一種含有克林黴素的複方凝膠劑的製作方法

2023-05-21 16:51:11 3

專利名稱：：一種含有克林黴素的複方凝膠劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種含有克林黴素或其可藥用鹽或酯的複方凝膠劑，具體涉及含有克林黴素或其可藥用鹽或酯、維A酸和含纖維素類衍生物的凝膠劑基質的複方凝膠劑及其製備方法和分析檢測方法。
背景技術：
：-痤瘡是一種常見的疾病，90%以上的青少年都患有痤瘡；甚至在40歲左右大約還有5%的女性和1%的男性都患有此病。痤瘡好發於人們的面部，不但給患者的身體帶來痛苦，還影響患者外貌，從而給患者帶來精神壓力。所以治療痤瘡的藥物市場前景良好，估計市場規模為5億一20億美元。目前痤瘡藥物品種繁多，市場競爭也越來越激烈，因此，研製具有更有特點的新藥有著重要的意義。痤疫的發病原因很多，一般認為其主要因素有二一是青春期雄性激素分泌增多，引起皮脂腺腫大，皮脂腺分泌增多，同時使毛囊、皮脂腺導管角化栓塞，皮脂淤積於毛囊形成脂栓，即粉刺。二是在厭氧環境下，痤瘡丙酸桿菌等厭氧菌大量增生繁殖，產生溶脂酶，分解皮脂產生游離酸，刺激毛囊引起炎症；致使毛囊壁損傷破裂，淤積的皮脂進入真皮內，從而引起毛囊周圍程度不等的炎症反應。目前用於治療痤瘡的藥物主要就是針對以上兩種發病機理的一類是維A酸類化合物，如維A酸、異維A酸等。異維A酸(Isotretinoin)是維A酸(Tretinoin)的異構體，是眾多維A酸類化合物中療效高、耐受性好的治療痤瘡的藥物。近年來，異維A酸已被國內外皮膚科醫生廣泛用於臨床治療各種皮膚病，如痤瘡、酒糟鼻、皮脂溢出症、脂溢性皮炎等。異維A酸具有抑制角化細胞增生、防止角質栓塞，抑制皮質腺分泌及皮脂生成、抑制蛋白產生，使痤瘡皮損消退等作用，對治療痤瘡有顯著療效，特別是用於重型痤瘡，已經成為治療重型痤瘡的首選藥物，被收載入2005版中國藥典。異維A酸可以口服給藥，也可以局部給藥。由於維A酸類似物有一定胚胎毒性和致畸作用，使得口服異維A酸類藥物的應用受到限制。局部用維A酸類似物低濃度時即具有治療作用，具有較高的皮膚濃度，向系統擴散，系統負載量低或難以測出；局部使用用維A酸類藥物的藥代動力學明顯優於口服維甲酸，它們能定向作用於耙位，系統毒性大為降低。英國施泰福藥廠(Stiefel)生產的含異維A酸為0.05X的愛素思凝膠(lS0TREXGel)已有上市，適應症為局部尋常性粉剌的治療。在大鼠身上進行的生殖試驗結果顯示局部應用量為人的60倍的愛素思凝膠(0.05X的異維A酸凝膠)時，對鼠胎沒有任何損害。另一類常用於痤瘡的藥物是抗生素類藥，如紅黴素、克林黴素、甲硝唑、氯黴素、氯潔黴素等等，其主要機理為殺滅導致局部炎症的痤瘡丙酸桿菌。痤瘡的發生與多種因素有關。當雄激素分泌過度，刺激皮脂分泌增加，助長了細菌的繁殖。細菌(主要是痤瘡棒狀桿菌)在脂酶的作用下，可產生較多的游離脂肪酸，使毛囊及毛囊周圍發生炎症反應，進而刺激毛囊角化，阻塞毛囊管引起炎症而形成痤瘡。克林黴素磷酸酯通過對細菌蛋白質早期合成的抑制作用，抑制了痤瘡棒狀桿菌，消除了炎症，從而達到治療痤瘡的目的。克林黴素是一種常見的抗生素，主要的鹽和衍生物為鹽酸克林黴素、磷酸克林黴素、克林黴素磷酸酯等。克林黴素磷酸酯為脂溶性及滲透性比克林黴素單體好，可水解成克林黴素發揮抗菌作用，尤對痤瘡丙酸桿菌具有較好的抗菌活性。維A酸(Tretinoin)又稱維甲酸，它可抑制表皮細胞角化過度、細胞增殖，具有抗腫瘤的作用；還能抑制皮脂腺分泌，減少或清除皮膚表面與痤瘡有關的致病菌，以減少痤瘡的炎症反應；可抗皮膚老化，使皮膚柔嫩，皺紋減少，減退過度沉著的色素；可抑制表皮增生，調節免疫功能。用於治療痤瘡、黃褐斑、銀屑病、角化異常性皮膚病、光老化性皮膚病、皮膚腫瘤等疾病。維A酸系體內維生素A(維甲醇)的代謝中間產物，作用機理在於主要影響骨的生長和上皮代謝，可能具有促進上皮細胞增生分化、角質溶解等作用，由於橋粒細胞(細胞間橋小體)脫落、張力絲降低、角化細胞fl體溶解增加和糖原的細胞內沉澱而使囊狀角質細胞不易粘著。1986年首次報導了本品可治療光照損傷性皮膚病，並進一步為臨床學和組織學兩方面試驗所證實。適用於尋常性痤瘡、扁平苔蘚(包括口腔扁平苔蘚)、白斑、毛髮紅糠疹和面部單純糠疹等。亦可用於治療多發性尋常疣以及角化異常類的各種皮膚病如魚鱗病、毛囊角化症等。本品常作為外用製劑。其主要作用為降低導致微小粉剌形成的角化(即痤瘡的最初損害)。綜上所述，採用和維A酸類藥物製成的複方製劑，綜合兩類藥物的作用機理，用於治療伴有局部感染的座瘡，具有明顯的效果。克林黴素抗生素或其可藥用鹽或酯和維A酸的重量比在]:0.1-0.001(W/W)之間(以克林黴素單體計)。凝膠劑係指藥物與能形成凝膠的輔料製成均一、混懸或乳狀液型的稠厚液體或半固體製劑。凝膠劑限局部用於皮膚及體腔如鼻腔、陰道和直腸。乳狀液型凝膠劑又稱乳膠劑。由天然高分子基質如西黃蓍膠製成的凝膠劑，也可稱為膠漿齊'j。小分子無機藥物(如氫氧化鋁)凝膠劑是由分散系統的藥物膠體小粒子以網狀結構存在於液體中，屬兩相分散系統，也稱混懸型凝膠劑。混懸型凝膠劑可有觸變性，靜止時形成半固體而攪拌或振搖時成為液體。凝膠劑基質屬單相分散系統，有水性與油性之分。水性凝膠基質一般由水、甘油或丙二醇與纖維素衍生物、卡波姆和海藻酸鹽、西黃蓍膠、明膠、澱粉等構成；油性凝膠基質由液狀石蠟與聚乙烯或脂肪油與膠體矽或鋁皂、鋅皂構成。因臨床應用較多的是以水性凝膠為基質的凝膠劑，故一般提及凝膠均是水凝膠劑。製備凝膠選用的基質和輔料在本領域一般是已知的，典型實例包括卡波姆、泊洛沙姆、纖維素衍生物，另外還包括抗氧劑如二丁基羥基甲苯，輔助抗氧劑檸檬酸和抑菌防腐劑等。專利W02006089070公開了一種含有克林黴素磷酸酯和維甲酸痤瘡的複方凝膠的製備方法，將含有卡泊姆、丙二醇和水作為第一相，將含有維A酸、聚乙二醇單十二醚、尼泊金甲酯等的混合物作為第二相，將含有克林黴素磷酸酯和枸櫞酸、氨基丁三醇的水溶液作為第三相，將第二相加入到第一相中得到混合物，再將第三相加入混合物中，置於真空中攪拌，冷卻，此過程需要通氮氣保護，以排除氧氣。WO03092621公開了一種用於治療痤瘡和其他一些皮膚病的脂質體，該脂質體含有克林黴素磷酸酯和維甲酸，發明的內容是將維甲酸類藥物分散於脂質相中後在分散於分散含有抗生素克林黴素磷酸酯凝膠相中，其凝膠基質為卡泊姆。該方法製備方案較煩瑣，步驟長達15步，且由於用到C18C20的長鏈脂肪族化合物，其在水相中的穩定性欠佳，且並不屬於凝膠體系。CN1217913,公開了維甲酸與鹽酸氯林可黴素(即鹽酸克林黴素)的軟膏製劑，使用了氮酮作為表皮促滲劑，採用用了長鏈脂肪族化合物為基質。CN200610038624本發明公開了一種由卡波姆，甘油，丙二醇，吐溫，三乙醇胺，克林黴素磷酸酯(按克林黴素計)，維甲酸，EDTA及蒸餾水等原料製成的凝膠劑，其製備方法是將卡波姆撒於適量蒸餾水中加入甘油、丙二醇少量，充分溶脹，先加三乙醇銨少量攪拌使成透明凝膠基質；取克林黴素磷酸酯用水溶解，維甲酸用丙二醇、吐溫溶解；將上述藥液依次加入到基質中，慢加快攪，加EDTA、丙二醇、補足蒸餾水至1000g，繼續攪勻，得淡黃色透明的複方維甲酸凝膠劑。由於採用了卡波姆、甘油、丙二醇、三乙醇胺、吐溫等輔料，通過實驗發現，由這些輔料組成的基質會對克林黴素的檢測產生幹擾，從而不能對凝膠的質量進行有效的控制和評價。而且輔料應用種類較多，步驟較複雜煩瑣，因卡泊姆需要較長時間溶脹，因此生產過程耗時太長，成本增高。EP0479518公開了一種治療痤瘡的複方維甲酸凝膠製劑和製備方法，其製備方法是將先將克林黴素磷酸酯溶於水、丙二醇和一定量工業級甲醇中，然後卡波姆撒入，使之溶脹完全，製得水性膠體。將維甲酸和沒食子酸丙酯溶於剩餘的工業級甲醇中，加入乙二胺，溶解後製得醇溶液。將醇溶液緩慢加入到水性膠體中，製得凝膠。該發明同樣使用了卡波姆等輔料為凝膠基質，因此生產過程耗時太長，而且還使用了藥品和化妝品中禁止使用的工業級甲醇。上面幾個專利提及的凝膠的基質和製備方法均不完善。它們或有質量分析問題，或製備方法煩瑣，或含有有毒有害物質，本發明人在研究治療痤瘡的含有克林黴素或其可藥用鹽或酯的複方凝膠劑時，意外的發現釆用纖維素衍生物作為凝膠基質，採用在乙醇中分散製備的方法解決了上述缺陷。由於克林黴素及其可藥用鹽或酯是從微生物發酵液中提取製得的，所以雜質很複雜，若製備凝膠劑所選用的高分子物質不當，尤其是卡波姆會遇到測定幹擾的問題。而且，由於克林黴素及其可藥用鹽或酯是水溶性較強的物質，而維a酸卻不溶於水，在檢測時必須採用不同的條件，這也增加了凝膠檢測的難度。高分子材料還會因為其較黏稠的性質，造成凝膠分散不均、堵塞分析用色譜柱等問題。目前未發現解決這些問題的方法，本發明採用了一種特別的檢測方法可解決這些問題。
發明內容本發明的目的之一提供了一種含有克林黴素或其可藥用鹽或酯的複方凝膠劑，該凝膠劑包含有效量的克林黴素或其可藥用鹽或酯、維a酸和凝膠基質，其特徵在於凝膠基質為纖維素類衍生物。所述的克林黴素或其可藥用鹽或酯包括以下物質中的至少一種克林黴素、磷酸克林黴素、鹽酸克林黴素、克林黴素磷酸酯，優選克林黴素磷酸酯。克林黴素抗生素或其可藥用鹽或酯和維a酸的重量比在i:o.l-o.ooi之間，優選i:o.05-o.oi(w/w，以克林黴素單體計)。上述本發明的凝膠劑，所述的纖維素類衍生物包括以下物質中的至少一種甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥乙基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素，優選甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥乙基甲基纖維或乙基纖維素，其用量根據粘度的不同，纖維素類衍生物高分子材料在凝膠劑中的用量可在0.5%-50%(w/w)，優選1.0%-20%(w/w)之間。上述本發明的凝膠劑還包括抗氧劑和溶劑，所說的抗氧劑包括脂溶性抗氧劑和水溶性抗氧劑，脂溶性抗氧劑包括二丁基羥基甲苯及其衍生物、叔丁基對羥基茴香醚及其衍生物、生育酚及其衍生物，如醋酸生育酚、沒食子酸或沒食子酸衍生物，如沒食子酸乙酯、丙酯，優選二丁基羥基甲苯或叔丁基對羥基茴香醚，水溶性抗氧劑包括但不限於亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鉀、維生素c、半胱氨酸、甘氨酸、穀胱甘肽、硫代甘油、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、枸櫞酸、枸櫞酸鈉、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸鈉，優選枸櫞酸或其鈉±卜血。所說的溶劑為醇和水，醇選自下列物質中的至少一種乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇、異丙醇、丁醇、聚乙二醇200和聚乙二醇400，優選乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇或聚乙二醇400。本發明的凝膠劑克服了卡波姆凝膠基質對克林黴素測定的幹擾、有利於產品的檢測和質量控制，同時製備更簡單、成本低、更適合工業化生產。本發明的另一目的是提供了一種製備含有克林黴素或其可藥用鹽或酯的複方凝膠劑的方法，該方法以下過程(a)將纖維素類衍生物高分子材料加入到溶有維A酸、脂溶性抗氧劑的醇中，攪拌使之分散，得到混懸液；(b)將克林黴素磷酸酯、水溶性抗氧劑或/和輔助性抗氧劑溶於水，得到水溶液；(c)將(b)步驟的水溶液緩慢加入(a)歩驟的混懸液中，邊加邊攪拌，製得凝膠。t述製備方法和目前已知的製備方法相比，製備過程明顯簡化，且不含工業甲醇等有害物質。由於是將纖維素類衍生物高分子材料先加入到醇中攪拌分散，形成纖維素類衍生物高分子微小顆粒，再加入水溶液溶脹，所以溶脹過程明顯縮短，起到了節約製備時間的效果。上述的製備方法尤其適用於本發明的凝膠劑的製備。纖維素類衍生物高分子材料可以避免用卡波姆所遇到的克林黴素磷酸酯、維A酸測定幹擾的問題，影響產品質量的控制。其原理在於一是纖維素類衍生物高分子材料在液相色譜中保留時間適中，離克林黴素磷酸酯、維A酸的主藥峰較遠，可以避開大多數的雜質。而卡波姆在3分鐘到5分鐘會有色譜峰，在20分鐘左右還會出峰，前者會對克林黴素的雜質檢測產生幹擾，後者會對克林黴素主藥產生幹擾，造成的幹擾問題並不能通過簡單的改變色譜流動相體系的方法來解決問題；二是可以通過沉澱纖維素類衍生物高分子的方法來除去纖維素類衍生物高分子，從而降低幹擾。根據粘度的不同，纖維素類衍生物高分子材料在凝膠劑中的用量可在O.5%-50%(W/W)，優選1.0%-20%(W/W)之間。上述本發明的製備方法，脂溶性抗氧劑包括二丁基羥基甲苯及其衍生物、叔丁基對羥基茴香醚及其衍生物、生育酚及其衍生物，如醋酸生育酚、沒食子酸或沒食子酸衍生物，如沒食子酸乙酯、丙酯，優選二丁基羥基甲苯或叔丁基對羥基茴香醚，水溶性抗氧劑包括但不限於亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鉀、維生素C、半胱氨酸、甘氨酸、穀胱甘肽、硫代甘油、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、枸櫞酸、枸櫞酸鈉、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸鈉，優選枸櫞酸或其鈉鹽。上述本發明的製備方法，所說的醇選自下列物質中的至少一種乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇、異丙醇、丁醇、聚乙二醇200和聚乙二醇400，優選乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇或聚乙二醇400。所述的醇的用量在10%—50%(W/W)，優選25-35%(W/W)。本發明的再一目的提供了一種含有克林黴素或其可藥用鹽或酯的複方凝膠劑的檢測方法，其特徵在於先在凝膠中加入一種足以使纖維素類衍生物沉澱的試劑，待纖維素類衍生物沉澱後再使用高效液相色譜法檢測。這裡所說複方凝膠劑主要是指本發明的凝膠劑，即其特徵在於凝膠基質為纖維素類衍生物的含有克林黴素或其可藥用鹽或酯的複方凝膠劑。上述本發明的檢測方法，其中，所說的足以使纖維素類衍生物沉澱的試劑選自以下物質中的至少一種加酸、加鹼、加有機試劑、加鹽、加重金屬離子，優選加硫酸鎂、氯化汞、硼酸氯化鉀緩衝液或它們的混合物；其中，所述的高效液相色譜法，其特徵在於檢測克林黴素磷酸酯時，在進樣後的最初至少15分鐘內，水相佔流動相的比例不得低於80%(V/V)，其中所述的水相含有磷酸鹽的緩衝液。本發明的製備方法還可以適用於其它各類活性組分的凝膠劑的製備，如任何已知的細胞生長抑制劑、軟化角蛋白劑、抗生素和抗微生物劑、非甾體抗炎藥、局部麻醉藥、皮質甾體類藥、皮膚治療藥等。細胞生長抑制劑包括烷基化劑、酶抑制劑、增生抑制劑、DNA合成抑制劑、溶解劑、DNA嵌入劑、代謝拮抗劑等等。作為例證的試劑包括類固醇、紫衫醇、伊屋諾黴素(ionomycin)、鬼臼乙又甙、亞硝基脲例如亞稍脲氮芥(BCNU)、柔紅黴素(c)aunoxubicin)、放線菌素D、meclorethamine、白消安、CCNU、Me-CCNU、苯丁酸氮芥、放線菌素C(cactinomycin)、嗜癌素、6-氯嘌啉、硫嘌啉、氟尿嘧啶、羥基脲、thioquanine、campothecin、絲裂黴素、環己亞硝脈(CCNU)、甲基環己亞硝脈(Me-CCNU)、斑鰲素、喜樹鹼、卡鉑、蓖麻毒、假單胞菌屬外毒素、幹擾素、白細胞介素、腫瘤壞死因子、長春花新鹼、米託坦美法侖、methchlorethamine、普卡黴素、二胺硝口丫啶、氨甲喋吟、諾加黴素、鏈黑菌素、鏈脲黴素、替加氟、吡咯垸甲基四環素(tetramin)，睪內酯脫羰秋水仙鹼和放線菌素。可使用的其它化合物包括環孢菌素、安口丫啶、卡莫司他甲磺酸鹽、喜樹鹼、依諾他濱、鬼臼乙叉甙、柔紅黴素、表柔比星鹽酸鹽、氟達拉濱、氟他胺、福莫司汀、去甲氧柔紅黴素鹽酸鹽、伊屋諾黴素、米託蒽醌鹽酸鹽、尼魯米特、紫衫醇、枸櫞酸託瑞米芬、長春瑞濱。合適的軟化角蛋白劑包括水楊酸，水楊酸的衍生物，例如5—辛醯水楊酸；類視黃醇，例如維生素A酸和它們的衍生物(例如，順式和反式)、維生素A醇、維生素A醛、乙酸視黃醛、棕擱酸視黃醛或其混合物；水楊酸和其衍生物;含硫的胺基酸與其衍生物和鹽；含硫的D和L胺基酸與其衍生物和鹽，具體地說N—乙酸基衍生物，例如N—乙醯基一L一半胱氨酸、硫辛酸、硫醇、羥基乙酸。抗生素和抗微生物劑例如過氧化苯甲醯、壬二酸、苯氧基乙醇、苯氧基丙醇、苯氧基異丙醇、四環素、青黴素、頭黴素、克林黴素、紅黴素、兩性黴素、環吡酮胺、聯苯苄唑、莫匹羅星、制黴菌素、灰黃黴素、克黴唑、咪康唑、酮康唑、益康唑、氟康唑、特比萘芬、阿巴芬淨、甲硝唑、替硝唑、青蒿素、青蒿琥酯、二氫青蒿素、類黃酮、蒽醌類、萜類的鹽和其衍生物。在本發明中可使用的非甾體抗炎藥的例子包括水楊酸類衍生物、苯胺類衍生物、芳基丙酸類衍生物、吲哚類衍生物、滅酸類衍生物、雜環芳基乙酸類衍生物、昔康類化合物，包括乙醯水楊酸、水楊酸鈉、對乙醯氨基酚、布洛芬、萘普生、非諾洛芬、芬布芬、酮洛芬、吲哚洛芬、吡咯洛芬、卡洛芬、奧沙普秦、普拉洛芬、硫嗯洛芬、舒洛芬、阿明洛芬、泰普芬酸、氟洛芬、布氯酸、吲哚美辛、舒林酸、依託度酸、甲芬那酸、甲氯芬那酸、託美汀、雙氯芬酸、氧昔康、吡羅昔康、替諾昔康、保泰松、萘丁美酮。在本發明中可使用的局部麻醉藥的例子包括苯佐卡因、利多卡因、丁哌卡因、氯普魯卡因、依替卡因、卡波卡因、丁卡因、達克羅寧、海克卡因、普魯卡因、古柯鹼、氯胺酮、普拉莫星、羅哌卡因，和其可藥用鹽。在本發明局部用製劑中可使用的皮質甾體類包括滷化皮質甾類通常是已知的，且有市售。例子包括可的松，氫化可的松和其衍生物包括去氧可的松，醋酸氟氫可的松，氟氫縮松丙酮化合物，甲羥孕酮；強的松，氫化潑尼松和其衍生物包括安西法爾，倍他米松的苯甲酸酯、戊酸酯和二丙酸酯，氯強的松乙酸酯，地西龍(descinalone)丙酮化合物，環索奈德，地塞米松，二氯松乙酸酯，地氟孕甾丁酯，氟氯奈德，二氟美松，氟尼縮松乙酸酯，氟輕鬆，氟輕鬆醋酸酯，氟可龍，氟甲脫氧潑尼松龍，氟潑尼松龍戊酸酯，甲潑尼松，甲基脫氫皮質甾醇，潑拉米松乙酸酯，氫化潑尼松的乙酸酯、丁基乙酸醋和磷酸酯鈉鹽，氟羥脫氫皮醇丙酮化合物，己曲安奈德，雙乙酸鹽或酯，氫化可的松丁酸酯，二氟美松特戊酸鹽，halcininide和丙酸氯氟美松。在本發明中可使用的皮膚治療藥的例子包括卡泊三醇、克羅米通、雷瑣辛、尿囊素、甲氧沙林、煤焦油。本發明的凝膠劑所用的凝膠基質為纖維素衍生物，包括但不限於甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥乙基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素中的至少一種，將纖維素衍生物在攪拌的情況下，以小微粒的形式較均勻的分散在無水乙醇中，在加入水後，溶脹成均勻的凝膠。本發明的實施例方案分別以羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥乙基甲基纖維素為凝膠基質。本發明的凝膠，在其製備過程中，本發明人發現醇的用量較為重要，因為克林黴素磷酸酯為半合成抗生素，本身雜質較多，為了儘可能減低輔料對其檢測的幹擾，就要求所用輔料數量較少，如果加入抑菌劑如尼泊金類，會對分析造成幹擾，所以，醇在此處一方面做溶解、分散維A酸和纖維素衍生物的基質，另一方面則用作抑菌劑。醇的含量的選擇較重要，醇含量低於10%(W/W)抑菌效果不理想，高於50%(W/W)則由於系統親水性改變，凝膠不能成型，因此，醇的含量為20%-50%(W/W)較合適，優選25-35%，更優選30%(W/W)。本發明的凝膠劑或製備方法，還包括脂溶性抗氧劑/輔助抗氧劑和水溶性抗氧劑/輔助抗氧劑。本發明所述的脂溶性抗氧劑包括二丁基羥基甲苯及其衍生物、叔丁基對羥基茴香醚及其衍生物、生育酚及其衍生物，如醋酸生育酚、沒食子酸、沒食子酸衍生物，如沒食子酸乙酯、丙酯。優選二丁基羥基甲苯和叔丁基對羥基茴香醚，主要由於二丁基羥基甲苯和叔丁基對羥基茴香醚抗氧化能力適中，且對分析測定無幹擾。本發明所述的水溶性抗氧劑或/和輔助性抗氧劑包括亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鉀、維生素C、半胱氨酸、甘氨酸、穀胱甘肽、硫代甘油、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、枸櫞酸、枸櫞酸鈉、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸鈉。本發明的實施方案中，優選的抗氧劑為二叔丁羥基甲苯酚(BHT)和枸櫞酸。本發明的凝膠劑還包括在不影響檢測的條件下可以加入一些賦形劑；如香料，例如薄荷醇；遮光劑例如氧化鋅，矽酸鋁鎂和二氧化鈦；軟化劑；著色劑；滲透增強劑等等。滲透增強劑可將其解釋為一種提高皮膚對於一或多種活性劑的滲透性以便可以經皮施用藥物活性劑的物質。用於提高皮膚滲透性的各種化合物在本領域是已知的。例如，二甲亞碸(DMS0)，二甲基甲醚胺(DMF)和N，N—二甲基乙酸胺(DMA)，癸基甲基亞礬，肉豆蔻酸異丙酯、油酸、聚乙二醇單月桂酸醋和l一取代的氮雜環庚烷一2酮。本發明還提及了本發明的凝膠劑的製備方法，所說的凝膠劑包含有效量的克林黴素或其可藥用鹽或酯、維A酸、包括纖維素類衍生物的凝膠基質、抗氧劑、醇和水，該製備方法包括以下過程(a)將纖維素類衍生物加入到溶有維A酸、脂溶性抗氧劑的醇中，攪拌使之分散，得到混懸液；(b)將克林黴素磷酸酯、水溶性抗氧劑或/和輔助性抗氧劑溶於水，得到水溶液；(c)將步驟(b)的水溶液緩慢加入步驟(a)的混懸液中，邊加邊攪拌，製得凝膠。本發明所述的方法與現有方法得到的凝膠劑相比，優點在於製備方法簡單、易於工業化生產，克服了凝膠基質需要長時間溶脹的缺點。步驟(c)中所述的"緩慢加入"，並沒有特別的限定，只要不因(b)的加入導致液體濺出即可。上述本發明的製備方法，脂溶性抗氧劑包括二丁基羥基甲苯及其衍生物、叔丁基對羥基茴香醚及其衍生物、生育酚及其衍生物，如醋酸生育酚、沒食子酸或沒食子酸衍生物，如沒食子酸乙酯、丙酯，優選二丁基羥基甲苯或叔丁基對羥基茴香醚，水溶性抗氧劑包括但不限於亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鉀、維生素C、半胱氨酸、甘氨酸、穀胱甘肽、硫代甘油、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、枸櫞酸、枸櫞酸鈉、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸鈉，優選枸櫞酸或其鈉鹽。上述本發明的製備方法，所說的醇選自下列物質中的至少一種乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇、異丙醇、丁醇、聚乙二醇200和聚乙二醇400，優選乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇或聚乙二醇400。所述的醇的用量在10%—50%(W/W)，優選25-35%(W/W)。本發明還涉及含有克林黴素磷酸酯和維A酸的凝膠劑的檢測方法，採用帶紫外檢測器的高效液檢測，流動相為水相-有機相混合體系。水相為含有磷酸鹽的緩衝液，可以從磷酸鈉、磷酸鉀、磷酸氫鈉、磷酸氫鉀、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀等試劑中選擇，有機相可從乙腈、甲醇、乙醇、四氫呋喃等試劑中選擇。克林黴素或其可藥用鹽或酯是天然抗生素或是半合成抗生素，成分複雜，在採用了纖維素衍生物為凝膠基質後，會極大減少基質對克林黴素或其可藥用鹽或酯檢測的幹擾。在實驗中，本發明人發現只要適當對流動相進行調整就可以完全消除幹擾的影響，本發明中的克林黴素磷酸酯和維A酸分別為水溶性和脂溶性成分，紫外吸收波長分別為210mii和356nm差距較大，且每克中兩組分含量差距也較遠，用同一系統雙波長梯度洗脫不能達到有效分離，不能準確的對本品中克林黴素磷酸酯及維A酸的含量及有關物質進行測定，所以採用不同的樣品處理方法及色譜條件對本品進行測定。由於凝膠基質的選取和流動相調整之間的關係並不為本專業一般技術人員所能推測，而需要通過大量實驗才能確定。克林黴素磷酸酯測定的方法一克林黴素磷酸酯根據部頒試行標準(WS1-(X-020)-2003Z)中對克林黴素磷酸酯有關物質的檢測方法對其進行檢測，將樣品溶液注入液相色譜儀器，採用以下(表l)梯度洗脫。表1時間(分鐘)0.005mol/LKH2P04緩衝液乙腈077.522.54077.522.54320805320805677.522.56077.522.5結論對比空白輔料、克林黴素原料藥及樣品溶液的色譜圖，可見採用此配比不能將樣品溶液中的克林黴素磷酸酯雜質與輔料完全分離。克林黴素磷酸酯測定的方法二採用以下(表2)梯度洗脫，在方法一的基礎上增加緩衝液起始百分比，使克林黴素磷酸酯的雜質峰出峰時間延長。表2tableseeoriginaldocumentpage13結論對比空白輔料及樣品溶液色譜圖，可見樣品溶液中的雜質與輔料完全分離，考慮主峰出峰過晚(23.295min)，有關物質檢測時間將延長，故作進一步調整比例。克林黴素磷酸酯測定的方法四在方法三的基礎上進行配比調整，採用以下(表4)梯度洗脫.表4tableseeoriginaldocumentpage14結論樣品溶液中雜質峰與輔料峰完全分離，克林黴素磷酸酯主峰於17.780min洗脫，考察了空白輔料及克林黴素磷酸酯陰性對照在此色譜系統下的色譜圖，均不幹擾測定，並進行了方法學研究，確定了此色譜條件對本品中克林黴素磷酸酯有關物質的測定方法是可行的。綜上所述，在用高效液相檢測克林黴素磷酸酯時，在進樣後的最初至少15分鐘內，水相不得低於80%(V/V)。在一個實施方案中，凝膠的檢測採用了以下方案-克林黴素磷酸酯的檢測取製備的凝膠適量，加適量O.005mol/LKH2P04緩衝液，振搖使分散、稀釋，並離心，取上清液作為供試品溶液。AgilentllOO型高效液相，檢測波長210nm,色譜柱為ZorbaxC8(250mmX4.6mm，5nm)，流動相流速為1.Oml/min，進樣量50ul，以下列梯度洗脫tableseeoriginaldocumentpage14樣品溶液中克林黴素磷酸酯的雜質峰與輔料峰完全分離，克林黴素磷酸酯於18分鐘左右洗脫，考察了空白輔料及克林黴素磷酸酯陰性對照在此色譜系統下的色譜圖，均不幹擾測定，並進行了方法學研究，確定了此色譜條件對本品中克林黴素磷酸酯有關物質的測定方法是可行的。凝膠基質為高分子化合物，易堵塞色譜柱，本發明人在查閱相關資料時，未發現有對其樣品處理的相關記載。維A酸為脂溶性成分，在凝膠劑中，維A酸分子或/和晶體、顆粒被親水性高分子材料分子包圍、纏裹，在這種情況下，不能像處理克林黴素磷酸酯那樣直接用流動相稀釋分散，必須先將凝膠分散、親水高分子沉澱後才能用合適的溶劑將維A酸較完全的提取出來。凝膠分散的化學實質在於剝奪親水性高分子結合的水使其溶解度減小，從而沉澱、變性，方法有加熱、加酸、加鹼、加有機試劑、加鹽、加重金屬離子等。由於親水性高分子材料和水分子結合緊密，所以單純的加熱和加酸、加鹼對親水性高分子材料的變性作用不大。有機試劑包含烷烴類及其衍生物、芳烴類及其衍生物、雜環類及其衍生物、醇類及其衍生物等。常用的鹽類包括鈉鹽、鉀鹽、硫酸鹽、鹽酸鹽、溴鹽、硼酸鹽等。常用的重金屬離子包括銅離子、鉛離子、鋅離子、鐵離子、鈷離子、錳離子、鎘離子、汞離子、鶴離子、銀離子等。-般將加入有機試劑、加入鹽類、加入重金屬離子、加酸、加鹼這幾種方法中的兩種或多種相結合使用。令人驚奇的是採用加硫酸鎂、氯化汞、和/或硼酸氯化鉀緩衝液等方法對凝膠基質沉澱完全，且對克林黴素或其可藥用鹽或酯和維A酸含量和測定無影響。維A酸處理提取方法一避光操作，取凝膠適量(約相當於維A酸0.25mg)，精密稱定，置50ml具塞磨口錐形瓶中，加2ml氯仿，振搖使凝膠分散，加甲醇分次洗滌至25ml容量瓶中。結論試驗中發現，加入甲醇後樣品成團，故維A酸不能完全提取。此法不能用於樣品溶液的配製。維A酸處理提取方法二避光操作，取凝膠適量(約相當於維A酸0.25mg)，精密稱定，置50ml具塞磨口錐形瓶中，加5。/。的硫酸鎂溶液2ml，振搖使凝膠分散，加約15ml甲醇分次洗滌至25ml容量瓶中，搖勻，超聲5分鐘後加甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。取供試品溶液20yl注入色譜系統，記錄色譜圖。結論考察了空白輔料及維A酸陰性對照採用此樣品溶液處理方法所得圖譜，發現輔料有一定程度的降解，但均不幹擾測定，並按維A酸處方量的80%、100%、120%進行了含量回收試驗及相關方法學研究，確定了此樣品處理方法在此色譜條件對維A酸有關物質的測定方法是可行的。維A酸處理提取方法三避光操作，取凝膠適量(約相當於維A酸0.25mg)，精密稱定，置50ml具塞磨口錐形瓶中，加飽和氯化汞溶液2ml，振搖使凝膠分散，加約15ml甲醇分次洗滌至25ml容量瓶中，搖勻，超聲5分鐘後加甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。取供試品溶液20yl注入色譜系統，記錄色譜圖。結論考察了空白輔料及維A酸陰性對照採用此樣品溶液處理方法所得圖譜，發現輔料有一定程度的降解，但均不幹擾測定，並按維A酸處方量的80%、100%、120%進行了含量回收試驗及相關方法學研究，確定了此樣品處理方法在此色譜條件對維A酸有關物質的測定方法是可行的。維A酸處理提取方法四避光操作，取凝膠適量(約相當於維A酸O.25mg)，精密稱定，置50ml具塞磨口錐形瓶中，加硼酸氯化鉀緩衝液(pH9.0)3.0ml，充分振搖使凝膠分散，加氯仿2.0ml，振搖混勻，用約15ml甲醇分次洗滌至25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液。取供試品溶液20iU注入色譜系統，記錄色譜圖。結論考察了空白輔料及維A酸陰性對照採用此樣品溶液處理方法所得圖譜，均不幹擾測定，並按維A酸處方量的809&、100%、120%進行了含量回收試驗及相關方法學研究，確定了此樣品處理方法在此色譜條件對維A酸有關物質的測定方法是可行的。在本發明的一個實施方案中，維A酸的檢測避光操作，取凝膠適量加硼酸氯化鉀緩衝液，充分振搖使凝膠分散，加氯仿適量，振搖混勻，用甲醇分次洗滌、稀釋，可見有沉澱物，過濾除去。取濾液作為供試品溶液。取供試品溶液20yl注入色譜系統，色譜系統AgilentllOO型高效液相，色譜柱為ZORBAXExtend-C18(250mmX4.6咖，5um)，流動相為乙腈-0.1%冰醋酸=80:20(V/V)，檢測波長為356nm，柱溫為20。C，流速為l.Oml/min，進樣量為50ul。考察了空白輔料及維A酸陰性對照採用此樣品溶液處理方法所得圖譜，均不幹擾測定，並按維A酸處方量的80%、100%、120%進行了含量回收試驗及相關方法學研究，確定了此樣品處理方法在此色譜條件對維A酸有關物質的測定方法是可行的。具體實施例方式下述實施例用於進一步說明本發明，但不限制本發明的範圍。實施例1:第一歩，先將0.8克的二丁基羥基甲苯、0.2克維A酸溶於240克無水乙醇中，然後將16.0克羧甲基纖維素鈉加入，120rpm攪拌使之分散均勻，製得a組分；第二步，將9.6克的克林黴素磷酸酯、0.4克枸櫞酸溶入533克的蒸餾水，製得b組分；第三步，將b組分緩慢加入到a組分中，邊攪拌邊加入，製得凝膠。取製備的凝膠適量(約相當於克林黴素磷酸酯18mg)，精密稱定，置50ml具塞磨口錐形瓶中，加約5ml流動相，振搖使分散，用流動相分次洗滌至25ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，置15ml離心管中，以每1分鐘4000轉離心約25分鐘，取上清液作為供試品溶液。Agilent11OO型高效液相，檢測波長210nm，色譜柱為ZorbaxC8(250mmx4.6mm，5pm)，流動相流速為1.0ml/min，進樣量5(^1，以下列梯度洗脫時間(分鐘)0.005mol/LKH2PO4緩衝液乙腈08515207525407525432080532080568515608515結論樣品溶液中雜質峰與輔料峰完全分離，克林黴素磷酸酯於18分鐘洗脫，考察了空白輔料及克林黴素磷酸酯陰性對照在此色譜系統下的色譜圖，均不幹擾測定，並進行了方法學研究，確定了此色譜條件對本品中克林黴素磷酸酯有關物質的測定方法是可行的。維A酸處理檢測避光操作，取凝膠適量(約相當於維A酸0.25mg)，精密稱定，置50ml具塞磨口錐形瓶中，加硼酸氯化鉀緩衝液(pH9.0)3.0ml，充分振搖使凝膠分散，加氯仿2.0ml，振搖混勻，用約15ml甲醇分次洗滌至25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液。取供試品溶液20pl注入色譜系統，色譜系統AgilentllOO型高效液相，色譜柱為ZORBAXExtend-C18(250mmx4.6mm，5nm)，流動相為乙腈-0.1%冰醋酸=80:20(V/V)，檢測波長為356nm，柱溫為20。C，流速為1.0ml/min，進樣量為50pl。考察了空白輔料及維A酸陰性對照採用此樣品溶液處理方法所得圖譜，均不幹擾測定，並按維A酸處方量的80n/。、100%、120%進行了含量回收試驗及相關方法學研究，確定了此樣品處理方法在此色譜條件對維A酸有關物質的測定方法是可行的。實施例2:第一步，先將0.8克的二丁基羥基甲苯、0.2克維A酸溶於80克無水乙醇中，然後將16.0克羧甲基纖維素鈉加入，120rpm攪拌使之分散均勻，製得a組分；第二步，將9.6克的克林黴素磷酸酯、0.4克枸櫞酸溶入693克的蒸餾水，製得b組分；第三步，將b組分緩慢加入到a組分中，邊攪拌邊加入，製得凝膠。克林黴素磷酸酯和維A酸的檢測方法同實施例1。實施例3:第一步，先將0.8克的二丁基羥基甲苯、0.2克維A酸溶於400克無水乙醇中，然後將16.0克羧甲基纖維素鈉加入，120ipm攪拌使之分散均勻，製得a組分；第二步，將9.6克的克林黴素磷酸酯、0.4克枸櫞酸溶入373克的蒸餾水，製得b組分；第三步，將b組分緩慢加入到a組分中，邊攪拌邊加入，製得凝膠。克林黴素磷酸酯和維A酸的檢測方法同實施例1。實施例4:第一步，先將0.8克的二丁基羥基甲苯、0.2克維A酸溶於240克丙二醇中，然後將16.0克羧甲基纖維素鈉加入，120rpm攪拌使之分散均勻，製得a組分；第二步，將9.6克的克林黴素磷酸酯、0.4克枸櫞酸溶入533克的蒸餾水，製得b組分；第三歩，將b組分緩慢加入到a組分中，邊攪拌邊加入，製得凝膠。克林黴素磷酸酯和維A酸的檢測方法同實施例1。實施例5:第一步，先將0.8克的二丁基羥基甲苯、0.2克維A酸溶於240克丙三醇中，然後將16.0克羧甲基纖維素鈉加入，120rpm攪拌使之分散均勻，製得a組分；第二步，將9.6克的克林黴素磷酸酯、0.4克枸櫞酸溶入533克的蒸餾水，製得b組分；第三歩，將b組分緩慢加入到a組分中，邊攪拌邊加入，製得凝膠。克林黴素磷酸酯和維A酸的檢測方法同實施例1。實施例6:第-一步，先將0.8克的二丁基羥基甲苯、0.2克維A酸溶於240克聚乙二醇400中，然後將16.0克羧甲基纖維素鈉加入，120rpm攪拌使之分散均勻，製得a組分；第二步，將9.6克的克林黴素磷酸酯、0.4克枸櫞酸溶入533克的蒸餾水，製得b組分；第三步，將b組分緩慢加入到a組分中，邊攪拌邊加入，製得凝膠。克林黴素磷酸酯和維A酸的檢測方法同實施例1。實施例7:第一步，先將0.8克的二丁基羥基甲苯、0.4克維A酸溶於240克無水乙醇中，然後將16.0克羧甲基纖維素鈉加入，120rpm攪拌使之分散均勻，製得a組分；第二步，將9.6克的克林黴素磷酸酯、0.4克枸櫞酸溶入533克的蒸餾水，製得b組分；第三步，將b組分緩慢加入到a組分中，邊攪拌邊加入，製得凝膠。克林黴素磷酸酯和維A酸的檢測方法同實施例1。實施例8:第一步，先將0.8克的二丁基羥基甲苯、O.OS克維A酸溶於240克無水乙醇中，然後將16.0克羧甲基纖維素鈉加入，120rpm攪拌使之分散均勻，製得a組分；第二步，將9.6克的克林黴素磷酸酯、0.4克枸櫞酸溶入533克的蒸餾水，製得b組分；第三步，將b組分緩慢加入到a組分中，邊攪拌邊加入，製得凝膠。克林黴素磷酸酯和維A酸的檢測方法同實施例1.實施例9:第一歩，首先將0.8克的二丁基羥基甲苯、0.2克維A酸溶於240克無水乙醇中，然後將64.0克甲基纖維素撒入，120rpm攪拌使之分散均勻，製得a組分；第二步，將9.6克的克林黴素磷酸酯、0.4克枸櫞酸溶入485克的蒸餾水，製得b組分；第二步，將b組分緩慢加入到a組分中，邊攪拌邊加入，製得凝膠。克林黴素磷酸酯和維A酸的檢測方法同實施例l.實施例10:第-歩，首先將0.8克的二丁基羥基甲苯、0.2克維A酸溶於240克無水乙醇中，然後將120.0克羥乙基甲基纖維撒入，120rpm攪拌使之分散均勻，製得a組分；第二步，將9.6克的克林黴素磷酸酯、0.4克枸櫞酸溶入429克的蒸餾水，製得b組分；第三步，將b組分緩慢加入到a組分中，邊攪拌邊加入，製得凝膠。克林黴素磷酸酯和維A酸的檢測方法同實施例1。權利要求1.一種含有克林黴素的複方凝膠劑，包含有效量的克林黴素或其可藥用鹽或酯、維A酸和凝膠基質，其特徵在於凝膠基質為纖維素類衍生物。2.根據權利要求l的凝膠劑，所述的克林黴素或其可藥用鹽或酯包括以下物質中的至少--種克林黴素、磷酸克林黴素、鹽酸克林黴素、克林黴素磷酸酯，優選克林黴素磷酸酯。3.根據權利要求l的凝膠劑，所述的纖維素類衍生物包括以下物質中的至少一種甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥乙基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素。4.根據權利要求1一3所述的任一凝膠劑，還包括抗氧劑和溶劑。5.根據權利要求4的凝膠劑，所說的溶劑為醇和水。6.—種含有克林黴素或其可藥用鹽或酯的複方凝膠劑的製備方法，該方法特徵包括以下過程(a)將纖維素類衍生物高分子材料加入到溶有維A酸、脂溶性抗氧劑的醇中，攪拌使之分散，得到混懸液；(b)將克林黴素磷酸酯、水溶性抗氧劑或/和輔助性抗氧劑溶於水，得到水溶液；(c)將(b)歩驟的水溶液緩慢加入(a)步驟的混懸液中，邊加邊攪拌，製得凝膠。7.根據權利要求6的製備方法，其中所述的脂溶性抗氧劑包括二丁基羥基甲苯、叔丁基對羥基茴香醚、生育酚、醋酸生育酚、沒食子酸、沒食子酸乙酯或沒食子酸丙酯，優選二丁基羥基甲苯或叔丁基對羥基茴香醚。8.根據權利要求4的凝膠劑或權利要求6的製備方法，所說的醇選自下列物質中的至少一種乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇、異丙醇、丁醇、聚乙二醇200、聚乙二醇400。9.根據權利要求8的凝膠劑或製備方法，其中所述的醇的用量在10。/。一50。/。(W/W),優選30%(W/W)。10.—種含有克林黴素或其可藥用鹽或酯的複方凝膠劑的檢測方法，其特徵在於先在凝膠中加入一種足以使纖維素類衍生物沉澱的試劑，待纖維素類衍生物沉澱後再使用高效液相色譜法檢測。11.根據權利要求io的檢測方法，所說的足以使纖維素類衍生物沉澱的試劑選自以下物質中的至少一種加酸、加鹼、加有機試劑、加鹽、加重金屬離子，優選加硫酸鎂、氯化汞、硼酸氯化鉀緩衝液或它們的混合物。12.根據權利要求10的檢測方法，其中所述的高效液相色譜法，其特徵在於檢測克林黴素磷酸酯時，在進樣後的最初至少15分鐘內，水相佔流動相的比例不得低於80%(V/V)。13.根據權利要求12的方法，其中所述的水相，其特徵在於含有磷酸鹽的緩衝液。全文摘要本發明涉及一種含有克林黴素的複方凝膠劑，包含有效量的克林黴素或其可藥用鹽或酯、維A酸和凝膠基質，其特徵在於凝膠基質為纖維素類衍生物，同時還涉及該凝膠劑的製備方法和分析檢測方法。本發明的凝膠劑，質量易控，且其製備方法工藝簡單、適合工業化生產。文檔編號A61P17/00GK101292991SQ20081006985公開日2008年10月29日申請日期2008年6月20日優先權日2008年6月20日發明者娟萬,濤張,林佳亮,斌樊,傑鄧申請人:重慶醫藥工業研究院有限責任公司