免疫層析測試條及其製造方法

2023-05-08 11:45:36 2

專利名稱：免疫層析測試條及其製造方法
技術領域：
本發明涉及了一種免疫層析測試條及其製造方法，特別是涉及了能夠快速檢測孕激素、雌激素及小分子激素的測試條及其製造方法。
背景技術：
目前，人們的生活水平逐漸提高，保健意識逐漸加強，很多營養品和補品蘊育而生，使人們的健康日益加強壽命普遍提高，但是同時也帶來不少的負作用，例如更年期婦女所服用的雌激素，如果服用量小起不到作用，如果服用量大會引起婦科系統的癌變，而現在檢測雌性激素或小分子激素需要通過很複雜的醫學檢測過程，並且不可能進行隨時檢測，廣大的婦女在不考慮後果的情況下，盲目補充雌性激素，會使身體受到了更大的傷害。

發明內容
本發明的發明目的是提供一種可以方便、隨時檢測出小分子激素的免疫層析測試條及其製造方法。
為了實現這一發明目的，本發明提供了一種免疫層析測試條，它包括支撐物、吸水纖維膜、硝酸纖維膜、樣品膜、防水膜和膠體金標記膜，其中硝酸纖維膜粘附在條形支撐物的中段，吸水纖維膜粘附在支撐物的頂端，吸水纖維膜的下端與硝酸纖維膜的上端搭接，膠體金標記膜、防水膜和樣品膜依次粘附在從支撐物的末端到硝酸纖維膜之間支撐物上，並且膠體金標記膜的一端與防水膜搭接，防水膜的一端與樣品膜搭接，樣品膜的一端與硝酸纖維膜搭接，其中膠體金標記膜一端與防水膜的搭接長度大於防水膜粘附在支撐物上的長度，所述的硝酸纖維膜上至少包含一種濃度的與所檢測的抗原所對應的抗體和一種抗免疫蛋白IgG的抗體，膠體金標記膜上包含用膠體金標記的、所檢測的抗原和用膠體金標記的免疫蛋白IgG。
本發明提供了一種免疫層析測試條，其中所述的硝酸纖維膜上包括三種不同濃度的與所檢測的抗原所對應的抗體。
本發明提供了一種免疫層析測試條，其中所述的三種濃度的與所檢測的抗原所對應的抗體和一種抗免疫蛋白IgG的抗體從位於樣品膜端向吸水膜端沿縱向均勻分布，每種抗體的噴塗高度為1-3毫米，四種抗體之間的間隔為2-3毫米。
本發明提供了一種免疫層析測試條，其中所述的樣品膜和膠體金標記膜為玻璃纖維膜。
本發明提供了一種免疫層析測試條，其中所述的檢測抗原是小分子抗原。
本發明提供了一種免疫層析測試條，其中所述的小抗原分子抗原為孕激素抗原或雌激素抗原。
本發明提供了一種製造免疫層析測試條的方法，其中它包括將硝酸纖維膜粘附在條形支撐物的中段上，將吸水纖維膜粘附在支撐物的頂端，吸水纖維膜的下端與硝酸纖維膜的上端搭接，將膠體金標記膜、防水膜和樣品膜依次粘附在從支撐物的末端到硝酸纖維膜之間的支撐物上，並且膠體金標記膜的一端與防水膜搭接，防水膜的一端與樣品膜搭接，樣品膜的一端與硝酸纖維膜搭接，其中膠體金標記膜一端與防水膜的搭接長度大於防水膜粘附在支撐物上的長度，所述的硝酸纖維膜上至少塗覆一種濃度的與所檢測的抗原所對應的抗體和一種抗免疫蛋白抗體，膠體金標記膜是在玻璃纖維膜上塗覆用膠體金標記的所檢測的抗原溶液和用膠體金標記的免疫蛋白溶液。
本發明提供了一種製造免疫層析測試條的方法，其中在所述的硝酸纖維膜不同部位上分別噴塗三種不同劑量的與膠體金標記抗原反應的抗體和一種抗免疫蛋白抗體，所述的不同部位是每種抗體從靠近樣品膜端到靠近吸水纖維膜端依次噴塗成呈線狀，三種不同劑量的與膠體金標記抗原反應的抗體依次為檢測線1、2、3，一種抗免疫蛋白抗體為對照線，抗體的四種劑量分別為0.3-0.6微克，1.0-1.7微克，2.6-3.9微克和4.4-5.6微克，每條線的噴塗高度約1毫米寬3毫米長，對照線位於距硝酸纖維素膜和吸水纖維膜連接處3-6毫米，各線間隔2～3毫米的距離，噴塗過後的硝酸纖維素膜經晾乾後，用40克/升-60克/升的白蛋白溶液浸泡封閉1-3小時，再用0.008-0.013摩爾的生理溶液洗滌2-4次，乾燥後密封保存。
本發明提供了一種製造免疫層析測試條的方法，其中將20-60微升的用膠體金標記的抗原溶液和20-60微升的用膠體金標記的免疫蛋白溶液混合後加在玻璃纖維膜上，在室溫或溫度為3-6℃下乾燥，製成膠體金標記膜。
本發明提供了一種製造免疫層析測試條的方法，其中所述的用膠體金標記的抗原溶液的製造步驟如下1.先用微量的0.08-012mol/L醋酸鹽溶液將膠體金溶液調節至酸鹼度為8.2-8.6；2.然後在80-120毫升膠體金溶液中加入300-500ug的所要檢測抗原的蛋白質溶液中，在室溫下攪拌10-15分鐘；3.再加入4-10毫升的0.8-1.3％聚乙二醇溶液；4.經過10000～100000克離心力作用20-40分鐘，小心吸去上清液；5.將沉澱物再和80-120毫升的0.2～0.5mg/ml聚乙二醇的緩衝液混合；
6.重複用10000～100000克離心力作用20-40分鐘，小心吸去上清液；7.將沉澱物再和80-120毫升的0.2～0.5mg/ml聚乙二醇的緩衝液混合後，加入30-70毫克的疊氮鈉，混合後已達防腐目的，置溫度為3-6℃保存。
本發明提供了一種製造免疫層析測試條的方法，其中所述的用膠體金標記的免疫蛋白溶液的製造步驟如下1.先用微量的0.08-012mol/L醋酸鹽溶液將膠體金溶液調節至酸鹼度7.8-8.2；2.然後在80-120毫升膠體金溶液中加入300-500ug免疫蛋白IgG溶液中，在室溫下攪拌10-15分鐘；3.再加入4-10毫升的0.8-1.2％聚乙二醇溶液；4.經過10000～100000克離心力作用20-40分鐘，小心吸去上清液；5.將沉澱物再和80-120毫升的0.2～0.5mg/ml聚乙二醇的緩衝液混合；6.重複用10000～100000克離心力作用20-40分鐘，小心吸去上清液；7.將沉澱物再和80-120毫升的0.2～0.5mg/ml聚乙二醇的緩衝液混合後，加入30-70毫克的疊氮鈉，混合後已達防腐目的，置溫度為3-6℃保存。
本發明提供了一種製造免疫層析測試條的方法，其中所述的聚乙二醇的分子量為20000；所述的醋酸鹽為醋酸鉀或醋酸鈉；蛋白溶液為白蛋白溶液或者鱟血清蛋白。
本發明提供了一種製造免疫層析測試條的方法，其中所述膠體金溶液的製備採用還原法；其步驟如下(a).首先將玻璃容器浸泡於3％-10％二氯二甲矽烷的氯仿溶液中30秒至1分鐘，室溫乾燥後用蒸餾水衝洗，再乾燥備用；(b).取80-120毫升的0.08％-0.12％氯金酸水溶液加入事先乾燥處理過的玻璃容器內加熱至沸，然後邊攪動邊加入0.5-0.9毫升的0.8％-1.2％還原劑水溶液，此混合液金在2分鐘內便由黃色溶液變為紫紅色溶液，繼續煮沸10-20分鐘，冷卻後加入蒸餾水使溶液的體積恢復到80-120毫升，完成膠體金的製備；本發明提供了一種製造免疫層析測試條的方法，其中所述的還原劑為檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、白磷或硼氫化鈉。
本發明與現有技術相比，本發明由於利用膠體金標記技術和定量免疫競爭法製造出快速檢測的測試條，能夠快速準確檢測出人體內的微量激素，用本發明的測試條進行檢測的快速檢測法具有高度的特異性和靈敏度，還具有穩定性好、重複性強，不使用特殊儀器，費用低廉，操作簡便易學，短時間就能判讀出結果，以利於人們隨時檢測自身的激素水平。


圖1為本發明的免疫層析測試條的側向示意圖。
具體實施例方式
參見圖1，本發明的免疫層析測試條包括支撐物1、吸水纖維膜2、硝酸纖維膜3、樣品膜4、防水膜5和膠體金標記膜6，硝酸纖維膜3粘附在條形支撐物1的中段，吸水纖維膜粘附在支撐物1的頂端，吸水纖維膜2的下端與硝酸纖維膜3的上端搭接，膠體金標記膜6、防水膜5和樣品膜4依次粘附在從支撐物1的末端到硝酸纖維膜3之間支撐物1上，並且膠體金標記膜6的一端與防水膜5搭接，防水膜5的一端與樣品膜4搭接，樣品膜4的一端與硝酸纖維膜3搭接，其中膠體金標記膜6一端與防水膜5的搭接長度大於防水膜5粘附在支撐物1上的長度，所述的硝酸纖維膜2上包括三種不同濃度的與檢測抗原(如孕激素抗原或雌激素抗原)對應的抗體和一種抗免疫蛋白抗體，所述的四種的抗體從位於樣品膜4端向吸水膜2端沿縱向均勻分布，每種抗體的噴塗高度為1-3毫米，四種抗體之間的間隔為2-3毫米，膠體金標記膜6上包含用膠體金標記的、所檢測的抗原和用膠體金標記的免疫蛋白IgG，所述的樣品膜4和膠體金標記膜6為玻璃纖維膜，所述的檢測抗原是小分子抗原，如孕激素抗原或雌激素抗原。
免疫層析測試條的製備方法包括硝酸纖維膜2的製備方法和膠體金標記膜6的製備方法，其中膠體金膜6的製備方法是將用膠體金標記的抗原溶液和用膠體金標記的免疫蛋白溶液混合後加在玻璃纖維膜上，乾燥後製成膠體金標記膜。
膠體金標記膜6的製備(一)膠體金溶液的製備其具體步驟如下(a).首先將玻璃容器浸泡於6％二氯二甲矽烷的氯仿溶液中1分鐘，室溫乾燥後用蒸餾水衝洗，再乾燥備用；(b).取90毫升的0.09％氯金酸水溶液加入事先乾燥處理過的玻璃容器內加熱至沸，然後邊攪動邊加入0.6毫升的0.9％檸檬酸鈉水溶液，此混合液金在2分鐘內便由黃色溶液變為紫紅色溶液，繼續煮沸15分鐘，冷卻後加入蒸餾水使溶液的體積恢復到90毫升，完成膠體金的製備。
(二)膠體金標記的抗原溶液的製備1.先用微量的0.09mol/L醋酸鉀溶液將上述膠體金溶液調節至酸鹼度8.3；2.然後在100毫升膠體金溶液中加入350ug的所要檢測抗原的白蛋白質溶液中，在室溫下攪拌12分鐘；3.再加入7毫升的1％分子量為20000聚乙二醇溶液；4.經過10000～100000克離心力作用25分鐘，小心吸去上清液；5.將沉澱物再和90毫升的0.4mg/ml分子量為20000聚乙二醇的緩衝液混合；6.重複用10000～100000克離心力作用25分鐘，小心吸去上清液；7.將沉澱物再和90毫升的0.4mg/ml分子量為20000聚乙二醇的緩衝液混合後，加入45毫克的疊氮鈉，混合後已達防腐目的，置溫度為5℃保存。
(三)膠體金標記的免疫蛋白溶液的製備1.先用微量的0.11mol/L醋酸鹽溶液將上述膠體金溶液調節至酸鹼度7.9；2.然後在100毫升膠體金溶液中加入350ug免疫蛋白IgG溶液，在室溫下攪拌14分鐘；3.再加入5毫升的1％分子量為20000聚乙二醇溶液；4.經過10000～100000克離心力作用25分鐘，小心吸去上清液；5.將沉澱物再和100毫升的0.4mg/ml聚乙二醇的緩衝液混合；6.重複用10000～100000克離心力作用25分鐘，小心吸去上清液；7.將沉澱物再和100毫升的0.4mg/ml聚乙二醇的緩衝液混合後，加入50毫克的疊氮鈉，混合後已達防腐目的，置溫度為4℃保存。
(四)膠體金標記膜的製備將50微升的上述膠體金標記的抗原溶液和50微升的上述膠體金標記的免疫蛋白溶液混合後加在玻璃纖維膜上，在室溫或溫度為4-5℃下乾燥，製成膠體金標記膜。
硝酸纖維膜的製備在所述的硝酸纖維膜2不同部位上分別噴塗三種不同劑量的與膠體金標記抗原反應的抗體和一種抗免疫蛋白抗體，它們依次為噴塗三種與膠體金標記抗原反應的抗體即檢測線1、2、3和一種抗免疫蛋白抗體即對照線，所述的不同部位是每種抗體從靠近樣品膜4端到靠近吸水纖維膜2端依次噴塗的呈線狀，抗體的四種劑量分別為0.4微克，1.2微克，3.0微克和4.8微克，每條線的噴塗高度約1毫米寬3毫米長，對照線位於距硝酸纖維素膜和吸水纖維膜連接處5毫米，各線間隔2～3毫米的距離，噴塗過後的硝酸纖維素膜3經晾乾後，用50克/升的白蛋白溶液浸泡封閉2小時，再用0.01摩爾的生理溶液洗滌3次，乾燥後密封保存。
免疫層析測試條的製備方法免疫層析測試條是將硝酸纖維膜3粘附在條形支撐物1的中段上，將吸水纖維膜粘附在支撐物1的頂端，吸水纖維膜2的下端與上述硝酸纖維膜3的上端搭接，將上述膠體金標記膜6、防水膜5和樣品膜4依次粘附在從支撐物1的末端到硝酸纖維膜3之間支撐物1上，並且膠體金標記膜6的一端與防水膜5搭接，防水膜5的一端與樣品膜4搭接，樣品膜4的一端與硝酸纖維膜3搭接，其中膠體金標記膜6一端與防水膜5的搭接長度大於防水膜5粘附在支撐物1上的長度，製成免疫層析測試條。
免疫層析測試條的使用方法下面以檢測雌激素進行說明1. 0.1-0.5毫升唾液或尿液加於樣品膜4上，等1分鐘；2.將位於樣品膜和膠體金標記膜之間的防水膜5去除；3.將0.1毫升水加於含有膠體金標記膜6上，等2分鐘；4.觀察測試條硝酸纖維素膜3上的變化，檢測線出現一條紅色條帶表示雌激素為400pg.兩條紅色條帶為200pg，三條紅色條帶為50pg/ml.四條紅色條帶為雌激素水平低於50pg/ml.沒有紅色條帶出現則視為雌激素水平高於400pg/ml.在測試條正常情況下，對照線應該顯示紅色條帶。
免疫層析測試條的工作原理將含有雌激素的唾液或尿液加入樣品膜上，唾液或尿液在吸水膜2的作用下，吸入到硝酸纖維膜3上，與硝酸纖維膜3上的1、2或3檢測線上的抗原結合，1分鐘後，使用者將防水膜撕掉，將0.1毫升水加於含有膠體金標記膜上，水使得膠體金標記膜6與樣品膜4緊緊地貼在一起，使得膠體金標記膜6上的用膠體金標記的雌激素抗原和用膠體金標記的免疫蛋白在在吸水膜2的作用下，吸入到硝酸纖維膜3上，用膠體金標記的雌激素抗原與硝酸纖維膜上的未完全被唾液或尿液中的雌激素中和的抗體反應顯色，用膠體金標記的免疫蛋白與硝酸纖維膜上的抗免蛋白抗體(即對照線)結合後顯色，使用膠體金標記免疫蛋白的目的是為了提示使用者可以通過硝酸纖維膜3上的對照線顯色與否來判定，測試條是否失效，從觀察硝酸纖維膜3的顯色情況可以看出唾液或尿液中含有的雌激素越多，檢測線顯色的條數越少，所以可以對唾液或尿液中的雌激素進行半定量的檢測。
上述實施例只是為了使公眾進一步理解本發明，而作的描述，不是對本發明的限定。
權利要求
1.一種免疫層析測試條，它包括支撐物(1)、吸水纖維膜(2)、硝酸纖維膜(3)、樣品膜(4)、防水膜(5)和膠體金標記膜(6)，其特徵在於硝酸纖維膜(3)粘附在條形支撐物(1)的中段，吸水纖維膜粘附在支撐物(1)的頂端，吸水纖維膜(2)的下端與硝酸纖維膜(3)的上端搭接，膠體金標記膜(6)、防水膜(5)和樣品膜(4)依次粘附在從支撐物(1)的末端到硝酸纖維膜(3)之間支撐物(1)上，並且膠體金標記膜(6)的一端與防水膜(5)搭接，防水膜(5)的一端與樣品膜(4)搭接，樣品膜(4)的一端與硝酸纖維膜(3)搭接，其中膠體金標記膜(6)一端與防水膜(5)的搭接長度大於防水膜(5)粘附在支撐物(1)上的長度，所述的硝酸纖維膜(2)上至少包含一種濃度的與所檢測的抗原所對應的抗體和一種抗免疫蛋白IgG的抗體，膠體金標記膜(6)上包含用膠體金標記的、所檢測的抗原和用膠體金標記的免疫蛋白IgG。
2.如權利要求1所述免疫層析測試條，其特徵在於所述的硝酸纖維膜(2)上包括三種不同濃度的與所檢測的抗原所對應的抗體。
3.如權利要求2所述的免疫層析測試條，其特徵在於所述的三種濃度的與所檢測抗原對應的抗體和一種抗免疫蛋白IgG的抗體從位於樣品膜(4)端向吸水膜(2)端沿縱向均勻分布，每種抗體的噴塗高度為1-3毫米，四種抗體之間的間隔為2-3毫米。
4.如權利要求3所述免疫層析測試條，其特徵在於所述的樣品膜(4)和膠體金標記膜(6)為玻璃纖維膜。
5.如權利要求1至4之一所述的免疫層析測試條，其特徵在於所述的檢測抗原是小分子抗原。
6.如權利要求5所述的免疫層析測試條，其特徵在於所述的小抗原分子抗原為孕激素抗原或雌激素抗原。
7.一種製造免疫層析測試條的方法，其特徵在於它包括將硝酸纖維膜(3)粘附在條形支撐物(1)的中段上，將吸水纖維膜粘附在支撐物(1)的頂端，吸水纖維膜(2)的下端與硝酸纖維膜(3)的上端搭接，將膠體金標記膜(6)、防水膜(5)和樣品膜(4)依次粘附在從支撐物(1)的末端到硝酸纖維膜(3)之間支撐物(1)上，並且膠體金標記膜(6)的一端與防水膜(5)搭接，防水膜(5)的一端與樣品膜(4)搭接，樣品膜(4)的一端與硝酸纖維膜(3)搭接，其中膠體金標記膜(6)一端與防水膜(5)的搭接長度大於防水膜(5)粘附在支撐物(1)上的長度，所述的硝酸纖維膜(2)上至少塗覆一種濃度的與所檢測的抗原所對應的抗體和一種抗免疫蛋白抗體，膠體金標記膜(6)是在玻璃纖維膜上塗覆標有膠體金標記的所檢測的抗原溶液和用膠體金標記的免疫蛋白溶液。
8.如權利要求7所述的免疫層析測試條的製造方法，其特徵在於在所述的硝酸纖維膜(2)不同部位上分別噴塗三種不同劑量的與膠體金標記抗原反應的抗體和一種抗免疫蛋白抗體，所述的不同部位是每種抗體從靠近樣品膜(4)端到靠近吸水纖維膜(2)端依次噴塗成呈線狀，三種不同劑量的與膠體金標記抗原反應的抗體依次為檢測線1、2、3，一種抗免疫蛋白抗體為對照線，抗體的四種劑量分別為0.3-0.6微克，1.0-1.7微克，2.6-3.9微克和4.4-5.6微克，每條線的噴塗高度約1毫米寬3毫米長，對照線位於距硝酸纖維素膜和吸水纖維膜連接處3-6毫米，各線間隔2～3毫米的距離，噴塗過後的硝酸纖維素膜(3)經晾乾後，用40克/升-60克/升的白蛋白溶液浸泡封閉1-3小時，再用0.008-0.013摩爾的生理溶液洗滌2-4次，乾燥後密封保存。
9.如權利要求7或8所述的免疫層析測試條的製造方法，其特徵在於將20-60微升的用膠體金標記的抗原溶液和20-60微升的用膠體金標記的免疫蛋白溶液混合後加在玻璃纖維膜上，在室溫或溫度為3-6℃下乾燥製成膠體金標記膜。
10.如權利要求9所述的免疫層析測試條的製造方法，其特徵在於所述的用膠體金標記的抗原溶液的製造步驟如下1.先用微量的0.08-012mol/L醋酸鹽溶液將膠體金溶液調節至酸鹼度8.2-8.6；2.然後在100毫升膠體金溶液中加入300-500ug的所要檢測抗原的蛋白質溶液中，在室溫下攪拌10-15分鐘；3.再加入4-10毫升的0.8-1.3％聚乙二醇溶液；4.經過10000～100000克離心力作用20-40分鐘，小心吸去上清液；5.將沉澱物再和80-120毫升的0.2～0.5mg/ml聚乙二醇的緩衝液混合；6.重複用10000～100000克離心力作用20-40分鐘，小心吸去上清液；7.將沉澱物再和80-120毫升的0.2～0.5mg/ml聚乙二醇的緩衝液混合後，加入30-70毫克的疊氮鈉， 混合後已達防腐目的，置溫度為3-6℃保存。
11.如權利要求9所述的免疫層析測試條的製造方法，其特徵在於所述的用膠體金標記的免疫蛋白溶液的製造步驟如下1.先用微量的0.08-012mol/L醋酸鹽溶液將膠體金溶液調節至酸鹼度7.8-8.2；2.然後在100毫升膠體金溶液中加入300-500ug免疫蛋白IgG溶液，在室溫下攪拌10～15分鐘；3.再加入4-10毫升的0.8-1.2％聚乙二醇溶液；4.經過10000～100000克離心力作用20-40分鐘，小心吸去上清液；5.將沉澱物再和80-120毫升的0.2～0.5mg/ml聚乙二醇的緩衝液混合；6.重複用10000～100000克離心力作用20-40分鐘，小心吸去上清液；7.將沉澱物再和80-120毫升的0.2～0.5mg/ml聚乙二醇的緩衝液混合後，加入30-70毫克的疊氮鈉， 混合後已達防腐目的，置溫度為3-6℃保存。
12.如權利要求10或11所述的免疫層析測試條的製造方法，其特徵在於所述的聚乙二醇的分子量為20000；所述的醋酸鹽為醋酸鉀或醋酸鈉；所述的蛋白溶液為白蛋白溶液或者鱟血清蛋白。
13.如權利要求12所述的免疫層析測試條的製造方法，其特徵在於所述膠體金溶液的製備採用還原法；其步驟如下(a).首先將玻璃容器浸泡於3％-10％二氯二甲矽烷的氯仿溶液中30秒至1分鐘，室溫乾燥後用蒸餾水衝洗，再乾燥備用；(b).取80-120毫升的0.08％-0.12％氯金酸水溶液加入事先乾燥處理過的玻璃容器內加熱至沸，然後邊攪動邊加入0.5-0.9毫升的0.8％-1.2％還原劑水溶液，此混合液金在2分鐘內便由黃色溶液變為紫紅色溶液，繼續煮沸10-20分鐘，冷卻後加入蒸餾水使溶液的體積恢復到80-120毫升，完成膠體金的製備。
14.如權利要求13所述的免疫層析測試條的製造方法，其特徵在於所述的還原劑為檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、白磷或硼氫化鈉。
全文摘要
本發明涉及了一種免疫層析測試條及其製造方法，免疫層析測試條包括支撐物(1)、吸水纖維膜(2)、硝酸纖維膜(3)、樣品膜(4)、防水膜(5)和膠體金標記膜(6)，本發明由於利用膠體金標記技術和定量免疫競爭法製造出快速檢測的測試條，能夠快速準確檢測出人體內的微量激素，用本發明測試條進行的快速檢測法具有高度的特異性和靈敏度，還具有穩定性好、重複性強，不使用特殊儀器，費用低廉，操作簡便易學，短時間就能判讀出結果，以利於人們隨時檢測自身的激素水平。
文檔編號G01N33/558GK1746675SQ20041007452
公開日2006年3月15日 申請日期2004年9月7日 優先權日2004年9月7日
發明者李人, 楊立邦, 申勇 申請人:李人