發明的疫苗製劑包括多價疫 苗，包括二價及三價疫苗製劑。
2.
背景技術：
一般而言，作為一種破壞力很強的致病因子，副粘病毒每年會導 致大量動物及人類的死亡。副粘病毒科是屬於單負鏈病毒 (Mononegavirales )(負鏈單鏈UNA病毒)目中的一個科，包括副粘 病毒和肺病毒兩個亞科。後一亞科目前在分類學上分為肺炎病毒屬和 間質肺病毒屬(Pringle， 1999， Arch. Virol. 144/2, 2065-2070 )。 人呼吸道合胞病毒(hRSV)，為肺病毒屬中的一個種，是世界範圍內嬰幼兒下呼吸道感染的最重要的單一致病因子(Domachowske, & Rosenberg, 1999， Clin. Microbio. Rev. 12 ( 2 ): 298-309 ).肺病 毒屬的其它成員包括牛及綿羊呼吸道合胞病毒以及小鼠肺炎病毒 (PVM)'
在過去的幾十年中，幾種哺乳動物疾病，具體是呼吸道疾病 (RTI)，具體為人的呼吸道疾病的病原因子，已經鯗定出來(Evans, In: Viral Infections of Humans, Epidemiology and Control. 3th edn. ( ed. Evans, A. S) 22-28 (Plenum Publishing Corporation, New York, 1989 ))。哺乳動物RTI的常見致病因子是在人(hRSV)及 反芻動物如牛或綿羊(bRSV和/或oRSV)中發現的屬於肺病毒屬的呼 吸道合胞病毒.就人RSV而言，根據正反交中和試驗差異、免疫學測 定中G蛋白的反應性以及G基因的核苷酸序列，分為兩個hRSV抗原 性亞組，在亞組內，胺基酸序列呈現出94% ( A亞組)或98% (B亞組) 的同一性，而亞組之間表現出僅53X的胺基酸序列同一性。根據單克 隆抗體、RT-PCR試驗及UNA酶保護試驗，還發現了亞組內的其它變 異。兩亞組的病毒都在全世界範圍內分布，可以發生在單一季節.感 染既可以發生於預先-存在免疫性的情況，抗原性變異也不是發生再 感染所必需的.參見，例如，Sullender， 2000, CIinical Microbiology Reviews 13( 1): 1-15; Collins等人Fields Virology, ed. B.N. Knipe， Howley， P.M. 1996， Philadelphia: Lippencott-Raven. 1313-1351; Johnson等人，1987， ( Proc Natl Acad Sci USA, 84 (16): 5625-9; Collins, in The paramyxoviruses, D. W. Kingsbury, Editor, 1991， Plenum Press: New York. p. 103—153,
另一種常見的肺病毒是小鼠肺炎病毒(PVM),通常僅發現於實驗 小鼠。但是，哺乳動物中發現的疾病一部分還不能歸結於已知病原體。
2.1禽類間質肺病毒
禽類肺病毒(APV)引發的呼吸道疾病在20世紀70年代後期首 次報導於南非(Buys等人，1980， Turkey 28: 36-46)，給火雞養殖 業造成毀滅性打擊.這種火雞疾病的特徵為竇炎和鼻炎，稱為火雞鼻 氣管炎(TRT)。現已有強有力證據表明APV的歐洲分離林是雞頭腫脹 症候群(swollen head syndrome ) ( SHS )的病因((KBrien， 1985， Vet. Rec. 117: 619-620 ).起初，該疾病出現於已感染新城疫病毒
(NDV)的產蛋母雞群，被認為是與新城疫(ND)相關的繼發問趙， 在爆發SHS後的感染雞群中檢測到了抗歐洲APV抗體(Cook等人， 1988, Avian Pathol. 17: 403-410),因而認為APV為致病因子。
禽類肺病毒(APV)又稱火雞鼻氣管炎病毒(TRTV)，是禽類真氣 管炎， 一種火雞上呼吸道感染(Giraud等人，1986， Vet. Res. 119: 606-607 )的致病因子，該病毒是新近命名的間質肺病毒屬的唯一成 員，迄今為止還未與哺乳動物感染相關，或者更進一步說還未與哺乳 動物的疾病有關.APV的血清學亞組可以根據G糖蛋白的核苷酸或氨 基酸序列以及使用也識別G糖蛋白的單克隆抗體的中和試驗來劃分， 但是，核苷酸及胺基酸序列中的其它差異也可用於區別APV的血清學 亞組。對於亞組A、 B和D，亞組內的G蛋白表現出98. 5 - 99. 7K的aa 序列同一性，而亞組之間僅31.2-38X的aa同一性.參見，例如， Collins等人，1993， Avian Pathology, 22: p. 469-479; Cook等 人，1993， Avian Pathology, 22: 257-273; Bayon-Auboyer等人，J Gen Virol， 81 (Pt 11 ): 2723-33; Seal, 1998， Virus Res, 58 U-2 ): 45-52; Bayon-Auboyer等人，1999, Arch Virol， 144 ( 6 ): 91—109; Juhasz,等人，1994， J Gen Virol， 75 (PU1 ): 2873—80,
APV的另一血清型提供於WO00/20600,在此引入作為參考，該文 獻描述了 APV科羅拉多(Colorado)分離抹，並用體外血清中和試驗 將其與已知的APV或TRT株進行了比較.首先，用識別TRT分離抹的
單特異性多克隆抗血清測試上述科羅拉多分離林。科羅拉多分離林未 被抗任一株TRT的單特異性抗血清所中和。但是，其被抗A亞組的一 病毒林的超免疫抗血清中和，這種血清中和同源病毒的滴度為1: 400， 中和科羅拉多分離林的滴度為1: 80,使用上述方法，然後用抗TRT 的單克隆抗體測定科羅拉多分離林。在每一種情況下，交互中和滴度 都< 10。另外，還用抗科羅拉多分離林的單特異性抗血清測試兩個亞 組的TRT分離林。被測的TRT中無一林被抗科羅拉多分離林的抗血清 中和。
APV科羅拉多分離林不能保護SPF雞免受TRT病毒的A亞組和B 亞組毒林的感染.這些結杲表明科羅拉多分離林可能是禽類肺病毒另 一血清型的第一個實例(參見，Bayon-Auboyer等人，2000， J. Gen. Vir. 81: 2723-2733 )。 禽類肺病毒屬於副粘病毒科肺病毒亞科間質肺病毒屬(Cavanagh 和Barrett, 1988， Vims Res. 11: 241-256; Ling等人，1992， J. Gen. Virol. 73: 1709-1715; Yu等人，1992, J, Gen. Virol. 73: 1355-1363 ).副粘病毒科分為兩個亞科副粘病毒亞科和肺病毒亞科.副 粘病毒亞科包括，但不限於副粘病毒屬、Rubulavirus和麻滲病毒屬. 最近，肺病毒亞科根據基因次序和序列同源性分為兩個屬，即肺病毒 屬和間質肺病毒屬(Naylor等人，1998 ， J. Gen. Virol. ， 79: 1393-1398; Pringle， 1998， Arch. Virol. 143: 1449—1159 )。肺病 毒屬包括但不限於，人呼吸道合胞病毒(hRSV)、牛呼吸道合胞病毒 (bRSV)、綿羊呼吸道合胞病毒和小鼠肺病毒.間質肺病毒屬包括但 不限於，歐洲禽類肺病毒(亞組A和B)，有別於肺病毒屬的hRSV種 型(Naylor等人，1998， J. Gen. Virol. ， 79: 1393-1398; Pringle， 1998， Arch. Virol. 143: 1449-1159 ). APV的美國分離株是間質肺 病毒屬中的第三亞組(亞組C)，因為已經發現它在抗原性和遣傳學上 不同於歐洲分離林(Seal, 1998， Virus Res. 58: 45—52; Senne等 人，1998， In: Proc. 47th WPDC， California, pp. 67-68)。
負鏈APV電鏡檢測顯示為多形的(pleomorphic),有時呈球形的 病毒顆粒，直徑為80~ 200 nm，帶有長為1000 ~ 2000的長絲(Coll ins and Gough， 1988， J. Gen. Virol. 69: 909— 916 ).包膜是一層布 滿著長度為13-15nm纖突的膜.核殼為螺旋形，直徑14n血，螺距7 mn。 核殼的直徑小於副粘病毒屬及麻疹病毒屬，副粘病毒屬及麻疹病毒屬 核殼的直徑通常約為18 ni
儘管禽類肺病毒感染在世界其它地方的禽類中已經存在多年，但 是對於美國來說其是一種突發性疾病.在1996年5月， 一種高度傳 染性的火雞呼吸道疾病出現於科羅拉多，隨後在美國衣阿華州埃姆斯 市國立獸醫服務實驗室(NVSL)中分離出了 APV (Senne等人，19"， Proc. 134th Ann. Mtg, , AVMA， pp. 190)。此前，美國和加拿大被 認為沒有禽類肺病毒(Pearson等人，1993， In: Newly Emerging and Re- emerging Avian Diseases: Applied Research and Practical Applications for Diagnosis and Control, pp. 78-83; Hecker and Myers, 1993， Vet. Rec. 132: 172 )。 1997年初，在明尼蘇達用血清 學方法從火雞中檢測到了 APV。在第一例確診時，APV感染已經擴散
到了許多農場.與該疾病相關的上呼吸遣臨床症狀有眼晴水泡腫， 鼻腔有分泌物以及眶下竇腫脹.二次感染會使症狀加劇.感染禽類的
發病率可高達100、死亡率為1~90%，且6-12周齡的幼禽死亡率泉 高，
禽類肺病毒通過接觸傳播.鼻腔分泌物、感染禽類的流動、汙染 的水、汙染的設備；受到汙染的祠料運輸車輛以及運栽行為都能造成 病毒的傳播.康復後的火雞被認為是攜帶者.由於證明該病毒感染產 蛋火雞榆卵管的上皮細胞，而且APV已經在幼禽中檢測到，所以卵傳 播也是可能的傳播途徑。
2.2 PIV感染
副流感病毒感染能導致耍幼兒嚴重的呼吸道感染(Tao等人， 1999， Vaccine 17: 1100-08 ).傳染性副流感病毒感染佔世界範閨內 全部呼吸道感染兒科患者住院病例約20X.出處同上.
PIV是副粘病毒科呼吸道病毒屬(PIV1， PIV3)或rubulavirus (PIV2， PIV4)的成員。PIV由兩個結構部分組成(1)位於內部的 核糖核蛋白芯或核殼，內含病毒基因組，以及(2)外部大致為球形 的脂蛋白包膜.它的基因組是單鏈負鏈RNA，長約15， 456個核普酸， 編碼至少8個多肽.這些蛋白包括但不限於核殼結構蛋白(根據屬的 不同為NP， NC,或N)、磷蛋白(P)、基質蛋白(M)、融合糖蛋白(F)、 血凝素神經氨酸蘇糖蛋白(HN)、大聚合酶蛋白(L)、和功能未知的 蛋白C和蛋白D.
副流感病毒核殼蛋白(NP、 NC或N)由每一蛋白單元中的兩個結 構域組成，其中一個為氡基末端結構域，該結構域佔該分子約2/3， 與RNA直接作用，另一為羧基末端結構域，該結構域位於裝配好的核 殼的表面.據信鉸鏈部分位於這兩個結構域的連接部從而賦予該蛋白 一些柔性(參見，Fields等人(ed. )， 1991， Fundamental Virology, Second Edition, Raven Press, New York,在此全文引入作為參考)。 基質蛋白(M)顯然參與了病毒的裝配，並且與病毒膜和核殼蛋白都 相互作用.磷蛋白(P)經過了磚酸化，據信發揮調節轉錄的作用， 並且有可能參與曱基化、確酸化和聚腺苷酸化.融合糖蛋白(F)與 病毒膜相互作用，首先生成為無活性的前體，然後翻譯後切割生成為 兩個二疏鍵連接的多肽。活性F蛋白還參與了副流感病毒顆粒穿透進
入宿主細胞過程，通過促進病毒包膜與宿主細胞質膜的融合來起該作
用，出處同上.糖蛋白血凝素神經氨酸酶(HN)從包膜中伸出從而使 病毒同時具有了血凝素和神經氨酸酶活性.HN的氨基末端高度疏水， 它的作用是將HN蛋白錨定入脂質雙層，出處同上.最後，大聚合酶 蛋白(L)在轉錄和複製中發揮重要作用，出處同上. 2. 3 RSV感染
呼吸道合胞病毒USV)是耍幼兒嚴重下呼吸道疾病的主要致病 因子(Feigen等人，eds, ， 1987， In: Textbook of Pediatric Infectious Diseases, WB Saunders, Philadelphia, p. 1653—1675; New Vaccine Development, Establishing Priorities, Vol. 1， 1985， National Academy Press, Washington DC， p. 397-409.， 和Ruuskanen等人， 1993， Curr. Probl. Pediatr. 23: 50-79 ). RSV感染的每年流行特 點都明顯為全球性，但是RSV在特定季節中的發生及強度因地區而變 化(Hall， 1993， Contemp. Pediatr. 10: 92-110),在北半球的溫 帶地區，它通常開始於深秋結束於晚春.原發性RSV感染最多見於6 周至兩歲的兒童，不常見出生後前4周的婆兒醫院感染(Hall等人， 1979， New Engl. J. Med. 300: 393-396 ). RSV感染的高發兒童包括 但不限於，早產耍兒(Hall等人，1979， New Engl. J. Med. 300: 393-396 )和患有下列病症的兒童支氣管肺發育異常(Groothuis等 人，1988， Pediatrics 82: 199-203 )、先天性心臟病(MacDonald等 人，New Engl. J. Med. 307: 397-400 )、先天性或獲得性免疫缺陷 (Ogra等人，1988， Pediatr. Infect. Dis. J. 7: 246-249;和Pohl 等人，1992， J. Infect. Dis. 165: 166-169 )、和囊性纖維化(Abman 等人，1988， J. Pediatr. 113: 826-830 ),患有心和肺病以RSV感 染就診耍兒的死亡率為3%-4% (Navas等人，1992， J. Pediatr. 121: 348-354 )。
RSV感染成人以及嬰兒和兒童。在健康成人中，RSV可導致佔主 導地位的上呼吸道疾病.近來，已經發現一些症狀性RSV感染的成人， 特別是老年人，出現RSV感染症狀的機率比先前的報導更髙(Evans, A. S. ， eds. ， 1989， Viral Infections of Humans. Epidemiology and Control, 3rded. ， Plenum Medical Book, New York, p. 525-544)。 另外還報導了發生於家庭護理患者及專門機構護理的年輕患者中的幾 個流行病例(Falsey， A, R. ， 1991， Infect. Control Hosp. Epidemiol. 12: 602-608;和Garvie等人，1980， Br. Med. J. 281: 1253—1254 )。 最後，RSV可引發免疫抑制人群，特別是骨殖移植患者的嚴重疾病 (Hertz等人，1989， Medicine 68: 269-281),
已有RSV疾病的治療措施還很有限.下呼吸道嚴重RSV疾病通常 需要相當的支持性護理，包括施用溼化氧氣和呼吸輔助(Fields等人， eds， 1990， Fields Virology, 2nd ed. ， Vol. 1， Raven Press, New York, P. 1045-1072 )。
儘管疫苗能防止RSV感染和/或RSV-相關疾病，但是現在還沒有 一種疫苗獲得許可.發展疫苗最大的陣礙是安全性. 一種福馬林滅 活疫苗儘管具有免疫原性，但是被免疫嬰兒中的RSV出人意料的引發 了比用類似方法製備的三價副流感疫苗免疫嬰兒更高發且更嚴重的下 呼吸道疾病Uim等人，1969， Am. J. Epidemiol. 89: 422-434; and Kapikian等人，1969， Am. J. Epidemiol. 89: 405-421 ).幾種候選 RSV疫苗已經被放棄，其它的則還在開發中(Murphy等人，1994， Virus Res. 32: 13-36 )，但是即使安全性問題得到解決，疫苗的效果還必 須提高，大重問題有待解決.新生兒期就需要馬上免疫，因為下呼吸 道感染的高峰發生於2-5月齡。預計新生兒免疫應答的不完備和高滴 度母源獲得RSV抗體一起可以降低新生兒期疫苗的免疫原性(Murphy 等人，1988,J. Virol. 62: 3907-3910; and Murphy等人，1991, Vaccine 9: 185-189 )。最後，原發性RSV感染及疾病不能很好地保護繼發性RSV 疾病(Henderson等人，1979， New Engl. J. Med. 300: 530-534 )。
目前，預防RSV疾病的最有效方法是被動免疫。起初的證據表明 IgG的保護作用來自雪貂(ferret) (Prince, G. A. ， Ph. D. diss,， University of California, Los Angeles, 1975 )和人(Lambrecht et al， 1976， J. Infect. [Hs. 134: 211-217;和Glezen等人，1981, J. Pediatr. 98: 708-715 )母源抗體試驗結果，Hemming等人(Morel 1 等人，eds. ， 1986， Clinical Use of Intravenous Immunoglobulins, Academic Press, London, P. 285- 294 )發現在疑似患有新生兒 膿毒血症新生兒體內靜脈內免疫球蛋白(IVIG)藥動學研究中，RSV 抗體可用來治療或防止RSV感染。在該試驗中，值得注意的是一個呼 吸道分泌物含RSV的要兒在IVIG輸注後迅速康復。IVIG曲線的後續 分析發現異常高滴度的RSV中和抗體.同一組研究者然後測定了富舍 RSV中和抗體的超免疫血清或免疫球蛋白保護棉鼠和靈長類免受RSV 感染(Prince等人，1985, Virus Res. 3: 193-206; Prince等人， 1990， J. Virol. 64: 3091-3092; Hemming等人，1985， J, Infect. Dis. 152: 1083—1087; Prince等人，1983, Infect. I咖im. 42: 81-87; and Prince等人，1985， J. Virol. 55: 517-520 )。這些試驗的結果 表明IVIG除了能治療或防止RSV相關病症，還可用於防止RSV感染.
最近臨床試驗表明這種被動施用RSV超免疫球蛋白(RSV IVIG) 能夠保護易感兒童免受RSV引發的嚴重下呼吸道感染(Groothius等 人，1993， New Engl. J.Med. 329: 1524-1530;和The PREVENT Study Group, 1997, Pediatrics 99: 93-99).儘管這是防止RSV感染的一 大進步，但是這種治療方法在廣泛使用上存在某些局限。首先，RSV IVIG 必須在幾小時內靜脈內輸注達到有效劑量，其次，超免疫球蛋白中活 性物質的濃度不足以治療易感成人或大部分心肺病易感兒童。第三， 靜脈內輸注需要再RSV季節住院數月.最後，選擇足夠提供者製備RSV
高免球蛋白滿足該產品的需要也是一大難趙.目前，只有約M正常 提供者的RSV中和抗體滴度足夠高能夠定量超免疫球蛋白的產量.
提高免疫球蛋白特異性活性的一種方法是製備一種或多種高效 RSV中和單克隆抗體(MAbs).這類MAbs應該是人的或人源化的從而
保留有利的藥動學並且遊免人抗鼠抗體應答，由於重複劑量需要貫穿 RSV季節.現已證實RSV表面的兩種糖蛋白F和G是中和抗體的靶標 (Fields等人，1990，同上；和Murphy等人，1994，同上)，
針對RSV F蛋白的A抗原位點中的表位的人源化抗體SYMGIS , 要求在整個RSV季節(北半球從11月至4月)按推薦的每月I5 mg/kg 體重的劑量，肌肉內施用給兒童患者防止RSV引發的嚴重下呼吸道感 染。SYNAGIS⑧是人抗體(95!4)與鼠(5%)抗體序列的結合體。參見， Johnson等人，1997, J. Infect. Diseases 176: 1215-1224和美國 專利No. 5， 824， 307，文獻全文在此引入作為參考。人重鏈序列源 自人IgGl恆定區以及Cor (Press等人，1970， Biochem. J. 117: 641-660 )和Cess (Takashi等人，1984， Proc. Natl- Acad. ScL USA 81: 194-198 )的VH基因的可變框架區域。人輕鏈序列源自Q的恆定區和 VL基因K104 Jk-4的可變框架區域(Bentley等人，1980， Nature 288:
5194-5198 ),鼠序列源自鼠單克隆抗體Mab1129 (Beeler等人，1989， J, Virology 63: 2941-2950 )，該方法是將鼠互補決定區移植入人抗 體框架。
呼吸道疾病中的一大部分是由副粘病毒亞科和肺病毒亞科的成員 引發的。本申請中首次描述了感染人的另一種哺乳動物肺病毒hMPV 的鑑定.仍然需要有效疫苗提供針對導致呼吸道感染的多種病毒的保
護作用，
本申請中引述和討論的文獻不應被理解為是本發明的現有技術. 3.發明概述
本發明涉及一種分離的哺乳動物負鏈RNA病毒，間質肺病毒 (MPV)，該病毒屬於副粘病毒科肺病毒亞科.本發明還涉及在系統發 育學上可鑑定為對應或屬於間質肺病毒屬的分離哺乳動物負鏈RNA病 毒及其組分.具體而言，本發明涉及一種哺乳動物MPV，該病毒在系 統發育學上與巴黎CNCM中保藏號為1-2614的病毒分離林的相關程度 比其與C型APV的相關程度更密切.在更具體的實施方案中，所述哺 乳動物MPV可以是哺乳動物MPV的Al、 A2、 Bl或B2變種。但是，本 發明的哺乳動物MPV包括待鑑定的其它變種，而不僅限於A1、 A2、 Bl 或B2變種。
本發明涉及哺乳動物間質肺病毒，特別是人間質肺病毒的不同分 離株的基因組核苷酸序列。本發明涉及哺乳動物間質肺病毒不同分離 株序列信息在診斷和治療方法中的用途.本發明涉及哺乳動物間質肺 病毒不同分離株的基因組核苷酸序列之間的差異，及其在本發明診斷 和治療方法中的用途.在特定實施方案中，編碼N， M， F, L， P， M2-1， M2-2， SH或G 0RF的哺乳動物MPV的核苷酸序列可以用於鑑定本 發明的病毒，在另一特定實施方案中，編碼N， M, F, L， P， M2-l， M2-2， SH或G 0RF的哺乳動物MPV的核普酸序列被用於將哺乳動物MPV劃分 為Al、 A2, Bl或B2變種。在一特定實施方案中，本發明涉及將不同 間質肺病毒分離林中的單核苷酸多態性(SNPs)用於診斷目的.
本發明涉及源自哺乳動物MPV或禽類肺病毒(APV)的重組及嵌 合病毒，本發明所述的重組病毒是一種源自哺乳動物MPV或禽類肺病 毒被內源或天然基因組序列或非天然基因組序列編碼的病毒.本發明 所述的非天然序列是指由於一處或多處突變而有別於天然或內源基因
組序列的序列，所述突變包括但不限於基因組序列中能或不會導致表 型改變的點突變、重排、插入、缺失等.本發明所述的嵌合病毒是一
種重組的MPV或APV，其中還含有異源核苷酸序列.本發明所述的嵌 合病毒是由具有下述特性的核苷酸序列編碼基因組中添加了異源核 苷酸序列或者基因組中的內源或天然核苷酸序列被異源核苷酸序列所 取代。在某些實施方案中，本發明的嵌合病毒源自MPV或APV，其中 的一個或多個ORF或其部分被來自另一株間質肺病毒的同源ORF或其 部分所取代。在一個範例實施方案中，哺乳動物MPV F基因的ORF被 APV F基因的ORF所取代。在一些其它實施方案中，本發明所述嵌合 病毒源自APV，其中一個或多個ORF被哺乳動物MPV的同源ORF所取 代。
本發明涉及編碼間質肺病毒(包括哺乳動物和禽類毒株)基因組 或其部分的核苷酸序列.本發明涉及編碼間質肺病毒基因產物的核苷 酸序列.具體而言，本發明涉及，但不限於，編碼MPV F蛋白、G蛋 白、M蛋白、SH蛋白、N蛋白、P蛋白、M2蛋白或L蛋白的核苷酸序 列，具體而言，本發明涉及編碼哺乳動物MPV變種F蛋白、G蛋白、M 蛋白、SH蛋白、N蛋白、P蛋白、M2蛋白或L蛋白的核苷酸序列，所 述變種是例如但不限於MPV的Al、 A2、 Bl或B2變種。本發明進一步 還涉及編碼間質肺病毒基因組或其部分的cDNA或RNA，包括哺乳動物 和禽類間質肺病毒，除了相對於病毒基因組異源或非天然的核苷酸序 列之外'本發明進一步涉及所述cDM或RNA編碼的嵌合或重組病毒，
本發明進一步還涉及哺乳動物MPV以及哺乳動物MPV不同變種的 F蛋白、G蛋白、M蛋白、SH蛋白、N蛋白、P蛋白、M2蛋白或L蛋白 的多肽及4L基酸序列。本發明進一步還涉及抗哺乳動物MPV以及哺乳 動物MPV不同變種的F蛋白、G蛋白、M蛋白、SH蛋白、N蛋白、P蛋 白、M2蛋白或L蛋白的抗體。該抗體可用於診斷或治療方法，在一些 更具體的實施方案中，所述抗體特異性針對哺乳動物MPV,在一些實 施方案中，所述抗體特異性針對哺乳動物MPV的變種。本發明進一步 還涉及含有下列一種或多種蛋白的疫苗製劑及免疫原性組合物哺乳 動物MPV的F蛋白、G蛋白、M蛋白、SH蛋白、N蛋白、P蛋白、M2
蛋白和/或L蛋白。
本發明進一步還涉及包含哺乳動物或禽類間質肺病毒的疫苗制刑
及免疫原性組合物，所述病毒包括所述病毒的重組及嵌合形式，具體
而言，本發明涉及含有MPV和/或APV的重組或嵌合形式的疫苗製劑， 本發明進一步還涉及含有嵌合MPV的疫苗，其中所述嵌合MPV編碼一 種或多種APV蛋白，並且其中所述嵌合MPV任選地還表達一種或多種 異源或非天然序列.本發明還涉及含有嵌合APV的疫苗，其中所述嵌 合APV編碼一種或多種hMPV蛋白，並且其中所迷嵌合APV任選還表
達一種或多種異源或非天然序列。本發明還涉及多價疫苗，包括二價 和三價疫苗。具體而言，本發明的多價疫苗包括由同一或不同肺病毒 栽體表達的兩種或多種抗原多肽.多價疫苗中的抗原多肽包括但不限 於MPV、 APV、 PIV、 RSV、流感病毒或其它負鏈RNA病毒或其它病毒如 麻務病毒的抗原多肽.
本發明進一步還涉及治療個體呼吸道感染的方法.在一些實施方 案中，本發明涉及通過向個體施用含有哺乳動物MPV疫苗製劑治療呼 吸道感染的方法，在特定實施方案中，治療個體呼吸道感染的方法包 括向個體施用含有重組或嵌合哺乳動物MPV或APV的疫苗製劑或免疫 原性組合物，在更具體的實施方案中，所述重組或嵌合哺乳動物MPV 是減毒的。在特定實施方案中，本發明涉及治療人類患者呼吸道感染 的方法，其中包括向人類患者施用含重組或嵌合APV，或者編碼APV 的F蛋白、G蛋白、M蛋白、SH蛋白、N蛋白、P蛋白、M2蛋白或L 蛋白的核苷酸序列的疫苗製劑.
本發明提供一種分離的負鏈單鏈RNA病毒MPV，該病毒屬於副粘 病毒科肺病毒亞科，從系統發育學上可鑑定為屬於間質肺病毒屬，其 中所述病毒在系統發育學上與含有SEQ ID NO: 18、 SEQ ID N(h 19、 SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21所示核苷酸序列的病毒分離抹間的 相關程度比其與禽類奏氣管炎致病因子火雞鼻氣管炎病毒間的相關程 度更密切。在一些實施方案中，本發明提供了一種分離的負鏈單鏈MA 間質肺病毒，其中所述病毒的基因組包含SEQ ID NO: 18所示核普酸 序列。在一些實施方案中，本發明提供了一種分離的負鏈單鏈UNA間 質肺病毒，其中該病毒的基因組包含SEQ ID NO: 19所示核苷酸序列， 在一些實施方案中，本發明提供了一種分離的負鏈單鏈RNA間質肺病 毒，其中該病毒的基因組包含SEQ ID NO: 20所示核苷酸序列。在一 些實施方案中，本發明提供了一種分離的負鏈單鏈RM間質肺病毒，
其中該病毒的基因組包舍SEQ ID NO: n所示核苷酸序列。在一些實 施方案中，本發明提供了一種分離的核酸，其中所迷核酸的核苷酸序 列與SEQ ID NO: 18、 SEQ ID N0: 19、 SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21具有至少70X同一性，其中所述序列同一性是在SEQ IDNO: l8、 SEQ ID NO: 19、 SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21全長範圍內測定的.在 一些實施方案中，本發明提供了一種分離的核酸，其中所述核酸編碼 一種蛋白質，該蛋白包含(i)與哺乳動物MPV變種B1的G蛋白(SBQ ID NO: 324 )具有至少66X序列同一性的胺基酸序列；(ii )與哺乳動 物MPV變種Bl的N蛋白(SEQ ID NO: 368 )具有至少98. 55i序列同一 性的胺基酸序列；(i ii)與哺乳動物MPV變種Bl的P蛋白(SEQ ID NO: 376 )具有至少96X序列同一性的胺基酸序列；(iv )與哺乳動物MPV 變種Bl的M蛋白(SEQ ID NO: 360 )相同的胺基酸序列；(v)與哺 乳動物MPV變種Bl的F蛋白(SEQ ID NO: 316 )具有至少99%序列同 一性的胺基酸序列；(vi )與哺乳動物MPV變種Bl的M2-1蛋白(SEQ ID NO: 340 )具有至少9854序列同一性的氛基酸序列；(vii)與哺乳動物 MPV變種Bl的M2-2蛋白(SEQ ID NO: 348 )具有至少99X序列同一 性的泉基酸序列；(viii)與哺乳動物MPV變種B1的SH蛋白(SEQ ID NO: 384 )具有至少8354序列同一性的胺基酸序列；或(ix)與哺乳動 物MPV變種Bl的L蛋白(SEQ IDNO: 332 )具有至少99%序列同 一性 的胺基酸序列，在一些實施方案中，本發明提供了一種分離的核酸， 其中所述核酸編碼一種蛋白質，該蛋白包含(i)與哺乳動物MPV變 種Al的G蛋白(SEQ ID冊322 )具有至少6654序列同一性的胺基酸 序列；(ii )與哺乳動物MPV變種Al的N蛋白(SEQ ID NO: 366 )具 有至少99. 5X序列同一性的胺基酸序列；(iii)與哺乳動物MPV變種 Al的P蛋白(SEQ ID NO: 374 )具有至少9W序列同一性的胺基酸序 列；(i v )與哺乳動物MPV變種Al的M蛋白(SEQ ID NO: 358 )具有 至少99X序列同一性的胺基酸序列；(v)與哺乳動物MPV變種Al的F 蛋白(SEQ ID NO: 314 )具有至少98 4序列同 一性的胺基酸序列；(vi ) 與哺乳動物MPV變種Al的M2-l蛋白(SEQ ID NO: 338 )具有至少99% 序列同一性的胺基酸序列；(vii)與哺乳動物MPV變種Al的M2-2蛋 白(SEQ ID NO: 346 )具有至少96%序列同一性的胺基酸序列；(viii) 與哺乳動物MPV變種Al的SH蛋白(SEQ ID NO: 382 )具有至少84%
序列同一性的胺基酸序列；或(ix)與哺乳動物MPV變種Al的L蛋 白(SEQ ID NO: 330 )具有至少99%序列同一性的胺基酸序列，在一 些實施方案中，本發明提供了一種分離的核酸，其中所述核酸編碼一 種蛋白質，該蛋白包舍(i)與哺乳動物MPV變種A2的G蛋白(SEQID N0: 332 )具有至少66X序列同 一性的胺基酸序列；(ii)與哺乳動物 MPV變種A2的N蛋白(SBQ ID NO: 367 )具有至少99.5%序列同一性 的胺基酸序列；(iii)與哺乳動物MPV變種A2的P蛋白(SEQ ID NO: 375 )具有至少96X序列同一性的胺基酸序列；(iv)與哺乳動物MPV 變種A2的M蛋白(SEQ ID NO: 359 )具有至少99X序列同一性的氨基 酸序列；(v)與哺乳動物MPV變種A2的F蛋白(SEQ ID NO: 315) 具有至少9M序列同一性的胺基酸序列；(vi)與哺乳動物MPV變種A2 的M2-l蛋白(SEQ ID NO: 339 )具有至少99%序列同 一性的胺基酸序 列；(vii)與哺乳動物MPV變種A2的M2-2蛋白(SEQ ID NO: 347 ) 具有至少96X序列同一性的胺基酸序列；(viii)與哺乳動物MPV變種 A2的SH蛋白(SEQ ID NO: 383 )具有至少84X序列同 一性的胺基酸 序列；或(ix)與哺乳動物MPV變種A2的L蛋白(SEQ ID NO: 331) 具有至少99X序列同一性的胺基酸序列.在一些實施方案中，本發明 提供了一種分離的核酸，其中所述核酸編碼一種蛋白質，該蛋白包含 (i )與哺乳動物MPV變種B2的G蛋白(SEQ ID NO: 325 )具有至少 66X序列同一性的胺基酸序列；(ii)與哺乳動物MPV變種B2的N蛋 白(SEQ ID NO: 369 )具有至少979i序列同 一性的胺基酸序列；(iii) 與哺乳動物MPV變種B2的P蛋白(SEQ ID NO: 377 )具有至少96X序 列同一性的胺基酸序列；(iv)與哺乳動物MPV變種B2的M蛋白(SEQ ID NO: 361)相同的胺基酸序列；(v)與哺乳動物MPV變種B2的F 蛋白(SEQ ID NO: 3117 )具有至少9W序列同 一性的胺基酸序列；(vi ) 與哺乳動物MPV變種B2的M2-1蛋白(SEQ ID NO: 341)具有至少98% 序列同一性的胺基酸序列；(vii)與噴乳動物MPV變種B2的M2-2蛋 白(SEQ ID NO: 349 )具有至少9M序列同 一性的胺基酸序列；(viii) 與哺乳動物MPV變種B2的SH蛋白(SEQ ID NO: 385 )具有至少 序列同一性的胺基酸序列；或(ix)與哺乳動物MPV變種B2的L蛋 白(SEQ ID NO: 333 )具有至少99X序列同 一性的胺基酸序列。在一 些實施方案中，本發明提供了一種分離的核酸，其中該核酸能夠與哺
乳動物MPV核酸在高度嚴格、中度嚴格或低度嚴格條件下特異性雜交.
在一些實施方案中，本發明提供了一種病毒，該病毒含有SEQ ID NO: 18-21所示核普酸序列或其片段.
在一些實施方案中，本發明提供了一種分離的蛋白質，該蛋白含 有(i)與哺乳動物MPV變種Bl的G蛋白(SEQ ID NO: 324 )具有至 少66X序列同一性的胺基酸序列；(ii)與哺乳動物MPV變種Bl的N 蛋白(SEQ ID NO: 368 )具有至少98. 5S序列同 一性的胺基酸序列；
(iii)與哺乳動物MPV變種B1的P蛋白(SEQ ID NO: 376 )具有至 少96X序列同一性的胺基酸序列；(iv)與哺乳動物MPV變種Bl的M 蛋白(SEQ ID NO: 360)相同的胺基酸序列；(v)與哺乳動物MPV變 種B1的F蛋白(SBQ ID NO: 316)具有至少99X序列同一性的胺基酸 序列；(vi)與哺乳動物MPV變種B1的M2-1蛋白(SEQ ID NO: 340 ) 具有至少98X序列同一性的胺基酸序列；(vii)與哺乳動物MPV變種 Bl的M2-2蛋白(SEQ ID NO: 348 )具有至少99X序列同一性的氨基 酸序列；(viii )與哺乳動物MPV變種Bl的SH蛋白(SEQ IDN0: 384 ) 具有至少83X序列同一性的胺基酸序列；或Ux)與哺乳動物MPV變 種Bl的L蛋白(SEQ ID NO: 332 )具有至少99X序列同一性的胺基酸 序列.在一些實施方案中，本發明提供了一種分離的蛋白質，該蛋白 舍有(i )與哺乳動物MPV變種Al的G蛋白(SEQ ID NO: 322 )具有 至少66X序列同一性的胺基酸序列；(ii)與哺乳動物MPV變種Al的 N蛋白(SEQ ID NO: 366 )具有至少99. 5X序列同一性的胺基酸序列；
(iii)與哺乳動物MPV變種Al的P蛋白(SEQ ID NO: 374 )具有至 少96X序列同一性的氣基酸序列；(iv)與哺乳動物MPV變種Al的M 蛋白(SEQ ID NO: 358)具有至少99X序列同一性的胺基酸序列；(v) 與哺乳動物MPV變種Al的F蛋白(SEQ ID NO: 314 )具有至少9M序 列同一性的胺基酸序列；(vi)與哺乳動物MPV變種Al的M2-l蛋白
(SEQ ID NO: 338 )具有至少99X序列同 一性的胺基酸序列；(vii) 與哺乳動物MPV變種Al的M2-2蛋白(SEQ ID NO: 346 )具有至少96% 序列同一性的胺基酸序列；(viii)與哺乳動物MPV變種Al的SH蛋 白(SEQ ID NO: 382 )具有至少84^序列同 一性的胺基酸序列；或(ix ) 與哺乳動物MPV變種Al的L蛋白(SEQ ID NO: 330 )具有至少9M序 列同一性的胺基酸序列。在一些實施方案中，本發明提供了一種分離
的蛋白質，該蛋白含有(i )與哺乳動物MPV變種A2的G蛋白(SEQ ID NO: 332 )具有至少669i序列同 一性的胺基酸序列；(ii)與哺乳動物 MPV變種A2的N蛋白(SBQ ID NO: 367 )具有至少99.594序列同一性 的胺基酸序列；(iii)與哺乳動物MPV變種A2的P蛋白(SBQ ID NO: 375 )具有至少96X序列同一性的胺基酸序列；(iv)與哺乳動物MPV 變種A2的M蛋白(SEQ ID NO: 359 )具有至少9W序列同一性的氨基 酸序列；(v)與哺乳動物MPV變種A2的F蛋白(SEQ ID NO: 315) 具有至少98 4序列同一性的胺基酸序列；(vi)與哺乳動物MPV變種A2 的M2-1蛋白(SEQ ID NO: 339 )具有至少99、序列同 一性的氦基酸序 列；(vii )與哺乳動物MPV變種A2的M2-2蛋白(SEQ ID NO: 347 ) 具有至少96X序列同一性的胺基酸序列；(viii)與哺乳動物MPV變種 A2的SH蛋白(SEQ ID NO: 383 )具有至少84%序列同一性的氛基酸 序列；或(ix)與哺乳動物MPV變種A2的L蛋白(SEQ ID NO: 331 ) 具有至少99X序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方案中，本發明 提供了一種分離的蛋白質，該蛋白含有(i)與哺乳動物MPV變種B2 的G蛋白(SBQ ID NO: 325)具有至少66X序列同一性的胺基酸序列； (ii)與哺乳動物MPV變種B2的N蛋白(SEQ ID NO: 369 )具有至 少97%序列同一性的胺基酸序列；(iii)與哺乳動物MPV變種B2的P 蛋白(SEQ ID NO: 377 )具有至少96X序列同一性的胺基酸序列；(iv ) 與哺乳動物MPV變種B2的M蛋白(SEQ ID NO: 361)相同的胺基酸 序列；(v)與哺乳動物MPV變種B2的F蛋白(SEQ ID NO: 317)具 有至少99%序列同一性的胺基酸序列；(vi)與哺乳動物MPV變種B2 的M2-l蛋白(SEQ ID NO: 341)具有至少98%序列同一性的胺基酸序 列；(vii )與哺乳動物MPV變種B2的M2-2蛋白(SEQ ID NO: 349 ) 具有至少99X序列同一性的胺基酸序列；(viii)與哺乳動物MPV變種 B2的SH蛋白(SEQ ID NO: 385 )具有至少84%序列同一性的胺基酸 序列；或(ix)與哺乳動物MPV變種B2的L蛋白(SEQ ID NO: 333) 具有至少99X序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方案中，本發明 提供了一種抗體，該抗體能與由下列胺基酸序列組成的蛋白特異性雜 交(i )與哺乳動物MPV變種Bl的G蛋白(SEQ ID NO: 324 )具有 至少66X序列同一性的胺基酸序列；(ii)與哺乳動物MPV變種Bl的 N蛋白(SEQ ID NO: 368)具有至少98. 5、序列同 一性的胺基酸序列； (iii)與哺乳動物JIPV變種B1的P蛋白(SEQ ID NO: 376 )具有至 少96X序列同一性的胺基酸序列；(iv)與哺乳動物MPV變種Bl的M 蛋白(SEQ ID NO: 360 )相同的胺基酸序列；(v)與嗜乳動物MPV變 種B1的F蛋白(SEQ ID NO: 316)具有至少99X序列同一性的胺基酸 序列；(Vi)與哺乳動物MPV變種Bl的M2-l蛋白(SEQ ID NO: 340 ) 具有至少9894序列同一性的胺基酸序列；(vii)與哺乳動物MPV變種 Bl的M2-2蛋白(SEQ ID NO: 348 )具有至少99X序列同一性的氨基 酸序列；(viii)與哺乳動物MPV變種B1的SH蛋白(SEQ IDN0: 384 ) 具有至少83X序列同一性的胺基酸序列；或(ix)與哺乳動物MPV變 種Bl的L蛋白(SEQ ID NO: 332 )具有至少999i序列同 一性的胺基酸 序列。在一些實施方案中，本發明提供了一種抗體，該抗體能與由下 列胺基酸序列組成的蛋白特異性雜交(i)與哺乳動物MPV變種Al 的G蛋白(SEQ ID NO: 322 )具有至少66X序列同一性的胺基酸序列；
(ii )與哺乳動物MPV變種Al的N蛋白(SEQ ID NO: 366)具有至 少99.5X序列同一性的胺基酸序列；(iii)與哺乳動物MPV變種Al的 P蛋白(SEQ ID NO: 374 )具有至少96%序列同 一性的氦基酸序列；(iv) 與哺乳動物MPV變種Al的M蛋白(SEQ ID NO: 358 )具有至少99%序 列同一性的胺基酸序列；(v)與哺乳動物MPV變種Al的F蛋白(SEQ ID NO: 314)具有至少98X序列同一性的胺基酸序列；(vi)與哺乳動物 MPV變種Al的M2-1蛋白(SEQ ID NO: 338 )具有至少9H序列同一 性的胺基酸序列；(vii )與哺乳動物MPV變種Al的M2-2蛋白(SEQ ID NO: 346 )具有至少96X序列同一性的胺基酸序列；(viii)與哺乳動 物MPV變種Al的SH蛋白(SEQ ID NO: 382 )具有至少84X序列同一 性的胺基酸序列；或(ix)與哺乳動物MPV變種Al的L蛋白(SEQ ID NO: 330 )具有至少99!4序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方案中， 本發明提供了一種抗體，該抗體能與由下列胺基酸序列組成的蛋白特 異性雜交(i )與哺乳動物MPV變種A2的G蛋白(SEQ ID NO: 332 ) 具有至少66X序列同一性的胺基酸序列；(ii)與哺乳動物MPV變種A2 的N蛋白(SEQ ID NO: 367 )具有至少96%序列同 一性的胺基酸序列；
(iii )與哺乳動物MPV變種A2的P蛋白(SEQ ID NO: 375 )具有至 少96X序列同一性的胺基酸序列；(iv)與哺乳動物MPV變種A2的M 蛋白(SEQ ID NO: 359 )具有至少99%序列同一性的胺基酸序列；(v)
與哺乳動物MPV變種A2的F蛋白(SEQ ID NO: 315 )具有至少9M序 列同一性的氦基酸序列；(vi)與哺乳動物MPV變種A2的M2-l蛋白 (SEQ ID NO: 339 )具有至少99X序列同 一性的胺基酸序列；(vii) 與哺乳動物MPV變種A2的M2-2蛋白(SEQIDN0: 347 )具有至少96X 序列同一性的胺基酸序列；(viii)與哺乳動物MPV變種A2的SH蛋 白(SEQIDN0: 383 )具有至少84X序列同 一性的氡基酸序列；或(ix) 與哺乳動物MPV變種A2的L蛋白(SEQ ID NO: 331 )具有至少99%序 列同一性的胺基酸序列。在一些實施方案中，本發明提供了一種抗體， 該抗體能與由下列胺基酸序列組成的蛋白特異性雜交(i)與哺乳動 物MPV變種B2的G蛋白(SEQ ID NO: 325 )具有至少66X序列同一性 的胺基酸序列；(U )與哺乳動物MPV變種B2的N蛋白(SEQ ID NO: 369 )具有至少9754序列同一性的胺基酸序列；(iii)與哺乳動物MPV 變種B2的P蛋白(SEQ ID NO: 377 )具有至少9M序列同一性的氨基 酸序列；(iv)與哺乳動物MPV變種B2的M蛋白(SEQ ID NO: 361) 相同的胺基酸序列；(v )與哺乳動物MPV變種B2的F蛋白(SEQ ID NO: 317)具有至少99X序列同一性的胺基酸序列；(vi)與哺乳動物MPV 變種B2的M2-1蛋白(SEQ ID NO: 341)具有至少9M序列同一性的 胺基酸序列；(vii)與哺乳動物MPV變種B2的M2-2蛋白(SEQ ID NO: 349)具有至少99 t序列同一性的胺基酸序列；(viii)與哺乳動物MPV 變種B2的SH蛋白(SEQ ID NO: 385 )具有至少84%序列同一性的氨 基酸序列；或(ix)與哺乳動物MPV變種B2的L蛋白(SEQ ID NO: 333 )具有至少9W序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方案中，本 發明提供了一種檢測樣本中哺乳動物MPV Bl變種的方法，該方法包 括讓樣本與Bl變種的特異性抗體接觸.在一些實施方案中，本發明 提供了一種檢測樣本中哺乳動物MPV Al變種的方法，該方法包括讓 樣本與Al變種的特異性抗體接觸。在一些實施方案中，本發明提供 了一種檢測樣本中哺乳動物MPV A2變種的方法，該方法包括讓樣本 與A2變種的特異性抗體接觸.在一些實施方案中，本發明提供了一 種檢測樣本中哺乳動物MPV B2變種的方法，該方法包括讓樣本與B2 變種的特異性抗體接觸，
在一些實施方案中，本發明提供了一種鑑定病毒分離林為哺乳動 物MPV的方法，該方法包括讓分離株或其組分與哺乳動物MPV的特異
性抗體接觸。在一些實施方案中，本發明提供了一種病毒學診斷哺乳
動物MPV感染的方法，該方法包括通過讓樣本與MPV的特異性抗體接 觸從而測定所述哺乳動物樣本是否存在病毒分離林或其組分。在一些 實施方案中，本發明提供了一種病毒學診斷個體哺乳動物MPV慼染的 方法，該方法包括從個體獲取樣本，然後讓樣本與MPV特異性抗體 接觸，其中如果抗體與樣本結合則表明個體感染了哺乳動物MPV.
在一些實施方案中，本發明提供了感染性重組病毒，其中所述重 組病毒包含哺乳動物MPV基因組，並且另外還包含非天然的MPV序列。 在一些實施方案中，本發明提供了一種重組核酸，其中所述重組核酸 舍有(i)編碼MPVA1變種G多肽的核酸；以及(ii)編碼非天然MPV 多肽的核酸。在一些實施方案中，本發明提供了一種重組核酸，其中 所述重組核酸含有(i )編碼MPV A2變種G多肽的核酸；以及(ii ) 編碼非天然MPV多舦的核酸.在一些實施方案中，本發明提供了一種 重組核酸，其中所述重組核酸含有(i)編碼MPV Bl變種G多肽的核 酸；以及(ii)編碼非天然MPV多肽的核酸，在一些實施方案中，本 發明提供了一種重組核酸，其中所述重組核酸含有(i)編碼MPV B2 變種G多肽的核酸；以及(ii)編碼非天然MPV多肽的核酸.
在一些實施方案中，本發明提供了一種感染性嵌合病毒，其中所 述嵌合病毒含有哺乳動物MPV第一變種的基因組，其中哺乳動物MPV 第一變種基因組中一個或多個開放閱讀框已被源自哺乳動物MPV第二 變種的類似開放閱讀框所取代.在一些實施方案中，本發明提供了一 種感染性嵌合病毒，其中所述嵌合病毒含有哺乳動物MPV第一變種的 基因組，其中哺乳動物MPV第二變種的一個或多個開放閱讀框被插入 哺乳動物MPV第一變種的基因組內。
在一些實施方案中，本發明提供了一種感染性嵌合病毒，其中所 述嵌合病毒含有哺乳動物MPV的基因組，其中哺乳動物MPV基因組中 一個或多個開放閱讀框已被編碼一種或多種下列蛋白質的ORF所取 代(i)禽類MPV F蛋白；(ii)禽類MPV G蛋白(iii)禽類MPV SH 蛋白；(iv )禽類MPV N蛋白(v )禽類MPV P蛋白；(vi )禽類MPV M2 蛋白；(vii )禽類MPV M2-l蛋白；(viii )禽類MPV M2-2蛋白；或 (ix)禽類MPV L蛋白.在一些實施方案中，本發明提供了一種感染 性嵌合病毒，其中所述嵌合病毒含有禽類MPV的基因組，其中禽類MPV
基因組中一個或多個開放閱讀框已被編碼下列一種或多種下列蛋白的
開放閱讀框所取代(i)哺乳動物MPV F蛋白；(ii)哺乳動物MPV G 蛋白(iii)哺乳動物MPV SH蛋白；(iv)哺乳動物MPV N蛋白(v) 哺乳動物MPV P蛋白；(vi)哺乳動物MPV M2蛋白；(vi i )哺乳動物 MPVM2-1蛋白；(viii)哺乳動物MPV M2-2蛋白；或(ix)哺乳動物 MPV L蛋白.
在一些實施方案中，本發明提供了一種免疫原性組合物，其中所 述免疫原性組合物含有本發明所述的感染性重組病毒，
在一些實施方案中，本發明提供了一種檢測樣本中哺乳動物MPV 的方法，該方法包括讓樣本與本發明所述的核酸序列接觸.在一些實 施方案中，本發明提供了一種葯物組合物，其中所迷藥物組合物含有 本發明所述的感染性重組病毒.
在一些實施方案中，本發明提供了一種治療或預防哺乳動物呼吸 道感染的方法，該方法包括施用含有哺乳動物間質肺病毒的疫苗.在 一些實施方案中，本發明提供了 一種治療或防止哺乳動物呼吸道感染 的方法，該方法包括施用含有重組哺乳動物間質肺病毒的疫苗.
在一些實施方案中，本發明提供了一種治療或預防哺乳動物呼吸 道感染的方法，該方法包括施用含有禽類間質肺病毒的疫苗，在一些 實施方案中，本發明提供了一種治療或預防人呼吸道感染的方法，該 方法包括施用含有禽類間質肺病毒的疫苗.在一些實施方案中，本發 明提供了一種治療或預防個體呼吸道感染的方法，該方法包括向個體 施用本發明組合物.
在一些實施方案中，本發明提供了一種鑑定可用於治療哺乳動物 MFV感染的化合物的方法，其中該方法包括(a)用哺乳動物MPV感 染動物；(b)向動物施用測試化合物；以及(c)測定測試化合物對 動物感染的效果，其中能減輕感染程度或改善感染相關症狀的化合物 被鑑定為可用於治療哺乳動物MPV感染的化合物。在一些實施方案中， 本發明提供了一種鑑定可用於治療哺乳動物MPV感染的化合物的方 法，其中該方法包括(a)用哺乳動物MPV感染細胞培養物；(b)用 測試化合物孵育細胞培養物；以及(c)測定測試化合物對細胞培養 物感染的效果，其中能減輕感染程度的化合物被鑑定為可用於治療哺 乳動物MPV感染的化合物.在一些實施方案中，本發明提供了一種診
斷動物的哺乳動物MPV感染的方法，其中該方法包括通過讓所述樣 本與能和禽類肺病毒組分反應的核酸或抗體反應從而測定所述動物樣
本是否存在病毒分離林或其組分，所述核酸或抗體與MPV組分交叉反應。
在一些實施方案中，本發明提供了一種血清學診斷動物感染哺乳 動物MPV的方法，該方法包括讓取自動物的樣本與本發明的蛋白質接 觸，在一些實施方案中，本發明提供了一種血清學診斷動物感染哺乳 動物MPV的方法，該方法包括讓取自動物的樣本與APV的蛋白質接觸. 在一些實施方案中，本發明提供了一種血清學診斷禽類APV感染的方 法，該方法包括讓取自動物的樣本與本發明的蛋白質接觸，
在一些實施方案中，本發明提供了一種分離的負鏈單鏈RNA病毒 MPV，該病毒屬於副粘病毒科肺病毒亞科，在系統發育學上可鑑定為 對應間質肺病毒屬，該病毒在系統發育學上與巴黎CNCM中保藏號為 1-2614病毒分離抹的相關程度比其與禽類鼻氣管炎致病因子火雞鼻氣 管炎病毒間的相關程度更密切.
3.1習慣命名及縮寫 cDM互補DNA L大蛋白
M基質蛋白(排列於包膜內) F融合糖蛋白
HN血凝素-神經氨酸酶糖蛋白
N， NP或NC核蛋白(與RNA結合具有聚合酶活性) P磷蛋白 MOI感染複數
NA神經氨酸醃(包膜糖蛋白) PIV副流感病毒 hPIV人副流感病毒 hPIV3 3型人副流感病毒 APV/hMPV具有hMPV序列的重組APV hMPV/APV具有APV序列的重組hMPV 哺乳動物MPV哺乳動物間質肺病毒 nt核苷酸
RNP核糖核酸蛋白 rRNP重組RNP vRNA基因組病毒RNA cRNA反基因組病毒RNA hMPV人間質肺病毒 APV禽類肺病毒
MVA修飾後的疽苗病毒安卡拉林(Ankara) FACS螢光激活細胞分選儀 CPE細胞病變效應
位置l被轉錄的病毒基因組笫一基因的位置
位置2天然病毒基因組第一和第二開放閱讀框之間的位置，或者可替 代地為，被轉錄的病毒基因組第二基因的位置
位置3天然病毒基因組第二和笫三開放閱讀框之間的位置，或者可替 代地為，被轉錄的病毒基罔組笫三基因的位置
位置4天然病毒基因組第三和第四開放閱讀框之間的位置，或者可替 代地為，被轉錄的病毒基因組笫四基因的位置
位置5天然病毒基因組第四和第五開放閱讀框之間的位置，或者可替 代地為，被轉錄的病毒基因組第五基因的位置
位置6天然病毒基因組第五和第六開放閱讀框之間的位置，或者可替 代地為，被轉錄的病毒基因組第六基因的位置 4.附閨描述


圖1:分離林00-1與肺病毒亞科其它成員的已發現的胺基酸序列 的同源百分比，百分比(x 100)得自N， P， M， F和L中的兩個RAP-PCR片段的胺基酸序列(8和9/10)。
困2:使用免疫螢光和病毒中和分析得到的、按年齡組別分類的 人的MPV血清陽性率.
圖3:用RAP-PCR和RT-PCR在病毒分離林00-1 ( Al)獲得的片 段位罝和大小所圖示表示的APV的基因組，用RAP-PCR獲得片段1到 10'用RAP-PCR片段1和2中的引物和基於APV和RSV ( Randhawa等 人，1997， J. Virol. 71: 9849-9854 )的前導和尾隨序列設計的引 物獲得了片段A。用RAP-PCR片段1和2以及RAP-PCR片段3中設計 的引物獲得了片段B,用RAP-PCR片段3以及RAP-PCR片段4、 5、 6
和7中設計的引物獲得了片段C。
困4:肺病毒亞科的成員與病毒分離抹00-1 (Al)的N、 P、 M和 F 0RF的比較，比對顯示病毒分離林00-1 (Al)完整的N、 P、 M和P 蛋白以及部分L蛋白的氛基酸序列.分離林00-1 (Al)和其它病毒不 同的胺基酸被標出， 一致的胺基酸用句點表示.缺位用破折號表示. 數字與蛋白質中的胺基酸位置相對應.縮寫如下所示APV-A， B或C: 禽類肺病毒A、 B或C型；hRSV:牛或人呼吸道合胞病毒；PVM:鼠的 肺炎病毒。L8:用RAP-PCR獲得的位於L中的片段8，L 9/10:用RAP-PCR 獲得的位於L中的片段9和10的共有部分。對於L蛋白的比對，僅 有bRSV， hRSV和APV-A的序列可以利用。
困5: MPV核蛋白的預測的胺基酸序列和其它肺炎病毒的序列的 比對.保守區域用框和標籤A， B以及C表示.肺病毒中的保守區城 用灰影表示.缺位用破折號表示，句點表示與MPV —致的胺基酸殘基 的位置。
圖6: MPV褲蛋白與其它肺病毒的胺基酸序列的比較.高度相似 的區域被框住，並且富含穀氨酸的區域在灰影中。缺位用破折號表示. 句點表示與MPV —致的胺基酸殘基的位裡。
圖7: MPV基質蛋白與其它肺病毒的推導出的胺基酸序列的比較。 保守的六肽序列在灰影中.缺位用破折號表示。句點表示與MPV —致 的胺基酸殘基的位置.
困8: fc(PV分離林00-1 (Al)的基因組圖詳。每個0RF都標出起 始和終止密碼子的核苦酸位置。穿過L的ORF的雙線表示L基因的截 短形式.困謙下的3個閱讀框表示原始的G ORF (nt 6262-6972 )和 重疊的潛在第二ORF.
圖9: MPV融合蛋白與其它肺病毒的預測的氡基酸序列的比對。 保守的半胱氨酸殘基被框住.N-相連的糖基化位點加了下劃線.F0的 斷裂位點加了雙下劃線；融合肽，倌號肽和膜錨定結構域用灰影表示， 缺位用破折號表示，句點表示與MPV—致的胺基酸殘基的位置.
圖10: MPV M2 ORF與其它肺病毒的胺基酸序列的比較.M2-1 0RF 的比對顯示於條格A中，其保守的氨基末端用灰影表示，三個保守的 半胱氨酸殘基用印刷粗體字並用#號表示。M2-2 0RF的比對顯示於條 格B中。缺位用破折號表示，並且句點表示與MPV —致的胺基酸殘基
的位置.
困11: MPV的SH ORF的胺基酸序列分析。(A )， MPV的SH ORF的 胺基酸序列，其絲氨酸和蘇氨酸殘基位於灰影中，半胱氨酸殘基用粗 體字，並且疏水區域加雙下劃線.潛在的N-相連的糖基化位點加單下 劃線.箭號表示在疏水結構域側面的鹼性氛基酸位置，(B)MPV， APV-A 和hRSV-B的SH蛋白的疏水結構的比對。17個胺基酸的窗被使用了 . 箭號表示強疏水結構域.ORF裡的位置在X軸上給出.
圖12: MPV G蛋白ORF的胺基酸序列分析，(A ) MPV G ORF的氨 基酸序列，其絲氛酸，蘇氛酸和脯氛酸殘基位於灰影中.半胱氨酸殘 基用粗體字，並且疏水區域加雙下劃線，潛在的N-相連的糖基化位點 加單下劃線。(B)MPV， APV-A和hRSV-B的G蛋白的疏水結構的比對。 17個胺基酸的窗被使用。箭號表示疏水結構域，並且ORF裡的位置在 X軸上給出。
困13: MPV和其它副粘病毒的聚合酶基因的保守結構域胺基酸序 列的比較，結構域III用四個框住的結構域III中的保守聚合酶模體 (A， B， C， D)表示(Poch等人，1989 EMBO J 8: 3867- 74; Poch 等人，1990， J. Gen. Virol 71: 1153-62 ).缺位用破折號表示，並 且句點表示與MPV—致的胺基酸殘基的位置.縮寫如下所示hPIV-3: 人副流感病毒3型；SV:仙臺病毒；hPIV-2:人副流感病毒2型；NDV: 新城病毒；MV:麻滲病毒；nipah: Nipah病毒。
圖14:肺病毒屬的成員與病毒分離林00-1 (Al)的N， F， M, 和F ORF的系統發育分析.系統發育分析基於病毒的如下基因序列來 進行F (條格A )， N (條格B )， M (條格C )和P (條格D )。系統發 育樹基於採用100次bootstrap和3次jumble的最大可能性分析法。 代表核苷酸變化的數值範圍以每個樹表示。
圖15: MPV和選定的副粘病毒的M2-1和L0RFs的系統發育分析. 如圖13圖例所述，M2-1 ORF用與肺病毒屬的其它成員(A )的M2-1 ORF 進行比對，而L ORF用與肺病毒屬和選定的其它副粘病毒的其它成員 的L ORF進行比對。系統發育樹由採用100次bootstrap和3次jumble 的最大可能性分析法生成。代表核苷酸變化的數值範圍以每個樹表 示。樹中的數字表示基於共有樹的bootstrap值。
圖16:九個原始MPV分離株和APV-C及其遣傳近親的F(條格A )，
N (條格B)， M (條格C) 20和L (條格D) ORF的部分的系統發育關 系.系統發育樹基於最大可能性分析法，代表核苷酸變化的數值範圍 以每個樹表示.APV-C的登記號條格A: D00850;條格B: U39295; 條格C: X58639;以及條格D: U65312。
圖17: hMPV的所有四個變種，即變種Al， A2, Bl或B2的不同 分離株的F基因的比對.
困18: hMPV的所有四個變種，即變種Al， A2， Bl或B2的不同 分離林的F蛋白的比對。
困19: hMPV的所有四個變種，即變種Al, A2， Bl或B2的不同 分離株的G基因的比對。
困20: hMPV的所有四個變種，即變種Al， A2， Bl或B2的不同 分離林的G蛋白的比對。
圖21:基於F基因序列的系統發育樹，其顯示hMPV各自變種的 不同分離林的系統發育關係。
圖22:基於G基因序列的系統發育樹，其顯示困13所示的hMPV
各自變種的不同分離林的系統發育關係。
圖23: MPV分離抹00-1 ( Al )在Vero細胞中的生長曲線。Vero 細胞以0. 1 MOI感染。
圖24: CAT-hMPV微複製子構建體的序列.序列片段編碼的功能 顯示於序列的下方。
困25:來自CAT-hMPV微複製子的CAT的表達.用於轉染的不同 構建體顯示於x-軸上；CAT表達量顯示於y-軸上，該困顯示轉染後24 小時的CAT的表達和轉染後48小時的CAT的表達情況.標準品用CAT 蛋白的稀釋液，
圖26:前導和尾隨序列比較顯示了不同病毒前導和尾隨序列 的比對。
圖27: hMPV基因組分析顯示了與hMPV基因組構成相關的hMPV 基因組序列的PCR片段.突變位點顯示於顯示了 PCR片段的豎條下面。
圖28: hMPV分離株00-1 (Al)和hMPV分離林99-1 (Bl)的限 制性酶讒，各自分離林中的限制性位點顯示於顯示了 hMPV基因組構 成的困表下方。圖表上方的範圍以kb顯示了 hMPV基因組的位置。
圖29A和29B: hMPV cDNA裝配。上方的困表顯示hMPV的基因組 構成，下方的橫條顯示裝配成編碼病毒的全長cDNA的PCR片段(見 圍27).表示PCR片段的橫條上方的數字以鹼基對顯示了病毒基因組
的位裡。
困30:來自MPV分離林00-1 (Al)基因組3，末端的核苷酸和氨 基酸序列信息.給出ORF. N:核蛋白的0RF; P:磷蛋白的0RF; M: 基質蛋白的ORF; F:融合蛋白的0RF; GE:基因末端；GS:基因起始.
圖31A和B:來自MPV分離株00-1 (Al)聚合睞基因(L)所得 片段的核苷酸和氛基酸序列信息。L中片段的定位是基於APV-A(登 記號U65312 )的蛋白質同源性的.翻譯片段8 (困31 A)定位於氨 基酸數8至243，片段9和10的一致部分(圖31 B)定位於APV-A L ORF的胺基酸數1358至1464.
困32:用ned/00/01 (Al)和/或ned/99/Ol ( Bl )接種的12個 豚鼠15的喉鼻擦拭物RT-PCR分析結果。
困33A:感染ned/00/01(Al)和重複感染ned/00/01(Al)(GP4， 5和6 )或ned/99/Ol ( Bl ) ( GP 1和3 )的豚鼠的抗ned/00/Ol ( Al) 和ned/99/Ol ( Bl )的IgG應答。
困33B:感染ned/99/Ol和重複感染ned/00/Ol ( Al) ( GP 8和6 ) 或ned/99/Ol ( Bl) ( GP 10， 11， 12)的脈鼠的抗ned/00/Ol ( Al) 和ned/99/01 ( Bl)的IgG應答.
困34:感染ned/00/Ol (Al)或ned/99/Ol ( Bl)的豚鼠血清之 ned/00/Ol ( Al)和ned/99/Ol (Bl)的ELISA特異性。
圖35: 3個同源的(00-1/00-1 )， 2個同源(99—1/99-1 )， 2個 異源(99-1/00-1 )和2個異源的(00-1/99-1 )感染的豚鼠的抗 ned/00/Ol (Al )和ned/99/Ol (Bl)的平均IgG應答的ELISA,
困36: hMPV感染的豚鼠的APV抑制平均百分比，
圖37: ned/00/Ol ( Al )和ned/99/Ol ( Bl )感染的豚鼠的抗 ned/00/Ol ( Al )， ned/99/Ol (Bl)和APV-C的病毒中和滴度。
困38:(兩次條種ned/00/01(Al)的恆河猴的喉擦拭物的RT-PCR 分析結果.
圖39 A (上兩條格)(重複)感染ned/00/01 ( Al)的恆河猴的 抗ned/00/01 (Al )的IgA， IgM和IgG應答.
圖39 B (底條格)感染ned/00/01 ( Al)的恆河猴的抗APV的 IgG應答。
圖40:人血清中IgG抗體檢測用hMPV ELISA和APV抑制ELISA 的使用比較.
困41:兩個原型hMPV分離抹與APV-A和APV-C的比較；用於編 碼各種病毒蛋白的核酸DNA相似性矩陣.
閨42:兩個原型hMPV分離株與APV-A和APV-C的比較；用於各 種病毒蛋白的蛋白質相似性矩陣。
困42b:哺乳動物個原型MPV的編碼序列的比較.左欄顯示核酸 序列比較，右欄顯示胺基酸序列比較.NL/1/00是變種A1 (SEQIDNO: 19)的原型。NL/17/00是變種A2 ( SEQ ID NO: 20)的原型。NL/1/99 是變種B 1 (SEQ ID NO: 18)的原型，NL/1/94是變種B2 ( SEQ ID NO: 21)的原型.
圖43:兩個原型hMPV分離林核蛋白的胺基酸比對， 困44:兩個原型hMPV分離林砩蛋白的胺基酸比對 困45:兩個原型hMPV分離林基質蛋白蛋白的胺基酸比對. 圖46:兩個原型hMPV分離抹融合蛋白的胺基酸比對。 困47:兩個原型hMPV分離林M2-l蛋白的胺基酸比對。 圖48:兩個原型hMPV分離林M2-2蛋白的氛基酸比對。 困49:兩個原型hMPV分離株短疏水蛋白的胺基酸比對。 困50:兩個原型hMPV分離抹附著糖蛋白的胺基酸比對。 圖51:兩個原型hMPV分離林聚合酵蛋白N-末端的胺基酸比對。 圖52: hMPV分離株OO-l ( Al)的非編碼序列.(A)正義鏈中位 於ORFs和基因組末端之間的非編碼序列。從左到右，首先列出的是 標示ORF的終止密碼子，隨後為非編碼序列，標示的下一個ORF的基 因起始信號及起始密碼子。數字顯示的是hMPV起始及終止密碼子的 第一個位置。用下劃線標出的是與已公開基因終止信號表現出相似性 的序列，用上劃線標出的是與UAAAAAU/A/C表現出相似性的序列.(B) hMPV基因組末端的核苷酸序列.hMPV基因組末端相互間比對以及與 APV基因組末端的比對，下劃線區域標出的是RT-PCR試驗所用引物序 列，這些引物序列是根據APV和RSV 3'和5'末端序列設計而成的。 粗斜體核苷酸是N基因起始信號的部分。Le:前導序列，Tr:尾隨序 列。
困53: hMPV分離林00-1 (Al)與hMPV分離林99-1 ( Bl)之間 基因組序列的序列比較.
困54:通過聚腺苷酸化與3'RACE方法結合測定得到的人間質肺 病毒(hMPV) NL/1/00 (Al)基因組RNA的前導序列。
困55:用PCR產物直接和用PCR克隆測序分析都表明hMPV的前 導區是由前導序列中最靠近3'端的20個核苷酸5'ACG CGA AAA AAA CGC GTA TA (按正義cDNA方向表示)組成的.下劃線標出的是兩個新近 鑑定的核苷酸。
5.發明詳述
本發明涉及一種分離的哺乳動物負鏈UNA病毒，間質肺病毒(MPV ) 及其變種，該病毒屬於副粘病毒科肺病毒亞科.本發明還涉及一種分 離的哺乳動物負鏈RNA病毒及其組分，該病毒從系統發育學上可鑑定 為對應或屬於間質肺病毒屬.本發明的哺乳動物MPV可以是哺乳動物 MPV的Al、 A2、 Bl或B2變種。但是，本發明的哺乳動物MPV包括有 待鑑定的其它變種，而不僅限於A1、 A2、 B1或B2變種。
本發明涉及哺乳動物間質肺病毒分離抹各種變種的基因組核香酸 序列，所述病毒具體為人間質肺病毒，包括A1、 A2、 Bl和B2變種。
本發明涉及哺乳動物間質肺病毒不同分離林的序列信息在診斷和治療 方法中的應用。本發明涉及不同間質肺病毒分離抹間基因組核苷酸序 列的差異，及其在本發明所述診斷和治療方法中的用途.具體而言， 本發明涉及使用不同間質肺病毒分離林間單核苷酸多態性(SNPs)用 於診斷和治療方法。本發明還涉及利用哺乳動物間質肺病毒不同分離 株的血清學特性，單獨或與不同分離林的序列信息結合，用於診斷和 治療方法。
本發明涉及編碼間質肺病毒基因組或其部分，包括哺乳動物和禽 類間質肺病毒(APV)的核苷酸序列.本發明涉及編碼間質肺病毒基 因產物的核苷酸序列，包括哺乳動物和禽類間質肺病毒。本發明進一 步還涉及核酸，包括DM和RNA,所述核酸編碼間質肺病毒基因組或 其部分，包括哺乳動物和禽類間質肺病毒，除相對於病毒基因組為異 源或非天然的核苷酸序列外。本發明進一步涉及由所迷核苷酸序列編 碼的重組或嵌合病毒.
本發明所述的重組病毒是一種源自哺乳動物MPV或APV由內源或
天然基因組序列或非天然基因組序列編碼的病毒.本發明所述的非天 然序列是指由於一處或多處突變而有別於天然或內源基因組序列的序 列，包括但不限於點突變、重排、插入、缺失等，該基因組序列能或
不能導致表型改變.本發明所述的嵌合病毒是一種重組的MPV或APV， 其中另含有異源核苷酸序列.本發明所述的嵌合病毒是由具有下述特 性的核苷酸序列序列編碼基因組中添加了異源核苷酸序列或者基因 組中的內源或天然核苷酸序列被異源核苷酸序列所取代.
本發明進一步還涉及含有哺乳動物或禽類間質肺病毒的疫苗制 刑，所述病毒包括所述病毒的重組體。具體而言，本發明涉及含有MPV 或APV重組或嵌合體的疫苗製劑，該重組或嵌合體表達抗原性糖蛋白， 包括MPV或APV糖蛋白，以及/或者非天然的MPV或APV糖蛋白。本 發明還涉及含有MPV或APV重組體的疫苗製劑，該重組體編碼另一種 負鏈RNA病毒，包括PIV或RSV的抗原性序列，或者另一種或另一抹 間質肺病毒的糖蛋白。本發明進一步還涉及含有嵌合hMPV的疫苗， 其中所述嵌合hMPV編碼一種或多種APV蛋白，並且其中所述嵌合hMPV 可任選地另外表達一種或多種異源或非天然序列.本發明還涉及含有 嵌合APV的疫苗，其中所述嵌合APV編碼一種或多種hMPV蛋白，其 中所述嵌合APV可任選地另外表達一種或多種異源或非天然序列.本 發明還涉及多價疫苗，包括二價和三價疫苗。具體而言，本發明的二 價及三價疫苗包括由同 一或不同肺病毒栽體表達的兩種或多種抗原多 肽，該栽體編碼MPV、 APV、 PIV、 RSV、流感病毒或另一種負鏈RNA病 毒或麻滲病毒的抗原多肽。
5. 1哺乳動物間質肺病毒 哺乳動物間質肺病毒的結構特徵
本發明提供了一種哺乳動物MPV。該哺乳動物MPV是一種負鏈單 鏈RNA病毒，屬於副粘病毒科肺病毒亞科.而且，該哺乳動物MPV在 系統發育學上可鑑定為對應或屬於間質肺病毒屬，其中該哺乳動物MPV 在系統發育學上與巴黎CNCM中保藏號為I-2614病毒分離株(SEQ ID NO: 19)的相關程度比其與禽類鼻氣管炎致病因子火雞鼻氣管炎病毒 間相關程度更密切。通過例如獲取病毒核酸序列信息並對其進行系統 發育測試可鑑定一種病毒系統發育學上對應於間質肺病毒屬。本領域
技術人員已知的任一技術都可用於測定兩株病毒間的系統發育相互關
系，例如方法參見章節5.9。其它技術公開於國際
發明者A·D·M·E·奧斯特豪斯, A·哈勒, B·G·范登霍根, R·A·M·福希爾, R·唐 申請人:免疫醫療疫苗公司;維洛諾瓦蒂夫公司