異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽在製備抗腫瘤藥物中的用途的製作方法

2023-05-16 01:10:36

專利名稱：：異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽在製備抗腫瘤藥物中的用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種異丙酚衍生物--異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽的製藥用途，具體涉及了異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽在製備抗腫瘤藥物中的用途。
背景技術：
：異丙酚又名丙泊酚，是一種臨床常用的靜脈麻醉藥，化學名為2，6—二(2_甲基乙基)苯酚。它在臨床上廣泛地用於手術麻醉的誘導和維持，屬於中樞性麻醉藥。近年來由於異丙酚其臨床應用廣泛，大量學者對其進行了研究，發現異丙酚與內源性抗氧化劑(維生素E)和已知的抗氧化劑(丁羥基甲苯)在化學結構上十分相似，近年來的研究表明異丙酚具有較強的抗氧化作用，它可以刺激蛋白激酶C，阻止肌細胞鈣離子內流，同時可舒張血管平滑肌，因此，異丙酚除了具有麻醉作用外可能還具有抗氧化作用，抗腫瘤作用、腦保護作用等。但是異丙酚最大弊端在於其過強的脂溶性(水中溶解度^lug/ml)，現應用的製劑都是異丙酚的油溶性製劑，脂溶性製劑相對於水溶性製劑有很大的缺點，如物理穩定性差；由於較大的油滴尺寸可能導致栓塞；注射引起疼痛；在用藥前僅能與少數可注射產品選擇性混合；乳劑難於滅菌；引起心臟方面毒副作用等，因此大大的限制了異丙酚的應用。
發明內容目前，研究人員針對異丙酚水溶性差的缺點開發了許多衍生物，其中異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽是對異丙酚中的羥基用琥珀酸酐進行酯化修飾而得到的，本發明的目的旨在應用異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽製備抗腫瘤藥物，製成的藥物能明顯抑制乳腺癌細胞、肝癌細胞、神經母細胞瘤的生長。本發明所述異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽的製備方法如下在氮氣保護(異丙酚在鹼性環境下易氧化)下，以吡啶為溶劑將異丙酚與丁二酸酐混合攪拌加熱回流反應，得到異丙酚丁二酸單酯，將異丙酚琥珀酸單酯與碳酸氫鈉反應製得異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽，合成路線如下formulaseeoriginaldocumentpage4本發明所述異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽在製備抗腫瘤藥物中的用途本發明的異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽可以單獨使用或以藥物組合物的形式使用。藥物組合物包括作為活性成份的異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽及可藥用載體。所述可藥用載體為各種常用的藥物輔料如填充劑(無水乳糖、澱粉、乳糖珠粒、葡萄糖)、粘合劑(微晶纖維素)、吸收促進劑等。本發明的異丙酚琥珀酸單酯及其可藥用的鹽或其藥物組合物的用量可根據給藥途徑，患者的年齡和體重，所治療腫瘤的類型及病情嚴重程度的不同而不同。口服量10-500mg/次'人，每日三次服用，注射劑用量為5-400mg/人，每日1次。具體實施例方式實施例l、異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽的製備將4.11g丁二酸酐與10ml吡啶置於50ml三頸瓶中混合攪拌0.5h，加入2g異丙酚原料，通氮氣保護(異丙酚在鹼性環境下易氧化)，加熱至回流，溫度U5.5'C，回流lh後，溶液顏色逐漸變深。維持溫度繼續回流15h小時，通過TLC檢測，原料點基本消失，可認為反應完全。將吡啶減壓抽乾(70°C,3mm)，得到褐色固體，加入NaHC03水溶液溶解，用鹽酸調節PH^-2，溶液中有淡灰色固體析出，將析出固體過濾，真空乾燥，得到異丙酚丁二酸單酯粗品3.16g，收率95.9%，將粗品以石油醚重結晶，活性炭脫色，得到白色針狀晶體2.7g，收率為81.94%,熔點99。C99.3。C。純度99%。.MSm/z:278(2，m+);IR在3065cm-l有短而尖的吸收，在1748.86均有強吸收。1H-NMR(CDC13)S7.137.19(m,3H)S2.90-2.94(m,2H),S2.83-2.85(t,4H),S1.17-1.19(t,12H)。將上步所得異丙酚琥珀酸單酯lg以8%的碳酸氫鈉滴加至剛好溶解，放置於l(TC結晶，過濾固體，以乙醚衝洗，將晶體真空乾燥，得白色固體0.96g即異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽，收率89%，純度80%，熔點4851。C。實施例2異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽對人乳癌細胞的影響受試藥物異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽方法體外培養人乳癌細胞株MDA-MB-231，實驗分為8組①正常對照組②空白對照組③紫杉醇對照組，異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽不同濃度幹預組④50uM⑤100pM⑥200uM⑦400yM⑧600wM。各實驗組幹預後繼續培養24、48、72小時後待查。採用MTT法選擇最佳細胞接種濃度、培養時間及最適抑制濃度，計算其IC50值。結果異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽作用MDA-MB-231細胞24h、48h、72h後OD值及抑制率的變化(n=4)tableseeoriginaldocumentpage5注400ug/mL及600ug/mL濃度處理組分別與正常對照組、空白對照組、50ug/mL、100ug/mL、200ug/mL濃度組比較，"P值均O.01;200Pg/mL組分別與50Ug/mL、100ug/mL組比較，其fp值均O.05,而400ixg/mL、600ug/mL組比較，其P值均X).05。採用SPSS軟體計算半數抑制濃度IC50為390.3Pg/mL異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽作用48小時對MDA-MB-231細胞AnnexinV，Caspase-3活性的影響如表所示經AnnexinV家冊所得凋亡百分率與藥物濃度存在著依賴關係，與MTT實驗結果一致。Caspase-3的表達在異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽各濃度組均增強。異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽作用48小時對MDA-MB-231細胞AnnexinV,Caspase-3活性的影響tableseeoriginaldocumentpage5tableseeoriginaldocumentpage6注各處理組與對照組比較，*值均0.05)，200uM、400uM、600uM組吸光度值與50uM、100yM組比較有非常顯著性差異(PO.Ol)。200iiM與400uM組比較無顯著性差異(P>0.05)，400PM與600UM組比較有顯著性差異(P0.05)。100uM、200uM、400uM、600uM組吸光度值與50uM組、對照組比較差異有非常顯著性(PO.Ol)。100ixM、200"M、400uM組與600uM組比較有非常顯著性差異(PO.Ol)。羥基喜樹鹼對照組與100"M與200yM組比較無顯著性差異(P>0.05),與400yM組比較有顯著性差異(PO.05),與600uM組比較有非常顯著性差異(PO，Ol)。其最適抑制濃度為100ug/mL，IC50為185.5yg/mL。異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽對人神經母細胞癌細胞和肝癌細胞株生長的影響(n=4)組別神經母細胞瘤細胞肝癌細胞吸光度值A抑制率(％)吸光度值A抑制率(％)(x土s)(x土s)正常對照組0.676±0.00401.524±0.0640空白對照組0.669±0.02104.530±0.0350羥基喜樹鹼對照0.391±0扁42.20.834±0.02445.3組50uM0.641±0.0455.21.41±0細7.5100yM0.633±0.0186.30.927±0.042**39.2**200uM0.317土0.023"53.1**0.783±0.021**48.6"400iiM0.295±0.025**56.4**0.470±0.005**69.2**600nM0.094+0.030**86.1**0.133+0.036**913**注與正常對照組和空白對照組比較"PO.Ol異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽作用48小時對人神經母細胞瘤細胞和肝癌細胞AnnexinV,Caspase-3活性的影響如表所示經AimexinV檢測所得的凋亡百分率與藥物濃度存在著依賴關係，與MTT實驗結果一致。兩種瘤細胞Caspase-3的表達在異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽各濃度組均增強。異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽作用48小時對人神經母細胞瘤細胞和肝癌細胞AnnexinV,Caspase-3活性的影響組別神經母細胞瘤細胞肝癌細胞A皿exinVCaspase-3(%)AnnexinVCaspase-3(%)(%)(%)正常對照組0.81±0.471.05土0.150.85±0.641.13±0.2950yg/mL0.79±0.371.89±0.521.73±0.262.05±0.17100ug/mL1.25±0.582.36±0.317.05±0.47*7.93±0.57*200ug/mE5.94±0.47*6.42±0.38*7.21±0.35*8.53±0.46*400ug/mL11.03±1.06*8.46±0.76*17.51±0.61*15.26±0.18*600ug/mL15.83±1.72*10.52±0.57*21.43±0.42*20.24±0.61*注與細胞對照組比較4P0.01從實驗結果可以發現異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽具有抗人神經母細胞瘤細胞和肝癌細胞活性，其作用均呈一定的劑量依賴關係。實施例4:異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽水針取異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽20g，加水10000ml溶解，滅菌，乾燥，無菌密封，製成IOOO支，規格含異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽20mg/支，成人靜脈滴注給藥，l支/次，溶於250ml生理鹽水中，一日一次，15天為一療程。實施例5:異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽片劑異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽24g，澱粉776g混勻，製成1000片，規格含異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽24mg/片，成人口服l片/次，一日三次，一個月一個療程。實施例6:異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽無菌分裝粉針取約佔配製體積總量70%的注射用水，通二氧化碳飽和，加入異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽30g、4g維生素C鈣、12g甘油，攪拌溶解，加配製量0.3%的活性炭室溫攪拌30分鐘，加10n/。鹽酸調節pH為47，加注射用水至10000mL，用0.22pm微孔濾膜(或其它適宜的方法)無菌過濾，用噴霧乾燥法製得無菌粉末，無菌條件下定量分裝於管制直管瓶中，製成1000支，規格含異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽30mg/支，成人靜脈滴注給藥，l支/次，溶於250ml生理鹽水中，一日一次，15天為一療程。實施例7:異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽無菌水針劑。取約佔配製體積總量80%的注射用水，通二氧化碳飽和，加入異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽100g、4g維生素C鈉、10g氯化鈉，攪拌溶解，加配製量0.2%的活性炭室溫攪拌30分鐘，加10%乙酸調節pH為35，加注射用水至10000mL，過濾至澄明，測定含量、pH、色澤等指標合格後，在二氧化碳氣流下灌封於安瓿中，每支10ml，封口，製成1000支，IO(TC流通蒸汽滅菌30分鐘。規格含異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽100mg/支，成人靜脈滴注給藥，l支/次，溶於250ml生理鹽水中，一日一次，15天為一療程。權利要求1、結構式(I)所示的異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽在製備抗乳腺癌、肝癌或神經母細胞瘤藥物中的用途，全文摘要本發明涉及一種異丙酚衍生物——異丙酚琥珀酸單酯鈉鹽(I)在製備抗腫瘤藥物中的用途，具體是在製備抗乳腺癌、肝癌或神經母細胞瘤藥物中的用途。文檔編號A61K31/222GK101361730SQ20081007033公開日2009年2月11日申請日期2008年9月19日優先權日2008年9月19日發明者輝周,李勤耕,桂琳琳,洪王,濤王,緒羅,金先慶,攀陳申請人:重慶醫科大學醫藥研究所