一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10－去乙醯基巴卡丁iii的方法
2023-05-23 10:11:56
專利名稱：一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10－去乙醯基巴卡丁iii的方法
技術領域：
本發明是一種從種植紅豆杉葉枝用後殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法。
Ramadoss等(USP.6,124,482，2000)先用脂肪醇浸提歐洲杉的乾燥樹葉，提取液部分濃縮後用脂肪酮萃取，去除不溶物，然後把母液旋轉蒸發乾燥，得到的固體用水和酮的混合液溶解，除去不溶物，經脫色，再利用有機溶劑進行萃取，有機層結晶得到純度為93.5-94.1％的10-去乙醯基巴卡丁III。
Margraff等(USP.5,736,366，1998)用水浸提歐洲杉，調節提取液的pH值至4.6-5.4之間，利用固定相萃取分離10-去乙醯基巴卡丁III，結晶得到產品的純度在75-90％，得率約為75.4-92％之間。
Gaullier等(USP.5,453,521；USP.5,393,895，1995)用脂肪醇浸提歐洲杉樹葉，用水稀釋溶液，去除不溶物，完全除掉酒精，用有機溶劑萃取水層，結晶得到產品純度為75.8-93.8％，得率為69.5-93.8％。
Nair等(USP 5,478,736，1995)用含50-95％的甲醇、乙醇或者丙酮的水溶液浸提觀賞性紅豆杉的組織，得到的浸提液用活性炭過濾，利用真空加壓的正相色譜柱分離，再用中壓色譜柱分離，搜集相應餾分，得到10-去乙醯基巴卡丁III。
專利WO94/07882中用甲醇浸提紅豆杉組織，得到的浸提液用水稀釋，去除不溶物，除盡甲醇後得到的溶液用合適的有機溶劑萃取，結晶得到10-去乙醯基巴卡丁III純度為95.8％，得率為93.6％。
上述專利對紅豆杉樹葉提取10-去乙醯基巴卡丁III主要涉及結晶，且有一定的得率。但是，我們發現經以上過程處理完樹葉後，在樹葉中殘留部分10-去乙醯基巴卡丁III，一般殘留量為10-25％，大大地浪費了資源，另外結晶法一次得率太低，其純度不易提高，為此本發明得供一種新的方法。
發明內容
本發明的目的在於使用種植的紅豆杉的樹葉、樹枝被提取出紫杉醇後的殘渣製備10-去乙醯基巴卡丁III。
本發明的目的可通過下述技術方案實現先脫除廢渣中的有機溶劑，再用水浸提後趁熱過濾去除廢渣，濾液濃縮後得到10-DABIII的粗提物，噴霧乾燥，得到的乾粉末用1∶1乙酸乙能和環己烷溶解，溶液經高壓正相矽膠液相製備色譜分離，用乙酸乙酯和環己烷等梯度淋洗，分段收集淋洗液，得到純度為99.5％以上的10-去乙醯基巴卡丁III。本發明使廢棄資源得到再利用，工藝簡單、成本低廉、試劑溶劑可回收使用，有利於環境保護。
本發明高效液相色譜分離所用的乙酸乙酯，環己烷為色譜純。分析色譜所用的甲醇、乙腈為HPLC級，水為經美國生產的Millipore淨水裝置製備得到HPLC級水。原料及中間產品分析使用美國惠普公司的Agilent 1100系列液相色譜，包括四元梯度泵、真空脫氣箱、標準微量自動進樣器、柱溫箱、可變波長檢測器(VWD)(AgilentChemStation 4.09.01色譜工作站)；色譜柱用的是日本SHISEIDO公司CAPCELL PAK C18分析色譜柱(4.6mm I.D.×250mm，5μm)，進樣量為10μm，柱溫為32℃，流動相為乙腈＋水＋甲醇(32＋36＋32)，流速為1ml/min；產物鑑定使用Thermo Finnigan公司的LCQ ADVANTAGE MS SYSTERM，包括TSP高效液相色譜系統和LCQADVANTAGE質譜檢測儀，Xcalibur 1.0.01，APCI/ESI源，MetaChem公司的Taxsil-3柱(250mm×4.6mm)，流動相為ACN＋H2O(51＋49)，流速為0.8ml/min，柱溫箱溫度是40℃，檢測波長為227nm。APCI源條件全範圍掃描150-2000，殼氣65單位，輔助氣20單位，源電壓4.5KV，加熱毛細管溫度350℃；ESI源條件全範圍掃描150-2000，殼氣70單位，輔助氣15單位，源電壓6KV，加熱毛細管溫度250℃，蒸發器溫度465℃。製備型HPLC美國Waters公司PrepLCTM4000高效液相色譜製備系統包括四元梯度泵，標準3725I進樣器(10mL樣品環)，2487雙波長紫外檢測器，NEC-586臺式計算機(Millennium32色譜工作站)，色譜柱是Merck的Packing standNW 100填料為日本Fuji生產的矽膠，20μm。上海申生公司生產的5L-20L旋轉蒸發儀，噴霧乾燥器為BCHI Mini Spray Dryer B-191。
在上述技術方案基礎上，所述的紅豆杉葉枝殘渣是以紅豆杉提取紫杉醇後的殘渣為原料；將殘渣烘乾成乾粉後，乾粉的大小為40目以下；該殘渣含有0.1-10％的甲醇或乙醇；並對所述殘渣在室溫至70℃乾燥處理後，脫除殘渣中的有機溶劑，製成殘渣乾粉。
所述紅豆杉殘渣為被甲醇或乙醇提取完紫杉醇的種植的南方紅豆杉的樹葉和直徑在0.5cm以下的樹枝殘渣。
將殘渣乾粉放入提取罐，加入水，在40-80℃下浸泡2-8小時；加入的水與殘渣的重量比在2-5之間。
在上述技術方案基礎上，對所述的10-去乙醯基巴卡丁III的粗提物噴霧乾燥，得到乾粉末。對所述的乾粉末用乙酸乙酯溶解，加入矽膠，然後旋轉蒸發乾燥得到粉末。對所述的所用乙酸乙酯與乾粉末重量比在0.5-2之間；加入的矽膠和乾粉末重量比在1-2之間。對所述的乾粉末用高壓正相製備色譜分離，填充矽膠的色譜柱長度為20-35cm，填充柱直徑10cm，矽膠粒徑為20μm，表面積為450m2/g。所述的乾粉末重量與填充的矽膠重量比在1∶8-1∶20之間，根據填充柱填充矽膠的重量來決定加入乾粉末重量，從而決定加入用於溶解乾粉末的乙酸乙酯的體積，以及幹法上樣所用的矽膠的量。
所述填充矽膠的色譜柱及加入用於幹法上樣的粉末，用淋洗液等梯度淋洗，淋洗液流出色譜柱分段收集餾分，得到的純度為99.5％以上的10-去乙醯基巴卡丁III，餾分經蒸發、濃縮、乾燥，製得產品；對含量低於99.5％、高於35％的10-去乙醯基巴卡III餾分集中收集，經蒸發、濃縮、乾燥，乾粉末用乙酸乙酯溶解，加入矽膠，然後旋轉蒸發乾燥成粉末，重新分離；對含量在35％以下的10-去乙醯基巴卡丁III餾分集中收集，經蒸發、濃縮、乾燥，乾粉末用乙酸乙酯溶解，加入矽膠，然後旋轉蒸發乾燥成粉末，用1∶1乙酸乙酯和環己烷溶液等梯度淋洗，分段收集淋洗液，重新分離。
其中，使用過的矽膠經處理後可多次使用，處理條件為280-380℃下焙燒24-36小時，反覆使用次數至少可達12次；淋洗液經過蒸發、濃縮後集中，精餾後得到的環己烷和乙酸乙酯可反覆使用。
本發明的優越性在於能使廢棄資源再利用，工藝簡單、成本低廉、試劑溶劑可回收使用，有利於環境保護。
圖2，紅豆杉枝葉殘渣經水煮後得到的物質的高效液相色譜。
圖3，10-去乙醯基巴卡丁III的質譜圖。
實施例2取種植的紅豆杉的樹葉、樹枝被提取出紫杉醇後的殘渣1kg，放在乾燥箱加熱至70℃真空乾燥36小時，得到911g乾燥的固體，碾磨成100目的粉末，放入5升廣口瓶，加入4升水，在80℃水浴中浸泡2小時，多次提取，合併提取液過濾濃縮，噴霧乾燥得到213g粉末，用300ml乙酸乙酯溶解，幹法上樣，用1∶1的乙酸乙酯和環己烷淋洗30L，分段收集淋洗液，得到純度為99.6％的10-去乙醯基巴卡丁III晶體0.25g。
實施例3取種植的紅豆杉的樹葉、樹枝被提取出紫杉醇後的殘渣10kg，放在乾燥箱加熱至70℃真空乾燥36小時，得到9217g乾燥的固體，碾磨成100目的粉末，放入提取罐，加入45升水，在80℃水浴中浸泡3小時，多次提取，合併提取液過濾濃縮，噴霧乾燥得到3215g粉末，用3L乙酸乙酯溶解，多次幹法上樣，用1∶1的乙酸乙酯和環己烷淋洗，分段收集淋洗液，得到純度為99.7％的10-去乙醯基巴卡丁III晶體2.98g。
實施例4取種植的紅豆杉的樹葉、樹枝被提取出紫杉醇後的殘渣100kg，放在乾燥房加熱至70℃真空乾燥30小時，得到93456g乾燥的固體，碾磨成100目的粉末，放入提取罐，加入450升水，在80℃水浴中浸泡3小時，多次提取，合併提取液過濾濃縮，噴霧乾燥得到34562g粉末，用30L乙酸乙酯溶解，多次幹法上樣，用1∶1的乙酸乙酯和環己烷淋洗，分段收集淋洗液，得到純度為99.6％的10-去乙醯基巴卡丁III晶體27.89g。
權利要求
1.一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，以紅豆杉葉枝用後殘渣為原料，其特徵在於先脫除廢渣中的有機溶劑，再用水浸提後趁熱過濾去除廢渣，濾液濃縮後得到10-去乙醯基巴卡丁III的粗提物，噴霧乾燥，得到的乾粉末用1∶1乙酸乙能和環己烷溶解，溶液經高壓正相矽膠液相製備色譜分離，用乙酸乙酯和環己烷等梯度淋洗，分段收集淋洗液，得到純度為99.5％以上的10-去乙醯基巴卡丁III。
2.根據權利要求1所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於以紅豆杉提取紫杉醇後的殘渣為原料；將殘渣烘乾成乾粉後，乾粉的大小為40目以下；該殘渣含有0.1-10％的甲醇或乙醇；對所述殘渣在室溫至70℃乾燥處理後，脫除殘渣中的有機溶劑，製成殘渣乾粉。
3.根據權利要求1、2所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於所述紅豆杉殘渣為被甲醇或乙醇提取完紫杉醇的種植的南方紅豆杉的樹葉和直徑在0.5cm以下的樹枝殘渣。
4.根據權利要求1、2所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於殘渣乾粉放入提取罐，加入水，在40-80℃下浸泡2-8小時。
5.根據權利要求4所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於所述的加入的水與殘渣的重量比在2-5之間。
6.根據權利要求1所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於對所述的10一去乙醯基巴卡丁III的粗提物噴霧乾燥，得到乾粉末；
7.根據權利要求6所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於對所述的乾粉末用乙酸乙酯溶解，加入矽膠，然後旋轉蒸發乾燥得到粉末。
8.根據權利要求7所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於對所述的所用乙酸乙酯與乾粉末重量比在0.5-2之間；加入的矽膠和乾粉末重量比在1-2之間。
9.根據權利要求7所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於對所述的乾粉末用高壓正相製備色譜分離，填充矽膠的色譜柱長度為20-3Scm，填充柱直徑10cm，矽膠粒徑為20μm，表面積為450m2/g。
10.根據權利要求9所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於所述的乾粉末重量與填充的矽膠重量比在1∶8-1∶20之間，根據填充柱填充矽膠的重量來決定加入乾粉末重量，從而決定加入用於溶解乾粉末的乙酸乙酯的體積，以及幹法上樣所用的矽膠的量。
11.根據權利要求1所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於所述填充矽膠的色譜柱及加入用於幹法上樣的粉末，用淋洗液等梯度淋洗，淋洗液流出色譜柱分段收集餾分，得到的純度為99.5％以上的10-去乙醯基巴卡丁III餾分經蒸發、濃縮、乾燥，製得產品；對含量低於99.5％、高於35％的10-去乙醯基巴卡III餾分集中收集，經蒸發、濃縮、乾燥，乾粉末用乙酸乙酯溶解，加入矽膠，然後旋轉蒸發乾燥成粉末，重新分離；對含量在35％以下的10-去乙醯基巴卡丁III餾分集中收集，經蒸發、濃縮、乾燥，乾粉末用乙酸乙酯溶解，加入矽膠，然後旋轉蒸發乾燥成粉末，用1∶1乙酸乙酯和環已烷溶液等梯度淋洗，分段收集淋洗液，重新分離。
12.根據權利要求1所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於使用過的矽膠經處理後可多次使用，處理條件為280-380℃下焙燒24-36小時，反覆使用次數至少可達12次。
13.根據權利要求1或12所述的一種從紅豆杉葉枝殘渣中製備10-去乙醯基巴卡丁III的方法，其特徵在於淋洗液經過蒸發、濃縮後集中，精餾後得到的環己烷和乙酸乙酯可反覆使用。
全文摘要
本發明是一種從種植紅豆杉葉枝用後殘渣中製備10－去乙醯基巴卡丁III的方法。使用種植的紅豆杉的樹葉、樹枝被提取出紫杉醇後的殘渣，經過常溫至70℃乾燥脫除廢渣中的有機溶劑，將殘渣放入提取罐，加入水後，在40－80℃下浸泡2－8小時；水與廢渣的重量比在2－5之間；殘渣浸泡後趁熱過濾去除廢渣，濾液濃縮後得到10－去乙醯基巴卡丁III的粗提物；用噴霧乾燥儀將10－去乙醯基巴卡丁III粗提物噴霧乾燥，得到的乾粉末用乙酸乙酯溶解，幹法上樣，高壓正相製備色譜分離，用1∶1乙酸乙酯和環己烷等梯度淋洗，分段收集淋洗液，得到純度為99.5％以上的10－去乙醯基巴卡丁III。本發明能使廢棄資源再利用，工藝簡單、成本低廉、試劑溶劑可回收使用，有利於環境保護。
文檔編號C07D305/14GK1398859SQ02136678
公開日2003年2月26日 申請日期2002年8月27日 優先權日2002年8月27日
發明者陳建民, 李明, 李華, 周海燕 申請人:上海萬古生物科技發展有限公司