一套用於對組織切片進行免疫組織化學染色及保存的載玻片的製作方法
2023-05-23 12:29:16
專利名稱：一套用於對組織切片進行免疫組織化學染色及保存的載玻片的製作方法
技術領域：
本發明涉及醫學生物實驗裝置，尤其涉及一套用於對組織切片進行免疫組織化學染色的載玻片。
背景技術：
在醫學實驗中，利用抗原與抗體特異性結合的原理，採用不同抗體對組織進行免疫化學染色，是檢測機體在生理或病理狀態下功能變化最常用的方法之一。在組織切片的免疫染色過程中，通常採用貼片法和漂片法對其進行染色。採用貼片法染色首先是將石蠟組織或冰凍組織進行切片後，粘貼於載玻片上，然後按照免疫組織化學染色的相關步驟檢測。目前該檢測方法通常存在以下問題:1、檢測過程中對組織進行反覆衝洗，容易造成組織切片脫落；2、由於抗體一般比較昂貴，因此加入一抗和二抗的量有限。在實驗添加抗體的操作過程中，由於載玻片或組織表面輕微的傾斜都可能導致抗體不能有效和組織接觸，影響抗體與抗原的特異性結合，從而導致實驗檢測的失敗。3、目前在組織染色結束後，通常採用中性樹脂、石蠟油或甘油對組織進行封片，以保存實驗的陽性結果，尤其是螢光陽性結果的保存，通常都採用甘油對組織進行封片，但該類封片劑容易造成蓋玻片的移位而不能很好的固定組織及保存染色結果。而漂片法染色則是將組織切片放置於一個容量裝置中完成染色的所有步驟。該染色方法可以避免組織切片脫落以及抗體與組織有效接觸等問題，但是該方法所需抗體的量較大，且在染色完成後需要將組織切片從容器中轉移到載波片上進行封片處理，方可觀察染色結果。然而在組織轉移過程中可導致組織破損和摺疊，影響實驗結果的觀察。因此理想的用於免疫組織化學檢測的載玻片裝置應該避免上述兩種染色方法存在的突出問題。目前通過多聚賴氨酸對載玻片進行處理後，可在一定程度上減少衝洗過程中組織切片的脫落，但對抗體的溢出及蓋玻片的移位尚無有效的解決方法。然而多聚賴氨酸是一種蛋白質，在反應過程中可能黏附大量的抗體而影響抗體與組織切片中抗原的結合。如中國專利申請:特別用於螢光顯微鏡的載玻片(專利號03101482.8)、一種用於微生物檢測的微生物載玻片(申請號200610163269.7)分別提出了利用具有吸收螢光特性或設有螢光光線的抗發射層來實現對螢光結果的保護作用以及通過對載玻片上特定區域進行顏色標識和面積限制以便於在顯微鏡下對微生物進行直接定位和形狀及數量的計算。雖然上述方法在解決螢光衰減及組織定位方面有一定的作用，但是要解決目前在組織免疫螢光染色過程中所存在的組織脫片、抗體溢出及蓋玻片滑脫等問題，仍需要對載玻片進行特殊的設計與處理。其次，中國專利:通用型病理組織細胞化學染色載玻片(申請號201020243434.1)，該實用新型專利較好的解決了免疫組化染色過程中切片脫落以及組織抗原與抗體結合的有效性問題，但該裝置在染色前需對切片進行多聚賴氨酸的預處理，同時需要將組織進行轉移後封片方可進行結果觀察。因此該專利未能避免組織切片轉移過程中可能出現破損與摺疊的缺陷，同時也不能避免甘油等封片劑封片後所引起的蓋玻片滑脫和移位等問題。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是針對現有載玻片在對組織進行免疫化學染色過程中容易造成切片脫落，抗體溢出、蓋玻片移位、組織轉移受損等問題，提出一套可以用於石蠟或冰凍組織免疫化學染色及有效保存的載玻片，且通過與之匹配的封片單元可對組織細胞的大小進行初步的測量。該載玻片結構簡單，成本低廉，能較好的保證組織切片和蓋玻片的穩定性以及抗體與組織接觸反應的有效性。本發明解決上述技術問題採用的技術方案是:一套用於對組織切片進行免疫化學染色及保存的載玻片，其包括透明玻璃材質的載物單元和封片單元。所述載物單元承載面上具有600um-800um深度、不同形狀的凹槽，凹槽內表面光滑，每個凹槽對應有一個封片單元，封片單元厚度為200 um。封片單元上以其中心為基點，分布有縱橫垂直交叉的直線，劃分出邊長10 um的多個方格,封片單兀的邊緣設置有一圈密封圈。在對組織進行染色後，將封片單元蓋在載物單元對應的凹槽中，通過封片劑將受檢測的組織固定在凹槽內，並通過密封圈密封，實現對組織切片的固定與封片保存。染色過程中，載物單元凹槽形狀的選擇根據受檢組織的形狀、大小決定，可以為圓形、橢圓形、長方形或正方形。載物單元的左側進行磨砂處理，形成對組織切片進行標記的標記部。本套載玻片在載物單元上製作不同形狀的凹槽是用於放置需要檢測的組織切片。採用的封片單元在檢測結束後可以與載物單元和受檢組織通過滴加封片劑後融合為一體，便於實驗結果的採集與保存。而且由於封片單元形狀及大小與載物單元相匹配，封片後通過周圍的密封圈可使其牢固的嵌在凹槽內，從而對組織起良好的固定和防止空氣氧化等作用。同時該封片單元不會凸出在載物單元上，不會被碰歪或碰掉，可以保證對組織切片的良好保存。另外，由於該封片單元上具有刻度方格，因此在顯微鏡下觀察時，可初步測量組織細胞的大小與面積。可見，本發明設計的載玻片，將載物單元和封片單元一體化，能較好的保證組織免疫化學染色過程中組織切片和封片的穩定性以及抗體與組織接觸反應的有效性，並有效的避免了組織脫落，抗體溢出、封片單元移位以及組織轉移受損等問題。同時還可對組織細胞的大小和面積進行測量。該套載玻片除用於免疫組織化學檢測外，還可用於原位雜交及其相關的生物醫學檢測。
圖1是免疫組化染色特製載物單元的平面視圖；圖2是載物單元和封片單元在使用中的操作過程的示意圖。具體實施方法下面結合附圖和具體實例對本發明進行詳細說明。如圖1和圖2所示，本載玻片由載物單元I和封片單元2構成。載物單元I為厚度1.2mm的玻璃，在其承載面上具有不同深度、不同形狀(如圓形、橢圓形、長方形和正方形等)凹槽11，凹槽深度600um-800um，內表面光滑，用於容納組織切片，每個凹槽都對應有一片形狀與深度可與之匹配的封片單元2，封片單元厚度為200 um。封片單元上以其中心為基點，分布有縱橫垂直交叉的直線，劃分出邊長10 um的多個方格21,封片單兀的邊緣還設置有一圈密封圈22。載物單元I的承載面的左側還有磨砂處理的標記部12。參見圖2，在組織免疫組化檢測過程中，載物單元的凹槽內表面光滑，不用塗具多聚賴氨酸，組織切片放置於凹槽內，在整個染色過程中漂洗組織的緩衝液以及添加的各種試劑均滴加於凹槽內。在免疫組化染色結束後，首先吸出多餘液體，並將組織切片3晾乾，然後在載物單元的凹槽內滴加封片劑4，最後將與凹槽11匹配的封片單元2蓋到凹槽內，使載物單元1、組織切片3與封片單元2構成一個整體，便於實驗結果的保存與觀察、採集。可見本發明提供了一種結構簡單，成本低廉，能較好的保證組織切片和封片單元的穩定性以及抗體與組織接觸反應有效性的特製載玻片。該裝置實驗操作簡便，可較好地避免目前組織免疫組化染色過程中存在的突出問題，而且利用封片單元上的刻度可對染色組織的大小和面積進行初步的計算與分析。
權利要求
1.套用於對組織切片進行免疫化學染色及保存的載玻片，包括玻璃材質的載物單元和封片單元；其特徵在於，所述載物單元的承載面上具有不同深度、形狀的用於容納組織切片進行染色的凹槽，凹槽內表面光滑，每個凹槽對應有一塊封片單元，封片單元與所述凹槽的形狀相匹配，厚度為200 um，封片單元上以其中心為基點，分布有縱橫垂直交叉的直線，劃分出邊長10 um的多個方格，封片單元的邊緣設置有一圈密封圈；在對組織進行染色後，將封片單元蓋在載物單元對應的凹槽中，通過封片劑將受檢測的組織固定在凹槽內，並通過密封圈密封，實現對組織切片的固定與封片保存。
2.根據權利要求1所述的用於對組織切片進行免疫化學染色及保存的載玻片，其特徵在於，所述凹槽為圓形、橢圓形、長方形或正方形。
3.根據權利要求1或2所述的用於對組織切片進行免疫化學染色及保存的載玻片，其特徵在於，所述載物片的左側有磨砂處理的標記部。
全文摘要
一套用於對組織切片進行免疫化學染色及保存的載玻片，其載物單元的承載面上具有不同深度、形狀的用於容納組織切片的凹槽，凹槽內表面光滑，每個凹槽對應有一塊封片單元，封片單元片與所述凹槽的形狀相匹配，封片單元上以其中心為基點，分布有縱橫垂直交叉的直線，形成邊長為10 um的每個方格，且封片單元的邊緣設有密封圈。該套載玻片有效避免了現有免疫組織化學檢測過程中容易造成組織切片脫落，抗體溢出、蓋玻片移位以及組織轉移受損等問題，且結構簡單，成本低廉，能較好的保證組織切片和蓋玻片的穩定性以及抗體與組織接觸反應的有效性，同時通過封片單元上的刻度線可對受檢測組織的大小和面積進行測算。
文檔編號G01N1/31GK103091826SQ201210562179
公開日2013年5月8日 申請日期2012年12月21日 優先權日2012年12月21日
發明者劉媛, 葉有義, 譚波濤, 王莉, 伍亞民, 王正國 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第三附屬醫院