使用熱休克蛋白72作為敏感生物標誌物來檢測急性腎損傷的診斷方法
2023-05-07 11:36:11 2
專利名稱：使用熱休克蛋白72作為敏感生物標誌物來檢測急性腎損傷的診斷方法
使用熱休克蛋白72作為敏感生物標誌物來檢測急性腎損傷的診斷方法
說明書發明領域本發明涉及臨床醫藥領域並且涉及用於檢測急性腎損傷(Acute Kidney Injury,AKI)的診斷方法，更具體地涉及證實72kDa的熱休克蛋白(Hsp72)是ー種檢測AKI的非侵入性的、敏感的和早期生物標誌物，並且涉及檢測尿樣中的Hsp72的定量方法。
背景技術：
急性腎損傷是在由於不同原因住院的患者中發病率和死亡率的ー種重要的原因。據估計，AKI發病率的變化從在任何外科手術前具有正常腎功能的患者中的5%到進入重症監護病房(I⑶)的患者中的30%。儘管最近在診斷和治療上有了發展，AKI相關的發病率和死亡率仍舊保持高度升高(在I⑶中的患者中為40% -60% )並且在過去四十年裡沒有 顯著改善，這主要是由於可用於早期檢測AKI的工具缺乏敏感性和特異性(Clin J Am SocN印hrol (美國腎臟學學會臨床雜誌)3 :1895-1901，2088)。因為這樣，尋找早期生物標誌物越來越受到重視。而且，這些新的生物標誌物可能是用於早期檢測AKI的潛在工具，並且也可以用於區分不同程度的腎損傷，從而確定檢測由於嚴重的AKI發作而有風險發展慢性腎疾病的患者。因此，開發有效的生物標誌物將有助於在暴露於AKI的那些患者中(如進入I⑶的患者，將進行心臟外科手術的患者，腎移植患者或已經發展AKI的患者)中對於充分治療AKI進行適當的幹預，該生物標誌物將有助於對損傷進行分級，並且檢測具有慢性腎疾病發展風險的那些患者。在臨床實踐中，AKI診斷的確定是基於血清肌酸酐的升高並且通過評估腎小球濾過率(GFR)進行。儘管血清肌酸酐用於在慢性腎疾病患者中、在AKI患者中進行腎功能評估，但是，因為以下三點原因它並不是ー個好的指示劑1)大量腎組織可能被損傷，但不伴隨血清肌酸酐升高，在腎移植供體中存在明顯的實例，其失去50%的腎實質，並且在血清肌酸酐水平中並不存在任何變化，2)血清肌酸酐濃度取決於許多非腎因素，如在骨骼肌中肌酸轉化為肌酸酐，肌酸酐釋放到血液中等，因此取決於其釋放和累積，血清肌酸酐的升高以滯後形式發生，和3)血清肌酸酐可能被其它因素影響，如被體重、人種、性別、年齡、藥物消耗、肌肉代謝和蛋白攝取影響。關於GFR測定，這可能關於腎和非腎損傷而被改變。例如，血容量不足(hypovolemia)或在傳入小動脈中血管收縮或血管舒張程度的改變導致TGF的減少，伴隨隨後發生的血清肌酸酐升高，這與腎小管或腎損傷(tubular or renal injury)並不相關。所有這些因素使發展AKI的患者的早期幹預難以進行，並且後果是不能達到更好的預後。(Clin Transl Sci3 ；200-208 ；2008).生物標誌物是ー種生物分子，其內源性產生並且可能是用於檢測異常生物學過程的客觀指示物。此外，其可以有助於檢測藥理幹預是否可用於減少由病理過程導致的損傷。具體而言，在AKI患者中，有用的生物標誌物是這樣的ー種生物標記物，其有助於以早期、精確和容易的方式檢測AKI的主要結構併發症，其是急性腎小管壞死(acutetubular necrosis, ATN)。ATN的特徵在於由於刷狀緣損失和上皮的極性導致的嚴重的近端腎小管損傷。對於這些特徵，可以找到這樣的生物標誌物，所述生物標誌物可以在脫附細胞中被檢測到，並且會在尿中出現，由此反映與該症候群相關的腎小管損傷。所述生物標誌物不僅有助於區分ATN和其它類型的腎損傷，還可以潛在地鑑定腎小管損傷定位、損傷的原因和短暫幹擾(temporal curse)。ー些研究提出了用於ATN檢測的蛋白和生物化學標誌物，在它們中有=N-Zj醯基-b_D_氨基葡糖苷酶(N-acetil-b-D-glucosaminidasa, NAG),嗜中性白細胞明膠酶相關的脂籠蛋白(Neutrophil gelatinase associated lipocalin, NGAL),腎損傷分子-1 (Kim-1)，半胱氨酸蛋白酶抑制劑C和白細胞介素-18(IL-18) (Am J Physiol RenalPhysiol (美國生理學腎臟學雜誌)290 :F517-F529) (J Am Soc Nephrol (美國腎臟學學會雜誌)18 :904-912,2007) (Am J of Tranplantation(美國移植雜誌)6 :1639-1645 ;2006)。 在最近關於90名進行了心臟外科手術的患者的報導中，評估了 Kim-1、NAG和NGAL的診斷應用性。通過使用評分等級1，以即時方式或在心臟外科手術後3小時分析這些分子用於AKI檢測的能力，發現Kim-I的能力分別是0. 68和0. 65，NAG的能力分別是0. 61和0. 63，並且NGAL的能力分別是0. 59和0. 65。為了增加這些標誌物的敏感性，有必要組合定量它們，並且以這種方式，將AKI的敏感性和早期檢測分別增加到0.75和0.78 (Clin JAm SocN印hrol (美國腎臟學學會雜誌)5 ;873-882，2009)。這支持了這ー觀點，即必須繼續尋找具有更高的用於早期診斷的潛カ並且具有對AKI損傷分級能力的新型生物標誌物。據報導，在AKI現象過程中，激活了一些補償所產生的細胞應激的機制，其中之一是熱休克蛋白家族(Hsp)表達的增加(Experientia 18，571-573，1962)，其有助於恢復細胞穩態。這些蛋白屬於多基因家族，其分子量從10到150kDa。根據它們的分子量，這些蛋白被分類在6個亞家族中100-1 IOkDa, 90kDa, 70kDa, 60kDa, 40kDa和分子量在18和30kDa之間的 Hsp 亞家族(Ann Med. 4 :261-71，1999)。具體而言，Hsp70家族由4個同種型組成Grp78, mHsp95, Hsc70和可誘導的同種型Hsp72。後者在細胞應激後表達並且其誘導可以高達總細胞蛋白的15% (Cell stresschaperones (細胞應激分子伴侶)4 ;309_316，2003)。這一事實，與在AKI過程中發生的腎単位的近側腎小管的細胞脫附一起被用作本發明的基礎，即使用免疫測定法在蛋白水平和使用實時-聚合酶鏈式反應(實時PCR)在mRNA水平檢測作為AKI的敏感生物標誌物的尿 Hsp72。已經將ELISA (酶聯免疫吸附測定法)技術和蛋白質印跡分析廣泛用於在不同類型的樣品中使用抗體來檢測特異性蛋白(Immunology 6thedition (免疫學,第6版),2007)。將實時PCR測試用於具體基因的mRNA水平的定量測定。本發明有助於解決臨床實踐中存在的問題(即不能早期檢測AKI和不能對腎臟遭受的腎損傷的程度進行分級)，從而以有效療法對患者進行適當幹預。發明描述本發明涉及通過使用尿樣中的生物標誌物Hsp72的濃度早期檢測急性腎損傷的非侵入性診斷方法。這是ー種非侵入性、可靠的和容易的方法。在本發明中，用於檢測AKI的方法通過從哺乳動物(優選人)獲得尿樣和在蛋白和mRNA水平定量生物標誌物濃度進行，所述生物標誌物為熱休克蛋白72 (Hsp72)。生物標誌物濃度可以使用免疫測定法如ELISA和蛋白質印跡法(它們不限制本發明)在mRNA水平和/或蛋白水平進行測定。與對照值相比，來自生物標誌物定量的結果在40倍和533倍之間變化，並且這種增加取決於損傷強度，在尿中的生物標誌物Hsp72可以自在腎中引起損傷後的三小時起檢測到。Hsp72定量能夠對由局部缺血(ischemia)的時期延長而引起的損傷的強度進行分級，這對於臨床實踐是重要的，從而可以檢測遭受嚴重腎損傷的那些患者，這又允許進行適當的隨訪並且因此這是有重大意義的，原因在於其可以避免 或減少慢性腎疾病併發症。
實施例下面的實施例舉例說明本發明，並且決不對其有限制。實施例I.為了證實Hsp72作為AKI的敏感和早期生物標誌物的應用，我們使用了大鼠中的腎局部缺血/再灌注(I/R)模型。局部缺血/再灌注模型整個研究中一直使用雄性Wistar大鼠。將大鼠用戊巴比妥鈉(30mg/kg i.p.)進行麻酔，進行剖腹手術，切開腎蒂，其後通過夾住兩條動脈歷時10，20,30,45和60分鐘來中斷到腎中的血流，目的是評估腎損傷的不同程度，從低度腎損傷到中度腎損傷到嚴重腎損傷。此外，包括進行了假外科手術(false surgery)的組作為對照。每組包括6隻大鼠。在局部缺血時期結束時，將大鼠縫合併且容許進行腎再灌注24小吋。為了確定定量Hsp72 mRNA水平作為生物標誌物的應用性，使用36隻大鼠，將其分到6個組中；使對照組和大鼠進行10，20，30，45和60分鐘的雙側局部缺血，將它們都進行24小時的再灌注。用特定條件收集尿以避免mRNA降解，如下所述。以類似方式，並且為了確定蛋白Hsp72水平的定量作為早期生物標誌物的應用，將另外33隻大鼠分到11個組中進行假外科手術的對照組，進行了 30分鐘雙側局部缺血和3，6，9，12，18，24，48，72，96和120小時再灌注時期的大鼠。收集尿，使用ELISA方法來確定Hsp72蛋白水平作為AKI的早期生物標誌物的敏感性。在所有的組中，通過肌酸酐清除率並且通過測量腎血流來評估腎功能。使用光學顯微鏡和形態測量法來評估結構損傷。作為腎小管損傷標誌物，測量尿NAG和總蛋白水平。為了研究Hsp72是否在腎中的局部缺血過程中被誘導，評估在腎組織提取物中的Hsp72的mRNA和蛋白水平。為了確定Hsp72是否是檢測不同程度腎損傷的敏感和早期生物標誌物，使用ELISA和蛋白質印跡法來定量尿Hsp72水平。實施例2.通過使用實時PCR進行Hsp72檢測對於Hsp72 mRNA水平檢測，將進行30分鐘的雙側局部缺血的30隻雄性Wistar大鼠分為6組進行假外科手術(對照組)的大鼠和進行10，20，30，45和60分鐘的雙側局部缺血和24小時的再灌注的大鼠。外科手術後ー小時，將大鼠置於代謝籠中24小吋。代謝籠之前用RNA酶抑制劑(RNAse Zap, Ambion)處理。在歷時24小時收集尿液的管中，加入300 V- IRNA later (Ambion),將樣品以3000rpm離心30分鐘。在磷酸鹽緩衝液pH = 7. 4中重新懸浮尿的沉降物並且再次以13000 rpm離心3分鐘。按照生產商(Invitrogen)提供的Trizol方法進行總RNA提取。通過260 nm處的UV吸光度確定RNA濃度，並且通過I %瓊脂糖凝膠電泳證實RNA完整性。在60分鐘內，在37°C使用逆轉錄酶反應(RT)RNA
合成每種cDNA。通過實時PCR檢測Hsp72 mRNA水平。包括核糖體RNA 18S作為對照基因來校正擴增效率變化。實施例3.通過使用ELISA檢測Hsp72關於Hsp72蛋白水平檢測，包括36隻大鼠並且進行10，20，30，45和60分鐘的雙側局部缺血。外科手術後ー小時，將大鼠置於代謝籠中24小時並且收集尿。尿必須立即用於ELISA或蛋白質印跡測定法，不然必須在-80°C保存以避免Hsp72降解。關於通過ELISA定量Hsp72，使用由Stressgene生產的商購試劑盒Hsp70高敏感性ELISA試劑盒，簡要解釋如下 I)將100 U I尿樣加入ELISA板的每個孔中；2)將該板在室溫溫育2小吋，並且伴隨輕柔搖動；3)在每個孔中必須用由該試劑盒提供的洗滌緩衝液進行三次洗滌；4)必須將100 U I ー級抗體(抗_Hsp72)加入孔中，並且將板溫育60分鐘。在該時期結束的時候，必須如第三點提及進行三次洗滌；5)必須加入100 ill與HRP偶聯的ニ級抗體，並且再次在室溫溫育60分鐘。在該時間結束的時候，必須再進行三次洗滌；6)必須將IOOiU底物溶液(來自該試劑盒)加入每個孔中，並且必須在室溫溫育所述板30分鐘；7)必須加入100 U I終止溶液(來自該試劑盒)；8)必須如生產商指示在450nm讀取所述板。實施例4.使用蛋白質印跡法來檢測Hsp72使用來自在上一實施例中所述大鼠的相同的尿樣。必須將每份尿I : 100稀釋，並且僅使用IOyl的稀釋的尿。將稀釋的尿與IOiIl上樣緩衝液(6% SDS，15%甘油，150mM Tris，3%溴酚藍，2% P -巰基こ醇，pH 7. 6)混合。將蛋白在95°C變性5分鐘，在
8.5% SDS-PAGE凝膠中電泳分離，並且在9V在60分鐘內，在轉移印跡(SD cell, BioRad)中電印跡到預先在IX遷移緩衝液(190mM甘氨酸，2mM Tris鹼，SDS 0. I %, 200mL甲醇)中平衡的聚ニ氟こ烯(polivinil difluoride)膜(PVDF, Amersham Pharmacia Biotech,Psicataway,NJ,USA)上，並且在室溫，用5%封閉試劑(BIORAD)在TBS-T (Tris緩衝鹽水和吐溫)中進行封閉。在封閉步驟後，將膜在4°C用抗-Hsp72—級抗體I : 5000 (Stressgene)溫育。溫育後，將膜洗滌用TBS-T三次，每次洗滌10分鐘。隨後，將I : 5000的與過氧化物酶綴合的IgG山羊杭-小鼠ニ級抗體(Santa Cruz Biotechnology Inc)與膜在室溫溫育90分鐘，並且將膜再次洗滌6次。使用商購的試劑盒ECL plus (GE衛生保健生命科學(GEHealthcare Life Sciences))檢測Hsp72的量,並且掃描獲得的條帶進行光密度分析。結果首先，我們評估了產生不同時期的雙側局部缺血(10-60分鐘)和24小時的再灌注對腎功能的影響。五組大鼠經歷了局部缺血，發展了腎功能不全，由血清肌酸酐的進行性升高和通過肌酸酐清除率測量的GFR的減少證實，如在圖IA和IB中所顯示。腎功能不全與10到30%的腎血流減少相關，不伴隨平均動脈壓的變化，如在圖IC和ID中詳細顯示。光學顯微鏡研究掲示，不同的雙側局部缺血時期和24小時的再灌注誘導了與引起的局部缺血時間相應的不同程度的腎小管損傷，如在圖2的(A)到(F)每組的代表性圖象中所顯示。損傷的特徵在於刷狀緣的損失、腎小管擴張、細胞脫附和管型形成。在圖2G和2H中顯示的每個視野內的管型數目和受影響的腎小管區域百分比分析，掲示局部缺血的時期越長，發展的腎小管損傷程度越大，這意味著存在腎小管損傷和管型數目的進行性増加，所述腎小管損傷和管型數目的進行性増加與損傷的強度成比例。通過光學顯微鏡評估的組織學損傷是確定由局部缺血/再灌注誘導的損傷程度的黃金標準，這是為什麼在下幅圖中我們將顯示在Hsp72生物標誌物和腎小管損傷之間的相關性的原因。評估了腎小管損傷和氧化應激的ー些經典標誌物，如尿蛋白排洩、N-こ醯基-P -D-氨基葡糖苷酶(NAG)和H202。如在圖3A中所顯示，NAG升高僅在局部缺血30分鐘後具有統計學意義，這意味著這種標誌物不能鑑定由更短 時期局部缺血(10或20分鐘)誘導的腎損傷。關於氧化應激標誌物，H2O2尿排洩從局部缺血10分鐘開始升高，但是敏感性並不足以區分不同程度的局部缺血，尤其是20分鐘和60分鐘之間的局部缺血，見圖3B。最終，我們觀察到蛋白尿是檢測不同程度腎損傷的最佳標誌物，如在圖3C中所顯示。為了評估Hsp72是否在不同時期的局部缺血過程中在腎組織中被誘導，確定腎組織中的Hsp72 mRNA和蛋白質水平，這意味著一旦收集了尿，即處死大鼠並且取ー個腎進行mRNA和蛋白提取。如在圖4A和4B中顯示，在來自具有I/R的組的每隻大鼠的腎組織中，Hsp72 mRNA和蛋白水平都顯著增加。此外，要理解其進行性増加明顯限制了由不同時期的局部缺血/再灌注誘導的腎損傷的不同程度。這些結果顯示在I/R現象中，Hsp72表達的増加與誘導的損傷的程度成比例，這是令人感興趣的並且有利於本發明。利用這些數據，我們決定研究該蛋白質是否能夠在遭受腎局部缺血/再灌注損傷的大鼠的尿中被檢測到用以開發敏感的和非侵入性的方法。為此目的，我們通過使用兩種免疫測定法確定Hsp72水平。第一種方法通過ELISA進行，第二個方法通過蛋白質印跡分析進行。通過ELISA定量尿的Hsp72掲示這種蛋白是ー種優越的用於AKI的生物標誌物，因為其能夠白10分鐘的局部缺血起在尿中被檢測到，並且顯示與對照相比，與由局部缺血誘導的腎損傷的程度相應的進行性増加在經歷60分鐘的局部缺血的大鼠中達到25倍的誘導，如在圖4C中顯示。這些生物標誌物的進行性升高明顯與關於局部缺血損傷的黃金標準，即組織病理學分析相關。圖5A顯示在尿中的Hsp72的量與管型形成之間的正相關性，其相關性為0. 83,p < 0. 0001，並且圖5B顯示在尿Hsp72與受影響的區域的百分比之間的相關性，其為0. 79並且p < 0. 0001。我們用來檢測hsp72蛋白水平的其它策略是對來自不同組的尿樣進行蛋白質印跡分析。圖6A中的上圖描述了來自蛋白質印跡分析的放射自顯影，而下圖顯示了掃描的條帶的光密度分析。如可以觀察到的，I/R在經歷了不同時期的局部缺血的大鼠中誘導了尿Hsp72水平的顯著增加。類似於ELISA分析，自10分鐘局部缺血起，Hsp72的檢測具有統計學顯著性，並且其與誘導的腎損傷的程度成比例升高。與ELISA相比，使用蛋白質印跡法檢測不同程度的腎損傷的敏感性更高，因為在10分鐘組中Hsp72增加是40倍，逐漸增加，在具有60分鐘的嚴重腎損傷的組中達到535倍。在尿中的Hsp72的量與管型形成之間的相關性顯示在圖6B中，其是0.9476，p < 0.0001。這些結果證實，尿Hsp72檢測的敏感性足以檢測不同程度的腎損傷，然而通過蛋白質印跡分析檢測這種蛋白優於ELISA分析(見相關性)。此外，重要的是強調使用蛋白質印跡分析，其僅需要0. IiU的尿，而使用ELISA，其則需要100 ill的尿。為了研究Hsp72檢測是否不僅僅限於蛋白水平的定量，我們決定研究在經曆局部缺血的大鼠尿中的Hsp72 mRNA豐度。提取的RNA的完整性顯示在圖7A中。與對照組相比，在經歷了局部缺血的大鼠中，尿的Hsp72mRNA水平増加，如在圖7B中顯示。如在蛋白質水平上發生的那樣，在尿中的mRNA水平與誘導的損傷的程度成比例増加。這用黃金標準進行了證實，並且如在圖7C中顯示，在Hsp72 mRNA水平和每視野的管型數目之間的顯著相關性為 0.8509。最後，為了評估Hsp72作為AKI的早期生物標誌物的應用性，在經歷了 30分鐘局部缺血和3-120小時再灌注時期的大鼠中確定尿的Hsp72濃度。圖8顯示與腎小管損傷的其它標誌物相比的Hsp72檢測。如在圖SC中顯示，自早期時期(3小時的再灌注)觀察到Hsp72的顯著升高，在18小時的再灌注達到峰值，隨後這種蛋白在尿中的排洩減少，這與72小時後腎小管的再生作用相關。這些結果顯示Hsp72作為AKI檢測的早期生物標誌物的應用性。 此外，與對照組相比，來自生物標誌物定量的結果更大，並且觀察到的増加取決於損傷強度，該結果是使用三種不同方法觀察到的。重要的是強調能夠自腎損傷被誘導後的前三個小時起檢測到尿的Hsp72。實施例5.在健康活腎供體和在AKI患者中的尿Hsp72水平。收集來自5名健康腎供體(對照)和9名來自在Instituto Nacional de CienciasMedicas y Nutricion, Salvador Zubirdn 的 IQJ 的敗血症性 AKI 患者的樣品。根據AKIN (Acute Kidney Injury Network(急性腎損傷網絡))指南,通過與基礎相比,血清肌酸酐0.3mg/dl以上的増加來確定AKI的診斷。在健康供體中，收集腎切除術(知情同意)之前一天當天的第一次尿液。每天監測所有的敗血症患者，並且當確診AKI時，通過排空尿收集袋來收集新鮮尿液。冷凍所有的樣品，並且在分析Hsp72水平之前將其保存在_80°C。在健康供體和AKI患者中的Hsp72尿水平。(結果)為了確定Hsp72是否是檢測人中的AKI的敏感生物標誌物，通過蛋白質印跡法分析該蛋白在健康供體中的尿水平，並且與在重症監護病房中已發展AKI的那些患者進行比較。AKI的定義為血清肌酸酐增加至少0. 3mg/dL,或6小時的尿體積少於0. 5ml/kg/h。表I顯示了來自5名健康腎供體和9名患有敗血症性AKI的患者的一般特徵和腎功能。在AKI患者的組中，5名為女性，4名為男性，年齡範圍在24到84歲。進入ICU時，所有的患者顯示正常的血清肌酸酐值，然而他們在I⑶期間，肌酸酐從0. 55+-0. 05增加到2. 30+-0. 52mg/dL，顯示了 AKI的發展。在圖9中顯示了尿的Hsp72水平。在健康腎供體的尿中，Hsp72幾乎檢測不到(33. 7+-7. I任意單位)，而在AKI患者中Hsp72水平增加(583+-85. I)。注意，兩名診斷患有AKI的患者在住院期間死亡，並且是顯示較高Hsp72水平的患者。表I.在健康腎供體和患有敗血症性急性腎損傷的患者中的一般特徵和腎功能
受試者編性引年齡診斷基線SCr 在AKI的取樣後的隨結果/最後的SCr號 (歲) S('r 訪(天) t_(m /dL) (ny dL)_W(IL)_健康腎的活體供體
權利要求
1.已經充分描述了本發明，並且認為其是有新穎性的，我們要求下列各項作為獨有權利，所述各項包含在下述權利要求中ー種早期檢測急性腎損傷的診斷方法，所述方法包括 a.從哺乳動物獲得尿樣；和 b.定量生物標誌物熱休克蛋白72(Hsp72)的濃度。
2.根據權利要求I所述的方法，其中所述哺乳動物是人。
3.根據權利要求I所述的方法，其中自在腎中引起損傷後三小時起能夠檢測到尿樣品中的Hsp72。
4.根據權利要求I所述的方法，其中Hsp72能夠對由增加的急性腎損傷時期引起的損 傷的強度進行分級。
5.根據權利要求I所述的方法，其中所述生物標誌物的濃度能夠在mRNA水平確定。
6.根據權利要求I所述的方法，其中所述生物標誌物的濃度能夠使用免疫測定法進行測定。
7.根據權利要求5所述的方法，其中所述免疫測定法是ELISA。
8.根據權利要求5所述的方法，其中所述免疫測定法是蛋白質印跡法。
9.根據權利要求I所述的方法，其中與對照值比較，來自所述生物標誌物定量的結果是40-533倍，並且這種增加取決於損傷強度。
全文摘要
本發明涉及一種通過測量尿樣中的生物標誌物濃度來檢測早期急性腎衰竭的可靠的、容易進行的非侵入性診斷方法，所述生物標誌物選自70KDa家族的熱休克蛋白。更具體地，本發明涉及熱休克蛋白72的鑑定，其中所述生物標誌物通過ELISA和蛋白質印跡法或通過使用實時RT-PCR在mRNA水平進行鑑定。本發明有助於解決現存於醫藥領域中的問題，即不能在早期階段檢測急性腎衰竭或檢測腎損傷的嚴重性，從而及時以有效療法來治療患者。
文檔編號G01N33/68GK102762985SQ201080062143
公開日2012年10月31日 申請日期2010年11月23日 優先權日2009年11月23日
發明者喬納森·巴雷拉凱莫爾, 諾瑪·阿拉塞利·博瓦迪利亞桑多瓦爾 申請人:墨西哥國立自治大學