白薇作為抗真菌類藥物的新用途的製作方法

2023-05-07 22:56:06

本發明涉及醫藥技術領域，具體地說，是白薇作為抗真菌類藥物的新用途。

背景技術：

真菌感染分為淺部真菌感染和深部真菌感染兩類，淺部真菌感染是由癬菌侵犯皮膚、毛髮、指(趾)甲等體表部位造成，發病率高，難根除。深部真菌感染，又稱侵襲性真菌病(invasive fungal disease，IFD)是由以念珠菌、隱球菌為主的酵母樣真菌和以麴黴為主的絲狀真菌侵犯內臟器官及深部組織造成，危害性大，病死率高。每年在世界範圍內約130萬人因嚴重真菌感染死亡。與危害嚴重的侵襲性真菌感染相比，抗真菌藥物的發展相對滯後。隨著臨床上抗菌藥的濫用，真菌耐藥性隨之蔓延，且臨床有效抗真菌的品種有限。

真菌耐藥性的一個原因是真菌在人體的生物材料表面形成生物被膜。生物被膜是一個微生物聚集群體，是微生物不可逆地與無活力物體或活組織表面接觸，由自身產生的細胞外基質包裹著活菌細胞形成的微生態，其具有高度耐藥性的特異表型。有研究報導，白念珠菌形成生物被膜後對氟康唑的敏感性下降幾百倍，對兩性黴素B的敏感性下降幾十倍。目前臨床對白色念珠菌的生物被膜尚無理想對策。(參見；趙蘭雪.抗白念珠茵生物被膜中藥成分的篩選及機制研究[D].福建中醫藥大學碩士論文，2013：1-2.)。

真菌由酵母態轉變為菌絲態毒力增強會增強。白色念珠菌作為臨床上的一種機會致病性真菌，其生長形態具有二相性，它能夠依外界環境的變化從酵母態變為菌絲態。而菌絲態因其有著粘附和侵襲的優勢，容易造成宿主的感染，因而白色念珠菌酵母態到菌絲態的轉變將顯著增強它的毒力。(參見；常文強.Retigeric acid B的抗真菌機制及白色念珠菌中分子工具的構建[D].山東大學博士論文，2013：1-2.)

綜上所述，發現高效低毒無耐藥性的新型抗真菌藥物已經迫在眉睫。中藥是我們國家的寶庫，有悠久的臨床實踐基礎，在化學結構方面和作用機制方面存在多樣性，收到廣泛的重視。由於中藥和天然藥物具有豐富的資源、無耐藥性等優點，且在現在技術的幫助下發現其未知的藥理活性，使中藥再次成為大家研究的熱點，也使我們看到抗真菌藥研究的新希望。

為了研究新型抗真菌藥物，本發明以中藥白薇為研究對象。白薇為蘿摩科鵝絨藤屬植物直立白薇Cynanchum atratum Bunge.或蔓生白薇Cynanchum versicolor Bunge.的乾燥根及根莖，具有清熱涼血、利尿通淋、解毒療瘡的功效，用於溫邪傷營發熱、陰虛發熱、骨蒸勞熱、產後血虛發熱、熱淋、血淋、癰疽腫毒等症。直立白薇多生於山坡或樹林邊緣，分布於東北、中南、西南以及河北、山西、陝西、山東、安徽、江西、福建、湖北等地。直立白薇的化學成分主要為C21甾體皂苷類化合物，這類成分廣泛存在於同屬植物中。C21甾體皂苷類化合物具有抗炎、鎮痛，退熱和抗腫瘤等藥理活性(參見：鄭兆廣，張衛東，柳潤輝，張川，孔令義.蔓生白薇的化學成分研究[J].中草藥,2006,37(7)987-989.)

白薇始載於《神農本草經》，列為中品，具有清熱、涼血、利尿通淋、解毒療瘡的功效，用於溫邪傷營發熱、陰虛發熱、骨蒸勞熱、產後血虛發熱、熱淋、血淋、癰疽腫毒等症。現代藥理表明白薇具有：退熱、消炎、鎮咳祛痰平喘、抗腫瘤、抗失憶、抗細菌等作用。而抗細菌作用僅見於1992年出版的《中藥藥理毒理與臨床》中報導的白薇中的皂苷對肺炎球菌有抑制作用。(參見：趙新超.直立白薇質量研究[D].山東省醫學科學院碩士論文，2009：7-8.)

目前，尚未見有關白薇抗真菌的報到，也未見其作為協同抗真菌增效藥物的相關報導。經查新，以往均無白薇提取物作為主要進行配製的防治真菌感染疾病的藥物的相關報導或專利。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供一種白薇作為抗真菌類藥物的新用途。

本發明的第一方面，提供白薇作為抗真菌類藥物的新用途，即，白薇在製備抗真菌藥物、抗真菌藥物增效劑、抗真菌生物被膜藥物(試劑)以及抗真菌菌絲藥物(試劑)中的應用。

優選的，所述的白薇為直立白薇。

優選的，所述的白薇是經75％乙醇粗提，再通過二氯甲烷萃取，最後採用大孔樹脂富集60％的乙醇溶液洗脫部位的餾分，得白薇活性成份。

更優選的，所述白薇活性成份，具體通過如下方法獲得：

1)75％乙醇粗提：白薇50g研磨成粉末，過20目篩，5倍量的75％乙醇50℃浸泡24h，超聲提取30min，重複操作2次，合併2次提取液，離心取上清液，得終濃度為200mg生藥/ml的提取液，置於4℃冰箱備用；

2)二氯甲烷萃取：取步驟1)製備的提取液1000ml，減壓回流乾燥至無醇味得浸膏，將浸膏與等體積的水混懸，不斷攪拌，混合均勻，然後用等體積二氯甲烷萃取，將萃取液旋轉蒸乾至浸膏，保存到4℃冰箱備用；

3)大孔樹脂富集：將步驟2)製備的二氯甲烷浸膏，超聲用水溶解，過D101大孔樹脂，富集60％的乙醇溶液洗脫部位的餾分，旋幹至浸膏，製得白薇活性成分。

優選的，所述抗真菌藥物增效劑中的抗真菌藥物是氟康唑、酮康唑、伏立康唑或兩性黴素B等抗真菌藥物。

優選的，所述的真菌是深部真菌菌株、淺部真菌菌株、敏感菌株或耐藥菌株。

優選的，所述的真菌是白色念珠敏感菌Y0109、白色念珠菌標準均sc5314、白色念珠耐藥菌102、白色念珠耐藥菌103、近平滑念珠菌22019、光滑念珠菌537、新生隱球菌32609、石膏樣小孢子菌Cmccfmza、紅色毛癬菌Cmccftla或煙麴黴菌7544。

優選的，所述的白薇在抗真菌菌絲藥物(試劑)中的應用是指白薇經乙醇粗提得終濃度為200mg生藥/ml的提取液，該提取液用於抑制真菌菌絲的形成。

本發明的第二方面，提供一種抗真菌的藥物組合物，所述藥物組合物的活性成分是抗真菌藥物和白薇。

優選的，所述的抗真菌藥物是氟康唑、酮康唑、伏立康唑或兩性黴素B等抗真菌藥物。

優選的，所述的藥物組合物的活性成分是氟康唑和直立白薇。

本發明的第三方面，提供一種抗白念珠菌生物被膜的藥物組合物，所述藥物組合物的活性成分是抗白念珠菌生物被膜藥物和白薇。

優選的，所述的藥物組合物的活性成分是兩性黴素B和直立白薇。

經實驗證實，白薇對常見深部真菌和淺部真菌均有很好的抑制作用，對於耐藥真菌，抗真菌藥物與白薇合用時，能明顯降低常規抗真菌藥物的藥物劑量，能不同程度地提高常用抗真菌藥對真菌的抑制作用，並能使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用，增強對耐藥真菌的抑制作用。

白薇具有抗真菌生物被膜活性，不僅能抑制真菌生物被膜的粘附、生長增殖，而且能協同兩性黴素B顯著地抗生物被膜。白薇醇提物在200μg/ml(生藥)的濃度下，能完全抑制白念菌絲形成。

白薇具有顯著地抗真菌及其協同抗真菌的活性，直立白薇具有抗菌效果，對常見致病真菌(白念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、新生隱球菌、石膏樣小孢子菌、紅色毛癬菌、煙麴黴菌)均有抑制作用。直立白薇的75％乙醇粗提物分別用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取後檢測其抗真菌的活性，發現二氯甲烷萃取部位的抗菌活性效果最好。然後用D101大孔樹脂富集二氯甲烷的活性部位，流動相為0％、30％、60％、100％的乙醇溶液，發現60％乙醇部位的抑菌效果最好。

本發明優點在於：

本發明為中藥白薇開闢了新的用途，不僅本身具有抗真菌的作用，而且用於抗真菌藥物的增效劑，不但能提高藥物的抗真菌作用，而且在臨床真菌耐藥性日趨普遍、耐藥程度日趨嚴重的情況下，使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用，可降低抗真菌藥物的用藥劑量，為患者節省了醫療費用，並可減少藥物的毒副作用。

本發明的中藥白薇是我國傳統藥物，具有資源豐富，價格便宜，副作用小等優點，白薇和抗真菌藥物合用也能夠減少藥物的毒副作用，節省患者的醫藥費用。

附圖說明

圖1是白薇1mg～4mg對白念標準菌SC5314和白念耐藥菌103不同程度的抑制作用以及白薇1mg-4mg與氟康唑合用的協同作用；

其中，a-白念標準菌SC5314；b-白念耐藥菌103；c-白念耐藥菌103+氟康唑6μg/ml；d-白念耐藥菌103+氟康唑12μg/ml；

a、b、c、d中對應位置的6片藥物為：1-白薇1mg/片；2-氟康唑10μg/片；3-白薇4mg/片；4-白薇3mg/片；5-空白紙片；6-白薇2mg/片。

圖2是不同濃度白薇醇提液抑制白念珠菌菌絲的作用。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明提供的具體實施方式作詳細說明。

實施例1：白薇醇提取液單獨抗常見致病真菌的作用

一、材料和方法

1、試劑

白薇：上海雷允上醫藥有限公司中藥部

氟康唑(Fluconazole，FLC)：美國Sigma公司

伏立康唑(Voriconazole，VCZ)：美國Sigma公司

酮康唑(Ketoconazole，KCZ)：美國Sigma公司

無水乙醇：上海國藥集團有限公司

石油醚：上海國藥集團有限公司

二氯甲烷：上海國藥集團有限公司

乙酸乙酯：上海國藥集團有限公司

正丁醇：上海國藥集團有限公司

其它試劑均為國產試劑

2、菌株

白念珠菌(Candida albicans)標準菌SC5314、敏感菌Y0109由美國華盛頓喬治敦大學的WilliamA.Fonzi教授惠贈，白念珠菌耐藥菌(Candida albicans)102、103、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)ATCC 22019、光滑念珠菌(Candida glabrata)537、新生隱球菌(Cryptococcus neoformans)32609、石膏樣小孢子菌(Microsporum gypseum)Cmccfmza、紅色毛癬菌(Trichophytonrubrum)Cmccftla、煙麴黴菌(Aspergillus fumigatus)7544均由長海醫院真菌室提供。所有菌株已經形態學和分子鑑定。

3、培養基

RPMI 1640液體培養液：RPMI 1640 10g，NaHCO3 2.0g，嗎啡啉丙磺酸34.5g，NaOH調pH至7.0，三蒸水定容1 000ml，0.22μm微孔濾膜過濾除菌；4℃保存備用。Spider培養液(PH 7.2)：營養肉湯10g，甘露醇10g，磷酸氫二鉀2g，三蒸水定容1000ml，高壓滅菌，保存於4℃備用。

YEPD培養液：酵母浸膏10g、蛋白腖20g、葡萄糖20g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯黴素水溶液50ml，三蒸水定容至1 000ml，高壓滅菌，於4℃保存。

沙堡葡萄糖瓊脂培養基(SDA)：蛋白腖10g、葡萄糖40g、瓊脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯黴素水溶液50ml，調整pH值至7.0，定容至1 000ml，高壓滅菌，4℃保存。

4、儀器

DL-1000B智能超聲波清洗器(上海之信儀器有限公司)，

SW-CT-IF型單人雙面超淨化工作檯(蘇州安泰空氣技術有限公司)，

96孔細胞培養板(丹麥Nunclon公司)，

12孔細胞培養板(美國Corning公司)，

80A漩渦混合器(上海琪特分析儀器有限公司)，

THZ-82A臺式恆溫振蕩器(上海躍進醫療器械廠)，

隔水式電熱恆溫培養箱(上海躍進醫療器械廠)，

XW-Multiskan MK3型酶標儀(芬蘭Labsystems公司)，

倒置顯微鏡(美國EVOS公司)，

單眼相機(日本Nikon公司)。

5、白薇粗提取液的製備：

白薇50g研磨成粉末，過20目篩，5倍量的75％乙醇50℃浸泡24h，超聲提取30min，2次，合併2次提取液，離心取上清液，得終濃度為200mg生藥/ml的提取液，置於4℃冰箱備用。

6、白薇二氯甲烷部位的製備：

將保存的白薇粗提物1000ml，減壓回流乾燥至無醇味，得浸膏，將浸膏與等體積的水混懸，不斷用玻璃棒攪拌，使混合完全。然後用等體積的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位，剩餘部位為水部位。分別旋轉蒸乾至浸膏，取少量用75％乙醇配置成6.4mg/mL的溶液(用於檢測石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇部位的抑菌活性，見表2)，剩餘浸膏保存到4℃冰箱備用。

7、白薇大孔樹脂100％乙醇餾分的製備：

將保存的二氯甲烷浸膏，用水超聲溶解，過D101大孔樹脂，流動相為0％、30％、60％、100％的乙醇溶液，富集各部位的餾分並旋幹至浸膏，取少量用75％乙醇配置成6.4mg/mL的溶液，待測。

8、陽性藥的配製

以二甲亞碸(DMSO)溶解FLC、VCZ、KCZ，配製成6.4μg/ml藥物母液，置於4℃冰箱備用。

9、菌液製備

菌株活化酵母菌35℃SDA固定培養板孵育24-48h，挑取單克隆接種至含YEPD培養液，於30℃、200rpm/min振蕩培養16h後，使其處於指數生長對數期，以保證菌的純度和活力；絲狀菌煙麴黴35℃馬鈴薯斜面培養基孵育7天，無菌紗布過濾。

菌懸液配製血細胞計數板計數，以RPMI1640培養液調整酵母菌液濃度至0.5×103CFU/ml～2.5×103CFU/ml、絲狀菌液濃度0.5×104CFU/ml～2.5×104CFU/ml用於藥敏實驗。離心收集生長對數期白念珠菌，用滅菌的PBS緩衝溶液(PH7.2)清洗3次，將白念珠菌細胞混懸於1ml Spider培養液中，用血細胞計數板計數，調菌濃度為1.0×106cells/ml用於菌絲生長實驗及生物被膜實驗。

10、藥物敏感測試板的製備

按2009和2008年CLSI推薦標準M27-A3和M38-A2方案：取無菌96孔板，於每排1號孔加RPMI1640液體培養基100μl作空白對照；3～12號孔各加新鮮配製的菌液100μl；2號孔分別加菌液198μl和白薇提取物2μl；2～11號孔進行2倍倍比稀釋，使各孔的最終藥物濃度分別為2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、3.906μg/ml，各孔中乙醇的含量均低於1％。12號孔不含藥物，只加菌液100μl作生長對照。陽性藥FLC、VCZ和KCZ的終濃度分別為16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625和0.0313μg/ml。各孔中DMSO的含量均低於1％。藥敏板於35℃隔水式電熱恆溫培養箱中培養，念珠菌和煙麴黴孵育48h、新生隱球菌孵育72h，用酶標分析儀於630nm測各孔OD值，並輔以目測。

11、最低抑菌濃度(MIC值)

與生長對照孔比較≥90％生長抑制所對應的最低藥物濃度為氟康唑和中藥提取物的MIC90。生長對照孔的OD值控制在0.2左右，與生長對照孔比，以OD值下降90％以上的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC90(真菌生長90％被抑制時的藥物濃度)。中藥提取物大多顏色較深可能產生假陽性結果，輔以目測，以肉眼觀察無菌生長的最低濃度為最低抑菌濃度。每塊藥敏板均設有質控菌株及質控化合物，實驗過程中質控株近平滑念珠菌ATCC22019、質控化合物氟康唑、伏立康唑、酮康唑MIC波動範圍不超過1個藥物梯度濃度，且均在CLSI-M27-A3和CLSI-M38-A2公布的質控菌株MIC標準範圍內，即本研究中實驗結果數據可靠。實驗在不同時間段重複3次，三次結果不超過一個濃度差則可信，且以高濃度MIC為準，若不符，再次重複測定。

12、紙片擴散實驗

用0.9％生理鹽水調菌懸液濃度為1.0×106cells/ml，取3ml鋪於YEPD固體培養基，35°恆溫培養30min，棄上層液體，待液體揮幹，在板上放含不同劑量藥物的無菌紙片，倒置平皿於35°培養箱孵育48h，觀察抑菌圈內外菌落狀態，並拍照。

二、實驗結果見表1、表2。

由表1中可見，蔓生白薇對各類真菌均無效，直立白薇對念珠菌屬及臨床耐藥白念珠菌均有很好的抑制作用，對常見深部真菌新生隱球菌、煙麴黴以及淺部致病真菌石膏狀小孢子菌、紅色毛癬菌抑制作用也較為明顯。本實驗說明中藥直立白薇對常見致病真菌均有很好的抗真菌作用。

由表2可知，發現白薇的活性部位為二氯甲烷部分，對白念珠菌Y0109和新生隱球菌32609的MIC90為1μg/ml，通過D101大孔樹脂進一步追蹤其活性部位，發現白薇二氯甲烷60％-100％乙醇洗脫部位是其活性較好的部位，抗真菌作用較強。

圖1表示白薇1mg～4mg對白念標準菌和耐藥菌103均有不同程度的抑制作用，氟康唑10μg並無抑菌圈；白薇1mg-4mg與氟康唑合用，抑菌圈均明顯擴大，說明有較好的協同作用。

實施例2：白薇與氟康唑聯合對白念珠菌的作用

材料和方法

1、藥敏板的製備

取無菌96孔板，於每排1號孔加RPMI1640液體培養基100μl作空白對照；3～12號孔各加新鮮配製的菌液100μl；2號孔分別加菌液198μl和白薇提取物2μl；2～11號孔進行2倍倍比稀釋，使各孔的最終藥物濃度分別為2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、3.906μg/ml，各孔中乙醇的含量均低於1％。12號孔不含藥物，只加菌液100μl作生長對照。將各藥敏板於30℃恆溫箱培養。

其他實驗步驟和方法同實施例1，實驗結果見表3。

表3白薇與氟康唑聯合對2株臨床白念珠菌的MIC80值(μg/ml)

由表3可知，白薇不但具有抗真菌作用，而且與抗真菌藥物氟康唑協同具有抗菌增效作用。氟康唑單用的MIC80值均大於1024μg/ml，合用4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml的氟康唑後，白薇的MIC80由250μg/ml下降到31.25～125μg/ml，顯示了白薇提取物對氟康唑的增效作用。

實施例3：白薇與兩性黴素B聯合使用對白念珠菌生物被膜的作用

材料和方法：

1、試劑

白薇：上海雷允上醫藥有限公司中藥部。

兩性黴素B：購自生工生物工程有限公司。

XT：購自Sigma公司。

甲萘醌(menadione)：購自Sigma公司。

二甲亞碸(DMSO)：中國醫藥(集團)上海化學試劑公司。

兩性黴素B用二甲亞碸溶解，配成所需濃度，於-20℃保存。實驗前，將藥物貯存液取出置35℃溫箱融化，充分混勻，分別進行藥效學實驗。

XTT用滅菌的PBS配成0.5mg/ml的飽和溶液，用0.22μm孔徑的濾器濾過除菌，甲萘醌(menadione)用100％丙酮配成10mM溶液，XTT、甲萘醌(menadione)於-80℃保存。實驗前，將藥物貯存液取出置4℃冰箱、35℃溫箱梯度融化，充分混勻，進行藥效學實驗。

2、抗白念珠菌生物被膜藥敏板製備：取無菌96孔板，於每排11號孔加RPMI 1640培養液150μl作陽性對照；2～10號孔各加RPMI 1640培養液150μl；1號孔分別加入RPMI 1640培養液298.8μl和兩性黴素B溶液1.2μl。1～10號孔10級倍比稀釋，使各孔的白薇最終藥物濃度分別為5000、2500、1250、625、312.5、156.25、和78.13μg/ml，兩性黴素B最終藥物濃度分別為8、4、2、1、0.5和0.25μg/ml，各孔中DMSO含量均低於1％。取出培養90min的生物被膜板，用PBS緩衝溶液洗3次，取配好的含藥物培養液100μl加入到被膜板對應的孔中，12號孔不培養生物被膜，作陰性對照。各藥敏板於37℃繼續靜置培養24h(一系列不含化合物的孔作為空白對照也採用上述培養方式培育)。

3、黏附最低抑菌濃度(sessile minimum inhibitory concentration，SMIC)的測定白念珠菌生物被膜於37℃培養24h後，取出生物被膜板，用PBS緩衝溶液輕輕洗3次，每孔加入200μl XTT/menadione(12號孔也加)，避光，37℃靜置孵育2-3h，取出生物被膜板，吸取100μl XTT/menadione至無菌96孔板中，用Infinite M200多功能酶標儀(TECAN,Austria)於490nm測各孔OD值(直接反映被膜細胞代謝活性變化)。與陽性對照孔比，以OD值下降80％以上的最低濃度孔中的藥物濃度為SMIC80(生物被膜生長80％被抑制時的藥物濃度)。當藥物的SMIC80值超過白薇測定濃度範圍時，按以下方法進行統計：SMIC80值高於最高濃度64μg/ml時，計為「>64μg/ml」；SMIC80值為最低濃度或在最低濃度以下時，不作區別，均計為「≤0.125μg/ml」。

4、聯合用藥的效果評價:

部分抑菌濃度指數(fractional inhibitory concentration index，FICI)是評價聯合用藥的兩藥相互作用方式的主要參數。抑菌濃度分數(FIC)，分別為每一種藥物聯合抑菌時所需最低抑菌濃度(MIC)與單用時MIC的比值.而FIC指數(FICI)則等於兩種藥物FIC之和。很多文獻報導當FICI≤0.5時兩藥的相互作用確定為協同作用，且FIC指數越小，協同作用越強；0.5<FICI≤1時兩藥的相互作用確定為相加作用；14時兩藥產生拮抗作用

上述實驗均平行操作6次，當SMIC80值能準確重複或只差一個濃度時才被接受，並以較高濃度作為SMIC80值；當SMIC80值相差兩個濃度以上時，則需重新實驗，直到符合要求為止。XTT還原法的基本原理在於四氮唑鹽能夠在電子耦合劑甲萘醌的作用下，通過具有線粒體活性的酵母細胞轉化為具有特殊顏色的甲月替四氮唑鹽。

二、實驗結果見表4

表4白薇及其和兩性黴素B聯合對白念珠菌成熟被膜的抑制效果

表4結果顯示：白薇、兩性黴素B單獨用藥對白念標準菌生物被膜均有抑制作用，而氟康唑則沒有抑制生物被膜的作用；白薇合用0.0625～0.25μg/ml的兩性黴素B後，SMIC80值由625μg/ml下降到125～31.25μg/ml，顯示了白薇提取物對兩性黴素B協同抗生物被膜作用。

實施例4：白薇醇提液抑制白念珠菌菌絲的作用

材料和方法

1、藥敏板製備

取無菌12孔細胞培養板一塊，每孔加入1ml 1.0×106cells/ml菌懸液，加入含有不同藥物濃度中藥醇提取液(v≤20μl)，37℃隔水式電熱恆溫培養箱中靜止培養3h，在EVOS xl型倒置顯微鏡下觀察菌絲生長狀況並拍照。

其它實驗步驟和方法同實施例1，實驗結果見圖2。

如圖2所示，實驗結果表明：白薇醇提物在200μg/ml(生藥)的濃度下，能完全抑制白念菌絲形成。

以上已對本發明創造的較佳實施例進行了具體說明，但本發明創造並不限於所述實施例，熟悉本領域的技術人員在不違背本發明創造精神的前提下還可做出種種的等同的變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在本申請權利要求所限定的範圍內。