甘草次酸固體脂質納米粒及其製備方法

2023-05-16 00:07:31

專利名稱：甘草次酸固體脂質納米粒及其製備方法
技術領域：
本發明屬於藥物製劑技術領域，具體涉及甘草次酸固體脂質納米粒及其製備方法。
背景技術：
甘草次酸(glycyrrhetinic acid，GA)系甘草的主要成分甘草酸加水分解而來， 也是甘草酸在體內的活性代謝產物，是一種五環三萜類化合物。GA又稱甘草亭酸，分子式 % C30H46O4,白色針狀晶體，熔點沘9 291°C。結構如下式所示
現代研究表明甘草次酸除具有抗炎、抗潰瘍、抗過敏、抗病毒、降血脂、止咳、平喘、止痛等作用外還具有抗腫瘤增生的作用[劉彬，齊雲。甘草酸及甘草次酸的藥理學研究進展。國外醫藥 植物藥分冊，2006，21 (3):100-104.]。研究發現甘草次酸對鼠肝細胞癌、人肝癌細胞、艾氏腹水癌、皮膚癌、惡性黑色素瘤、人乳腺癌細胞、人白血病細胞、愛滋病等均有顯著的抑制作用。[1，黃煒等.18β_甘草次酸和甘草酸對人肝癌細胞增殖的抑制和誘導分化作用.中國中醫藥科技.2009, 9(2) :92-95 ；2,Rene Csuk, Stefan Schwarz, Ralph Kluge,
Dieter Strohl. Synthesis and biological activity of some antitumor active derivatives from glycyrrhetinic acid, European Journal of Medicinal Chemistry,
2010， 45: 5718-5723.]。甘草次酸已引起了國內外醫藥學工作者的廣泛興趣。日本正在研究用甘草次酸來治療癌症，臨床上已有抗肝癌製劑。美國國家癌症研究中心也正在研究甘草裡的「三萜類化合物」抑制癌細胞生長的效果及預防蛀牙。西方國家大量進口甘草，從中提取甘草次酸治療愛滋病。近年來，我國也開始重視和加強甘草次酸的研究開發。由於甘草次酸為水不溶性化合物，口服後體內吸收差，生物利用度低，且個體差異性大。作為一種抗癌製劑，延長藥物體內滯留時間並使其能濃集於治療部位，對於增強藥物療效，提高藥物生物利用度具有重要意義。固體脂質納米粒(solid lipid nanoparticles, SLN)是20世紀90年代初發展起來的一類新型給藥系統，它是將藥物包載於類脂核中形成的粒徑在50-1000nm之間的膠體給藥系統。SLN具有穩定性好、藥物載藥量高，同時又具有脂質體的毒性低、能大規模生產、靴向、緩釋等優點[Muller R H, et al. Solid lipid nanoparticles (SLN) for controlled drug delivery a review of the state of the art.Eur J Pharm Biopharm,2000，50(1) 161-177]。普通固體脂質納米粒進入體循環易被巨噬細胞識別吞噬，在巨噬細胞體內經溶酶體作用而釋放藥物，使其具有被動靶向性，容易聚集到肝、脾、淋巴結內。為了延長納米粒在體內的作用時間，通常可以對納米粒進行PEG修飾，增加其表面親水性，形成立體位阻， 使納米粒躲過單核巨噬細胞系(MPS)的識別，延長納米粒在血液循環中的滯留時間，使其以更充足的時間到達靶向部位，從而達到主動靶向的目的[Gref R, et al. "Stealth" corona-core nanoparticles surface modified by polyethylene glycol ( PEG): influences of the corona(PEG chain length and surface density) and of the core composition on phagocyt ic uptake and plasma protein adsorption [J]. Colloid Surf B, 2000，18(3 - 4): 301- 313]。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種性質穩定並適合工業化生產的甘草次酸固體脂質納米粒及其製備方法。本發明的甘草次酸固體脂質納米粒是將甘草次酸包裹於類脂核中，具有穩定性好、包封率高，可達到靶向、緩釋等效果。本發明的甘草次酸固體脂質納米粒可以通過多種方法製備，包括乳化蒸發-高壓乳勻或超聲、薄膜分散-高壓乳勻或超聲以及熔融-高壓乳勻法製備甘草次酸的固體脂質納米粒溶液，進一步通過加入支架劑冷凍乾燥得到方便儲存和運輸的甘草次酸固體脂質納米粒的凍乾粉。本發明的甘草次酸固體脂質納米粒由治療有效劑量的活性成分包裹在類脂核中構成。具體地，其中各成分質量百分比如下
甘草次酸ι-ιο%
磷脂10-80%
類脂5-50%
表面活性劑10-50%
當處方中所用表面活性劑為聚乙二醇(PEG)修飾材料時，即為甘草次酸長循環固體脂質納米粒。常用聚乙二醇修飾材料為PEG的類脂衍生物如聚乙二醇-磷脂醯乙醇胺 (mPEG-PE)、甲氧基聚乙二醇-二硬酯醯磷脂醯乙醇胺(mPEG-DSPE)、聚乙二醇單甲醚膽固醇琥珀酸酯(PEGCHS)等中的一種。所述磷脂可以為蛋黃卵磷脂、大豆磷脂、氫化大豆磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、磷脂醯肌醇、磷脂醯絲氨酸、二磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯乙醇胺等。所述的類脂包括甘油脂類，其中包括單硬脂酸甘油酯、雙硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、雙棕櫚酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯、山嵛酸甘油酯及其混合物；脂肪酸類，其中包括硬脂酸、棕櫚酸、油酸、山嵛酸、癸酸及其混合物；固醇類，包括膽固醇等；蠟質類，包括鯨蠟醇棕櫚酸酯、鯨蠟醇十六酸酯以及微晶石蠟。所述表面活性劑可以為聚乙二醇衍生物類，包括聚乙二醇-磷脂醯乙醇胺 (mPEG-PE )、甲氧基聚乙二醇-二硬酯醯磷脂醯乙醇胺(mPEG-DSPE )、聚乙二醇單甲醚膽固醇琥珀酸酯(PEGCHS)等；膽酸鹽類，包括膽酸鈉、苷膽酸鈉、牛磺膽酸鈉；脫氧膽酸鹽類，包括脫氧膽酸鈉、牛磺去氧膽酸鈉；泊洛沙姆類，包括泊洛沙姆108、188、407、908 ；聚山梨醇類，包括吐溫 80、85、65、60、40。用本發明方法所製得的固體脂質納米粒粒徑可控，可根據需求製備出從50nm到 SOOnm之間不同粒徑大小並且粒徑均一的納米粒。上述甘草次酸固體脂質納米粒可採用如下方法製備
方法一按比例稱取甘草次酸和磷脂、類脂及表面活性劑，溶於有機溶劑；減壓蒸發， 除去有機溶劑，在容器壁上形成薄膜，注入PH6-8的水溶液，使得膜材溶解，水化1- ；所形成的乳劑進一步通過高壓乳勻或超聲來減小納米粒徑，再過微孔過濾器，即得粒徑均一、 大小可控的固體脂質納米粒溶液。方法二 按比例稱取甘草次酸和磷脂、類脂及表面活性劑，溶於有機溶劑；在攪拌下將有機溶液直接注入PH6-8的水溶液，使其形成乳液，再減壓蒸發除去有機溶劑；所形成的乳劑進一步通過高壓乳勻或超聲來減小納米粒徑，再過微孔過濾器，即得粒徑均一、大小可控的固體脂質納米粒溶液。方法三按比例稱取甘草次酸和磷脂、類脂及表面活性劑，直接加熱熔融；
在攪拌狀態下將PH6-8的水溶液注入熔融的混合物中；所形成的乳劑進一步通過高壓乳勻或超聲來減小納米粒徑，再過微孔過濾器，即得粒徑均一、大小可控的固體脂質納米粒溶液。為便於儲存和運輸，可將甘草次酸固體脂質納米粒溶液通過噴霧乾燥或冷凍乾燥成固體粉末，其中需加入賦形劑。所用賦形劑包括甘露醇、葡萄糖、環糊精、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、甘氨酸、氯化鈉等
本發明方法，所用有機溶劑可以使用通常的有機溶劑，如甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、 乙酸乙酯、二氯甲烷等中的一種或其混合物。所用的pH6-8的水溶液可以使用蒸餾水、注射用水、磷酸緩衝液以及含β-環糊精、羥丙基β-環糊精或甲基β-環糊精的水溶液或磷酸緩衝液。本發明的甘草次酸固體脂質納米粒製劑可用於治療肝炎、肝癌、乳腺癌、肺癌、胃炎、胃癌、卵巢癌、白血病及愛滋病等疾病。本發明方法簡單易行，易消毒，適合大規模生產。所製備的甘草次酸固體脂質納米粒粒徑均一，包封率高，穩定性好，適合口服或注射等多種給藥途徑，所選的載體材料安全、 無毒、生理相容性好，能靶向於炎症或癌變部位，並能緩慢釋放藥物，達到長效的目的。


圖1實施例1中甘草次酸固體脂質納米粒透射電鏡照片。圖2實施例1中甘草次酸固體脂質納米粒粒徑分布圖。圖3實施例1製備甘草次酸固體脂質納米粒過CL-4B凝膠柱洗脫曲線。圖4甘草次酸固體脂質納米粒的體外溶出曲線。
具體實施例方式實施例1配方質量百分比(％)
甘草次酸5
蛋黃卵磷脂40
硬脂酸30
mPEG-DSPE25
稱取甘草次酸、蛋黃卵磷脂、硬脂酸和mPEG-DSPE，溶於2ml乙醇，超聲使其溶解形成透明溶液，將其注入50ml 50°C的蒸餾水中，持續攪拌30分鐘後，置於旋轉蒸發儀上減壓蒸發，進一步揮發有機溶劑，然後經高壓勻質機循環勻質3-5次後，室溫放冷，過0. 45Mffl濾膜，即得甘草次酸固體脂質納米粒的膠體溶液，該膠體溶液呈半透明、藍色乳光。用反相高效液相色譜柱測定內藥物含量。色譜柱選用ODS C18柱(4.6M50mm，5Mm)，流動相為甲醇-水-冰醋酸(體積比為89:10:1)，流速1.01111/1^11，檢測波長250nm，進樣量ΙΟμ 。建立甘草次酸的標準曲線，結果表明甘草次酸在lPg/mL-SOPg/mL範圍類線性關係良好。將所得脂質體溶液取0. 2ml過瓊脂糖CL-4B凝膠柱，以pH7. 4的磷酸緩衝液為洗脫液，按每試管 Iml的量收集流出液，根據洗脫曲線求算包封率達94. 6%，甘草次酸脂質體過CL-4B凝膠柱洗脫曲線見圖3所示。用kta電位粒度測定儀測定其粒徑130. lnm, Zeta電位為-36. 2mv。實施例2
配方質量百分比(％)
甘草次酸1
蛋黃卵磷脂80
油酸9
PEGCHS10
稱取甘草次酸、蛋黃卵磷脂、油酸及mPEG-DSPE置於50ml圓底燒瓶中，加入2ml氯仿使其溶解，40°C水浴置於旋轉蒸發儀上減壓回收有機溶劑，在瓶壁形成一層膜，進一步置於減壓乾燥器中完全除去有機溶劑。注入PH8的磷酸緩衝液水化lh，置於探頭超聲波破碎儀中超聲10-30分鐘，過0.45Mm濾膜，將所得脂質體溶液定容，加入10% (g/ml)的蔗糖，經冷凍乾燥得甘草次酸固體脂質納米粒凍乾粉。復溶後取0. 2ml過瓊脂糖CL-4B凝膠柱，以 PH7. 4的磷酸緩衝液為洗脫液，按每試管Iml的量收集流出液，根據洗脫曲線求算包封率達 90%。同樣如實例1用高效液相色譜法測定固體脂質納米粒中甘草次酸含量。測得納米粒粒徑 178. 2nm, Zeta 電位-30. 6mv。實施例3
配方質量百分比(％)
甘草次酸4
大豆磷脂46
棕櫚酸甘油酯5
泊洛沙姆50
稱取甘草次酸、蛋黃卵磷脂、棕櫚酸甘油酯、泊洛沙姆，於60°C熔融混勻，攪拌下將 600C的水注入熔融液中，繼續攪拌30分鐘，高壓勻質機循環勻質3-5次後，室溫放冷，過 0. 45Mffl濾膜，將超聲所得固體脂質納米粒定容，加入5% (g/ml)甘露醇，冷凍乾燥，得甘草次酸固體脂質納米粒的凍乾粉。加蒸餾水復溶後，取0. 2ml過瓊脂糖CL-4B凝膠柱，以pH7. 4
6的磷酸緩衝液為洗脫液，按每試管Iml的量收集流出液，根據洗脫曲線求算包封率達98%。 測定納米粒粒徑為231. 7nm, Zeta電位為-33. 15mv。
實施例4 配方
甘草次酸氫化大豆磷脂
單硬酯酸甘油酯吐溫80
稱取甘草次酸、蛋黃卵磷脂、
質量百分比(％) 10 40 40 10
L硬酯酸甘油酯加入5ml乙酸乙酯使其溶解，用注射器緩慢注入磁力攪拌下的60°C含吐溫80的水溶液，繼續攪拌30分鐘後，轉移至旋轉蒸發儀中， 揮發有機溶劑直至完全除去，經高壓勻質機循環勻質3-5次後，室溫放冷，過0. SMffl濾膜，即得甘草次酸固體脂質納米粒的膠體溶液，取0. 2ml過瓊脂糖CL-4B凝膠柱，以pH7. 4的磷酸緩衝液為洗脫液，按每試管Iml的量收集流出液，根據洗脫曲線求算包封率達87. 3%。測得粒徑384. lnm, Zeta電位-25. 12mv。加入10% (g/ml)的乳糖，經噴霧乾燥得甘草次酸固體脂質納米粒固體粉末，該固體粉末可進一步製備成膠囊或片劑。實施例5
質量百分比(％) 5 10 50 35
稱取甘草次酸、氫化蛋黃卵磷脂、硬脂酸及mPEG-DSPE置於50ml圓底燒瓶中，加入2ml 二氯乙烷使其溶解，40°C水浴置於旋轉蒸發儀上減壓回收有機溶劑，在瓶壁形成一層膜，進一步置於減壓乾燥器中完全除去有機溶劑。注入含脫氧膽酸鈉的水溶液中水化lh，超聲 10-30分鐘，過0. 45Mffl濾膜，將所得固體脂質納米粒溶液定容，根據洗脫曲線求算包封率達92. 4%。測得粒徑155. 3nm, Zeta電位-26. 57mv。加入10% (g/ml)的海藻糖，經冷凍乾燥得甘草次酸固體脂質納米粒凍乾粉。該凍乾粉可進一步製備成膠囊或片劑。實施例6
質量百分比(％) 3
47 15
配方
甘草次酸氫化蛋黃卵磷脂硬酯酸脫氧膽酸鈉
配方
甘草次酸氫化蛋黃卵磷脂癸酸
mPEG-DSPE
35
稱取甘草次酸、氫化蛋黃卵磷脂、膽固醇及mPEG-DSPE置於50ml圓底燒瓶中，加入2ml 氯仿使其溶解，40°C水浴置於旋轉蒸發儀上減壓回收有機溶劑，在瓶壁形成一層膜，進一步置於減壓乾燥器中完全除去有機溶劑。注入含有0. IM β -環糊精的ρΗ8的水溶液中水化 Ih,反覆凍融3次後過高壓擠壓器，將所得固體脂質納米粒溶液定容，根據洗脫曲線求算包封率達95. 7%ο測得粒徑152. 6nm, Zeta電位-23. 15mv。 實施例7甘草次酸固體脂質納米體外釋放度的測定。以200mL含0. 5%(g/ml)的十二烷基硫酸鈉和30%(g/ml)乙醇的pH7. 4的PBS溶液為介質，精密移取2mL甘草次酸固體脂質納米粒溶液，置於透析袋中(截留分子量3000)，磁力攪拌。分別於0.5、1、2、3、4、6、 8、10、12、M、48小時取釋放液0. 5mL，過0. 45Mm的微孔濾膜，進行HPLC分析，同時補充同溫度的溶出介質lmL。測定GA濃度，計算累積釋放百分率。按公式Q(%)=(；/(；X 100%計算釋放量。其中Ct為釋放的藥物量，Ctl為脂質體中初始藥物量。以時間為橫坐標，累積釋放百分率為縱坐標，繪製體外釋藥曲線，詳見圖4。將所得數據按一級、Higuchi及Weibull方程進行擬合，相關方程及擬合度見表1。結果表明其釋放規律更符合一級速率過程，說明甘草次酸在固體脂質納米中主要以被動擴散的方式向溶出介質中釋放。
表1甘草次酸固體脂質納米粒的體外釋藥曲線擬合
權利要求
1.一種甘草次酸固體脂質納米粒，由治療有效劑量的活性成分包裹在類脂核中構成， 其特徵在於，其中各成分質量百分比如下甘草次酸1-10%磷脂10-80%類脂5-80%表面活性劑10-50%。
2.根據權利要求1所述的甘草次酸固體脂質納米粒，其特徵在於，所述磷脂為天然磷脂或合成磷脂。
3.根據權利要求1所述的甘草次酸固體脂質納米粒，其特徵在於，所述的類脂包括甘油脂類，脂肪酸類、固醇類或蠟質類。
4.根據權利要求1所述的甘草次酸固體脂質納米粒，其特徵在於，所述表面活性劑為聚乙二醇衍生物類，膽酸鹽類，脫氧膽酸鹽類，泊洛沙姆類或聚山梨醇類。
5.根據權利要求1所述的甘草次酸固體脂質納米粒，其特徵在於，其粒徑在50-1000nm 之間。
6.權利要求1所述甘草次酸固體脂質納米粒的製備方法，其特徵在於，按比例稱取甘草次酸和磷脂、類脂及表面活性劑，溶於有機溶劑；減壓蒸發，除去有機溶劑，在容器壁上形成薄膜，注入pH6-8的水溶液，使得膜材溶解，水化1- ；所形成的乳劑進一步通過高壓乳勻或超聲來減小納米粒徑，再過微孔過濾器，即得粒徑均一、大小可控的固體脂質納米粒溶液。
7.權利要求1所述甘草次酸固體脂質納米粒的製備方法，其特徵在於，按比例稱取甘草次酸和磷脂、類脂及表面活性劑，溶於有機溶劑；在攪拌下將有機溶液直接注入PH6-8的水溶液中，使其形成乳液，再減壓蒸發除去有機溶劑；所形成的乳劑進一步通過高壓乳勻或超聲來減小納米粒徑，再過微孔過濾器，即得粒徑均一、大小可控的固體脂質納米粒溶液。
8.權利要求1所述甘草次酸固體脂質納米粒的製備方法，其特徵在於，按比例稱取甘草次酸和磷脂、類脂及表面活性劑，直接加熱熔融；在攪拌狀態下將PH6-8的水溶液注入熔融的混合物中；所形成的乳劑進一步通過高壓乳勻或超聲來減小納米粒徑，再過微孔過濾器，即得粒徑均一、大小可控的固體脂質納米粒溶液。
全文摘要
本發明涉及甘草次酸固體脂質納米粒及其製備方法，屬於藥物製劑領域。本發明的甘草次酸固體脂質納米粒主要成分包括活性原料甘草次酸、可藥用的磷脂、脂質材料、表面活性劑。本發明製備的甘草次酸固體脂質納米粒溶液及其凍乾粉針劑，其粒徑小，包封率高，穩定性好，可用於口服和注射給藥等多種給藥途徑。本發明的甘草次酸固體脂質納米粒，不僅可以減少用藥劑量，增強療效，而且可以降低藥物的毒副作用，適用於治療肝炎、肝癌、肺癌、卵巢癌、胃炎、胃癌、白血病及愛滋病等多種疾病。
文檔編號A61K31/56GK102512369SQ20111042559
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月19日 優先權日2011年12月19日
發明者周小菊, 王炯, 胡先明 申請人:武漢大學