牛膝提取物的製備方法及其應用的製作方法
2023-05-07 20:47:01 2
牛膝提取物的製備方法及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種牛膝提取物的製備方法及其應用，所述牛膝提取物在TLC矽膠薄層板上與10%的硫酸乙醇反應呈淺藍色，其HRMS給出的準分子離子峰m/z204.5126[M+Na]+。本發明通過藥效實驗驗證：本發明方法製備得到的牛膝提取物具有顯著的降尿酸效果，其對小鼠的灌胃最大耐受量大於相當於生藥240g/kg，具有極大的安全性。
【專利說明】牛膝提取物的製備方法及其應用
【技術領域】
[0001]本發明屬於中藥製劑領域，具體涉及一種牛膝提取物的製備方法及其在製備降尿酸藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]隨著人們物質生活不斷豐富，生活節奏日益加快，高尿酸血症和痛風的發病率不斷上升。當人體的血清尿酸值≥416 μ mo I / L(710 mg / dl)，稱為高尿酸血症。痛風則是由於嘌呤類物質代謝紊亂，產生尿酸過多和(或)尿酸排洩減少，血尿酸濃度持續增高導致尿酸鹽結晶沉積軟組織所致的一組代謝性疾病。痛風的臨床特徵是高尿酸血症、反覆發作的急性關節炎，以及痛風石形成並沉積於關節、結締組織和腎臟，導致關節活動障礙或畸形，腎尿酸結石或痛風性腎病。高尿酸血症是痛風的前提與重要生化基礎，痛風患者在其病程中的某一階段必將有高尿酸血症的存在。
[0003]由高尿酸血症引發的痛風性關節炎發作時關節的紅腫熱痛，及高尿酸血症與其他各種疾病的潛在關係，嚴重影響著高尿酸血症和痛風患者的日常生活和工作。因此，當前對於降尿酸的藥物研究尤為重要。
【發明內容】
[0004]本發明的一個目的在於提供一種牛膝提取物的製備方法。
[0005]本發明的另一個目的在於提供牛膝或其提取物在製備降尿酸藥物或保健品中的應用。
[0006]本發明的另一個目的在於提供一種降尿酸藥物。
[0007]本發明所採取的技術方案是:
一種牛膝提取物的製備方法，包括如下步驟:
1)取牛膝粉碎後，用90~95%(V/V)的乙醇水溶液浸提，將浸提液減壓濃縮得浸膏；
2)將浸膏溶解於50~70°C的溫水中，冷卻後用氯仿萃取，減壓濃縮得到氯仿部分浸
膏；
3)氯仿部分浸膏經矽膠柱層析，石油醚(6(T90°C)-丙酮(石油醚，50:1，20:1,10:1,5:1, 2:1，丙酮)梯度洗脫，TLC檢測，相同部分合併到一起，共分成10個部分；
4)部分5經矽膠製備薄層，展開劑為石油醚:乙酸乙酯(5:1，V/V)，分離提純得到牛膝提取物，該物質在TLC矽膠薄層板上與10%的硫酸乙醇反應呈淺藍色，該化合物的HRMS給出的準分子離子峰m/z 204.5126[M+Na] +。
[0008]作為優選的，步驟I)是用93% (V/V)的乙醇水溶液提取2~4次。
[0009]牛膝或其提取物在製備降尿酸藥物或保健品中應用。
[0010]所述牛膝提取物採用上述的方法製備得到。
[0011]一種降尿酸藥物，其主要成分為牛膝或其提取物。
[0012]所述牛膝提取物採用上述的方法製備得到。[0013]所述藥物還含有藥學上可以接受的載體和/或輔料。
[0014]所述藥物為口服製劑或注射液。
[0015]本發明的有益效果是:本發明通過藥效實驗驗證:本發明方法製備得到的牛膝提取物具有顯著的降尿酸效果，其對小鼠的灌胃最大耐受量大於相當於生藥240g/kg，具有極大的安全性。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016]圖1為高尿酸血症小鼠造模結果；
圖2為牛膝對小鼠高尿酸血症的藥效試驗的結果。
【具體實施方式】
[0017]下面結合實施例對本發明作進一步的說明，但並不局限於此。
[0018]實施例1牛膝提取物的製備方法
(1)取牛膝50kg用中藥粉碎機粉碎至粗粉，粉碎後用93%乙醇浸提(80LX3次)，減壓濃縮得總浸膏3800g ；
(2)總浸膏溶解在10.0L約60°C的溫熱水，冷卻後用氯仿萃取(3.0LX 10次)，減壓濃縮得氯仿部分浸膏1500g ；
(3)氯仿部分浸膏經矽膠柱層析，石油醚(60~90°C)_丙酮(石油醚，50:1，20:1,10:1, 5:1, 2:1，丙酮)梯度洗脫，TLC檢測，相同部分合併到一起，共分成10個部分；
(4)部分5經矽膠製備薄層，展開劑為石油醚:乙酸乙酯(5:1，V/V)，分離提純得到牛膝提取物12750mg，該物質在TLC矽膠薄層板上與10%的硫酸乙醇反應呈淺藍色，其HRMS給出的準分子離子峰m/z 204.5126[M+Na] +。
[0019](5)往牛膝提取物中加入8 g/L羧甲基纖維素鈉水溶液，製備成牛膝提取物濃度為lmg/ml的溶液備用，進行後面的動物灌胃做藥理學實驗。
[0020]實施例2牛膝提取物對小鼠的急性毒性試驗
分組:將正常小鼠隨機均等分為四組:空白組(生理鹽水)、60mg/kg、120mg/kg、240mg/kg牛膝提取物組，每組小鼠10隻，體重20±2g，均為雄性。
[0021]灌胃試驗:各組小鼠均禁食>12h，分別為每組小鼠稱量體重，一次性為各組每隻小鼠按體重灌胃以相應藥品，觀察14天內小鼠的狀態、行為活動及死亡情況，並進行記錄。
[0022]空白組小鼠以生理鹽水灌胃後無一死亡，試驗結束，小鼠精神和飲食慾均未見異常；60mg/kg牛膝提取物組小鼠灌胃後無一死亡，試驗結束，小鼠精神和飲食慾均未見異常；120mg/kg牛膝提取物組小鼠中1號在灌藥後四肢無力，第2天死亡，2號小鼠第1天出現尾巴偶然僵直並抖動，精神緊張，隨後行為無異常，疑為個體現象，其餘小鼠行為正常；240mg/kg牛膝提取物組小鼠 灌胃後無一死亡，試驗結束時，小鼠精神和飲食慾均未見異常。
[0023]實施例3牛膝對小鼠高尿酸血症的藥效試驗
1、羧甲基纖維素鈉助懸劑的製備
電子稱量儀準確稱取羧甲基纖維素鈉粉末，用生理鹽水配製濃度為8 g/L助懸劑。
[0024]2、造模劑的製備
氧嗪酸鉀造模劑的製備:稱取氧嗪酸鉀1.5g，加50ml羧甲基纖維素鈉助懸劑，超聲波助懸15min，得0.03g/ml氧嗪酸鉀造模劑；次黃嘌呤造模劑的製備:稱取次黃嘌呤0.3g，加50ml羧甲基纖維素鈉助懸劑，超聲波助懸15min，得0.006g/ml次黃嘌呤造模劑。
[0025]3、高尿酸血症小鼠模型製造
分組:將正常小鼠隨機均等分為三組:空白組、單用氧嗪酸鉀(300mg/kg)模型組、氧嗪酸鉀(300mg/kg)和次黃嘌呤(60mg/kg)聯用模型組，每組小鼠10隻，體重20±2g，均為雄性。
[0026]造模試驗:各組小鼠禁食>12h，分別為每組小鼠稱量體重，依體重確定小鼠實際給藥量，為各組每隻小鼠腹腔注射，注射相應藥品(空白組:生理鹽水、單用氧嗪酸鉀模型組:氧嗪酸鉀300mg/kg、氧嗪酸鉀和次黃嘌呤聯用模型組:氧嗪酸鉀300mg/kg和次黃嘌呤60mg/kg)o 2h之後，對各組小鼠眼球採血，3500r離心分離血清，取血清測試三組小鼠的血尿酸濃度。
[0027]統計學方法:採用SPSS 10.0統計軟體，數據x±s表示，採用單因素方差分析，組間比較用檢驗，P <0.05被認為有顯著性差異。
[0028]本實驗以氧嗪酸鉀(300mg/kg)和次黃嘌呤(60mg/kg)聯用製備高尿酸模型,經過2h後，檢測血尿酸水平，發現明顯高於空白對照組，表明造模成功，見表1、圖1。
[0029]表1.小鼠高尿酸血症造模試驗血尿酸水平
【權利要求】
1.一種牛膝提取物的製備方法，包括如下步驟: 1)取牛膝粉碎後，用90~95%(V/V)的乙醇水溶液浸提，將浸提液減壓濃縮得浸膏； 2)將浸膏溶解於50~70°C的溫水中，冷卻後用氯仿萃取，減壓濃縮得到氯仿部分浸膏； 3)氯仿部分浸膏經矽膠柱層析，石油醚(6(T90°C)-丙酮(石油醚，50:1，20:1,10:1,5:1, 2:1，丙酮)梯度洗脫，TLC檢測，相同部分合併到一起，共分成10個部分； 4)部分5經矽膠製備薄層，展開劑為石油醚:乙酸乙酯(5:1，V/V)，分離提純得到牛膝提取物，該物質在TLC矽膠薄層板上與10%的硫酸乙醇反應呈淺藍色，其HRMS給出的準分子離子峰 m/z 204.5126 [M+Na] +。
2.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟I)是用93%(V/V)的乙醇水溶液提取2~4次。
3.牛膝或其提取物在製備降尿酸藥物或保健品中應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特徵在於，所述牛膝提取物採用權利要求1或2所述的方法製備得到。
5.一種降尿酸藥物，其主要成分為牛膝或其提取物。
6.根據權利要求5所述的降尿酸要求，其特徵在於，所述牛膝提取物採用權利要求1或2所述的方法製備得到。
7.根據權利要求5所述的藥物，其特徵中在於，所述藥物還含有藥學上可以接受的載體和/或輔料。
8.根據權利要求5所述的藥物，其特徵在於，所述藥物為口服製劑或注射液。
【文檔編號】A61K36/21GK103610716SQ201310567564
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月14日 優先權日:2013年11月14日
【發明者】臧林泉, 臧詩蕾, 吳之喬 申請人:廣東藥學院