燈盞花素中藥提取物精製的製備方法與流程

2023-06-11 08:33:06

本發明涉及一種燈盞花素中藥提取物的製備方法。技術背景燈盞花又名燈盞細辛、東菊，屬菊科植物短葶飛蓬erigeronbreviscapus(vant.)hand-mazz，主要分布於我國西南地區，尤以雲南較多。燈盞花素是從燈盞細辛中提取的黃酮類有效成分，其主要有效成分是燈盞乙素。燈盞花素具有增加血流量、改善微循環、擴張血管、降低血粘度等作用，臨床已廣泛用於治療腦梗塞、缺血性心臟病、眩暈、老年性痴呆及腎病症候群。目前燈盞花素主要以乙醇為溶劑提取。如：在現行《中華人民共和國藥典》2015版一部收載的兩種燈盞花素提取工藝，均為乙醇提取工藝，具體製法為：第一種：取燈盞細辛，粉碎成粗粉，加75％乙醇(6倍、4倍、4倍)加熱回流提取三次，每次2小時，合併提取液，濾過，濾液濃縮至無醇味，加等體積水攪勻，靜置過夜，濾過，濾液通過大孔吸附樹脂(聚苯乙烯型)柱，用水洗脫，收集洗脫液，濃縮，沉澱，濾過，沉澱用10％硫酸溶液調ph值至2.0～2.5，靜置過夜，濾過，沉澱用乙醇洗滌，再用水洗至中性，乾燥，乾燥品用乙醇精製，重結晶，結晶用乙醇、丙酮洗滌，乾燥，粉碎，混合，即得。第二種：取燈盞細辛粉碎成粗粉，加入2～6倍量75％乙醇，加熱回流提取三次，每次3小時，濾過，合併濾液，濃縮至相對密度為1.2(80℃)的清膏，加水適量，攪勻，加熱至80℃，用5％氫氧化鈉溶液調節ph值至8，攪拌使溶解，靜置24小時，濾過，濾液用10％硫酸溶液調節ph值至1～3，攪拌，靜置48小時，抽濾，沉澱用水洗至中性，或先用3～4倍量乙醇洗2～3次，再用水洗滌至中性。加入20倍量85％～95％乙醇及1％量的活性炭，或加入適量甲醇溶解後，加0.1％量的活性炭，加熱回流1小時，濾過，濾液濃縮至原體積的60％～80％，靜置使析出結晶，濾過，將所得結晶用45％乙醇洗滌5次，於50～80℃，減壓真空乾燥。取結晶物，加水適量，用30％精氨酸溶液或10％碳酸氫鈉溶液調節ph值至7.0～7.5，加熱使溶解，離心，取上清液，濾過，濾液通過大孔吸附樹脂(聚苯乙烯型)柱，用水洗脫，收集洗脫液，濾過；或用5％鹽酸調節ph值至1～3，靜置，濾過，沉澱用水洗至中性，取沉澱，加入適量的水攪勻，加熱，用20％～30％磷酸氫二鈉溶液調節ph值至6.5～7，煮沸，冷卻至35～55℃；減壓濃縮，加入8～10倍量的丙酮，攪勻，靜置，抽濾，用丙酮洗滌沉澱。取沉澱，加入適量50％～70％丙酮溶液拾成混懸液，用10％鹽酸溶液調節ph值至1～2，靜置，抽濾，取沉澱，用注射用水洗至中性，再用90％乙醇洗滌，烘乾，即得。上述的兩種製備方法，燈盞花素原料精製時均需要使用丙酮，而丙酮對人體有較大的毒副作用，且使用丙酮後燈盞花素中會有部分丙酮殘留，患者使用後易產生不良反應。如果不使用丙酮精製，按上述兩種方法，所生產的燈盞花素含量很難達到藥典要求的90％以上。技術實現要素：本發明的目的是克服現有技術的缺陷，提供一種只使用乙醇不使用丙酮，且用大孔樹脂柱吸附一次後，即能夠生產出含量在90％以上符合藥典標準的合格的燈盞花素中藥提取物精製的製備方法。本發明所述的燈盞花素中藥提取物精製的製備方法由以下步驟組成：一、溶解：取含量70％以上的燈盞花素原料，加純化水配製成燈盞花素濃度在1％～5％的混懸液，加10～30％的磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀或檸檬酸鈉溶液中的一種或多種，調ph值至7，攪拌溶解，過濾；二、大孔樹脂柱吸附：將步驟一過濾後的藥液上hpd722大孔樹脂柱吸附，用純化水洗脫，流速為1～2倍柱體積，開始流出的棕色液體棄之不要，從黃色的洗脫液開始收集，洗至洗脫液接近無色；三、濃縮：將收集好的洗脫液減壓濃縮至洗脫液體積的20至40分之一；四、成鹽：將步驟三得到的濃縮液加入3倍以上體積的乙醇中，攪拌，靜置過夜；五、酸沉：將步驟四所得的混懸液過濾，沉澱物用乙醇洗滌一次，加入步驟四濃縮液體積2～3倍的30～70％乙醇中，攪拌，加酸將ph值調至1～3，靜置；六、過濾、乾燥：將步驟五的混懸液過濾，用乙醇洗滌一次，再用純化水洗至中性，乾燥，即可得到符合藥典標準的燈盞花素中藥提取物。步驟二中採用特定的hpd722大孔樹脂，hpd722大孔樹脂對黃酮類物質分離效果較好，並且結合本發明的其它步驟，能夠實現大孔樹脂柱吸附一次後，即能夠生產出含量在90％以上符合藥典標準的合格的燈盞花素中藥提取物。步驟四中所用乙醇的優選量是3～6倍。步驟五所使用的酸主要用於調整ph值，常用的酸都可以使用，如：鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸等無機酸或有機酸如冰醋酸中的一種或幾種。酸液濃度無特別要求，但不宜過高，鹽酸、硝酸、硫酸的濃度不宜高於10％，磷酸的濃度不宜高於30％，對有機酸酸度沒有要求。否則會破壞燈盞花素分子結構。本發明與現行工藝的區別在於：現行工藝採用碳酸氫鈉或l-精氨酸溶解上柱，因兩種物料極性較強，柱分離時對其他黃酮類雜質分離效果較差，大孔樹脂吸附後原料還需要使用丙酮將其他黃酮類雜質除去，才能確保燈盞花素含量符合國家藥典90％以上的質量標準。本發明的獨特之處在於使用極性較弱的磷酸氫二鈉(或磷酸氫二鉀、檸檬酸鈉)溶解燈盞花素，而大孔樹脂也採用弱極性的hpd722，柱分離時大孔樹脂對燈盞花素吸附效果好，相對於現行工藝，可有效的去除其他黃酮類雜質60％以上，洗脫液濃縮、成鹽、酸沉後含量即可符合藥典標準。工藝簡單，由於沒有採用丙酮，大大地降低了對人體的危害。雜質的鑑別及定量分析：分別取兩組樣品，每組均為燈盞花素中藥提取物1克，其中樣品1為實施例1所得產品，樣品2為現有技術得到的燈盞花素中藥提取物。樣品2的製備方法為：取10kg含量為76％的燈盞花素粗品，加入100kg的純化水中，用10％碳酸氫鈉溶液調節ph值至7.0，攪拌溶解，離心，取上清液，濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱，用純化水洗脫，開始階段棕色的洗脫液不要，收集黃色洗脫液，用純化水洗脫至洗脫液基本無色，收集洗脫液濃縮至150升，加入600升的乙醇中，靜置，過濾，用乙醇洗滌一次，將沉澱加入400升50％的乙醇中，用5％鹽酸調節ph值至1，攪拌，靜置，濾過，沉澱用90％乙醇洗滌，再用純化水洗至中性，烘乾，即得。取樣，按2015版藥典項下燈盞花素質量標準檢測，燈盞花素含量88.6％。燈盞花素含量及雜質對比分析：1、燈盞花素含量：分別取1、2樣品，按中國藥典項下燈盞花素檢測方法，檢測結果如下：2、雜質對比分析：分別取1、2樣品，以蘆丁為對照品，用紫外分光光度法測定總黃酮含量，檢測結果如下：樣品序號總黃酮含量196.3％295.9％其他黃酮類雜質含量：附圖說明圖1為本發明實施例1高效液相色譜圖。圖2為樣品2高效液相色譜圖。圖1中：序號保留時間峰面積備註12.5013.05622.7385.41234.8697.538410.2693.654513.20815.479615.5171689.056燈盞花素吸收峰，含量93.7％716.9982.652836.8182.165圖2中：具體實施方式實施例1：取10kg含量為76％的燈盞花素粗品，加200kg純化水攪拌，加20％磷酸氫二鈉溶液調節ph值至7.0，攪拌溶解，離心，取上清液，濾過，濾液通過hpd722大孔吸附樹脂柱，用純化水洗脫，開始階段深棕色的洗脫液不要，收集黃色洗脫液，繼續用純化水洗脫至洗脫液基本無色，收集洗脫液濃縮至150升，加入600升的乙醇中，靜置過夜，過濾，用乙醇洗滌一次，將沉澱加入400升50％的乙醇中，用5％鹽酸調節ph值至1，攪拌，靜置，濾過，沉澱用90％乙醇洗滌，再用純化水水洗至中性，烘乾，即得。取樣，按2015版藥典項下燈盞花素標準檢測，燈盞花素含量93.7％。文中所述的乙醇百分比為體積百分比，其它均為重量百分比。當前第1頁12