治療抑鬱症的藥物製劑及其製備方法

2023-05-08 19:15:01 2

專利名稱：治療抑鬱症的藥物製劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種治療抑鬱症的藥物製劑極其製備方法，屬於藥品的技術領域。
背景技術：
抑鬱症是一種常見的精神障礙，是人類高發病率的主要疾病之一。調查發現，抑鬱的時點患病率為4.3％，終生患病率為8％～20％。據美國政府和醫藥行業統計數字表明，美國每年約有1100萬患抑鬱症，重型抑鬱致殘比高血壓、糖尿病等通科疾病還嚴重，即便是單純的抑鬱症狀，其致殘程度超過高血壓、糖尿病等的也不少。隨著我國經濟快速發展，人們的工作壓力愈來愈大，生活節奏愈來愉快，工作緊張、競爭激烈造成人們精神壓力大大增大。據專家預測，我國抑鬱症的發病率也將比80年代有大幅度提高。
目前國外市場上抗抑鬱藥大多為西藥，但部分病人對其反應不佳，且有多種副作用和禁忌症，使病人不能耐受而難以達到滿意療效，復發率也高，而且各種抗抑鬱藥都有可能誘發燥狂。

發明內容
本發明的目的在於提供一種治療抑鬱症的藥物製劑及其製備方法，本產品對抑鬱症具有較好的療效，且無毒副作用和禁忌症，治療後不易復發，以解決現有技術存在的問題。
抑鬱障礙是一種情感性精神障礙，臨床上以情緒低落、思維遲緩和精神運動性抑制為特徵，屬於中醫「鬱病」的範疇。抑鬱障礙的發生與「脾胃」關係極為密切。《內經》指出人的神志活動不僅由心主宰，而且歸屬於五臟，即所謂的五神髒理論。其中「脾藏營，營舍意」；而且脾又因其在五神髒中的特殊位置，而於全部神志活動的產生與作用的發揮方面，佔有重要地位。肝心肺腎四神髒之氣的升降出入，還要依靠脾升胃降的作用。因而，就五神髒之氣化產生、調節神志而言，中焦脾胃亦對全部神志活動起著重要的調節作用。由於脾胃為氣機升降之樞，如氣結於中，則脾不升清，一方面水谷精微不能上運心肺，氣血化生不足，導致心神失養；另一方面，水液不能正常輸布而產生痰溼等病理產物，上蒙清竅。脾主運化水谷精微，化生氣血充養形體精神。脾虛則運化失健，氣血虧虛，精神失養，而見心境低落對日常活動無興趣，無愉快感。脾失健運，營血生化乏源，無以充養五臟、腦髓，自會見精力明顯減退，持續疲乏。憂鬱傷脾，脾傷則運化失健，導致食欲不振，或體重明顯減輕。脾傷則食少納呆，生化之源不足，營血虧虛，不能上奉於心，以致心神不安出現失眠，或早醒。脾虛不能運化水溼致水溼內停，脾虛溼勝導致睡眠過多。脾藏意，與注意、記憶、思考、分析等認知思維活動有關。脾虛則思維能力顯著下降，聯想困難。脾在志為思，思慮過度則氣結，氣結即氣機運行不暢，見情緒鬱悶，遇事想不通，且易自卑自責，有內疚感。在這種情緒得不到改善情況下就會感到活著沒意思，從而反覆出現想死的念頭或自殺自罪妄想。總之，脾失健運、痰溼內困是抑鬱障礙發生的基本病機之一。醒脾化溼、理氣解鬱是其基本的一種治療方法。
本發明是這樣實現的按照重量份計算，它由廣藿香700～1200份、陳皮200～400份、豆蔻300～700份、草豆蔻300～700份和麩炒蒼朮400～750份加適量輔料製備而成，準確的說，按照重量計算，它由廣藿香1000g、陳皮334g、豆蔻500g、草豆蔻500g和麩炒蒼朮666g加適量輔料製備而成；所述的製劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊、口服液或糖漿劑等等。
本產品是這樣製備的稱取藥材廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻和麩炒蒼朮，加8～16倍量藥材的水煎煮2～6次，每次1～4小時，合併每次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達50～80％，在5～10℃下冷藏20～36小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，即得到本發明藥物的有效成分，將得到的藥物有效成分加入需要的輔料、按照常規方法製備成所需的製劑。
本產品的片劑是這樣製備的稱取藥材廣藿香1000g、陳皮334g、豆蔻500g、草豆蔻500g和麩炒蒼朮666g，加14倍量藥材的水煎煮4次，每次2小時，合併4次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達70％，在5～10℃下冷藏24小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，加入輔料乳糖340g、糊精104g、羥丙纖維素40g、微晶纖維素8g、微粉矽膠4.8g、硬脂酸鎂3.2g，混勻，加適量乙醇制粒，乾燥，壓製成1000片，本產品的膠囊劑這樣製備稱取藥材廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻和麩炒蒼朮，加8倍量藥材的水煎煮2次，每次1小時，合併2次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達50％，在5～10℃下冷藏20小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，混勻，裝膠囊，即得到本發明的膠囊劑。
本產品的顆粒劑的製備方法為稱取藥材廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻和麩炒蒼朮，加16倍量藥材的水煎煮6次，每次4小時，合併6次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達80％，在5～10℃下冷藏36小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，然後加入阿司帕坦和乳糖適量，幹壓制粒即得本發明的顆粒劑。
本產品的軟膠囊這樣製備稱取藥材廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻和麩炒蒼朮，加10倍量藥材的水煎煮3次，每次3小時，合併3次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達60％，在5～10℃下冷藏30小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，然後加入吐溫-80和丙二醇，混勻，用膠體磨研磨後壓製成軟膠囊，即得到本發明的軟膠囊製劑。
本產品具有醒脾化溼，理氣解鬱的功效，主要用於溼濁困脾、氣機鬱滯所致的情緒鬱悶、低落，思維遲鈍，食少納呆，夜睡不實、倦怠乏力，舌苔白膩或灰膩，脈滑或弦滑等症的治療。
方中廣藿香，辛香、性溫，入中焦能燥溼濁以健脾胃，除穢濁以悅脾氣，解溼鬱以暢達氣機，其切合脾失健運、痰溼內困的基本病機，為方中君藥；陳皮，辛散苦降性溫，芳香醒脾，長於理氣健脾化痰；豆蔻、草豆蔻辛溫氣味芳香，均為芳香化濁要藥，善理中焦溼濁痰涎，醒脾快胃，三藥共為臣藥，與廣藿香配伍，增加廣藿香醒脾化溼之功，同時又可以調暢氣機，達到「氣順則痰消」之目的；麩炒的蒼朮，辛香、苦溫，擅入中焦，增強君藥、臣藥的醒脾燥溼的作用，為佐使藥。
縱觀全方，本方以輕清芳香，苦溫性燥之品為主組成，諸藥配伍，入於中焦，能醒脾化溼，理氣解鬱。與現有技術使用的西藥抗抑鬱藥相比，本產品具有抗抑鬱效果顯著、且毒副作用小，無禁忌症、患者易於接受，治療後不易復發且質量可控，性能穩定的優點。
為對本產品的藥效進行驗證並對本產品的生產工藝進行篩選，申請人進行了一系列的相關試驗研究，其結果如下藥效學研究試驗試驗目的嚴格遵守「隨機、對照、重複」的原則，根據本產品的臨床功能主治設計藥效學研究內容。在小鼠、大鼠兩種動物上，觀察藥物對正常動物、利血平誘發副交感神經機能亢進脾虛證動物「行為絕望」及其他脾虛證行為的影響，對中樞神經遞質水平的影響，並通過藥物誘發模型分析本產品的作用特點及機理，為臨床用於中醫辨證有脾虛、脾失健運、痰溼內困之抑鬱障礙治療提供實驗依據。
試驗材料1.受試藥物本產品提取物(不含輔料)，組方由廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻、蒼朮(麩炒)組成。為北京中日友好醫院加工，共2批次。批號031224，每1g提取物相當於10.10g生藥，得率9.9％，用於小鼠藥效學實驗；批號040428，每1g提取物相當於10.03g生藥，得率9.97％，用於大鼠藥效學實驗。
2.動物ICR小鼠，SPF/VAF級，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證編號SCXK(京)2002-0003；Wistar種大鼠，SPF級，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證編號SCXK(京)2002-0003。
3.飼養環境動物飼養於中國中醫研究院醫學實驗動物中心，為屏障環境，許可證號SYXK(京)2000-0048。飼料，由軍事醫學科學院加工，經60Co照射滅菌。許可證號SCXK(軍)2002-0018。
4.藥品鹽酸阿米替林片25mg/片，常州四藥製藥有限公司，批號9906222；百優解(鹽酸氟西汀分散片)20mg/片，Lilly公司生產，批號A042635；利血平注射液1mg/ml，上海復旦復華藥業有限公司，批號030206；重酒石酸去甲腎上腺素L-Norepinephrine.bitartrate FW 337.3 SERVA產品；5-羥色胺硫酸肌酐(Serotonincreatinine sulfate)FW405.43 Fluka產品；鹽酸多巴胺(3Hydroxytyraminehydrochloride)FW189.64純度＞98.5％；5-羥吲哚乙酸(5-Hydroxyindole-3-Acetic5-HIAA)FW 191.2 Sigma公司；鄰苯二甲醛(o-phthaladehyde)中國五聯化工廠化學純，批號960117；正丁醇(n-Butanol)AR分子量74.12，北京化工廠生產，批號960409；正庚烷(n-Heptane)AR分子量100.21，北京化工廠生產，批號940121；鹽酸帕吉林(Pargyline)1g/瓶，FW195.7 Sigma公司。其他試劑均為分析純，購自北京化學試劑公司。
5.儀器四導生理記錄儀RM6240C型生理實驗系統，成都儀器廠製造；肌張張換能器JZ100型，高碑店市新航機電設備有限公司生產；螢光分光光度計HITACHI 650-60型，日本產；自發活動記錄儀OPTO-VARIMEX-3型。日本產；電動玻璃勻漿機DY-89-1型，寧波新光科器研究所產；半自動生化分析儀，北京中生儀器廠生產；恆溫水浴，上海醫療器械五廠生產；精密天平SARTORIUS BP110S型，德國產；高速離心機SORVALL SUPER-T21型，美國產；數字溫度計WMY-01型，上海華辰醫用儀表有限公司產；運動秒表JS-601型，深圳君斯達實業有限公司產。
實驗方法及結果一、本品對正常小鼠自主活動及「行為絕望」的影響(一)本品對正常小鼠自發活動及懸尾不動時間的影響1.基本原理小鼠懸尾實驗(tail suspension test in mice)，小鼠在懸尾狀態下很快出現絕望行為(behavioral despair)，表現為不再掙扎，呈現特有的安靜不動狀態。絕大多數的抗抑鬱藥既能縮短不動狀態時間，又能減少或不影響小鼠自主活動。
2.小鼠懸尾實驗裝置一排帶有間隔板的實驗架，間隔板使實驗架分成4個實驗小室，在貫穿的橫杆上，每一小室內以固定器水平固定一支JZ100型肌肉張力換能器，換能器前端連一金屬線，小鼠尾部以粘膏固定在金屬線上，使動物呈倒掛狀態，頭距地面70cm。張力換能器與四導生理記錄儀相連。記錄動物活動狀態。以秒表記時測量動物不動時間。
3.方法ICR雄性小鼠，體重(16.6±0.6)g分為7組，分別為正常對照組，本品3個劑量組(按提取物g/kg體重計，分別為0.23g/kg、0.58g/kg、1.44g/kg)，陽性對照藥阿米替林50mg/kg，百優解14mg/kg，利血平2mg/kg組，給藥組除利血平組外，各組每日灌胃給藥1次，連續18天，利血平組於實驗17d肌肉注射1次2mg/kg。於第17天給藥後1h，每組取前10隻動物放自發活動儀中8分鐘，記錄後6min每分鐘的自發活動次數，數據以單因素方差分析進行統計比較，結果見表1。第18天末次給藥後1h將小鼠尾在距尾尖1cm處用膠布粘於肌肉張力換能器前端，使動物呈倒掛狀態，動物頭離地面70cm。經四導生理記錄儀記錄動物懸尾6min內後3min的不動時間。數據經單因素方差分析進行統計比較。結果見表2。
表1 本品連續給藥17天對正常小鼠自發活動的影響(X±Sn＝10)

注與正常對照組比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
4.結果從表1可見，本品在0.23～1.44g/kg劑量連續給藥17d對正常小鼠自發活動無明顯作用(與正常對照組比P＞0.05)。本品對正常小鼠自發活動的影響輕微，連續給藥後對自發活動無明顯影響。
表2 本品連續給藥18d對正常小鼠懸尾不動時間的影響(X±Sn＝10)

注與正常對照組比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
5.結果從表2可見，本品連續灌胃給藥18天，在0.23～1.44g/kg劑量能顯著減少小鼠懸尾不動時間(與正常對照組比P＜0.05或P＜0.01)。陽性對照藥阿米替林50mg/kg、百優解14mg/kg顯著減少小鼠懸尾不動時間(與正常對照組比P＜0.001或P＜0.01)。本品減少小鼠懸尾不動時間的最小有效劑量為0.23g/kg，作用有明顯量-效關係。
二、本品對正常大鼠「行為絕望」的影響(一)本品對正常大鼠懸尾不動時間的影響]1.大鼠懸尾實驗裝置為一排帶有間隔板的實驗架，間隔板使實驗架分成6個實驗小室，在貫穿的橫杆上將大鼠尾部(距尾尖2cm處)以2cm寬的膠布將鼠尾粘於水平方向金屬杆上。使鼠頭距地面1米，與四壁距離大於60cm。
2.方法Wistar種雄性大白鼠，體重(150±10)g，飼養於屏障環境，按體重分層隨機分為5組，每組13隻以上動物。分別為正常對照組，本品3個劑量組分別為0.16g/kg、0.4g/kg、1.0g/kg，阿米替林20mg/kg，連續灌胃給藥15天，末次給藥後1h，將大鼠尾部固定於大鼠懸尾實驗裝置上，每隻動物懸尾6min記錄後3min內不動時間(秒)，數據以單因素方差分析進行統計處理。結果見表3。
表3 本品連續給藥15d對正常大鼠懸尾不動時間的影(X±S＝10)

注動物懸尾6min，記錄後3min不動時間與正常對照組比**P＜0.01。
3.結果從表3可見，本品連續灌胃給藥15天，在0.4g/kg、1.0g/kg劑量顯著減少大鼠懸尾不動時間(與正常對照組比P＜0.05)。阿米替林20mg/kg顯著減少懸尾不動時間(P＜0.05)。本品減少大鼠懸尾不動時間的最小有效劑量為0.4g/kg，有一定量-效關係。
(二)本品對正常大鼠遊泳不動時間的影響1.基本原理]當大鼠或小鼠放進一個有限的空間使之遊泳，開始時拼命遊泳力圖逃脫，很快就變成漂浮不動狀態，僅露出鼻孔保持呼吸，四肢偶爾划動保持身體不至於沉下去，這種狀態叫做不動狀態(immobility)，實際上是動物放棄逃脫的希望，也屬於行為絕望(behavioral despair)。此模型主要包括多巴胺(DA)和去甲腎上腺素(NA)功能，因為興奮DA受體或a-腎上腺素受體可以翻轉不動狀態，而降低DA和NA系統功能則增加不動狀態。
2.方法Wistar種雄性大鼠，分組及給藥劑量見表4。每組14～16隻動物，連續灌胃給藥20天，末次給藥後1h，將大鼠單個地放入垂直放置的5000ml燒杯中(高24cm，直徑18cm，水深18cm，水溫25℃)強迫遊泳。大鼠初放入時，拼命遊泳並試圖爬上筒壁或潛入筒底，2-3分鐘後，活動減弱。本實驗大鼠放入筒中遊泳10min，記錄後6min內保持不動狀態的時間(秒)。動物不動行為的評判標準為大鼠微卷軀體，但保持垂直姿勢，鼻孔露出水面。結果見表4。
表4 本品連續灌胃給藥20天對正常大鼠遊泳「行為絕望」的影響(X±S)

注大鼠遊泳10min記錄後6min內不動時間(秒)。與正常對照組比*P＜0.05，**P＜0.01。
3.結果從表4可見，本品0.4g/kg、1.0g/kg組連續灌胃給藥20d，能顯著減少遊泳不動時間(與正常對照組比P＜0.05或P＜0.01)。阿米替林20mg/kg也減少遊泳不動時間(與正常對照組比P＜0.01)。本品減少大鼠遊泳不動時間的最小有效劑量為0.4g/kg。有一定的量-效關係。
三、本品對利血平引起小鼠上瞼下垂、運動不能及體溫降低的影響(一)利血平引起小鼠上瞼下垂及運動不能的影響1.方法ICR雄性小鼠，SPF級，21.3±1g，按體重隨機分為8組，給藥劑量見表5。給藥組連續灌胃給藥14天，正常對照組和利血平組灌胃等體積常水(0.2ml/1.0g)，第14天腹腔注射利血平2mg/kg後1h、2h、6h將動物放於支架上觀察15s，記錄各組中眼瞼關閉的動物數(-眼瞼開；±眼瞼半開；+眼瞼閉合)，以Fisher精確法比較利血平造型組與其他各組間眼瞼閉合等級的差異程度。結果見表5，6，7。給利血平2h、6h後將動物放於直徑7.5cm的圓形白紙中央，觀察15秒，記錄各組動物仍呆在圈內的動物數，以秩和檢驗(Nemenyi法)進行統計比較。結果見表8，9。
表5 本品連續給藥14天對利血致小鼠眼瞼閉合的影響

注P值與利血平模型組比較所得值。下同。
表6 本品連續給藥14天對利血致小鼠眼瞼閉合的影響


表7 本品連續給藥14天對利血致小鼠眼瞼閉合的影響

2.結果從表5，6，7可見，本品0.23g/kg-3.59g/kg劑量連續給藥14d可顯著對抗利血平ip 2mg/kg後1-2h所致的上瞼下垂(與利血平造型組比P＜0.05或P＜0.01)。藥後6h對利血平所致上瞼下垂對抗作用消失(P＞0.05)。本品對抗利血平致上瞼下垂的最小有效劑量為0.23g/kg，作用有一定量-效關係。本品給藥後1h對抗利血平上瞼下垂作用最強，致藥後2h大劑量組仍有顯著對抗作用(P＜0.01)。
表8 本品對利血致小鼠運動不能的影響

表9 本品對利血致小鼠運動不能的影響

從表8、9可見本品0.58g/kg劑量連續給藥14d顯著對抗腹腔注射利血平2mg/kg所致小鼠活動減少，顯著增加動物出圈數(P＜0.05)。但無明顯量-效關係。藥後6h作用較藥後2h作用明顯。
(二)利血平引起小鼠體溫下降的影響1.方法ICR雄性小鼠，體重(21.3±1.0)g，SPF級，按體重隨機分為7組，劑量見表10，連續給藥14天，第14天於給藥前測基礎體溫(肛溫)；給藥同時腹腔注射利血平2mg/kg，給藥後6h、24h分別測體溫一次。計算給藥前後自身體溫差值，以單因素方差分析進行統計比較。結果見表10，11。
表10 本品對利血平致小鼠體溫降低的影響(X±S)

注與利血平模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表11 本品連續給藥14d對利血平致小鼠體溫降低的影響(X±S)

注與利血平模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。肛溫降低值＝藥前肛溫-藥後肛溫2.結果從表10，11可見，本品連續給藥14d對利血平2mg/kg ip後24h引起的體溫降低有顯著對抗作用(與利血平造型組比P＜0.05或P＜0.001)。最小有效劑量為0.23g/kg，量-效關係呈U型曲線。
四、對利血平造型大鼠「行為絕望」的影響1.方法Wistar雄性大鼠，分組及給藥劑量見表12。各給藥組連續灌胃給藥20天，正常組及利血平組灌胃等體積常水。第20天除正常組不進行處理外，其餘各組腹腔注射利血平1mg/kg，同時給藥1次。給利血平5h再給藥1次，第6h按二(二)正常大鼠遊泳不動時間法進行遊泳實驗。本實驗大鼠放入筒中遊泳8min，記錄後6min內保持不動狀態時間(秒)，結果見表12。
表12 本品連續灌胃給藥20d對利血平造模大鼠遊泳不動時間的影響(X±S)

注與利血平模型組比*P＜0.05，**P＜0.05，***P＜0.01.
2.結果從表12可見，本品0.16g/kg-1.0g/kg連續給藥20天可顯著對抗腹腔注射利血平1mg/kg所致遊泳不動時間延長(P＜0.05或P＜0.01)。最小有效劑量為0.16g/kg，量-效關係呈U型曲線。
五、正常小鼠中樞單胺神經遞質含量的影響1.方法ICR雄性小鼠，分組及給藥劑量見表13，連續給藥25天。利血平處理組於實驗第17天、22天、25天各肌注給藥一次，劑量為2mg/kg。於末次給藥後80min將動物迅速斷頭取腦，乾冰速凍，以螢光測定法測定去除小腦後全腦勻漿中去甲腎上腺素(NA)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)、5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)含量。以單因素方差分析進行統計比較。結果見表13。
2.腦組織中單胺類神經介質的提取和螢光分光度測定法(1)小鼠腦組織的處理及勻漿於實驗結束時快速斷頭取腦，於1min內取出腦組織，迅速放入乾冰中速凍，然後移入-20℃冰箱，於組織勻漿前解凍，去除小腦延腦和嗅球，在分析天平上稱取腦組織300mg，加入10倍體積的酸性正丁醇勻漿。
(2)提取NA、DA、5-HT、5-HIAA的提取腦組織勻漿液離心(2000rpm)5min，取上清液2.5ml置於含0.1NHCl 1ml和正庚烷5ml的具塞離心管中，置離心管於康式振蕩器上，振蕩5min，離心(2500rpm)5min。取上層有機相6ml置於含0.033M NaHCO3溶液0.6ml的具塞試管中以提取5-HIAA。從下層水相中分別取0.5ml和0.4ml，前者用於測定NA和DA，後者用於測定5-HT。將提取5-HIAA的具塞離心管置於康式振蕩器上，振蕩5min，離心(2500rpm)5min，吸去有機相，取0.4ml水相，測定5-HIAA。
內標準管處理取酸性正丁醇勻漿液9ml，均分3管，於其中2管中加入40ul混合標準應用液(分別含NA、DA、5-HT、5-HIAA標準品5ug/ml)。
(3)測定，對NA、DA、5-HT、5-HIAA進行螢光測定。
表13 本品連續給藥25天對正常小鼠全腦神經遞質水平的影響(X±S)

注與正常對照組比，**P＜0.01，***P＜0.001，利血平組為2mg/kg於實驗第18天、22天、25天各肌注一次。
3.結果從表13可見，本產品0.23g/kg組全腦中5-HIAA含量高於正常對照組(P＜0.05)；本產品3.59g/kg組全腦中DA高於正常對照組，5-HIAA低於正常對照組(P＜0.01)。陽性對照藥阿米替林50mg/kg能顯著增高腦內DA、5-HT含量並降低5-HIAA含量(P＜0.01或P＜0.001)。陽性對照藥百優解14mg/kg能顯著降低腦內NA、5-HIAA含量，並升高腦內DA含量(P＜0.05～P＜0.01)。利血平2mg/kg肌注射給藥3次後腦內DA、NA、5-HT及5-HIAA均顯著低於正常對照組(P＜0.05～P＜0.001)。本產品對正常小鼠腦神經遞質有影響的最小有效劑量為0.23g/kg，量-效關係不明顯。
六、對利血平造型大鼠中樞神經遞質水平的影響1.方法Wistar種雄性大鼠，分組及給藥劑量見表14。各給藥組連續灌胃給藥21天，正常對照組和利血平組給同體積常水。於實驗第20天除正常對照組外，實驗各組ip利血平1mg/kg，各組同時給藥一次。實驗第21天末次給藥後1h(注射利血平後24h)將大鼠斷頸取腦，立即以乾冰冷凍，-20℃保存，按螢光光度測定法[3]測定大腦皮層勻漿中去甲腎上腺素(NA)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)、5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)含量。各組數據經單因素方差分析進行統計處理。結果見表14。
表14 本品連續給藥21天對利血平處理大鼠大腦皮層神經遞質水平的影響(X±S)

注與利血平對照組比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0012.結果從表14可見，利血平處理大鼠大腦皮層5HT、DA、NA均顯著低於正常對照組(與正常對照組比較P＜0.01或P＜0.001)。本品0.4g/kg劑量顯著升高利血平處理大鼠大腦皮層5HT、DA、NA含量，並降低5HIAA水平(P＜0.05或P＜0.01)。本品1.0g/kg組5HT、DA水平高於利血平造型組(P＜0.01)。本品對抗利血平所致大鼠大腦皮層神經遞質改變的最小有效劑量為0.4g/kg，量-效關係呈U型曲線。
七、對小鼠5-羥色胺酸增強引起甩頭行為的影響]1.原理按照抑鬱症發生的單胺假說，抗抑鬱藥的作用在於其能提高去甲腎上腺素能和/或5-羥色胺能神經功能。多種抗抑鬱藥可通過阻斷5-HT的重攝取而增加5-HT的作用。L-5-HTP可用作5-HT的前體物，單胺氧化酶抑制劑帕吉林可抑制其酶促降解反應。在小鼠可觀察到特徵性症狀-甩頭行為。給受試藥物後增強小鼠甩頭行為可作為以抑制5-HT攝取功能為機理抗抑鬱作用的一個證據。
2.方法ICR雄性小鼠，體重(20±1)g，按體重隨機分6組，每組12隻動物。分組及給藥劑量見表15，給藥各組連續灌胃給藥19d。實驗第19d各組皮下注射鹽酸帕吉林75mg/kg，並開始記時，30min後各組給藥一次。給帕吉林90min腹腔注射5-羥色胺酸20mg/kg，給5-HTP 10min後記錄10min內的甩頭次數，數據以單因素方差分析進行統計比較。結果見表15。
表15 本品連續給藥19天對5-HTP誘發小鼠甩頭的影響(X±Sn＝12)

注與模型對照組比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0013.結果從表15中可見，本品0.58g/kg/kg劑量連續給藥19天，對5-HTP誘發的甩頭行為有顯著抑制作用(P＜0.05)，顯著減少甩頭次數(與造型組比P＜0.05)，本品1.44g/kg以上劑量對甩頭行為無明顯影響(與造型組比P＞0.05)。陽性對照藥百優解(5-HT重攝取抑制劑)非常顯著增加小鼠的甩頭次數(P＜0.01)，阿米替林則非常顯著減少甩頭次數(P＜0.001)。
八、本品在小鼠上對去甲腎上腺素毒性的影響
1.原理抗抑鬱藥可阻斷神經組織對去甲腎上腺素重攝取而增強去甲腎上腺素毒性。
2.方法ICR雄性小鼠，SPF級，體重(20g±1.5)g，按體重隨機分為7組，分別為正常對照組，去甲腎上腺素造型組，本品3個劑量組，劑量見表16，阿米替林50mg/kg、百優解14mg/kg。給藥組連續灌胃給藥19d，末次給藥後30min，除正常對照組不做處理外，其餘各組動物皮下注射去甲腎上腺素4mg/kg，記錄注射去甲腎上腺素後48小時內動物死亡數。以卡方檢驗比較各組死亡數與去甲腎上腺組間差異的顯著程度。結果見表16。
表16 本品給藥19天對去甲腎上腺素毒性的影響

注P值與去甲腎上腺素組比較。
3.結果從表16可見，本品在0.58g/kg-3.591g/kg劑量連續給藥19天，對去甲腎上腺素4mg/kg皮下注射的毒性無明顯增強作用。表明本品對去甲腎上腺素重攝取無明顯抑制作用。陽性對照藥阿米替林顯著增加去甲腎上腺素毒性(P＜0.01)。
研究結論一、本品對正常小鼠、大鼠「行為絕望」有明顯對抗作用。顯著縮短小鼠懸尾不動時間的最小有效劑量為0.23g/kg，按每公斤體重計算相當於臨床成人日用劑量(1.8g/60kg)的7.7倍(按體表面積折算相當於臨床等效劑量)；顯著縮短大鼠懸尾不動時間和遊泳不動時間的最小有效劑量為0.4g/kg相當於人臨床成人日用劑量的13.3倍，按體表面積折算為臨床等效劑量的2.5倍，作用有一定的量-效關係。
二、本品對利血平在小鼠、大鼠誘發的抑鬱行為有明顯對抗作用。顯著對抗利血平引起的小鼠眼瞼下垂及體溫降低的最小有效劑量為0.23g/kg；顯著對抗利血平引起大鼠遊泳不動時間延長的最小有效劑量為0.16g/kg(按體表面積折算均相當於臨床等效劑量)。
三、本品對正常小鼠腦內單胺遞質水平有一定影響，本品升高小鼠全腦5-HIAA的最小有效劑量為0.23g/kg；升高DA，降低5-HIAA的劑量為3.59g/kg。
四、本品對利血平造型引起大鼠大腦皮層單胺遞質降低有顯著對抗作用。最小有效劑量0.4g/kg，能顯著升高皮層5-HT、DA、NA水平，同時降低5-HIAA水平。
五、本品中樞作用環節初步分析1.本品對5-HTP引起的甩頭行為無明顯協同作用，提示對5-HT重攝取無明顯阻斷作用。
2.對去甲腎上腺素毒性無明顯增強作用，提示對去甲腎上腺素重攝取無明顯阻斷作用。
以上研究結果表明本品對正常動物「行為絕望」有明顯對抗作用，而對自發活動無明顯影響；對利血平誘發副交感神經機能亢進脾虛動物表現眼瞼下垂、運動不能、體溫降低有明顯對抗作用，並能顯著對抗利血平引起的「行為絕望」。本品在高劑量對正常小鼠中樞神經遞質DA有明顯升高，5-HIAA有明顯降低。對利血平誘發副交感神經機能亢進脾虛大鼠，本品能顯著對抗利血平對皮層5-HT、DA、NA的耗竭作用，並降低5-HIAA水平。本品對正常動物和利血平誘發副交感神經機能亢進脾虛證動物行為學的影響及對中樞單胺神經遞質水平的影響均顯示其有抗抑鬱作用，為臨床用於由脾虛溼困所致抑鬱障礙治療研究提供了實驗依據。
藥效學研究表明，本產品抗抑鬱效果顯著，副作用小；藥學研究表明，其製劑質量可控，性能穩定，因此是一種很有前景的中藥治療抑鬱障礙的製劑。
毒理研究(一)急性毒性試驗小鼠單次灌胃給本品提取物藥粉(不含輔料)濃度為0.4g/ml(最大濃度)，給藥體積為0.4ml/10g體重，最大給藥量為16g/kg(相當於160.48g生藥/kg體重)，相當於臨床成人日服用劑量(提取物1.8g/60kg，相當於18g生藥/60kg)的534.9倍。在連續7天觀察期中僅見給藥15min後動物有輕度自主活動減少，6h後動物自主活動基本正常，其他時間點動物行為活動、精神狀態、食量、體重增長、糞便排洩等均無異常，無明顯中毒症狀，7天內動物無死亡。大體解剖未發現器質性病變。
(二)長期毒性試驗本品提取物藥粉(不含輔料)對大鼠連續灌胃給藥26周，相當於人臨床用藥周期(3個月)的2倍。本品提取物藥粉3個劑量組的劑量單位是提取物g/kg體重，分別為0.8g/kg，2.0g/kg，5.0g/kg，分別相當於成人臨床日用劑量(提取物1.8g/60kg，相當於18g生藥/60kg)的26.74倍、66.85倍和167.13倍。本品提取物藥粉大鼠長期毒性試驗設低、中、高三個劑量組。低劑量組略高於主要藥效學研究的藥效劑量，高劑量組藥物已達到較高濃度，接近最大給藥量，在高低劑量之間設一中劑量，同時設正常對照組。每組40隻動物，雌雄各半。
本品大鼠長期毒性試驗按藥監局有關中藥新藥毒理學研究的技術要求進行各項觀察和檢測。各給藥組與正常對照組在26周給藥期及停藥恢復4周期間對動物一般行為、體重增長、食量消耗、血液學、血液生化檢查、尿常規檢查、心電圖、系統屍解及組織病理學檢查，均按規定時間進行檢測，給藥各組與正常對照組計量數據以單因素方差分析及組間t檢驗統計比較；組織病理學分級數據以秩和檢驗進行統計比較。本品三個劑量組在26周給藥期中，未見藥物中毒引起的死亡及明顯病理組織學損害。恢復期4周末，各項檢驗指標與正常對照組比較無顯著差異，未見遲緩毒性。本品在26周給藥期及4周恢復期末各項檢測指標與正常對照組比較結果如下本品低劑量組(0.8g/kg)給大鼠灌胃給藥13周、26周及停藥恢復4周期間，動物行為活動正常，體重增長與食量消耗與同期正常對照組比無顯著差別(P＞0.05)；血液學檢測、血液生化指標檢測、尿常規檢查、心電圖檢查各項指標與正常對照組比無顯著差別(P＞0.05)；系統屍解臟器係數及病理組織學檢查各項指標與正常對照組比無顯著差別(P＞0.05)。停藥恢復4周各項檢測指標與正常對照組比無顯著差別(P＞0.05)。本品提取物藥粉0.8g/kg為安全劑量。
本品中劑量組(2.0g/kg)給大鼠灌胃給藥13周、26周及停藥恢復4周期間，動物行為活動正常，體重增長與食量消耗與同期正常對照組比無顯著差別(P＞0.05)；血液生化指標檢測、尿常規檢查、心電圖檢查、系統屍解臟器係數及病理組織學檢查各項指標與正常對照組比無顯著差別(P＞0.05)；血液學檢測給藥13周時各項檢測指標與正常對照組比均無顯著差異(P＞0.05)；給藥26周時，外周血紅細胞計數(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞容積(HCT)低於正常對照組(P＜0.01)，紅細胞平均血紅蛋白量(MCH)、紅細胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)高於正常對照組(P＜0.01)。對網織紅細胞及骨髓塗片粒紅比值無明顯影響(P＞0.05)，對血液學HGB降低在4.9％，仍在正常生理範圍。停藥恢復4周各項指標與正常對照組比均無顯著差別(P＞0.05)。以上結果表明本品中劑量(2.0g/kg)所引起的血液學指標改變是可復性改變，藥物無遲緩毒性。本品提取物藥粉2.0g/kg劑量為相對安全劑量。
本品高劑量組給大鼠灌胃給藥13周、26周動物行為活動正常、食量消耗、體重增長、尿常規檢查、心電圖檢查，主要臟器病理組織學檢查與同期對照組比無顯著差別(P＞0.05)；血液生化指標測定僅給藥13周GLU高於正常對照組(P＜0.05)，但仍為正常生理範圍，其他生化指標與正常對照組無顯著差別(P＞0.05)。本品高劑量組在給藥期中對血液學檢測指標的影響為給藥13周、26周血液RBC、HCT均低於正常對照組，MCH、MCHC高於正常對照組(P＜0.05或P＜0.01)。其餘各項血液學指標與正常對照組無顯著差別(P＞0.05)。停藥恢復4周血液學各項指標與正常對照組比均無顯著差別(P＞0.05)。本品高劑量組對系統屍解主要實質性臟器係數的影響為給藥26周肝(♀♂)係數、腎係數(♂)高於正常對照組(P＜0.05或P＜0.01)。其餘臟器係數與對照組比較無明顯差別(P＞0.05)。停藥恢復4周本品高劑量組所有檢測指標與正常對照組比無顯著差異(P＞0.05)，對25種臟器組織的病理組織學檢查未見藥物引起的病理形態學改變。表明本品高劑量組所引起的血液學指標改變及臟器係數增高是可復性改變，藥物無遲緩毒性。
結論本品低、中、高三個劑量組在26周給藥期中未見藥物中毒引起的死亡及明顯病理組織學損害。恢復期4周末，各項檢測指標與正常對照組比較無顯著差異，未見遲緩毒性。
以上研究結果表明本品低、中劑量(0.8g/kg、2.0g/kg)(相當於人臨床日用劑量的26.74倍和66.87倍)連續灌胃給藥26周，未顯示明顯的不良反應與毒性，為相對安全劑量；本品高劑量引起的主要毒副作用為對血液學指標(RBC、HCT)及臟器係數(肝、腎)有一定的影響，建議臨床研究時對血常規及肝、腎功能變化予以注意。
工藝研究一、劑型選擇的依據本品片劑系依據中醫對「鬱症」的辨證論治組方，並經過藥理實驗篩選和現代科學方法提取後製成，在臨床上用於治療抑鬱障礙的6(2)類中藥新藥。本方日服飲片藥量為18g，經提取純化，幹浸膏得率在12％左右，加適量輔料，製成片劑。日服劑量為每日6片，每片0.8g，每日3次，每次2片。
二、提取工藝的研究(一)藥材的鑑定與前處理廣藿香為唇形科植物廣藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.的乾燥地上部分。應符合《中國藥典》2000年版一部33頁廣藿香項下規定。投料前需除去雜質，先抖下葉，篩淨另放；莖洗淨，潤透，切段，曬乾，再與葉混勻。
陳皮為芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培變種的乾燥成熟果皮。應符合《中國藥典》2000年版一部148頁陳皮項下規定。投料前需除去雜質，噴淋水，潤透，切絲，陰乾。
豆蔻為姜科植物爪哇白豆蔻Amomum compactum Soland ex Maton的乾燥成熟種子。應符合《中國藥典》2000年版一部132頁豆蔻項下規定。投料前除去雜質，搗碎。
草豆蔻為姜科植物草豆蔻Alpinia katsumadai Hayata的乾燥成近熟種子。應符合《中國藥典》2000年版一部191頁項下規定。投料前除去雜質，搗碎。
蒼朮(麩炒)為菊科植物茅蒼朮Atractylodes lancea(Thunb.)的乾燥根莖。應符合《中國藥典》2000年版一部127頁蒼朮項下規定。投料前需經炮製，目的是除去過量的揮髮油成分，減少刺激性。方法取蒼朮片，照麩炒法(《中國藥典》2000年版一部附錄II D)炒至表面深黃色。
(二)提取工藝路線的設計製備工藝研究是根據處方中藥味所含化學成分的性質，經預試驗後，進行提取和分離工藝的設計，應用正交試驗篩選出最佳工藝條件以上五味藥加水煎煮四次，每次2小時，加水量為藥材量的14倍；合併每次得到的煎液，濾過，濃縮至相對密度為1.04-1.05(50℃)的清膏，加乙醇使含醇量達70％，冷藏(5～10℃)過夜，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至相對密度為1.32～1.35(50℃)的清膏，減壓乾燥(70℃)，幹膏粉碎成細粉，加入輔料乳糖340g、糊精104g、羥丙纖維素40g、微晶纖維素8g、微粉矽膠4.8g、硬脂酸鎂3.2g混勻，經加工提取精製製成1000片，加適量乙醇制粒，乾燥(65℃)，壓製成1000片，每片0.8g，包薄膜衣，即得；服用劑量為每日6片，每次2片。中試試驗結果說明本品製備工藝穩定。
本產品由廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻、蒼朮(麩炒)等五味藥物組成。其中廣藿香味辛微溫，歸脾、胃、肺經。具有芳香化濁，開胃止嘔，發表解暑的功效。現代研究表明，主要含有揮髮油類、倍半萜類和黃酮類成分。藥理實驗研究表明，廣藿香的水溶性成分，通過抑制胃腸運動機能，達到解痙作用。通過增加胃酸分泌、提高胃蛋白酶活性、提高血清澱粉酶活性，消除胃腸道的消化和吸收障礙，改善脘腹脹痛、噯氣等消化系統症狀；並有鎮痛和止瀉作用。
陳皮性味苦、辛、溫，歸肺、脾經。具有理氣健脾、燥溼化痰的功效。陳皮含有揮髮油1.5-2.0％，還含有橙皮甙(hesperidin)、新橙皮甙(neohesperidin)、柑橘素(tangeretin)和黃酮化合物以及右旋檸檬烯、枸櫞醛、麝香草酚和β-谷甾醇等。藥理實驗研究表明，採用改良的酚紅含量測定法觀察陳皮水煎劑及橙皮甙對正常小鼠胃排空、小腸推進無影響；陳皮水煎劑能拮抗新斯的明引起的小鼠胃排空、小腸推進亢進；可加強阿託品、腎上腺素對小鼠胃排空抑制作用，但對其造成的小鼠小腸推進抑制沒有影響。提示陳皮對胃排空有一定抑制作用，橙皮甙具有一定的促胃腸動力作用，其作用機制可能與膽鹼能受體和腎上腺素受體有關。另有報導通過實驗比較陳皮水提物與揮髮油對消化道、呼吸道平滑肌等方面的藥理作用有何差別，結果，一方面肯定了陳皮對胃腸道和氣管平滑肌的自發活動有一定的抑制作用，且能明顯拮抗組胺或乙醯膽鹼引起的腸道和氣管平滑肌的收縮痙攣，還具有一定的抗過敏作用，這些作用是陳皮理氣健脾、燥溼化痰的藥理學基礎之一。另一方面表明，陳皮水提物和揮髮油對胃腸道平滑肌的影響基本類同，但對呼吸系統的影響有一定差別，以揮髮油對呼吸系統的作用較為明顯。
豆蔻性味辛溫，歸肺、脾、胃經。具有化溼消痞，行氣溫中，開胃消食的功效。現代研究表明，主要含有揮髮油類和黃酮類成分。藥理實驗證明其能促進胃液分泌，增進胃腸蠕動，制止腸異常發酵，祛除胃腸積氣。另有報導應用豆蔻研末加水煮沸服用，用於婦產科腹部術後患者，可促進胃腸蠕動，防止腸粘連，使患者早進食，預防電解質紊亂，減少輸液量，促進患者康復。
草豆蔻性味辛、溫，歸脾、胃經。具有燥溼健脾，溫胃止嘔的功效。草豆蔻含揮髮油約為1.5％，除去揮髮油的丙酮提取部分分離到的黃酮類化合物6個，經理化常數測定、光譜分析與文獻對照，其中4個分別為松屬素(pinocembrin)，小豆蔻明(cardamonin)，山姜素(alpinetin)和7，4-二羥基-5-甲氧基雙氫黃酮(7，4』-dihydroxy，5-methoxyflavanones)。藥理實驗研究表明，草豆蔻的水浸出物對巴甫洛夫小胃胃液總酸排出量無明顯影響，對胃蛋白酶的活力有明顯的影響。在灌注後3小時期間每半小時樣品中的胃蛋白酶平均活力為36.8+0.7單位，比灌注前的對照值升高6.3％，與灌注生理鹽水後的相應胃蛋白酶活力比較有顯著性差異(P＜0.05)。另有報導草豆蔻的氯仿及甲醇提取物可使乾嘔次數減少。並且從這兩種提取物中分離得到暫稱為SOUZUKU-3，4，5，6，7的5種鎮吐活性成分。以後又從草豆蔻分離得到2個新的鎮吐成分，新成分1的抑制作用顯示劑量依賴性，新成分2在劑量50mg/kg時呈明顯的抑制活性。新成分1，2是草豆蔻中首次發現的二芳基庚萜與單環α-吡喃酮結合的成分。
蒼朮(麩炒)性味辛、苦、溫，歸脾、胃、肝經。具有燥溼健脾，祛風散寒、明目的功效。主要含揮髮油，約5％-9％。油中主要成分為蒼朮醇。其次是蒼朮酮、蒼朮素等。蒼朮中還含有胺基酸、多炔類化合物、倍半萜糖苷等水溶性成分以及少量糠醛。藥理實驗研究表明，蒼朮水煎劑對脾虛洩瀉(番瀉葉水煎灌胃致虛)動物，能增加體重，抑制小腸推進運動，提高血清鋅鐵含量，降低血清銅含量，還能對抗鹽酸鹽所致大鼠胃炎及幽門結紮所至大鼠潰瘍的形成，提高胃液pH值，抑制胃蛋白酶活力，拮抗乙醯膽鹼、氯化鋇對離體豚鼠迴腸的收縮。另有報導蒼朮揮髮油部分和水溶液部分在抗動物胃潰瘍和抑制動物腸蠕動以及利尿、抗炎方面的作用。結果在對抗胃潰瘍方面水溶液部分與揮髮油部分作用相當，在抑制腸蠕動方面揮髮油部分效果略佳，在抗炎作用方面水溶液部分和揮髮油部分作用相近，在利尿作用方面揮髮油部分作用略強。結論認為蒼朮的揮髮油和水溶性成分均有一定的藥理作用。
上述五味中藥均含有揮髮油，在設計提取工藝時，我們分別進行了兩種提取方法的藥效實驗，A法為用水蒸氣蒸餾法提取的揮髮油部分，B法為採用傳統水煎醇沉工藝提取後的幹浸膏部分。
藥效實驗方法取ICR雄性小鼠46隻，按體重隨機分為4組，每組10-13隻動物。受試樣品和陽性藥(百優解)灌胃給藥，連續7天，末次給藥後1小時將動物迅速斷頭，取腦，乾冰速凍，存於-18℃。腦組織中單胺類神經遞質的含量測定參照文獻螢光分光光度法進行，腦組織中單胺氧化酶活性測定按試劑說明書進行。結果見表17。
表17 不同提取部位對正常小鼠神經遞質的影響

與正常對照組比，*P＜0.05，**P＜0.001由表17可見B法可升高MAO活性，增加腦內5-TH減少5-HIAA，與正常對照組比P＜0.05或P＜0.001。陽性對照藥百優解也顯示了升高MAO，降低5-HIAA的作用。除了上述藥效試驗結果，同時參照文獻報導，廣藿香、蒼朮(麩炒)、陳皮的水溶性部分均對胃腸道有較好的療效。豆蔻和草豆蔻的水溶性部分也有燥溼健脾、促進胃液分泌，增進胃腸蠕動的療效，與藥效試驗結果一致。因此，本發明的提取工藝採用水提醇沉的工藝路線。
由於A法也能夠提取這些藥材的有效成分，只是經過篩選之後認為它不優於B法；所以實際上A法也適宜本發明的製備。
(三)提取工藝技術條件的研究1.廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻、蒼朮(麩炒)、水提取條件的優選(1)正交試驗以上五味藥，稱取廣藿香18g、陳皮6g、豆蔻9g、草豆蔻9g、蒼朮(麩炒)12g，共計54g，9份，按表18、表19試驗條件安排試驗，提取液分別合併、濃縮，減壓乾燥(70℃)得幹浸膏。測定出膏率和橙皮苷含量(HPLC法)，並對橙皮苷含量進行方差分析，結果見表20。
表18 因素水平表

表19 正交試驗表

表20 方差分析表

由表19、20可知，A因素(加水量)對結果無顯著影響，確定A3(加水量14倍)為最佳；B因素(提取時間)對結果無顯著影響，確定B3(提取2.0小時)為最佳；C因素(提取次數)對結果無顯著影響，以C3(提取4次)為最佳；故最佳條件為A3B3C3，也即藥材加14倍量水，提取4次，每次2小時。
(2)水提最佳條件驗證實驗方法稱取廣藿香180g、陳皮60g、豆蔻90g、草豆蔻90g、蒼朮(麩炒)120g，共計540g，3份，按最佳條件提取，提取液濃縮，減壓乾燥，測定橙皮苷含量和出膏率，結果見表21。
表21 水提驗證實驗結果

由表21結果可知，廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻、蒼朮(麩炒)的水提取工藝穩定。
三、分離、純化、濃縮與乾燥工藝的研究(一)分離與純化工藝研究1.水提液醇沉濃度的比較試驗取廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻、蒼朮(麩炒)合煎濃縮藥液(每ml相當1g藥材)50ml，三份，分別加乙醇至含醇量分別達60％、70％和80％，冷藏過夜，取上清夜回收乙醇至無醇味，減壓乾燥後，測定得膏率和橙皮苷含量。結果見表22。
表22 醇沉濃度的比較試驗結果

由表22結果可見，70％醇沉和80％醇沉橙皮苷含量相差不多，出膏率依乙醇濃度的升高而降低，兼顧生產成本，故擬採用70％醇沉工藝去除雜質。
2.70％醇沉時藥液濃縮程度的比較取相當100g藥材的合煎藥液3份，分別按下表中濃度濃縮，測定相對密度，加乙醇至含醇量達70％，冷藏過夜，取上清夜回收乙醇至無醇味，減壓乾燥後，測定得膏率和橙皮苷含量。
表23 藥液濃縮程度的比較

由表23結果可見，橙皮苷的含量隨藥液的濃縮程度的升高而有所下降，出膏率隨藥液濃縮程度的提高而下降，為了保證橙皮苷的含量，故選擇藥液濃縮至相對密度1.04時(0.5∶1)，加乙醇使含醇量達70％的方法來去除雜質。
(二)濃縮與乾燥工藝研究本品乾燥工藝考察了噴霧乾燥法和真空減壓乾燥法，方法如下真空乾燥法取醇沉後濃縮後藥液200ml(含藥200g)，繼續濃縮至相對密度1.32，進行真空乾燥(70℃，0.09MPa)，收得率為16.25％。
噴霧乾燥法取醇沉濃縮後藥液200ml(含藥200g)，相對密度1.06，過100目篩(有部分不溶物)，進行噴霧乾燥(壓力1.4kg/cm2，進口溫度180℃，出口溫度75℃)，噴霧時觀察到粉末在乾燥器中粘壁現象較嚴重，收得率只有10％。
根據上述試驗結果，本品的乾燥不適用於噴霧乾燥法，故選擇真空乾燥法。
四、製劑成型工藝研究1.壓片用輔料品種及用量的選擇(1)填充劑品種選擇的預試驗方法取提取物適量，按處方比例分別加入預膠化澱粉、乳糖、糊精等輔料混勻，用95％乙醇制粒，烘乾，整粒，加少量硬脂酸鎂，壓片。測定片劑的硬度、崩解度，並結合片劑成型情況考察不同填充劑品種和用量對片劑成型的影響。輔料種類及試驗結果見表24。
表24 填充劑品種和用量的選擇


注「-」因片劑成型不好，未作其它測定。
從表24可知用澱粉(2號)和糊精(3號)作填充劑制粒時成型性不好，故不採用；而用乳糖(4號)或乳糖加糊精(5號)作填充劑比較適宜。
(2)崩解劑、填充劑與潤滑劑品種與用量的正交試驗為了進一步篩選片劑輔料的最佳配方，又對片劑的崩解劑、填充劑與潤滑劑品種與用量進行正交試驗。方法取提取物適量，按表25的因素水平和表26的試驗條件安排試驗，分別加入各種崩解劑和填充劑，混勻，用95％乙醇制粒，烘乾，整粒，加入潤滑劑，壓片。測定片劑的硬度、崩解時限、脆碎度和吸溼性(室溫，相對溼度75％，24小時)，並對吸溼性結果進行方差分析，結果見表27。
表25 因素水平表

表26 正交試驗表


表27 吸溼性結果方差分析表

*F1-0.05(2，2)＝19.0；**F1-0.01(2，2)＝99.0由表26、27試驗結果可見，崩解時限在4-10分鐘之內，均在規定範圍之內，故未作統計學處理；吸溼性結果經統計學處理，A因素(崩解劑的種類)對結果有顯著性影響；B因素(填充劑)對結果有非常顯著的影響；C因素(潤滑劑)對結果無明顯影響。此外，片劑的硬度和脆碎度指標之間有交互影響，從本試驗結果看二者未能達到統一，即有的樣品硬度好而脆碎度差，有的樣品脆碎度好而硬度較差，需要進一步調節片劑的配方。
(3)片劑處方的調整與確定根據上述片劑配方的試驗結果，綜合考慮崩解劑、填充劑及其其它輔料的作用，經進一步實驗確定下列處方藥材提取物 40-50％乳糖30-40％糊精14％羥丙纖維素 5％微晶纖維素 1％微粉矽膠0.6％硬脂酸鎂0.4％上述配方中低取代-羥丙基纖維素主要用作片劑的崩解劑和粘合劑，使片劑易於成型、崩解迅速，長期保存崩解度不受影響；微晶纖維素具有賦型、粘合、吸水膨脹等作用，可用作片劑的粘合劑、崩解劑和填充劑，調節其用量可改善片劑的硬度和脆碎度。按上述處方製備片劑1000片，測定結果硬度為6.58，脆碎度為0.28％，崩解時限15分鐘，吸溼率(室溫，相對溼度75％，24小時)5.75％。片劑的各項指標均符合要求。
2.薄膜包衣工藝及抗吸溼試驗包衣材料LE(胃溶型)包衣材料，天津市愛勒易醫藥材料科技有限公司提供。
工藝條件包衣劑加70％乙醇攪拌45分鐘至包衣劑完全溶散。包衣片床溫度46+2℃，進風溫度48+2℃，霧化壓力0.2-0.25mpa.s，包衣鍋轉速8-12rpm。
吸溼試驗取素片和包衣片各2片，精密稱重，置室溫下，保持相對溼度75％，每個24小時測定吸溼增重，計算累積增重率。重複2份。比較素片包衣後的抗吸溼效果。結果見表28。
表28 素片和包衣片累積增重率比較(％)

表28結果可見，素片包薄膜衣後吸溼情況明顯好於素片。
3.輔料來源及質量標準本品所用輔料來源及質量標準見表29。
表29 輔料來源及質量標準


4.轉移率試驗本方中陳皮(與製劑同批藥材)的主要有效成分橙皮苷含量為44.12mg/g，製劑中(0.33g陳皮/片)橙皮苷的含量為8.09mg/片，橙皮苷的轉移率為55.6％。
5.日服劑量的計算根據湯劑日服劑量18g，接處方量藥物投料所得成品量，計算片劑日服劑量為6片(含飲片18g)，一日3次，每次2片。
五、中試研究以處方量的10倍投料，考察三批中試生產工藝，結果見表30。
表30 三批中試生產結果

具體實施例方式本發明的實施例1稱取藥材廣藿香1000g、陳皮334g、豆蔻500g、草豆蔻500g和蒼朮(麩炒)666g，加14倍量藥材的水煎煮4次，每次2小時，合併4次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達70％，在5～10℃下冷藏24小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，在70℃下減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，加入輔料乳糖340g、糊精104g、羥丙纖維素40g、微晶纖維素8g、微粉矽膠4.8g、硬脂酸鎂3.2g，混勻，加適量乙醇制粒，乾燥(65℃)，壓製成1000片，每片0.8g，包薄膜衣，即得本發明的片劑。本產品口服，一次2片，一日3次。
本發明的實施例2稱取藥材廣藿香700g、陳皮200g、豆蔻300g、草豆蔻300g份和蒼朮(麩炒)400g，加8倍量藥材的水煎煮2次，每次1小時，合併2次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達50％，在5～10℃下冷藏20小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥(70℃)，幹膏粉碎成細粉，混勻，裝膠囊，即得到本發明的膠囊劑。
本發明的實施例3稱取藥材廣藿香1200g、陳皮400g、豆蔻700g、草豆蔻700g和蒼朮(麩炒)750g，加16倍量藥材的水煎煮6次，每次4小時，合併6次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達80％，在5～10℃下冷藏36小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥(70℃)，幹膏粉碎成細粉，然後加入阿司帕坦和乳糖適量，幹壓制粒即得本發明的顆粒劑。
本發明的實施例4稱取藥材廣藿香900g、陳皮300g、豆蔻400g、草豆蔻400g和蒼朮(麩炒)500g，加10倍量藥材的水煎煮3次，每次3小時，合併3次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達60％，在5～10℃下冷藏30小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，然後加入吐溫-80和丙二醇，混勻，用膠體磨研磨後壓製成軟膠囊，即得到本發明的軟膠囊製劑。
本發明的實施例5稱取藥材廣藿香700g、陳皮200g、豆蔻300g、草豆蔻300g份和蒼朮(麩炒)400g，加16倍量藥材的水煎煮6次，每次4小時，合併6次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達80％，在5～10℃下冷藏36小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥(70℃)，幹膏粉碎成細粉，加入溶劑和適量蜂蜜及山梨酸，即得本發明的口服液製劑。
本發明的實施例6稱取藥材稱取藥材廣藿香1200g、陳皮400g、豆蔻700g、草豆蔻700g和蒼朮750(麩炒)g，加8倍量藥材的水煎煮2次，每次1小時，合併2次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達50％，在5～10℃下冷藏20小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥(70℃)，幹膏粉碎成細粉，然後加入甘油並研勻後加入糖漿劑，即得本發明的糖漿劑。
權利要求
1.治療抑鬱症的藥物製劑，其特徵在於按照重量份計算，它由廣藿香700～1200份、陳皮200～400份、豆蔻300～700份、草豆蔻300～700份和麩炒蒼朮400～750份加適量輔料製備而成。
2.按照權利要求1所述的治療抑鬱症的藥物製劑，其特徵在於按照重量計算，它由廣藿香1000g、陳皮334g、豆蔻500g、草豆蔻500g和麩炒蒼朮666g加適量輔料製備而成。
3.按照權利要求1所述的治療抑鬱症的藥物製劑，其特徵在於所述的製劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊、口服液或糖漿劑。
4.如權利要求1～3中任意一項所述治療抑鬱症的藥物製劑的製備方法，其特徵在於稱取藥材廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻和麩炒蒼朮，加8～16倍量藥材的水煎煮2～6次，每次1～4小時，合併每次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達50～80％，在5～10℃下冷藏20～36小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，即得到本發明藥物的有效成分，將得到的藥物有效成分加入需要的輔料、按照常規方法製備成所需的製劑。
5.按照權利要求4所述治療抑鬱症的藥物製劑的製備方法，其特徵在於稱取藥材廣藿香1000g、陳皮334g、豆蔻500g、草豆蔻500g和麩炒蒼朮666g，加14倍量藥材的水煎煮4次，每次2小時，合併4次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達70％，在5～10℃下冷藏24小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，加入輔料乳糖340g、糊精104g、羥丙纖維素40g、微晶纖維素8g、微粉矽膠4.8g、硬脂酸鎂3.2g，混勻，加適量乙醇制粒，乾燥，壓製成1000片。
6.按照權利要求4所述治療抑鬱症的藥物製劑的製備方法，其特徵在於稱取藥材廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻和麩炒蒼朮，加8倍量藥材的水煎煮2次，每次1小時，合併2次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達50％，在5～10℃下冷藏20小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，混勻，裝膠囊，即得到本發明的膠囊劑。
7.按照權利要求4所述治療抑鬱症的藥物製劑的製備方法，其特徵在於稱取藥材廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻和麩炒蒼朮，加16倍量藥材的水煎煮6次，每次4小時，合併6次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達80％，在5～10℃下冷藏36小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，然後加入阿司帕坦和乳糖適量，幹壓制粒即得本發明的顆粒劑。
8.按照權利要求4所述治療抑鬱症的藥物製劑的製備方法，其特徵在於稱取藥材廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻和麩炒蒼朮，加10倍量藥材的水煎煮3次，每次3小時，合併3次得到的煎液，濾過，煎液濃縮至50℃時測相對密度為1.04～1.05的清膏，加乙醇使含醇量達60％，在5～10℃下冷藏30小時，濾過，濾液回收乙醇，並濃縮至50℃時測相對密度為1.32～1.35的清膏，減壓乾燥，幹膏粉碎成細粉，然後加入吐溫-80和丙二醇，混勻，用膠體磨研磨後壓製成軟膠囊，即得到本發明的軟膠囊製劑。
全文摘要
本發明是一種治療抑鬱症的藥物製劑及其製備方法，它由廣藿香、陳皮、豆蔻、草豆蔻和蒼朮製備而成，本產品具有醒脾化溼，理氣解鬱的功效，主要用於溼濁困脾、氣機鬱滯所致的情緒鬱悶、低落，思維遲鈍，食少納呆，夜睡不實、倦怠乏力，舌苔白膩或灰膩，脈滑或弦滑等症的治療，與現有使用的抗抑鬱症藥物相比，本產品具有抗抑鬱效果顯著、且毒副作用小，無禁忌症、患者易於接受，治療後不易復發且質量可控，性能穩定的優點。
文檔編號A61P25/00GK1736472SQ20051020047
公開日2006年2月22日 申請日期2005年8月17日 優先權日2005年8月17日
發明者黃璐琦, 付梅紅, 楊樺, 聶淑琴, 王永炎 申請人:貴州同濟堂製藥有限公司