一種藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法
2023-05-08 19:45:31 1
專利名稱：：一種藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法
技術領域：
：本發明涉及一種藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法，具體地說是用氣相色譜一質譜聯用指紋圖譜方法來測定藿香正氣軟膠囊中有效成分的一種方法，屬於中藥現代化領域。
背景技術：
：藿香正氣處方出自《太平惠民和劑局方.巻二》所載藿香正氣散，主要藥物組成有藿香、蒼朮、半夏、厚樸、大腹皮、白芷、紫蘇、茯苓、陳皮、桔梗、甘草。具有解表和中，芳香化濁的功效，主要用於外感風寒，內有溼滯或感受暑溼，外見寒熱頭痛等表證，內有胸腹滿悶、腹痛洩瀉，口淡苔膩，脈濡緩等溼阻之證。本方常用於胃腸型感冒、急性胃腸炎或消化不良等具有上述證候者。天津中新藥業集團股份有限公司達仁堂製藥廠首家研發了我國第一個藿香正氣軟膠囊製劑。目前，藿香正氣軟膠囊廣泛用於現代醫學的胃腸型感冒、急慢性腸炎等，被列為全國中醫醫院急診必備中成藥，國家中藥保護品種。中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特徵性的某類或數類成分的色譜或光譜的圖譜。在現階段中藥的有效成分絕大多數沒有明確的情況下，中藥指紋圖譜對於有效控制中藥材或中成藥的質量具有重要的意義。日本漢方藥主要生產企業在20世紀80年代就已經在企業內部採用高效液相指紋圖譜控制質量。美國FDA最近幾年制定的植物草藥指南中己經明確把指紋圖譜作為混合物質群的質量控制方法(FDA.Guidanceoflndustry:BotanicalDrug(Draft).2004)。隨著研究的深入，人們發現，作為中醫理論的實踐產物，中藥，尤其是複方中藥，其中所含的任一成分都不能代表其整體療效。人們逐漸認一識到，現行的參照西藥(合成藥)質量控制模式的質量標準不能恰當地反映中藥內在的質量。從發展趨勢看，從現行的質量控制模式向一種綜合的、宏觀的、可量化的鑑別與主要有效成分含量測定結合己是發展的趨勢。對於化學藥品而言，其藥效成分為結構清晰的單一化合物，構效關係明確，其含量和純度直接表達其有效及安全性。然而，中醫用藥的特點是複方配伍，任何單一的有效或活性成分的含量高低。均不能表達其整體的療效。例如，黃芪所含的黃芪甲苷(aastmgalosideIV)是當前被選擇為質量標準的鑑別和含量測定的最為常見的目標，但並沒有依據證明黃芪甲苷與黃芪的功能主治的明確聯繫。同樣，黃連、黃柏、三棵針均含小檗鹼，一般都以它作為檢測的目標，但是三者的功能主治卻截然不同。複方製劑的情況就更加複雜。中醫這種不是一對一的非線性的理論和實踐說明中藥質量應該採用某種宏觀的綜合的質量評價手段。藿香正氣源於宋代《太平惠民和劑局方》，被稱為"祛溼聖藥"。達仁堂採用先進工藝，製成同類品種中全國第一個軟膠囊劑型，很好地保存了揮髮油，保證了療效。藿香正氣軟膠囊臨床上可應用於胃腸型感冒、功能性消化不良、低熱、小兒厭食、溼疹、老年性腹脹等多種疾病。其治療效果已經得到臨床的驗證。是否能夠保證藥物質量以及有效成分的含量，是決定藿香正氣軟膠囊療效的基礎。目前的藿香正氣軟膠囊的標準中僅僅對厚樸酚和和厚樸酚的含量進行控制，這顯然對於控制藿香正氣軟膠囊的內在質量而言是遠遠不夠的。必須對其物質群整體予以控制，從整體上有效表徵藿香正氣軟膠囊的質量。指紋圖譜作為中草藥及其提取物質量控制的方法，已經成為國際共識。現在，對藿香正氣軟膠囊中化學組分為指標的指紋圖譜建立方法未見報導。藥理實驗表明，藿香正氣軟膠囊中的揮發性成分具有顯著的藥理活性，其中，廣藿香油具有顯著的藥理作用，廣藿香的水提物、去油水提物和揮髮油均可抑制離體兔腸的自發收縮性和乙醯膽鹼、氯化鋇引起的痙攣性收縮，對乙醯膽鹼和氯化鋇引起的收縮作用強度順序是揮髮油〉去油水提物>水提物。廣藿香油對胃排空、正常小鼠腸推進運動以及新斯的明引起的小鼠腸推進運動無影響且協同番瀉葉引起的小鼠腹瀉。廣藿香油還可抑制冰醋酸引起的內臟絞痛。廣藿香水提物、揮髮油以及去油其他部分均能不同程度地增加胃酸分泌，提高胃蛋白酶活性，增強胰腺分泌澱粉酶的功能，提高血清澱粉酶活力。廣藿香油對沙門氏菌、大腸桿菌、志賀菌、金黃色葡萄球菌等均有一定抑制作用。廣藿香油還具有較強的抗瘧作用，且對伯氏瘧原蟲抗青蒿酯鈉株有明顯的選擇性抑制作用和較強的逆轉抗性作用。莫小路等就廣藿香油對13種常見植物病原真菌的抑制活性進行了研究，結果顯示廣藿香油對受試的13種植物病原真菌均有不同程度的抑制作用。廣藿香油對角叉菜膠、蛋清致大鼠足腫脹、二甲苯致小鼠耳廓腫脹等急性炎症都有明顯的抑制作用，對由物理、化學刺激引起的疼痛有較強的鎮痛作用，對由2，4-二硝基苯酚引起的大鼠發熱有一定解熱作用。(任守忠，靳德軍等，廣藿香藥理作用研究進展，中國現代中藥，2006，8(8):27-29)藥理實驗還表明，紫蘇葉油也具有顯著的藥理作用，紫蘇葉揮髮油具有解熱作用，且解熱效果優於阿司匹林。具有抗微生物和抗菌作用，對自然汙染的黴菌的抑制力明顯優於尼泊金乙酯和苯甲酸，對革蘭氏陽性菌核革蘭氏陰性菌的活性具有良好的抑制作用。具有止嘔作用，對洋地黃酊引起的家鴿嘔吐具有抑制作用。具有抗腫瘤作用，紫蘇葉揮髮油具有抑制畸變腺囊病灶發展的作用，是結腸癌初期的抑制劑。紫蘇葉揮髮油還具有鎮咳、化痰、降血脂作用。(顧文娟，張建梅等，紫蘇的藥理研究進展，黑龍江畜牧獸醫，2006，8:26_28)為了更有效的對藿香正氣軟膠囊中的揮發性成分進行質量控制，本發明採用氣相色譜一質譜聯用法(使用電子轟擊源)作為藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法，氣相色譜一質譜聯用法比單純的氣相色譜法具有更強的定性優勢，它不但採用保留時間定性，而且釆用質譜法進行定性，可以明確所研究的主要成分。在指紋圖譜研究中，採用氣相色譜一質譜聯用法可以明確判斷批間的異同處，找出相同與相異的成分，從而進一步控制產品質量，保證產品療效。該方法用於藿香正氣軟膠囊質量控制迄今未見報導。
發明內容本發明的目的是提供一種藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法，通過此測定方法，可以控制藿香正氣軟膠囊質量。為實現上述目的，本發明採用以下技術方案-一種藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法，步驟如下-(a)供試品的製備取藿香正氣軟膠囊內容物，置容量瓶中，加有機溶劑溶解，定容，即為供試品；(b)參照物溶液的製備精密量取環已酮、正十二垸、正十三烷、正十四烷、正十六垸或正十八烷，作為參照物溶液(內標)；(C)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細管柱，聚矽氧垸柱為固定相；程序溫度初始溫度40~100°C，以每分鐘26°C的速率升溫至230~280°C，氣化室溫度為230~280°C，接口溫度為230~280°C，質荷比範圍為101000;(d)測定方法採用氣質聯用測定；吸取供試品溶液，注入氣相色譜一質譜聯用儀，測定，記錄l小時色譜圖；廣藿香醇峰面積作為l,計算峰面積相對比值。本發明優選通過下列步驟實施所述(a)供試品的製備中，有機溶劑為石油醚、正己烷、乙醚、乙酸乙酯、苯、甲苯或二甲苯。所述聚矽氧垸柱為交聯苯基聚矽氧烷柱。所述參照物溶液選自環己酮、正十二垸、正十三垸、正十四垸、正十六垸或正十八垸中的一種，其目的是以此為參照，標定出峰的相對時間。進一步優選的藿香正氣軟膠囊指紋圖譜測定方法，方法如下(a)供試品的製備取藿香正氣軟膠囊內容物，精密稱定，加乙酸乙酯，加熱至沸，放冷，置容量瓶中，定容，即為供試品；(b)參照物溶液的製備精密量取正十四垸適量，作為參照物溶液(內標)；(C)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細管柱，交聯5%苯基甲基聚矽氧烷柱為固定相；程序溫度初始溫度5070'C，以每分鐘35。C的速率升溫至24027(TC，氣化室溫度為240270。C,接口溫度為240~270°C，質荷比範圍為20750;(d)測定方法採用氣質聯用測定；吸取供試品溶液，注入氣相色譜一質譜聯用儀，測定，記錄l小時色譜圖；廣藿香醇峰面積作為l，計算峰面積相對比值。最佳的藿香正氣軟膠囊指紋圖譜測定方法，方法如下(a)供試品的製備取藿香正氣軟膠囊內容物約10g，精密稱定，加正已烷2ml，緩緩加熱至沸，並保持微沸3小時，放冷；再用正已垸定容至5ml，混勻，即為供試品；(b)參照物溶液的製備精密量取正十四烷適量，加正已烷製成每lml含15mg的溶液，作為參照物溶液；(c)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細管柱，交聯50%苯基甲基聚矽氧烷柱為固定相；程序溫度初始溫度6(TC，以每分鐘4'C的速率升溫至ll(TC，再以每分鐘rC的速率升溫至120°C，再以每分鐘5'C的速率升溫至18(TC，最後以每分鐘8。C的速率升溫至250°C,並保持20min;氣化室溫度為25(TC，接口溫度為25(TC，離子源(EI)溫度為200°C;分流比為50:1;檢測器電壓為1.2kV，質荷比範圍為33500;(d)測定方法採用氣質聯用測定；吸取供試品溶液，注入氣相色譜一質譜聯用儀，測定，記錄1小時色譜圖；供試品指紋圖譜中正十四垸參照物峰為S峰，計算相對保留時間；廣藿香醇峰面積作為l，計算峰面積相對比值。一種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法，將藿香正氣軟膠囊採用上述方法測定，將待測產品指紋圖譜與所述指紋圖譜進行比對，相似度在卯100%，認為所述待測產品的質量合格。一種藿香正氣軟膠囊，將其採用上述測定方法測定，所得指紋圖譜有49個共有指紋峰(含內標參照物峰)，分別為1號峰相對保留時間0.386RSD%0.442號峰相對保留時間0.429RSD%0.343號峰相對保留時間0.461RSD%0.394號峰相對保留時間0.565RSD%0.185號峰相對保留時間0.576RSD%0.286號峰相對保留時間0.791RSD%0.137號峰相對保留時間0.803RSD%0.168號峰相對保留時間0.847RSD%0.109號峰相對保留時間1.000RSD%—(為內標，正十四烷)10號峰相對保留時間1.067RSD%0.1111號峰相對保留時間1.158RSD%0.1712號峰相對保留時間1.175RSD%0.1913號峰相對保留時間1.212RSD%0.1914號峰相對保留時間1.221RSD%0.1915號峰相對保留時間1.286RSD%0.2316號峰相對保留時間1.308RSD%0.1417號峰相對保留時間1.348RSD%0.2218號峰相對保留時間1.384RSD%0.1619號峰相對保留時間1.498RSD%0.2720號峰相對保留時間1.512RSD%0.2721號峰相對保留時間1.526RSD%0.2622號峰相對保留時間1.559RSD%0.2623號峰相對保留時間1.604RSD%0.3924號峰相對保留時間1.682RSD%0.1225號峰相對保留時間1.695RSD%0.1026號峰相對保留時間1.709RSD%0.0927號峰相對保留時間1.748RSD%0.1028號峰相對保留時間1.802RSD%0.1829號峰相對保留時間1.822RSD%0.1530號峰現對保留時間1.837RSD%0.2031號峰相對保留時間1.873RSD%0.1932號峰相對保留時間1.884RSD%0.2033號峰相對保留時間1.906RSD%0.2434號峰相對保留時間1.917RSD%0.2435號峰相對保留時間1.935RSD%0.2536號峰相對保留時間1.971RSD%0.3437號峰相對保留時間1.996RSD%0.3238號峰相對保留時間2.127RSD%0.3339號峰相對保留時間2.135RSD%0.3140號峰相對保留時間2.225RSD%0.4041號峰相對保留時間2.237RSD%0.3942號峰相對保留時間2.248RSD%0.4043號峰相對保留時間2.283RSD%0.3944號峰相對保留時間2.294RSD%0.4145號峰相對保留時間2.316RSD%0.4446號峰相對保留時間2.340RSD%0.3847號峰相對保留時間2.668RSD%0.3848號峰相對保留時間2.683RSD%0.5949號峰相對保留時間2.887RSD%0.62其中單峰面積超過總峰面積5%的吸收峰有11個，分別為1號峰，相對保留時間0.386，RSD%0.442號峰，相對保留時間0.429，RSD%0.347號峰，相對保留時間0.803，RSD%0.1610號峰，相對保留時間1.067，RSD%0.1111號峰，相對保留時間1.158，RSD%0.1718號峰，相對保留時間1.384，RSD%1.1619號峰，相對保留時間1.498，RSD%0.2720號峰，相對保留時間1.512，RSD%0.2722號峰，相對保留時間1.559，RSD%0.2627號峰，相對保留時間1.748，RSD%0.1046號峰，相對保留時間2.340，RSD%0.58通過NIST質譜圖檢索以及査閱文獻資料共鑑定出主要化學成分27個，詳見表1。表l主要化學成分鑑定表tableseeoriginaldocumentpage12的相對保留時間與相對峰面積，以相對保留時間與相對峰面積的平均失量作為對照指紋圖譜數據；以相對峰面積的平均失量作為對照，通過夾角餘弦與相關係數兩種算法計算各批次樣品指紋圖譜與對照指紋圖譜間的相似度，各批次樣品指紋圖譜與對照指紋圖譜具有良好的相似性。具有特徵性的11個共有峰，1號峰、2號峰、7號峰、IO號峰、ll號峰、18號峰、19號峰、20號峰、22號峰、27號峰、46號峰進行峰面積的比值比較；其中1號峰、2號峰、7號峰、IO號峰來源於紫蘇葉油，ll號峰、18號峰、19號峰、20號峰、22號峰、27號峰、46號峰來源於廣藿香油。單峰面積佔總峰面積大於5%，而小於10%的共有峰為18號峰、27號峰、46號峰；IO號峰單峰面積佔總峰面積在5%附近，其它各峰單峰面積佔總峰面積均小於5%。供試品圖譜中各特徵性共有峰面積的比值與指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，18號峰、27號峰(單峰面積佔總峰面積在5%10%)其差值不大於±30%;10號峰(單峰面積佔總峰面積在5%附近)其差值不大於±50%;1號峰、7號峰、11號峰、19號峰、20號峰、22號峰(單峰面積佔總峰面積在1%3%)，其差值不大於±80%;2號峰(單峰面積佔總峰面積小於1%)，其差值不大於土100%。相似度確定採用相同方法測定，計算相似度，相似度90%100%範圍內，確認為相同指紋圖譜。本發明優點如下-(1)以藿香正氣軟膠囊中主要有效成分紫蘇油和廣藿香油為指標建立起來的氣質聯用指紋圖譜，代表了藿香正氣軟膠囊的藥理活性，能有效地表徵藿香正氣軟膠囊的質量。從而實現對藿香正氣軟膠囊的化學成分進行檢測，對中藥質量進行全面控制。(2)將藿香正氣軟膠囊中揮發性組分的指紋圖形作為一個整體看待，注重各個構成指紋特徵峰的前後順序和相互關係，注重整體特徵，避免了因只測定一、二個化學成分而判定藿香正氣軟膠囊整體質量的片面性，同時也防止為少數成分合格而人為處理的可能。本發明為完整、準確評價藿香正氣軟膠囊的質量提供了新的標準，為有效控制藿香正氣軟膠囊的質量做出貢獻。(3)本發明具有穩定、精密度高、重現性好的特點。本發明將指紋圖譜技術與氣質聯用儀器相結合，對測定組分進行定性定量的測定，其測定方法可作為藿香正氣軟膠囊成分測定的標準指紋圖譜，以鑑別其有效成分。下面結合較佳實施方式和附圖對本發明作進一步的解釋說明，對本發明不構成限制。對於本領域技術人員而言，根據本發明所公開的技術內容，本領域技術人員將很清楚本發明的其它實施方案，本發明實施例僅作為示例。在不違反本發明主旨及範圍的情況下，可對本發明進行各種改變和改進，例如，使用不同的檢測儀器所獲得的測定結果可能有所不同，但只要使用本發明所述的質量控制方法，均在本發明保護範圍之內。圖1為10批次樣品譜圖比較，譜圖基本一致，表明有效成分含量基本一致。圖2為對照指紋圖譜。圖3為全部18批藿香正氣軟膠囊供試品聚類分析結果圖。圖4為實施例2中3號樣品(批號為F292021)的指紋圖譜。圖5為實施例2中5號樣品(批號為2920098)的指紋圖譜。圖6為實施例2中8號樣品(批號為D292014)的指紋圖譜。具體實施例方式以下實施例使用的儀器和試劑1.島津氣相色譜-質譜聯用儀(GCMS-QP2010)及GCMSsolutions工作站DB-5MS柱(30mX0.25mmX0.25um),安捷倫科技有限公司DB-17MS柱(30mX0.25腿X0.25nm)，安捷倫科技有限公司2.正已烷(分析純，天津市北方天醫化學試劑廠)正十四烷(天津市軒昂科工貿有限公司)乙酸乙酯(分析純，天津市北方天醫化學試劑廠)環已酮(天津市科密歐化學試劑開發中心)3.供試品2005年、2006年、2007年天津市中新藥業集團股份有限公司達仁堂製藥廠生產的藿香正氣軟膠囊樣品實施例l:藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定一.供試品的製備分別取不同批次藿香正氣軟膠囊10批次(批號分別為F292004、F292007、F292021、F2920076、F2920098、F2920159、E292003、D292014、D291015、E291656，順次編號為110)，分別取每批次藿香正氣軟膠囊內容物約10g，精密稱定，加正已垸2ml，緩緩加熱至沸，並保持微沸3小時，放冷。將正已垸液轉入10ml具塞刻度試管中，用少量正己烷清洗提取器23次，清洗液併入刻度試管中，精密加入參照物溶液(內標)lml，再用正已垸定容至5ml，混勻，即得。二.參照物溶液的製備精密量取正十四垸適量，加正已烷製成每lml含15mg的溶液，作為參照物溶液(內標)。三.測定採用氣相色譜一質譜聯用法進行測定色譜條件及系統適用性試驗彈性石英毛細管柱(柱長30m，內徑0.25111111，膜厚度0.25pm)DB-17MS(交聯50%苯基甲基聚矽氧烷為固定相)；程序溫度初始溫度60°C，以每分鐘4'C的速率升溫至ll(TC，再以每分鐘rC的速率升溫至120°C，再以每分鐘5'C的速率升溫至180°C，最後以每分鐘8'C的速率升溫至25(TC，並保持20min;氣化室溫度為25(TC，接口溫度為250'C，離子源(EI)溫度為200°C;分流比為50:1;檢測器電壓為1.2kV，質荷比範圍為33500。測定方法吸取供試品溶液llU，注入氣相色譜一質譜聯用儀，測定，記錄l小時色譜圖。供試品指紋圖譜中正十四烷參照物峰為S峰，計算相對保留時間；廣藿香醇峰面積作為l,計算峰面積相對比值。四.結果10批次樣品的數據見表2和表3，相似度均》0.98，圖譜參見圖1和圖2。表2各共有峰相對保留時間tableseeoriginaldocumentpage15tableseeoriginaldocumentpage16462.3462.3292.3392.3452.3452.3452.3492.3452.3272.3272.3400.3759472.6792.6502,6692.6772.6772.6772.6822.6782.6482.6482.6680.5313482.6952.6632.6842.6942.6932.6922.6982.6942.6602.6612.6830.5866492.9022.8652.8882.8992,8982.8972.9042.8992.8612.8612.8870.6210表3相對峰面積與相似度評價結果峰號樣品號賄離離)1234567891010.04880.06780.11440.09880.04200.09650.09870.08470.07880.08970.082020,01890.03080.05240.04650,02590.04610.04670.04060.02960.03410.037230.00530.00600.00830.00680.00320.00710.00720.00600.00600.00650.006240.05350.07150.01850.01750.05850.01800.01650.01630.03410.03910.034450.02560.02290.01830.01640.01970.01560.01650.01580.00970.01100.017160.03810.05700.00750.00730.04360.00800.00730.00500.02630.03190.023270.11550.16420.14040.簡0.13230,12410.12310.12550.畫0.12560.128880.00770.01220.01410.01460,01080.01390.01330.01310.01340.01550,012991.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00001.0000100,22720.30610.22820.22190.22320.21810.21420.22200.22010.24300.2324110.12470,17540.13420.12820.12870.13670.13300.13210.16320.08820.1344120.01100.00560.01210.01030.00760.01460.01210.01320.00700.00670.0100130.01550.01180.02200.01730.01210.02360.02180.02090.01500.00810.0168140.04300.04960.04370.03880.04730.04750.04080.04220.05290.05150.0457150.00600,01200.02560.02320.00960.02410.02310.01900.00190.00200.0147160,07060.07140.07270.06990.06550.07300.06750,06640.05720.06120.0676170.醒0,12190.14220.12670,10900.13610.13580.13850.10390.11340.1244180.22300.29920.30470.28460.27380.29920.29260.29240.25910.29850.2827190.11990.17160.14680.14220.13790.15300.14910.14720.13940.16460.1472200.09430.12290.10940.10460.腦0.11010.10930.鹿30.10270.10590.1071210.02760,02580.03030.02870,02440.03110.03110.03180.02110.02360.0276220.06500.09320.06860.06660.06430.07130.07060.06730.07820.04970.0695230.06620.10360.07430.06440.06990.08330.07530.07220.13660.13400.0880tableseeoriginaldocumentpage18一.供試品的製備分別取不同批次藿香正氣軟膠囊8批次(批號分別為F292004、F292007、F292021、F2920076、F2920098、F2920159、E292003、D292014，樣品編號順次為18)，分別取每批次藿香正氣軟膠囊內容物約10g，精密稱定，加乙酸乙酯2ml，緩緩加熱至沸，並保持微沸3小時，放冷。將乙酸乙酯液轉入10ml具塞刻度試管中，用少量乙酸乙酯清洗提取器23次，清洗液併入刻度試管中，精密加入參照物溶液(內標)lml，再用乙酸乙酯定容至5ml，混勻，即得。二.參照物溶液的製備精密量取環己酮適量，加乙酸乙酯製成每lml含15mg的溶液，作為參照物溶液(內標)三.測定採用氣相色譜一質譜聯用法進行測定色譜條件及系統適用性試驗彈性石英毛細管柱(柱長30m，內徑0.25mm，膜厚度0.25pm)DB-5MS(交聯70%苯基甲基聚矽氧烷為固定相)；程序溫度初始溫度60°C，以每分鐘4。C的速率升溫至ll(TC，再以每分鐘1。C的速率升溫至120°C，再以每分鐘5。C的速率升溫至18(TC，最後以每分鐘8'C的速率升溫至25(TC，並保持20min;氣化室溫度為250。C，接口溫度為250。C，離子源(EI)溫度為200°C;分流比為50:1;檢測器電壓為1.2kV，質荷比範圍為33500。測定方法吸取供試品溶液lyl，注入氣相色譜一質譜聯用儀，測定，記錄l小時色譜圖。供試品指紋圖譜中環己烷參照物峰為S峰，計算相對保留時間；廣藿香醇峰面積作為l，計算峰面積相對比值。四.結果1.共有峰相對保留時間考察將8批藿香正氣軟膠囊供試品圖譜與指紋圖譜共有峰相對保留時間進行統計，結果見表l。結果表明，共有指紋峰相對保留時間一致，RSD<3%。表4共有峰相對保留時間考察tableseeoriginaldocumentpage19tableseeoriginaldocumentpage20tableseeoriginaldocumentpage212.峰面積相對比值比較將8批藿香正氣軟膠囊供試品圖譜與指紋圖譜特徵指紋峰面積相對比值進行統計，結果見表5。結果表明，除批號為2920098的供試品圖譜(5號樣品)中2號峰(差值為156%〉100%)、批號為E292003的供試品圖譜(7號樣品)中7號峰(差值為-90%>-80%)超出藿香正氣軟膠囊指紋圖譜檢測標準(草案)中規定的範圍要求外，其它批次供試品圖譜中各峰均符合要求。表5峰面積相對比值比較tableseeoriginaldocumentpage21tableseeoriginaldocumentpage224.相似度計算以藿香正氣軟膠囊指紋圖譜檢測標準(草案)中指紋圖譜共有模式(平均失量)為參照，通過相關係數與夾角餘弦兩種算法進行相似度計算。8批藿香正氣軟膠囊供試品檢測數據及相似度計算結果見表7、表8，結果表明，批號為F292021、2920098、D292014三批供試品圖譜與指紋圖譜共有模式(平均失量)間的相似度<0.9,不符合要求；其它各批供試品圖譜與指紋圖譜間的相似度〉0.9，均符合要求。表78批藿香正氣軟膠囊供試品檢測數據峰號樣品號124678指紋圖譜10.09440.08800.05690.08800.08760.07250.02840.01620.082020.10080.08750.05820.04450.08660.02960.01830.05830.037230細70.01090.00450.00630廁50.00540.01100.00270細240.07240.06360.04370.01680.01710.03280.01960細90.03440.04710.04820,02070.01680.00980.00980.04570.01620.017160.04660.04020.03520扁30.01560.02540.00770.01460.023270.22550.18610.13750.13020.09790,10450.01230.07150.128880.02980.02460,02140,01520.02310.01300.00540.02390.01299(S)1.0000l扁Ol扁Ol細Ol細Ol細Ol細Ol細Ol細O100.50520.46630.24240.22370.21750.21000.27650.23510.2324110.22870.23730.12730.13100.13090.19510.15970.14640.1344120.01090.00980.00870.01260扁20.00780.00890細30.0100130.01670.01260.01200.02130.01150.01550.01770.02560.0168140攝90.08090.03620.03790錢70.05240.08540.05870.0457150屈40.0272O.Ol卯0.02540.01720.00440.00000.01510.0147160.11870.11870.06480.07230.05250.05110.05910.05560.0676170,20200.20610,09610.13660.09700.10360.15550.10560.1244180.45230.45280.22220.28760.26950.24310.29970.27330.2827190.23940.23560.12360.14400.13850.13230.14170.14380.1472200.18020.18450.09620.10620.09790.10200.10950.10400.1071210.03540.03810.02100.03200.01900.02120.02510.01920.0276220.11990.12890.06650.06940.06440扁80.07760.07220扁5230.11010.11440.06360.06620.08330.12960.14990.10640.0880240.22290.21260.11040.07440.04250.24800.32770.25880.1621250.05420.06410.02640.02590.02190.02520.04280.02570.0270260.12230.12370.07860.07560馬20.08340.08490.07470細5270.66220.68580.37930.38380.37030.30910.36030.37450.3892280.03150.03140.01830.04940.01600.02130.01820.01620.0414290緒10扁20.00970扁70.01190.00%0.01650.01550.0104tableseeoriginaldocumentpage24聚類合併的距離尺度上，可以看出15號樣品與其它各批樣品的差距最大，然後是13、18號樣品與其它各批樣品存在差距。結果表明，聚類分析結果與相似度計算結果一致，13號樣品(批號為F292021)、15號樣品(批號為2920098)、18號樣品(批號為D292014)與其它各批樣品存在差異。6.圖譜考察為了找出差異存在的原因，將3號樣品(批號為F292021，圖4)、5號樣品(批號為2920098,圖5、8號樣品(批號為D292014，圖6)的供試品圖譜與藿香正氣軟膠囊指紋圖譜檢測標準(草案)中對照指紋圖譜(代表性樣品，批號為2920062)進行圖譜比較分析。結果表明，3號樣品(批號為F292021)、5號樣品(批號為2920098)、8號樣品(批號為D292014)的供試品圖譜與藿香正氣軟膠囊指紋圖譜檢測標準(草案)中對照指紋圖譜(代表性樣品，批號為2920062)間的差異，主要來源於圖譜中42號峰、44號峰與46號峰(廣藿香醇)間的相對峰值比。7.相似度再計算為了考察42號峰、44號峰對相似度影響的大小程度，將42號峰、44號峰剔除，進行相似度再計算(見表9、表IO)。結果表明，通過剔除42號峰、44號峰，相關係數法與夾角餘弦法兩種算法計算，相似度結果均>0.90;結果證明，42號峰、44號峰是造成批號為F292021、2920098、D292014三批供試品圖譜與指紋圖譜間存在差異的主要因素。表9相似矩陣(相關係數法)批號F2920212920098D292014指紋圖譜F2920211扁0.9780.9760.98129200980.9781扁0.9410.933D2920140.9760.9411細0.977指紋圖譜0.9810.9330.9771.000表10相似矩陣(夾角餘弦法)批號F2920212920098D292014指紋圖譜F2920211細0.9840.9820.98629200980.9841.0000.9570.951D2920140.9820.9571細0.983指紋圖譜0.9860.9510.9831細8.譜峰歸屬經譜庫檢索，42號峰為蒼朮醇(Hinesol)、44號峰為P-桉葉油醇(beta-Eudesmol)。蒼朮醇與e-桉葉油醇是蒼朮根莖中含有的主要化學成份，因此，認為42號峰、44號峰來源於藿香正氣軟膠囊處方中的藥味一蒼朮。五.結論通過指紋圖譜分析、相似度計算、聚類分析，證明批號為F292021、2920098、D292014三批供試品圖譜與指紋圖譜間存在差異。通過圖譜考察、相似度再計算、譜峰歸屬，發現造成批號為F292021、2920098、D292014三批供試品圖譜與指紋圖譜間存在差異的主要因素為來源於蒼朮中的主要化學成份蒼朮醇與e-桉葉油醇。介於以上分析結果，建議在生產過程中應該對蒼朮的質量進行控制。權利要求1.一種藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法，其特徵在於包括以下步驟(a)供試品的製備取藿香正氣軟膠囊內容物，置容量瓶中，加有機溶劑溶解，定容，即為供試品；(b)參照物溶液的製備精密量取有機溶劑，作為參照物溶液(內標)；(c)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細管柱，聚矽氧烷柱為固定相；程序溫度初始溫度40～100℃，以每分鐘2～6℃的速率升溫至230～280℃，氣化室溫度為230～280℃，接口溫度為230～280℃，質荷比範圍為10～1000；(d)測定方法採用氣質聯用測定；吸取供試品溶液，注入氣相色譜-質譜聯用儀，測定，記錄1小時色譜圖。廣藿香醇峰面積作為1，計算峰面積相對比值。2.根據權利要求1所述的藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法，其特徵在於所述的(a)供試品的製備中有機溶劑選自石油醚、正己烷、乙醚、乙酸乙酯、苯、甲苯或二甲苯。3.根據權利要求1所述的藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法，其特徵在於所述的(b)參照物溶液的製備中有機溶劑選環已酮、正十二垸、正十三烷、正十四烷、正十六垸或正十八烷中的一種。4.一種藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法，其特徵在於包括以下步驟(a)供試品的製備取藿香正氣軟膠囊內容物約10g，精密稱定，加正已垸2ml，緩緩加熱至沸，並保持微沸3小時，放冷；再用正已垸定容至5ml，混勻，即為供試品；(b)參照物溶液的製備精密量取正十四垸適量，加正已垸製成每lml含15mg的溶液，作為參照物溶液；(c)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細管柱，交聯50%苯基甲基聚矽氧烷柱為固定相；程序溫度初始溫度6(Tc，以每分鐘4'c的速率升溫至iior，再以每分鐘rc的速率升溫至12(TC，再以每分鐘5'C的速率升溫至18(TC，最後以每分鐘8"C的速率升溫至25(TC，並保持20min;氣化室溫度為250。C，接口溫度為250。C，離子源(EI)溫度為20(TC;分流比為50:1;檢測器電壓為1.2kV,質荷比範圍為33500;(d)測定方法採用氣質聯用測定；吸取供試品溶液，注入氣相色譜一質譜聯用儀，測定，記錄l小時色譜圖；供試品指紋圖譜中正十四垸參照物峰為S峰，計算相對保留時間；廣藿香醇峰面積作為l，計算峰面積相對比值。5.根據權利要求4所述的藿香正氣軟膠囊的指紋圖譜測定方法，其特徵在於所述藿香正氣軟膠囊的指紋圖譜中有49個特徵峰，其中單峰面積超過總峰面積5%的吸收峰有11個，分別為1號峰，相對保留時間0.386，RSD%0.442號峰，相對保留時間0.429，RSD%0.347號峰，相對保留時間0.803，RSD%0.16IO號峰，相對保留時間1.067，RSD%0.11ll號峰，相對保留時間1.158，RSD%0.1718號峰，相對保留時間1.384，RSD%1.1619號峰，相對保留時間1.498，RSD%0.2720號峰，相對保留時間1.512，RSD%0.2722號峰，相對保留時間1.559，RSD%0.2627號峰，相對保留時間1.748，RSD%0.1046號峰，相對保留時間2.340，RSD%0.58。6.—種藿香正氣軟膠囊的質量控制方法，其特徵在於將藿香正氣軟膠囊採用權利要求4所述的測定方法測定，將待測產品指紋圖譜與所述指紋圖譜進行比對，相似度在90100%，認為所述待測產品的質量合格。7.—種藿香正氣軟膠囊，其特徵在於，將其採用權利要求4所述的測定方法測定，所得指紋圖譜有有49個特徵峰，分別為-1號峰相對保留時間0.386RSD%0.442號峰相對保留時間0.429RSD%0.343號峰相對保留時間0.461RSD%0.394號峰相對保留時間0.565RSD%0.185號峰相對保留時間0.576RSD%0.286號峰相對保留時間0.791RSD%0.137號峰相對保留時間0.803RSD%0.168號峰相對保留時間0.847RSD%0.1010號峰相對保留時間1.067RSD%0.1111號峰相對保留時間1.158RSD%0.1712號峰相對保留時間1.175RSD%0.1913號峰相對保留時間1.212RSD%0.1914號峰相對保留時間1.221RSD%0.1915號峰相對保留時間1.286RSD%0.2316號峰相對保留時間1.308RSD%0.1417號峰相對保留時間1.348RSD%0.2218號峰相對保留時間1.384RSD%0.1619號峰相對保留時間1.498RSD%0.2720號峰相對保留時間1.512RSD%0.2721號峰相對保留時間1.526RSD%0.2622號峰相對保留時間1.559RSD%0.2623號峰相對保留時間1.604RSD%0.3924號峰相對保留時間1.682RSD%0.1225號峰相對保留時間1.695RSD%0.1026號峰相對保留時間1.709RSD°/。0.0927號峰相對保留時間1.748RSD%0.1028號峰相對保留時間1.802RSD%0.1829號峰相對保留時間1.822RSD%0.1530號峰現對保留時間1.837RSD%0.2031號峰相對保留時間1.873RSD%0.1932號峰相對保留時間1.884RSD%0.2033號峰相對保留時間1.906RSD%0.2434號峰相對保留時間L917RSD%0.2435號峰相對保留時間1.935RSD%0.2536號峰相對保留時間1.971RSD%0.3437號峰相對保留時間1.996RSD%0.3238號峰相對保留時間2.127RSD%0.3339號峰相對保留時間2.135RSD%0.3140號峰相對保留時間2.225RSD%0.4041號峰相對保留時間2.237RSD%0.3942號峰相對保留時間2.248RSD%0.4043號峰相對保留時間2.283RSD%0.3944號峰相對保留時間2.294RSD%0.4145號峰相對保留時間2.316RSD%0.4446號峰相對保留時間2.340RSD%0.3847號峰相對保留時間2.668RSD%0.3848號峰相對保留時間2.683RSD%0.5949號峰相對保留時間2.887RSD%0.62。全文摘要本發明涉及一種藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法，屬於中藥現代化領域。藿香正氣軟膠囊指紋圖譜的測定方法，包括供試品的製備；參照物溶液的製備；色譜條件色譜柱為彈性石英毛細管柱，聚矽氧烷柱為固定相；程序溫度初始溫度40～100℃，以每分鐘2～6℃的速率升溫至230～280℃，氣化室溫度為230～280℃，接口溫度為230～280℃，質荷比範圍為10～1000；測定方法採用氣質聯用測定，記錄1小時色譜圖。廣藿香醇峰面積作為1，計算峰面積相對比值。本發明的優點是將指紋圖譜技術與氣質聯用儀器相結合，進行定性定量的測定，可作為藿香正氣軟膠囊成分測定的標準指紋圖譜，以鑑別其有效成分；方法穩定、精密度高、重現性好。文檔編號G01N30/78GK101183091SQ20071006037公開日2008年5月21日申請日期2007年12月18日優先權日2007年12月18日發明者彤劉,劉志青,琳孫,孫寶珍,江永萍,勤潘,石世學,輝羅,金兆祥申請人:天津中新藥業集團股份有限公司達仁堂製藥廠