一種製備魔芋葡甘露寡糖的方法

2023-05-21 23:16:01 5

專利名稱：一種製備魔芋葡甘露寡糖的方法
技術領域：
本發明涉及食品飼料添加劑領域，特別是涉及一種製備魔芋葡甘露寡糖的方法。
背景技術：
我國是魔芋種植大國，鮮魔芋年產量已達100萬噸以上，成為農民尤其是貧困地 區農民的一個主要經濟來源。魔芋中含有90%葡甘露聚糖，是製備功能性葡甘露寡糖的最 佳原料。但是我國對於魔芋的加工，僅僅停留在魔芋粗粉、精粉和魔芋膠的製備和生產階 段，其潛在的巨大經濟效益沒有展現出來。葡甘露寡糖是指由2-10個葡萄糖和甘露糖通過糖苷鍵連接而成的寡聚體，對於 機體的新陳代謝具有特殊的功效，主要體現在①促進機體腸道有益菌生長與繁殖；②直 接吸附病原菌，排除腸道毒素；③增強機體的免疫功能和抗病能力；④具有降脂效應，能改 善脂質代謝，增進礦物元素的吸收，降低血氨濃度。由於獨特的生理功能功效，葡甘露寡糖 作為重要的功能性添加劑被人們所認知，並將被廣泛應用於食品、保健品和飼料等多個領 域。葡甘露寡糖主要是通過葡聚糖酶降解魔芋精粉，通過除雜、精製得到葡甘露寡糖。 目前普遍採用的是間歇釜式反應的製備方法，但該方法耗能、耗時且酶的利用效率不高。

發明內容
本發明的目的是提供一種製備魔芋葡甘露寡糖的方法。本發明提供的製備魔芋葡甘露寡糖的方法，包括如下步驟1)將魔芋與水混勻剪切乳化後，依次在壓力為160_250MPa和450_650MPa的條件 下均質，乾燥後得到魔芋粗粉；2)將所述魔芋粗粉與水混勻得到魔芋粗粉的漿液，將所述魔芋粗粉的漿液與內切 型甘露聚糖酶進行酶水解反應，得到魔芋葡甘露寡糖的生成液，並不斷將所述魔芋葡甘露 寡糖的生成液取出，每反應3-6小時補充所述魔芋粗粉的漿液一次，所述補充的所述魔芋 粗粉的漿液的體積數與所述取出的所述魔芋葡甘露寡糖的生成液的體積數相同，補料9-20 次後，再反應3-6小時後停止反應，收集合併所述魔芋葡甘露寡糖的生成液，乾燥得到所述 魔芋葡甘露寡糖。上述方法的步驟1)中，所述魔芋與水的用量比為Ikg 600kg-lkg 1200kg，優 選Ikg 1000kg;所述魔芋粗粉的目數為40-80目，優選60目。所述剪切乳化步驟中，剪 切乳化速率為6000rpm-10000rpm，優選8000rpm，所述剪切乳化的次數為2_5次，優選3次， 所述每次剪切乳化的時間為5-15分鐘，優選10分鐘；所述在160-250Mpa的條件下均質步 驟中，優選均質的壓力為200MPa，均質的次數為1次，所述在450-650MPa的條件下均質的步 驟中，優選均質的壓力為500MPa，均質的次數為2-3次；所述乾燥步驟中，溫度為80_110°C， 優選95 °C，時間為10-24小時，優選20小時。所述步驟2)中，所述內切型甘露聚糖酶為中性β-甘露聚糖酶，各種公開商業途徑出售的上述內切型甘露聚糖酶均適用於該方法，如可購自北京博仕奧生物技術有限公 司。所述魔芋粗粉的漿液的質量百分比濃度為1.5% _3.5%，優選2%，所述內切型甘露聚 糖酶的酶活為18-20萬U/g，優選19萬U/g ；所述中性β -甘露聚糖酶酶活定義如下在 400C、ρΗ值為6. 0的測定條件下，Imin催化濃度為5mg/mL的LBG底物(洋槐豆粉)水溶液 生成1 μ g還原糖(以甘露糖表示)所需的酶量定義為一個酶活力單位(U)，單位計為U/g。所述酶水解反應中，溫度為35°C "45 V，優選40°C，時間為3_6小時，優選4小時， 壓力為0. 16MPa-0. 25MPa，優選0. 2MPa ；所述內切型甘露聚糖酶與所述魔芋粗粉的質量比 為0.1-0. 6 1，具體為0.4-0. 5 1，優選0.4 1。由於該酶水解反應進行過程中，魔芋 粉中的葡甘露聚糖量逐漸減少，因此需要補充魔芋粗粉，以維持反應體系的相對平衡。補料 次數優選為每反應4小時補料一次。在所述收集合併所述魔芋葡甘露寡糖的生成液步驟之後，所述乾燥步驟之前，還 對所述魔芋葡甘露寡糖的生成液進行如下處理將所述步驟2)得到的所述魔芋葡甘露寡 糖的生成液依次進行脫色、除雜和濃縮。所述脫色步驟中，所用脫色劑為活性炭，所述活性炭為所述魔芋葡甘露寡糖的生 成液的總體積的0. 1-1 %，優選0. 6 %，溫度為90°C -Iio0C，具體為90-100°C、95-100°C或 90-95°C，優選950C，時間為30-40分鐘，優選35分鐘。所述除雜步驟是為了脫除所含有的離子和具有苦澀味的成分，除雜方式為依次用 酸性陽離子交換樹脂和鹼性陰離子交換樹脂進行除雜，所述酸性陽離子交換樹脂為D72型 酸性陽離子交換樹脂，所述鹼性陰離子交換樹脂為D201 X7型鹼性陰離子交換樹脂。各種 從公開商業途徑購買的上述型號的酸性陽離子交換樹脂和鹼性陰離子交換樹脂均適用於 該方法；該除雜步驟中，洗脫液均為蒸餾水。所述濃縮步驟中，溫度為50-60°C，所述濃縮後魔芋葡甘露寡糖溶液中所述魔芋葡 甘露寡糖的質量百分濃度為50% -70%，優選65%。所述步驟2)乾燥步驟中，乾燥方式為噴霧乾燥，溫度為120-160°C，具體為 140-150°C、120-150°C或 150_160°C，優選 140°C，時間為 10-30 分鐘，優選 15 分鐘。本發明提供了一種物理預處理和酶水解反應相結合製備葡甘露寡糖的方法。該方 法採用高速剪切乳化耦合超高壓均質方式處理鮮魔芋，選擇內切甘露聚糖酶製備葡甘露寡 糖粗糖液，並進行脫色、除雜、濃縮及乾燥，得到了純度高達90%以上的魔芋葡甘露寡糖。本 發明提供的製備魔芋葡甘露寡糖的方法，具有如下優點(1)採用高剪切乳化耦合超高壓均質處理對魔芋的物理結構具有較大的破壞作 用，所得魔芋粗粉的顆粒最小，因而使底物魔芋粗粉暴露出了更多的酶結合位點，同時在酶 解反應時也可以增加底物與酶的接觸面積和接觸機率，從而有利於酶解反應的進行。(2)該方法能夠適時移走生成產物可促進正反應進行，對於提高甘露聚糖酶的功 效和利用效率，最大程度的獲得目標葡甘露寡糖產物，具有極大的優越性。


圖1為實施例1製備所得產物的螢光輔助糖電泳圖譜。
圖2為實施例1製備所得產物的HPLC譜圖。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步說明，但本發明並不限於以下實施例。下述實施例中所述濃度，如無特別說明，均為質量百分濃度。下述實施例中所述檢 測方法，如無特別說明，均為常規檢測方法。下述實施例中所用內切型甘露聚糖酶均購自北 京博仕奧生物技術有限公司，產品規格為中性β-甘露聚糖酶，酶活為18-20萬U/g。其中， 中性β -甘露聚糖酶酶活定義如下在40°C、pH值為6. 0的測定條件下，Imin催化濃度為 5mg/mL的LBG底物(洋槐豆粉)水溶液生成1 μ g還原糖(以甘露糖表示)所需的酶量定 義為一個酶活力單位(U)，單位計為U/g。實施例11)將鮮魔芋洗淨，去皮，切塊，用榨汁機初步破碎，按魔芋與水的用量比為 Ikg IOOOkg的比例加入蒸餾水，用高剪切混合乳化機於8000r/min下剪切乳化3次，每次 IOmin,再用超高壓均質機先於200Mpa下均質一次，再於500Mpa下均質兩次，靜置，用濾布 濾去上層清液，將濾渣在80°C乾燥24小時，得到魔芋粗粉，目數為60目。2)稱取步驟1)製得的60目的魔芋粗粉100g，用水調製成濃度為2%的魔芋粗粉 的漿液，將該魔芋粗粉的漿液與酶活為19萬U/g的內切型甘露聚糖酶40g進行酶水解反 應，得到魔芋葡甘露寡糖的生成液，並不斷將所述魔芋葡甘露寡糖的生成液取出，該酶水解 反應中，溫度為40°C，工作壓力為0. 2MPa，反應4h後，進行第一次補料，補充的物料為所用 濃度為2%的魔芋粗粉的漿液，體積為此時收集的魔芋葡甘露寡糖的生成液的體積量。此後 每隔4h補料一次，待補料10次後，繼續反應4小時，停止反應，收集合併魔芋葡甘露寡糖的 生成液；3)將步驟2)收集到的魔芋葡甘露寡糖的生成液合併，加入該魔芋葡甘露寡糖的 生成液體積量0. 6 %的活性炭粉末，95 °C下脫色35min，過濾後，將糖液依次過D72型酸性陽 離子交換樹脂和D201 X7型鹼性陰離子交換樹脂後，水洗脫液合併在50°C進行濃縮，得到 質量百分濃度為70%的葡甘露寡糖溶液，再在140°C噴霧乾燥15分鐘，得到58g產物。該螢光輔助糖電泳的具體檢測條件如下取100 μ g樣品(步驟2)所得產物)，置於2ml離心管中，在旋轉真空離心濃縮 儀中於40°C下旋幹，加入5yL 0. 2M ANTS水溶液及5 μ L 1. OM NaBH3CN水溶液，混勻，於 12000r/min下離心2min，置於37°C數控超級恆溫槽中反應16h，再於旋轉真空離心濃縮 儀中40°C旋幹，將旋幹後的樣品溶於50 μ L由體積比為1 4的甘油和水組成的樣品處 理液中，以備使用。所述ANTS為8-氨基-1，3，6-三磺酸萘(8-aminonaphthalene-l,3, 6-trisulfonic acid,亦稱為8-氨基萘-1，3，6三磺酸或氨基卞三磺酸)。按照下述條件進行該樣品處理液的電泳檢測先在300V電壓下電泳lh，然後將電 壓提高至1000V繼續電泳，直至螢光前沿到達分離膠底部。整個電泳過程始終保持電泳槽 的溫度為5 7°C (採用循環水冷卻)。該電泳條件中，所用濃縮膠為質量百分濃度為3. 8%的濃縮膠，所用分離膠為質量 百分濃度為30%的分離膠。所用正極緩衝液為pH值為8.2的0. IM Tris-HCl0所用負極 緩衝液為 PH 值為 8. 5 的 0. 15M Tris-glycine。所用30%分離膠是按照如下方法製備而得將60%凝膠儲液A34mL，凝膠緩衝液 B17mL、重蒸水17mL和10%過硫酸銨水溶液116 μ L混合攪拌3min，再加入74 μ LTEMED (N，N, N' ,N'-四甲基乙二胺)，攪拌3min後而得。所用3. 8%濃縮膠是按照如下方法製備而得將60%凝膠儲液A 1. 26mL、凝膠 緩衝液B5. OOmL、重蒸水13. 6mL和10%過硫酸銨水溶液200 μ L混合攪拌3min，再加入 32 μ LTEMED,攪拌3min後而得。其中，製備30%分離膠和3. 8%濃縮膠中所用60%凝膠儲液A是按照如下方法制 備而得稱取丙烯醯胺300. OOg加入到80ml的蒸餾水中，蒸餾水事先加熱至70_80°C，繼續 加熱並不斷攪拌直至丙烯醯胺全部溶解。加入8. OOg甲叉丙烯醯胺(甲叉丙烯醯胺與水的 比例為1. 6g 100ml)水溶液直至其全部溶解，冷卻至室溫後定容至500ml容量瓶中，轉移 到棕色瓶中4°C冰箱中儲存備用。所用凝膠緩衝液B是按照如下方法製備而得用1. 5M Tris與1. 5M Tris-HCl混 合用PH計檢測pH值至8. 5為止。該步驟2)所得產物的螢光輔助糖電泳如圖1所示。其中，1為甘露糖標準樣品 (DPI)，2為甘露糖(DPI)及甘露寡糖(DP2 5)標準樣品(其中，DP2 5依次為葡甘露二 糖、葡甘露三糖、葡甘露四糖和葡甘露五糖)，3為步驟2)所得產物。由圖1可知，該步驟2)所得產物是以葡甘露二糖、葡甘露三糖、葡甘露四糖和葡甘 露五糖為主的葡甘露寡糖。此外，對步驟2)所得產物進行HPLC檢測，色譜檢測條件如下所示色譜系統Waters2695，色譜柱Waters Sugar-D (4. 61. D. X 250mm)色譜柱，檢 測器Waters 2414示差折光檢測器，流動相由乙腈和水以體積比70 30混合而得的混 合液，流速為0. 75mL/min，檢測溫度30. 0°C，進樣量=IOyL0所得HPLC檢測結果如圖2所示，其中，峰1-5依次為甘露糖、葡甘露二糖、葡甘露 三糖、葡甘露四糖和葡甘露五糖。由圖2可知，該步驟2)所得產物是以葡甘露二糖、葡甘露 三糖、葡甘露四糖和葡甘露五糖為主的葡甘露寡糖。按照滴定法測定步驟2)所得產物中的總糖含量，並按照圖2所示HPLC譜圖測定 該產物中甘露糖的含量，可知，步驟2)所得產物中，寡糖的總含量>91%。實施例21)鮮魔芋洗淨，去皮，切塊，用榨汁機初步破碎，按魔芋與水的用量比為 Ikg 600kg的比例加入蒸餾水，用高剪切混合乳化機於lOOOOr/min下剪切乳化2次，每次 5min,再用超高壓均質機先於160MPa下均質一次，再於650MPa下均質三次，靜置，用濾布濾 去上層清液，將濾渣在110°C乾燥10小時，得到魔芋粗粉，目數為80目。2)稱取步驟1)製得的80目的魔芋粗粉100g，用水調製成濃度為3. 5%的魔芋粗 粉的漿液，將該魔芋粗粉的漿液與酶活為20萬U/g的內切型甘露聚糖酶40g進行酶水解反 應，得到魔芋葡甘露寡糖的生成液，並不斷將所述魔芋葡甘露寡糖的生成液取出，該酶水解 反應中，溫度為40°C，工作壓力為0. 16MPa,反應3h後，進行第一次補料，補充的物料為所用 濃度為3. 5%的魔芋粗粉的漿液，體積為此時收集的魔芋葡甘露寡糖的生成液的體積量。此 後每隔3h補料一次，待補料15次後，繼續反應3小時，停止反應，收集合併魔芋葡甘露寡糖 的生成液；3)將步驟2)收集到的魔芋葡甘露寡糖的生成液合併，加入該魔芋葡甘露寡糖的生成液體積量0. 1 %的活性炭粉末，90°C下脫色40min，過濾後，將糖液依次過D72型酸性陽 離子交換樹脂和D201 X7型鹼性陰離子交換樹脂後，水洗脫液合併在60°C進行濃縮，得到 質量百分濃度為70%的葡甘露寡糖水溶液，再在160°C噴霧乾燥10分鐘，得到54g產物。將該產物用與實施例1完全相同的檢測條件進行螢光輔助糖電泳檢測，所得結果 與實施例1相同，該產物是以葡甘露二糖、葡甘露三糖、葡甘露四糖和葡甘露五糖為主的葡 甘露寡糖產品，寡糖的總含量> 90%。實施例31)鮮魔芋洗淨，去皮，切塊，用榨汁機初步破碎，按魔芋與水的用量比為 Ikg 1200kg的比例加入蒸餾水，用高剪切混合乳化機於6000r/min下剪切乳化5次，每次 15min,再用超高壓均質機先於250MPa下均質一次，再於450MPa下均質三次，靜置，用濾布 濾去上層清液，將濾渣在95°C乾燥20小時，得到魔芋粗粉，目數為40目。2)稱取步驟1)製得的40目的魔芋粗粉100g，用水調製成濃度為1. 5%的魔芋粗 粉的漿液，將該魔芋粗粉的漿液與酶活為20萬U/g的內切型甘露聚糖酶40g進行酶水解反 應，得到魔芋葡甘露寡糖的生成液，並不斷將所述魔芋葡甘露寡糖的生成液取出，該酶水解 反應中，溫度為35°C，工作壓力為0. 25MPa,反應6h後，進行第一次補料，補充的物料為所用 濃度為1. 5%的魔芋粗粉的漿液，體積為此時膜外收集的魔芋葡甘露寡糖的生成液的體積 量。此後每隔6h補料一次，待補料9次後，繼續反應6小時，停止反應，收集合併魔芋葡甘 露寡糖的生成液；3)將步驟2)收集到的魔芋葡甘露寡糖的生成液合併，加入該魔芋葡甘露寡糖的 生成液體積量0. 的活性炭粉末，110°C下脫色40min，過濾後，將糖液依次過D72型酸性 陽離子交換樹脂和D201 X7型鹼性陰離子交換樹脂後，水洗脫液合併在55°C進行濃縮，得 到質量百分濃度為65%的葡甘露寡糖水溶液，再在120°C噴霧乾燥30分鐘，得到50g產物。將該產物用與實施例1完全相同的檢測條件進行螢光輔助糖電泳檢測，所得結果 與實施例1相同，該產物是以葡甘露二糖、葡甘露三糖、葡甘露四糖和葡甘露五糖為主的葡 甘露寡糖產品，寡糖的總含量> 92%。實施例41)鮮魔芋洗淨，去皮，切塊，用榨汁機初步破碎，按魔芋與水的用量比為 Ikg 600kg的比例加入蒸餾水，用高剪切混合乳化機於lOOOOr/min下剪切乳化3次，每次 5min,再用超高壓均質機先於200Mpa下均質一次，再於500Mpa下均質兩次，靜置，用濾布濾 去上層清液，將濾渣在95°C乾燥20小時，得到魔芋粗粉，目數為60目。2)稱取步驟1)製得的60目的魔芋粗粉100g，用水調製成濃度為3. 5%的魔芋粗 粉的漿液，將該魔芋粗粉的漿液與酶活為18萬U/g的內切型甘露聚糖酶50g進行酶水解反 應，得到魔芋葡甘露寡糖的生成液，並不斷將所述魔芋葡甘露寡糖的生成液取出，該酶水解 反應中，溫度為45°C，工作壓力為0. 2MPa,反應4h後，進行第一次補料，補充的物料為所用 濃度為3. 5%的魔芋粗粉的漿液，體積為此時膜外收集的魔芋葡甘露寡糖的生成液的體積 量。此後每隔4h補料一次，待補料10次後，繼續反應4小時，停止反應，收集合併魔芋葡甘 露寡糖的生成液；3)將步驟2)收集到的魔芋葡甘露寡糖的生成液合併，加入該魔芋葡甘露寡糖的 生成液體積量1 %的活性炭粉末，100°c下脫色30min，過濾後，將糖液依次過D72型酸性陽離子交換樹脂和D201 X7型鹼性陰離子交換樹脂後，水洗脫液合併在60°C進行濃縮，得到 質量百分濃度為50%的葡甘露寡糖水溶液，再在150°C噴霧乾燥15分鐘，得到61g產物。
將該產物用與實施例1完全相同的檢測條件進行螢光輔助糖電泳檢測，所得結果 與實施例1相同，該產物是以葡甘露二糖、葡甘露三糖、葡甘露四糖和葡甘露五糖為主的葡 甘露寡糖產品，寡糖的總含量> 90%。
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權利要求
一種製備魔芋葡甘露寡糖的方法，包括如下步驟1)將魔芋與水混勻剪切乳化後，依次在壓力為160 250MPa和450 650MPa的條件下均質，乾燥後得到魔芋粗粉；2)將所述魔芋粗粉與水混勻得到魔芋粗粉的漿液，將所述魔芋粗粉的漿液與內切型甘露聚糖酶進行酶水解反應，得到魔芋葡甘露寡糖的生成液，並不斷將所述魔芋葡甘露寡糖的生成液取出，每反應3 6小時補充所述魔芋粗粉的漿液一次，所述補充的所述魔芋粗粉的漿液的體積數與所述取出的所述魔芋葡甘露寡糖的生成液的體積數相同，補料9 20次後，再反應3 6小時後停止反應，收集合併所述魔芋葡甘露寡糖的生成液，乾燥得到所述魔芋葡甘露寡糖。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述步驟1)中，所述魔芋與水的用量比 為Ikg 600kg-lkg 1200kg，優選Ikg 1000kg;所述魔芋粗粉的目數為40-80目，優選 60目；所述步驟2)中，所述內切型甘露聚糖酶為中性β-甘露聚糖酶。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特徵在於所述步驟2)中，所述魔芋粗粉的漿 液的質量百分濃度為1.5%-3.5%，優選2%，所述內切型甘露聚糖酶的酶活為18-20萬U/ g，優選19萬U/g。
4.根據權利要求1-3任一所述的方法，其特徵在於所述步驟1)中，所述剪切乳化步 驟中，剪切乳化速率為6000rpm-10000rpm，優選8000rpm，所述剪切乳化的次數為2_5次，優 選3次，所述每次剪切乳化的時間為5-15分鐘，優選10分鐘；所述在160-250Mpa的條件下 均質步驟中，均質的壓力為200MPa，均質的次數為1次，所述在450-650Mpa的條件下均質的 步驟中，均質的壓力為500MPa，均質的次數為2-3次；所述乾燥步驟中，溫度為80_110°C，優 選95 °C，時間為10-24小時，優選20小時。
5.根據權利要求1-4任一所述的方法，其特徵在於所述步驟2)所述酶水解反應中， 溫度為350C _45°C，優選40°C，時間為3-6小時，優選4小時，壓力為0. 16MPa_0. 25MPa，優 選0.2MPa;所述內切型甘露聚糖酶與所述魔芋粗粉的質量比為0.1-0. 6 1，優選0.4 1。
6.根據權利要求1-5任一所述的方法，其特徵在於在所述收集合併所述魔芋葡甘露 寡糖的生成液步驟之後，所述乾燥步驟之前，還進行如下處理將所述魔芋葡甘露寡糖的生成液進行如下處理將所述魔芋葡甘露寡糖的生成液依次 進行脫色、除雜和濃縮。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於所述脫色步驟中，所用脫色劑為活性 炭，所述活性炭為所述魔芋葡甘露寡糖的生成液的總體積的0. 1-1 %，優選0. 6 %，溫度為 900C -IlO0C,優選95°C，時間為30-40分鐘，優選35分鐘。
8.根據權利要求6或7所述的方法，其特徵在於所述除雜步驟中，除雜方式為依次用 酸性陽離子交換樹脂和鹼性陰離子交換樹脂進行除雜，所述酸性陽離子交換樹脂為D72型 酸性陽離子交換樹脂，所述鹼性陰離子交換樹脂為D201X7型鹼性陰離子交換樹脂，洗脫 液均為蒸餾水。
9.根據權利要求6-8任一所述的方法，其特徵在於所述濃縮步驟中，溫度為50-60°C， 所述濃縮後魔芋葡甘露寡糖溶液中所述魔芋葡甘露寡糖的質量百分濃度為50% -70%，優 選 65%。
10.根據權利要求1-9任一所述的方法，其特徵在於所述步驟2)乾燥步驟中，乾燥方 式為噴霧乾燥，溫度為120-160°C，優選140°C，時間為10-30分鐘，優選15分鐘。
全文摘要
本發明公開了一種製備魔芋葡甘露寡糖的方法。1)將魔芋與水混勻剪切乳化後，依次在壓力為160-250MPa和450-650MPa的條件下均質，乾燥後得到魔芋粗粉；2)將魔芋粗粉的漿液與內切型甘露聚糖酶進行酶水解反應，得到魔芋葡甘露寡糖的生成液，並不斷將所述魔芋葡甘露寡糖的生成液取出，每反應3-6小時補充所述魔芋粗粉的漿液一次，補料9-20次後，再反應3-6小時後停止反應，收集合併所述魔芋葡甘露寡糖的生成液，乾燥得到所述魔芋葡甘露寡糖。該方法能夠提高甘露聚糖酶的功效和利用效率，最大程度的獲得目標葡甘露寡糖產物，純度達90％以上。
文檔編號C12P19/14GK101914597SQ20101023780
公開日2010年12月15日 申請日期2010年7月27日 優先權日2010年7月27日
發明者姚喜梅, 梁平, 王紹雲, 石波 申請人:中國農業科學院飼料研究所