治療或預防角結膜上皮細胞損傷的藥物的製作方法

2023-06-29 13:11:41

專利名稱：治療或預防角結膜上皮細胞損傷的藥物的製作方法
技術領域：
本發明涉及眼科用治療或預防角結膜上皮細胞損傷藥物。具體而言，是針對由藥物特別是抗炎藥物等導致的角結膜上皮細胞損傷以及前列腺素類減少等造成的角結膜上皮細胞損傷具有治療和/或預防效果的眼藥。
背景技術：
透明的覆蓋在眼球最前面的晶狀體前房上的角膜是由上皮細胞、前彈力膜、基質層、角膜後彈力層以及內皮細胞層構成的井然排列的分層構造組織。角結膜上皮細胞損傷既包括伴隨內源性疾病，如角膜皰疹、細菌性角膜潰瘍、神經麻痺性角膜炎、糖尿病性角膜症、斯耶格倫氏綜合症、乾眼症等產生的角結膜上皮細胞損傷，還包括術後、藥物性、外傷、佩戴隱形眼鏡等外源性疾病或物理性、化學性損傷等原因造成的損傷，由所述病因最嚴重的可發展成上皮無法再生的頑固性角膜損傷，導致視力損傷和/或失明。由於某些原因，在形成角膜基質規則、井然排列的、格子樣結構過程中，角膜上皮細胞受到某種原因的損傷的情況下，推測發揮角膜細胞功能的物質對角膜損傷的治癒具有重要作用。
角膜潰瘍等角膜炎是白內障手術、視網膜手術和玻璃體切除術、角膜癌的放射線治療等治療的併發症。為了治療或預防該角膜炎常使用倍他米松等類固醇以及雙氯芬酸鈉等非類固醇抗炎藥物。這些藥物在治療上針對炎症症狀非常有效。可是已知使用，尤其是長期使用這類藥物會誘發角結膜上皮細胞損傷、角結膜潰瘍，玻璃體液化以至於失明(JulianneC.Lin等，ARCH OPHTHALMOL.118 AUG 2000 1129-1132)。
恢復視力要求角膜上皮迅速的正常再生覆蓋。治癒角結膜上皮細胞損傷的機制包括第1到第3階段。其中第1階段包括上皮細胞的黏附、伸展、遷移；第2階段包括上皮細胞的增殖；第3階段包括上皮細胞的分化。直到經過第3階段才能恢復到具有井然排列層狀結構的上皮。亟待開發恢復上述過程的，具有透明質酸、纖維結合蛋白的眼藥所不具備的效果的藥物。
一方面，在哺乳類的組織或者器官中含有的前列腺素類(下面稱為「PG」)，包含一組具有廣泛生理活性的有機羧酸，並具有作為一般結構特徵的前列腺酸骨架。
已知PGE1、PGE2和PGE3具有擴張血管、降低血壓、減少胃酸分泌、令腸蠕動亢進、收縮子宮、利尿、擴張支氣管以及抗潰瘍作用。PG在眼科領域中應用的報導有PGF2α同系物具有降低眼壓作用(Alm，ThePotential of Prostaglandin Derivatives in Glaucoma Therapy，CurrentOpinion in Ophthamology，Volume 4，No.11，44-50；1993)。
在Pedro Cortina等(Graefe’s Arch Clin Exp Ophthalmol 235；180-185；1997)中公開了下述結果，通常在厭氧、還原狀態下體外培養晶狀體上皮細胞的過程中，25、50以及100μM的雙氯芬酸鈉可抑制上皮細胞的增殖，由此抑制白內障手術副作用的後發性白內障。而添加1、10、50以及100μM的PGE2時，引起上皮細胞增殖，這個現象暗示後發白內障等細胞增殖疾病和PGE2有關。可是未見關於恢復角膜上皮細胞損傷的報導。
山本在日本眼科學協會雜誌(103(3)P-164；1999)中公開了對家兔眼角膜片研究結果如下。單獨使用前列腺素合成抑制劑雙氯芬酸鈉和吲哚美辛不影響角膜上皮的伸展，但如果同時添加表皮生長因子(EGF)，EGF使上皮伸展促進作用受到抑制。通過上皮細胞培養發現雙氯芬酸鈉等對上皮增殖以及EGF的增殖促進作用沒有影響，不過與對照組相比，添加了EGF的含上皮細胞的溶液中PGE2、PGE2α的濃度有所上升。
同一研究小組的月山等人在第66屆中部眼科學協會講演文集(E-W-2；2000)中發表了下述結果。單層培養角膜上皮細胞，製造一定面積缺損，添加EGF會使缺損部分減小。單獨添加前列腺素合成阻斷劑對缺損面積沒有影響，可是當它和EGF同時添加時，能夠顯著抑制上皮創傷治癒促進作用。在添加EGF的培養液中PGE2、PGE2α的濃度顯著上升，不過尚未見到外部添加PG會產生怎樣結果的報導。
同樣月山等人在日本眼科學協會雜誌(105 P35；2001)中公開了如下結果在單層培養的角膜上皮細胞中製造缺損，添加EGF能夠促進創傷治癒。添加雙氯芬酸鈉能夠抑制上皮創傷治癒、並且補充添加PGF2α衍生物(Latanoprost)可觀察到上皮創傷治癒的顯著恢復，當單獨加入Latanoprost時沒有效果。此外無論單獨加入PGE2衍生物16，16-二甲基前列腺素E2(16，16-二甲基PGE2)，還是和EGF、雙氯芬酸鈉同時加入，都未觀察到對角膜上皮創傷的治癒效果。某種角度上看，該結果沒有暗示PGE2衍生物對角結膜上皮細胞損傷有任何療效。
抗炎藥物的典型副作用是當經口給藥時引起胃黏膜損傷。PG類具有黏膜保護作用，Scand J Rheumatol 21(2)85-91(1992)中報導雙氯芬酸鈉和PG衍生物米索前列醇(下稱(MS))的合劑能夠抑制胃潰瘍的發生，同時維持其抗炎活性。
同樣地，在WO 92/21350中記述了合用非類固醇抗炎藥物和前列腺素E類的米索前列醇、前列腺素E1(PGE1)、前列腺素E2(PGE2)、15R-甲基前列腺素E2(15R-甲基PGE2)、16，16-二甲基前列腺素E1(16，16-二甲基PGE1)、16，16-二甲基前列腺素E2(16，16-二甲基PGE2)能減輕副作用，可用於關節風溼病、骨質疏鬆症的治療。
為了減輕對胃黏膜的損傷，非類固醇類抗炎藥物中的環氧化酶(下稱「COX」)選擇性的藥物，美洛昔康這樣的COX-2選擇性藥物，在開發的市場上受到了一定的好評。不過，不能完全沒有對胃黏膜的損傷。這是因為選擇性是相對的，會在某種程度上殘留COX-2活性。
在眼科領域進行眼睛的白內障手術的時候，據報導使用美洛昔康這樣的選擇性COX-2抗炎藥物代替非選擇性COX抑制劑的抗炎藥物能夠減輕角膜細胞的損傷(WO99/59634)。可是，這類藥物的COX的選擇性是相對的，不能完全抑制COX-2的活性，需要採用其它手段治療或預防角結膜上皮細胞損傷。

發明內容
鑑於上述情況，本發明的目的是提供治療或預防角結膜上皮細胞損傷、尤其是PGE類減少導致的角結膜上皮細胞損傷或藥物造成的角結膜上皮細胞損傷的藥物。
本發明涉及以前列腺素類為有效成分的治療或預防因為各種原因導致的角結膜上皮細胞損傷的眼藥。
即本發明提供如下所示的治療或預防角結膜上皮損傷的眼藥。
1、以前列腺素E為有效成分的治療或預防角結膜上皮細胞損傷的眼藥。
2、上述1記載的眼藥中的前列腺素E類選自米索前列醇、前列腺素E1(PGE1)、前列腺素E2(PGE2)、15R-甲基前列腺素E2(15R-甲基PGE2)、16，16-二甲基前列腺素E1(16，16-二甲基PGE1)、16，16-二甲基前列腺素E2(16，16-二甲基PGE2)、オキシプロスト一ル以及它們的低級烷基酯。
3、上述1或2記載的眼藥，其中所述的角結膜上皮細胞損傷是由前列腺素E類減少引起的。
4、上述1或2記載的眼藥，其中所述的角結膜上皮細胞損傷是由藥物引起的。
5、上述4中記載的眼藥，其中引起角結膜上皮細胞損傷的藥物是抗炎藥物。
6、上述5中記載的眼藥，其中引起角結膜上皮細胞損傷的抗炎藥物是環氧化酶的非選擇性抑制劑。
7、上述6中記載的眼藥，其中能夠非選擇性抑制導致角結膜上皮細胞損傷的環氧化酶的藥物是雙氯芬酸鈉。
8、以前列腺素E類和導致角結膜上皮細胞損傷的藥物為有效成分的治療或預防角結膜上皮細胞損傷的眼藥。
9、上述8中記載的眼藥，其中導致角結膜上皮細胞損傷的藥物是抗炎藥物。
10、上述9記載的眼藥中前列腺素E類和抗炎類藥物的質量比在1∶25～50000的範圍。
11、上述10記載的眼藥中的前列腺素E類為米索前列醇，抗炎藥物為雙氯芬酸鈉。
12、上述11中記載的眼藥，其中的米索前列醇的濃度在0.01μM到10μM的範圍。
13、上述11中記載的眼藥，其中的雙氯芬酸鈉的濃度在0.01％到0.5％的範圍。
附圖的簡單說明

圖1表示本發明的MS對角膜上皮細胞損傷的效果圖。
圖2表示本發明的MS對結膜上皮細胞損傷的效果圖。
的最佳實施方案本發明使用的前列腺素類可以是任何一種前列腺素E類，優選MS、PGE1、PGE2、15R-甲基PGE2、16，16-二甲基PGE1、16，16-二甲基PGE、オキシプロステロ一ル以及這些物質的低級烷基酯(如碳原子數為1～5的低等低級烷基酯)，最優選MS。
本發明可以單獨使用MS，也可以和在眼科領域應用的造成角結膜上皮細胞損傷的非選擇性抗炎藥物配合成合劑使用。
本發明所用的非選擇性抗炎藥物包括如雙氯酚酸、吲哚美辛、氟比洛芬、布洛芬等，優選雙氯酚酸。
在單獨使用或合劑使用時，推薦前列腺素類的用量從0.001μM到10μM的範圍。考慮到用藥時會被淚液所稀釋，用量可以在10μM以上。此外，使用雙氯芬酸鈉這類抗炎藥物時，推薦根據抗炎藥物的濃度，按照每1單位質量的抗炎藥物使用1/25～1/50000的單位質量的MS。當用普通的抗炎藥物作為眼藥時，其用量可以在0.01％～0.5％的範圍內，最優選0.1％。在這種情況下，推薦相對於抗炎藥物的質量1，MS的用量為1/25～1/50000。但本發明中的各組分濃度並不限於上述範圍。
本說明書中所用的「眼藥」包括滴眼液、眼環流液、眼軟膏製劑以及凍幹劑。即包括全部與眼睛治療相關的劑型。本發明的眼藥可以以任意劑型用作角結膜上皮細胞損傷的治療或預防藥。尤其優選滴眼液、眼環流液、膏劑、眼軟膏劑或凍幹劑為劑型。不過本發明並不局限與此。用滴眼液、眼軟膏劑、膏劑時，可以使用常規採用的脫氫醋酸鈉、甲基對氧苯甲酸等防腐劑、氯化鈉、甘油等等滲劑、羧甲基纖維素、聚乙烯醇等增稠劑，依地酸鈉、多糖等穩定劑。對這些物質並沒有限定，只要是眼生理允許就可以。向上述各種劑型中添加的緩衝液優選等滲的pH4-9、pH5-9的無刺激物質。
本發明的眼藥水如下例所示製劑例1米索前列醇 0.002％磷酸緩衝液 1.0％苯扎氯銨 0.001％聚山梨酸酯80 0.5％純水 使總量為100％根據患者的症狀、年齡相應變動本發明角膜疾病治療藥物的用法、用量，眼藥水通常1日1-5次，每次1-5滴。眼軟膏通常每天1-3次，適量途布於角結膜囊內。
下面，根據具體實施例說明本發明，本發明不受實施例的限定。
實施例[實施例]MS由雙氯芬酸鈉引起人角膜上皮細胞損傷以及人結膜細胞損傷的效果。
使用細胞角膜細胞SV40無限增殖的人角膜上皮細胞株(HCEC)(Araki-Sasaki等.IOVS 36614-621，1995)，結膜細胞Chang人結膜細胞株(CCL-20.2)(ATC CCCL-20.2)。
實驗用含有10％血清的增殖培養基將細胞調整到5×104細胞/mL，在96孔板中按照100μL/孔接種，在37℃中培養過夜。達到30-50％鋪滿後，溶入新鮮培養基中，另外添加梯度稀釋的MS，雙氯芬酸鈉，在37℃條件下培養24小時。培養結束後，洗滌每孔，按照新鮮培養基100μL/孔、WST-8(同仁化學Cell Counting Kit-8)10μL/孔添加，在培養1.5小時後，測定450nm-660nm的吸光度，計算殘存的細胞數。
毒性評價法以不添加任何被檢測物質的組為陰性對照，將其吸光度值定為生存率100％，根據各個被檢測物質濃度下的細胞生存率繪製用量相關曲線。
表1以及圖1表示米索前列醇使SV40無限增殖人角膜上皮細胞免受非類固醇抗炎藥物引起的角膜損傷的效果。
非類固醇抗炎藥物雙氯芬酸鈉在0.25mM到1mM的範圍內引起細胞損傷，米索前列醇在0.01μM到100μM的用量範圍內改善細胞損傷。在100μM的高濃度下，可以觀察到米索前列醇本身對細胞的損傷。
表1米索前列醇對雙氯芬酸鈉引起的角膜上皮細胞損傷的效果

從圖1以及表1中可以看出0.25、0.5以及1mM的雙氯芬酸鈉以用量依賴性的方式抑制角膜上皮細胞的增殖。此濃度相當於抑制晶狀體上皮細胞增殖的濃度的10倍。MS從0.01μM增加到10μM能夠顯著促進細胞增殖。可以觀察到100μM的MS本身對細胞的毒性作用。
表2以及圖2表示米索前列醇對人結膜上皮細胞的非類固醇抗炎藥物引起的角膜損傷的防預效果。
米索前列醇對雙氯芬酸鈉引起的結膜上皮細胞損傷的效果。

從圖2以及表2中可以看出0.125、0.25以及0.5mM的雙氯芬酸鈉以用量依賴性的方式抑制結膜上皮細胞的增殖。0.1、1以及10μM的MS能夠恢復細胞增殖損傷。高濃度的雙氯芬酸鈉效果降低。可以觀察到100μ的MS本身對細胞的毒性作用。
生產上應用的可能性本發明的以米索前列醇這樣的前列腺素E類為有效成分的治療或者預防用的角結膜上皮細胞損傷眼藥水對物理性、化學性、機械損傷引起的角膜或者結膜的損傷以及內因性角膜或者結膜損傷具有高度的治療效果。尤其是雙氯芬酸鈉這樣的非類固醇類抗炎藥物對角膜損傷即細胞增殖障礙具有抑制效果。
權利要求
1.以前列腺素E為有效成分的治療或預防角結膜上皮細胞損傷的眼藥。
2.如權利要求1所述的眼藥中的前列腺素E類選自米索前列醇、前列腺素E1(PGE1)、前列腺素E2(PGE2)、15R-甲基前列腺素E2(15R-甲基PGE2)、16，16-二甲基前列腺素E1(16，16-二甲基PGE1)、16，16-二甲基前列腺素E2(16，16-二甲基PGE2)、オキシブロスト一ル以及它們的低級烷基酯。
3.如權利要求1或2所述的眼藥，其中所述的角結膜上皮細胞損傷是由前列腺素E類減少引起的。
4.如權利要求1或2所述的眼藥，其中所述的角結膜上皮細胞損傷是由藥物引起的。
5.如權利要求4所述的眼藥，其中引起角結膜上皮細胞損傷的藥物是抗炎藥物。
6.如權利要求5所述的眼藥，其中引起角結膜上皮細胞損傷的抗炎藥物是環氧化酶的非選擇性抑制劑。
7.如權利要求6所述的眼藥，其中能夠非選擇性抑制導致角結膜上皮細胞損傷的環氧化酶的藥物是雙氯芬酸鈉。
8.以前列腺素E類和導致角結膜上皮細胞損傷的藥物為有效成分的治療或預防角結膜上皮細胞損傷的眼藥。
9.如權利要求8所述的眼藥，其中導致角結膜上皮細胞損傷的藥物是抗炎藥物。
10.如權利要求9所述的眼藥，其中，前列腺素E類和抗炎類藥物的質量比在1∶25～50000的範圍。
11.如權利要求10所述的眼藥，其中的前列腺素E類為米索前列醇，抗炎藥物為雙氯芬酸鈉。
12.如權利要求11所述的眼藥，其中的米索前列醇的濃度在0.01μM到10μM的範圍。
13.如權利要求12所述的眼藥，其中的雙氯芬酸鈉的濃度在0.01％到0.5％的範圍。
全文摘要
本發明提供了以前列腺素E類如米索前列醇為有效成分的用於治療或預防角結膜上皮損傷細胞的眼藥；以前列腺素E類和抗炎藥物為有效成分的用於治療或者預防角結膜上皮細胞損傷的眼藥。對物理性、化學性、機械性損傷造成的角膜或結膜損傷以及內源性角膜或結膜上皮細胞損傷具有高度治療和/或預防效果。
文檔編號A61P27/02GK1665514SQ03815748
公開日2005年9月7日 申請日期2003年7月2日 優先權日2002年7月2日
發明者秋葉清, 保科太, 阿形光治 申請人:若素製藥株式會社