新型組合物的製作方法

2023-05-22 05:31:11 3

專利名稱：新型組合物的製作方法
用於預防A肝和B肝的疫苗已為人們所熟知。例如，SmithKlineBeecham生物製品公司出售的用於預防B肝的Engerix-B(商標名)疫苗。該疫苗包含B肝表面抗原(特別是Harford等人在Postgraduate Medical Journal,1987,63(Suppl.2),65-70一文中描述的226個胺基酸的S抗原)，並用氫氧化鋁作佐劑配製而成。疫苗Havrix(商標名)也來自SmithKline Beecharn生物製品公司，可以用於預防A肝感染，也是用氫氧化鋁作佐劑配製而成。該疫苗包含經福馬林(甲醛)滅活過的HM-175A肝病毒減毒株；參見Andre et al[Prog Med.Virol.1990,vol 37；p72-95]。疫苗Twinrix(商標名)是上述A肝及B肝抗原的聯苗，可以用來同時預防A肝和B肝。
歐洲專利EPO339667(Chemo Sero)中記述了通過合併A肝和B肝抗原製備聯苗的常規概念。該專利說明書中寫明，其中所用佐劑無嚴格規定唯一必須的要求是它能夠將免疫活性增強到期望的程度，但不帶來任何副作用。其中還指明可以使用鋁凝膠，具體為氫氧化鋁凝膠和磷酸鋁凝膠。
PCT申請WO 93/24148(SmithKline Beecham)中描述了包含B肝表面抗原的製備方法，其中使用磷酸鋁作為佐劑。另外還描述了任選包含A肝抗原的多價聯苗。福馬林的使用未見公開。
序號為0 633 784的歐洲專利申請(SmithKline Beecham)中描述了含有與磷酸鋁結合的B肝成分和3脫氧醯化單磷酸脂質A的新疫苗製劑。
令人驚奇的是現已發現如果含有B肝和/或A肝抗原的疫苗以特定的方式配製，那麼該疫苗發揮出奇好的效果。
使用本發明的疫苗，可以2倍而非3倍劑量方式施用。
本發明的第一個方面，本發明提供的水性疫苗組合物中包含有用磷酸鋁作佐劑配製的B肝表面抗原，磷酸鋁濃度的選用原則是B肝表面抗原和磷酸鋁之間用量之比為每μgB肝表面抗原對應0.015-0.1mg磷酸鋁。
優選地，所述比例為每μg HBsAg對應0.02～0.08mg磷酸鋁。
本發明的另一方面，可以任選地將一種滅活後的A肝病毒(HAV)加入本發明所述製劑，前提是A肝和B肝聯苗可以2倍劑量的方案給藥。
所述A肝抗原優選為商品化疫苗Havrix(SmitMUine BeechamBiologicals)中所使用的HM-175毒株。
本發明所述疫苗中A肝抗原的濃度優選約720-2880 EU單位/ml。EU單位的定義參見Andre et al(1990)，在上述引文中。
本發明所述含有HAV的組合物此外還可以包含氫氧化鋁，通常氫氧化鋁總量為0.05-0.10mg/ml。
正常地，每0.5～lml劑量中鋁鹽總量為0.4～1.0mg。
本發明所述疫苗組合物中，優選加入福馬林(甲醛)並使其濃度為10～200μg/ml．優選地，所述福馬林濃度約為20-160μg/ml。
正常地，所述B肝抗原為B肝表面抗原(HBsAg)。B肝表面抗原的製備已被充分公開。參見例如，Harford et al in Develop.Biol.Standard54,page125(1983),Gregg et al in Biotechnology,5,page479(1987),EP-A-0226846,EP-A-0 299 108以及其中的參考文獻。
本發明使用的表述方法「B肝表面抗原」或「HbsAg」包括能夠展示HBV表面抗原抗原性的任一種HBsAg抗原或其片段。應該理解的是除HBsAg S抗原的226胺基酸序列(參見Tiollais et al,Nature,317,489(1985)及其中所引文獻)外，如果需要，本發明所述的HbsAg還可以包括上述文獻以及EP-A-0278 940中描述的原-S序列的全長或部分序列。本發明所述的HBsAg還可以指變體，例如，WO 91/14703中描述的「脫逸突變體」。另一方面，所述HbsAg可以包含序列號為0414374歐洲專利申請中描述為SL*的蛋白質，即這樣一種蛋白，它的胺基酸序列包含B肝病毒大(L)蛋白(ad或ay亞型)胺基酸序列的多個部分，其特徵在於所述蛋白胺基酸序列由下述二者之一組成(a)所述L蛋白的殘基12-52後接殘基133-145再後接殘基175-400；或者(b)所述L蛋白的殘基12後接殘基14-52後接殘基133-145再後接殘基175-400。
HBsAg也可以指EP 0 198 474或EP 0 304 578中所述的多肽。
正常地，HbsAg為顆粒形式。它可以只包含S蛋白，或者也可以是合成顆粒，例如(L*S)其中L*同上述定義，S代表B肝表面抗原的S蛋白。
優選地，按照WO93/24148描述，將HbsAg吸附到磷酸鋁上。
優選地，所述B肝抗原為商品化疫苗Engerix-B(SmithklineBeecham Biologicals)中所用的HbsAgS抗原。
本發明所述疫苗製劑包括免疫保護量的抗原，可以用常規技術製備。疫苗製備的一般描述見Voller等人編著的疫苗的新趨勢及進展，University Park Press,Baltimore,Maryland,U.S.A.1978。包裹於脂質體的方法見，例如，Fullerton在美國專利4,235,877中的描述。將蛋白質與大分子偶聯的描述見，例如Likhite的美國專利4,372,645和Armor等人的美國專利4,474,757。
優選地，本發明所述的疫苗組合物採用0,6月的方案施用，也就是說，第一劑量在0月，第二劑量在第6個月時給藥。
本發明所述的疫苗組合物特別適用於成人，也適用於青少年和兒童。
下列實施例是為了說明而並非限制本發明。
實施例實施例1．具體製劑本發明範圍內的具體製劑包括下述方案a)一種施用給成人的疫苗組合物，其中包含40μg HBsAg1440 EU HAV0.85mg鋁鹽(0.8mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)20μg福馬林劑量為0.5mlb)一種給成人施用的疫苗組合物，其中包含40μg HBsAg1440 EU HAV0.85mg鋁鹽(0.8mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)20μg福馬林劑量為1.0mlc)一種給青少年和/或兒童施用的疫苗組合物，其中包含20μg HBsAg720 EU HAV0.45mg鋁鹽(0.4mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)80μg福馬林劑量為1mld)一種給青少年和/或兒童施用的疫苗組合物，其中包含20μg HBsAg720 EU HAV0.45mg鋁鹽(0.4mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)80μg福馬林劑量為0.5ml實施例2研究「HAB 054」2.1 用含有下述成分的疫苗組合物接種一組共47名健康成人個體1440 EU HAV抗原40μg HBsAg(S-抗原)0.8mg AlPO40.05mg氫氧化鋁20μg/ml福馬林表格中該組合物縮寫為「1440/NF40」2.2 接種一組共47名健康成人個體a)在一隻胳膊上接種劑量為1ml的疫苗組合物，其中含有用0.8mg AlPO4配製的40μgHbsAg和20μg/ml福馬林(下文中給組合物縮寫為』NF40』)；以及b)在另一隻胳膊上接種劑量為1ml的HAVRIX 1440，其中含有用0.5mgAlPO4配製的1440 EU HAV抗原和20μg/ml福馬林。HAB 054的免疫方案為0,6(即在0月和第6個月劑量接種)。
與使用同一年齡組志願者進行的另一項研究(HBV NF 021)中得到組織學結果相比，第2、6和7月時B肝血清學結果(血清轉化(SC)、血清保護(SP)及幾何平均滴度(GMT))都出乎意料的高。HBV NF 021的研究(參見表1)包括下列3組組1用體積為0.5ml的一種製劑接種，其中含有用0.5μgAlPO4配製的40μg HbsAg但不含福馬林，接種方案為0,6月(該方案在表格中縮寫為NF40μg,0,6M)組2用體積為0.5ml的一種製劑接種，其中含有用0.5μg AlPO4配製的20μg HbsAg但不含福馬林，接種方案為0,6月(該方案在表格中縮寫為NF40μg,0,6M)組3採用典型的0,1,6月3劑量免疫方案(表1中的第3行數據)，接種Engerix B製劑(20μg)結果1)在HBV NF 021研究中，組1和組2第7月B肝血清學結果不如組3的結果令人滿意(較低的SC、SP結果以及GMT+/-1/3(500～600)3劑量Engerix-B後得到的水平(1500))。
2)在HAB 054研究中，2劑量疫苗後得到的滴度與3劑量EngerixB後得到的滴度為同一數量級。
表1HBV-NF 021研究
表2HAB 054研究成人中的HAB 2-劑量程序(0,6月方案)N=94
表3HAB 054研究成人中的HAB 2-劑量程序(0,6月方案)N=94
表4HAB 054研究成人中的HAB 2-劑量程序(0,6月方案)N=94
表5HAB 054研究成人中的HAB 2-劑量程序(0,6月方案)N=94
表6HAB 054研究成人中的HAB 2-劑量程序(0,6月方案)N=94
實施例3研究「HAB063,HAB071和HAB075」11～18年齡段青少年中的HAB 2劑量程序3.1研究HAB 063含有下列成分的疫苗組合物720HAV EU/20μg HBsAg0.25mg Al鹽40μg福馬林共0.5ml劑量結果見表7。
表7HAB 063研究11～18年齡段青少年中的HAB2劑量程序(0,6月方案)N=52
3.2研究HAB071用於該研究中的兩組。組1中的疫苗組合物720HAV EU/20μg HBsAg0.425mg Al鹽40μg福馬林共0.5ml劑量和0,6月方案組2中的疫苗組合物(TwinrixTMJunior):
360 HAV EU/10μg HBsAg0,225mg Al鹽40μg福馬林共0.5ml劑量0,6月方案表8HAB071研究
3.3 研究HAB075用於該研究中的兩組。疫苗組合物組1(TwinrixTM):720HAV EU/20μgHBsAg0.45mg Al鹽80μg福馬林總劑量為1ml,0,6月方案N=67疫苗組合物組21440HAV EU/40μgHBSAg0.85mg Al鹽80μg福馬林總劑量1ml，採用0,6月方案
N=55表9HAB 075研究
實施例4研究「HAB 084」12～15年齡段青少年中的HAB 2劑量程序用於該研究中的兩組。疫苗組合物組1(TwinrixTM)720HAV EU/20μgHBsAg0.45mg Al鹽80μg福馬林總劑量為1ml，採用0,6月方案疫苗組合物組2(TwinrixTM):360HAV EU/10μgHBS Ag0.225mg Al鹽40μg福馬林總劑量0.5ml，採用0,1,6月方案表10HAB 084研究
實施例5研究HAB 076疫苗組合物包括720HAV EU/20μgHBsAg0.45mg Al鹽80μg福馬林總劑量為1ml，採用0,1月方案結果見表11表11HAB 076研究
綜述上述實施例的臨床結果清楚表明實施例了完全方案後，即第7月時，兒童、青少年以及成人都能夠獲得滿意的針對A肝和B肝二者的免疫應答。
權利要求
1．一種含水的疫苗組合物，其中包含每μgB肝表面抗原對應0.015～0.1mg磷酸鋁。
2．權利要求1中的疫苗組合物，其中還包括一種滅活的A肝病毒(HAV)。
3．權利要求2中的疫苗組合物，其中還包含有氫氧化鋁。
4．權利要求3中的疫苗組合物，其中每毫升含有0.05～0.10mg氫氧化鋁。
5．上述任一權利要求中所述的疫苗組合物，其中還包含福馬林。
6．權利要求5中的疫苗組合物，其中所述福馬林的濃度為約10～200μg/ml。
7．權利要求2～6任一項中所述的疫苗，其中所述HAV的濃度為約720～2880EU/ml。
8．用於成人的權利要求7所述疫苗組合物，其中包括40μg HBsAg1440 EU HAV0.85mg鋁鹽(0.8mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)20μg福馬林劑量為0.5ml。
9．用於成人的權利要求7所述疫苗組合物，其中包括40μg HBsAg1440 EU HAV0.85mg鋁鹽(0.8mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)20μg福馬林劑量為1.0ml。
10．用於青少年和/或兒童的權利要求7所述疫苗組合物，其中包括20μg HBsAg720 EU HAV0.45mg鋁鹽(0.4mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)80μg福馬林劑量為1.0ml。
11．用於青少年和/或兒童的權利要求7所述疫苗組合物，其中包括20μg HBsAg720 EU HAV0.45mg鋁鹽(0.4mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)80μg福馬林劑量為0.5ml。
12．用於青少年和/或兒童的權利要求7所述疫苗組合物，其中包括20ug HBsAg720 EU HAV0.25mg鋁鹽40μg福馬林劑量為0.5ml。
13．用於青少年和/或兒童的權利要求7所述疫苗組合物，其中包括20μg HBsAg720 EU HAV0.45mg鋁鹽40μg福馬林劑量為0.5ml。
14．上述任一權利要求中所述的疫苗組合物，其中所述的B肝表面抗原為S-抗原。
15．權利要求2～13中任一項中所述的疫苗組合物，其中所述的A肝抗原衍生自HM-175毒株。
16．一種以2劑量方案給人接種的A肝加B肝疫苗組合物。
17．權利要求16中的疫苗組合物，其中包括權利要求8～15任一項中所述的製劑。
18．權利要求16或17中所述的疫苗組合物，其中所述的兩劑量為0,6(即，劑量在第0和第6月接種)。
全文摘要
本發明提供了一種用磷酸鋁配製的含B肝抗原的新型疫苗組合物。所述疫苗組合物還可以包括一種滅活後的A肝病毒、氫氧化鋁以及福馬林。如果需要,所述的A肝B肝聯苗可以2劑量方案給人接種。本發明公開了合適的製劑。
文檔編號A61K47/02GK1308547SQ99808141
公開日2001年8月15日 申請日期1999年4月27日 優先權日1998年5月1日
發明者C·阿託伊斯, M·J·克拉克, C·迪裡爾特, S·G·J·特倫 申請人:史密絲克萊恩比徹姆生物有限公司