免疫調節組合物的製作方法

2023-04-29 22:39:21 2

專利名稱：：免疫調節組合物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及免疫調節藥物，可用於醫學和獸醫學中。具體來說，本發明涉及可用於免疫導向治療(immune-oriented)的免疫調節組合物，特別是用於胂瘤、傳染性疾病、自身免疫疾病和過敏性疾病的治療的免疫調節組合物。
背景技術：
：免疫系統不能有效地發揮其基本功能導致了各種繼發性免疫缺陷的發生，其在臨床上表現為幾種典型的綜合症傳染性綜合症、過敏(特應性反應)性綜合症、自身免疫性綜合症和淋巴組織增生綜合症。現在公知大部分多發病和功能性障礙伴發有免疫缺陷。免疫抑制不僅伴發於AIDS,也伴發於許多傳染性疾病、肺瘤、創傷、燒傷和損傷中。其可以在各種病因學的腐敗狀態、老化、分娩、新生兒的早產和外科手術中觀察到。免疫導向治療方法的應用是現在重要的一種應用醫學。若沒有這些方法則不能治療許多疾病，它們是綜合治療的一種必須組成。具有親免疫活性的藥物的範圍很寬而且多樣化。由現有技術(專利US4138479，公開於06.02.1979)已知一種水溶性免疫增強劑，其表現為破碎酵母細胞壁的抽提產物。已知一種免疫調節組合物(專利US6509313、公開於2003年1月21日)，其含有具有細胞因子活性的製劑，該製劑可以為天然、重組或突變的細胞因子。該組合物用於刺激、維持或抑制免疫應答。在專利US6509313說明書中記載了含有細胞因子活性劑的組合物的口服給藥可能性。然而，如可從提供的實施例推斷的該組合物通過皮下注射給藥或通過硬膏或吸入器的應用來給藥。而且提出建議"避免胃腸道的水解環境"(15欄倒數第二段)。此外，還應指出的是，迄今為止已知的細胞因子活性劑為生產成本極高的高純度的天然或重組蛋白。還已知一種組合物，其含有酵母細胞壁成分作為活性成分(專利US691卯82、公開於2005年7月19日)。其口服給藥表現出療效，特別是在過敏性疾病的治療中。上述成分刺激短鏈脂肪酸的合成，所述短鏈脂肪酸對人腸道的健康狀況的貢獻最近備受重視。該組合物未利用有巨大潛力的酵母作為異源蛋白的生產菌。
發明內容本發明的目的在於，提供一種低成本製劑，其可用於免疫導向治療，特別是用於腫瘤、傳染性疾病、自身免疫疾病和過敏性疾病的治療，而且不破壞皮膚表皮就能對病人給藥。考慮到患者的免疫系統由於未知的原因不識別已經存在的外源因子而導致疾病，本發明人的目的在於，開發一種製劑，所述製劑通過進一步刺激各種免疫細胞增殖，可以提供附加的抗原刺激以實現第一階段免疫應答。從而本發明的進一步目的在於，提供一種含有人和動物免疫細胞活化和增殖因子的藥物組合物。上述目的通過提供一種含有異源疏水性細胞因子蛋白的酵母生產菌的水不溶性破碎細胞成分的組合物來達成，其中，所述生產菌中目的疏水性細胞因子蛋白已被合成。具體來說，該細胞因子蛋白為白細胞介素-2(IL-2),該酵母生產菌為在全俄樣吏生物菌種保藏中心以No.Y-791保藏的釀酒酵母這種組合物其本身無活性，但是可以在加入增溶劑和水後最終得到本發明的免疫調節組合物後用於免疫調節的目的。在一種替代和最優選的實施方式中，本發明的組合物含有酵母生產菌(其中目的異源疏水性細胞因子蛋白(特別是白細胞介素-2(IL-2))已被合成)的水不溶性破碎的細胞成分和增溶劑(特別是十二烷基硫酸鈉)。加入水便足以活化所述組合物。最後，本發明的目的通過提供一種組合物來達成，所述組合物含有異源疏水性細胞因子蛋白的酵母生產菌的水不溶性破碎細胞成分、增溶劑和水，所述生產菌中已合成了目的疏水性細胞因子蛋白。具體來說，提供一種含有酵母生產菌的水不溶性破碎細胞成分的組合物，其中所述生產菌中已合成了異源白細胞介素-2(IL-2),該組合物還含有增溶劑和水。該組合物具有免疫調節活性。在優選的實施方式中，該酵母生產菌為在全俄微生物菌種保藏中心以No.Y-791保藏的釀酒酵母(S(3cc/2aram少cwcereWw'ae)菌抹，該菌株為人重組白細胞介素-2的生產菌。在該組合物中使用的增溶劑優選為十二烷基硫酸鈉。所要求保護的組合物可以以最有效的方式利用異源細胞因子的酵母生產菌的治療潛力，同時避免了非常複雜的細胞因子純化過程，這大幅降低了得到的組合物的成本，如此得到的配製品可以不破壞皮膚表皮來給藥，即口服給藥。所要求保護的組合物對於免疫調節藥物來說是一種非常新的方式。其結合了酵母和細胞因子的治療效果，並且所提議的溶液雖然看起來非常簡單，但是在現有的
技術領域：
中是絕對意想不到的。提供這種組合物可以徹底地改變細胞因子治療的方式，因為用這種天然方法得到的組合物可以同時解決幾種問題降低細胞因子治療成本、簡化給藥方法(口服給藥而不是皮下或靜脈給藥)、增加治療效果，特別是在耐受細胞因子的單一治療的情況下。由本發明組合物的試-瞼結果可知，所述組合物在效果方面與公知的細胞因子製劑相比具有極高的竟爭力，特別是與白細胞介素-2製劑等相比，根據初步的數據，破碎酵母細胞的水不溶性成分含有激活因子，若無該激活因子，則細胞因子，特別是白細胞介素-2,所代表的增殖因子則不能提供任何治療效果。具體實施例方式在本說明書中，三種類型的對免疫系統的影響即免疫保護、免疫修正和免疫恢復被理解為免疫調節。免疫保護指的是，防止在例如重機械性創傷、大型外科手術、大面積燒傷等異常因素或情況下免疫缺陷的產生成為多器官功能衰竭的組成之一。在這些情況下，免疫缺陷在相當大程度上與全身炎症系統功能紊亂，以及與失血、休克、缺氧和內因性中毒有關，而且免疫缺陷也是急性產生的嚴重多器官衰竭(即經常導致致命結果的危及生命的情況)的發病機理的關鍵因素。免疫修正指的是，補償與免疫系統的細胞組成相關的所表現出的免疫缺陷，和對該組成的不均衡的消除。免疫恢復指的是，免疫活性細胞，主要是T-淋巴細胞的整個庫的重建，以及免疫系統的形態和功能完整性的恢復。正常地，免疫應答在有機體中被激活是由於病毒因子、細菌因子或真菌因子的侵入，還由於在有機體中形成惡性細胞，也就是說，免疫應答淨皮抗原激活。然而，醫師經常面臨的情況為，由於不明原因，在伴發有免疫缺陷狀態下，患者的有機體對抗原刺激未應答，且患者感染伴發有外源因子的永久攜帶的慢性疾病(該疾病為肺結核、B型肝炎和C型肝炎、竇炎、反覆發作的過敏性疾病、慢性衣原體和支原體病、慢性病毒感染攜帶狀態、持續膿性皮炎、腎盂腎炎、真菌感染等)。因此，可以推斷在某種情況下僅使用增殖因子對於免疫調節目的來說是不夠的，還需要激活因子。特別是，該內源性IL-2的作用機理包括刺激CD4+和CD8+淋巴細胞的抗原依賴性增殖。換而言之，即上述T-淋巴細胞的成功增殖以及隨後的級聯免疫事件的開始(大量細胞因子的分泌，適當受體的表達，免疫應答反應形式等)需要活化因子(抗原刺激)和增殖因子(白細胞介素-2)兩者都存在(SmithK.A."T-cellgrowthfactor".〃Immunol.Rev.-1980.-51.-p.337-357.RubinJ.T."Interleukin-2:itsbiologyandclinicalapplicationinpatientswithcancer".〃Cancerinvestigation._1993.-11(4)._p.460-472》如上所述，根據臨床病理學，通過抗原激活免疫應答的發生可能由於病毒因子、細菌因子和真菌因子侵入有機體，而且也可由於在有機體中形成了惡性細胞。若IL-2是在這種情況下導入到有機體中，則僅刺激抗原激活細胞的增殖，這是因為其生物活性由於與僅由激活的靶細胞表達的特異性受體的相互作用而表現出來。所要求保護的組合物具有免疫調節作用，可用於治療惡性疾病；各種感染敗血病、腹膜炎、胰腺炎、骨髓炎、膿性皮炎、子宮內膜炎、腸炎、真菌病；抗生素抗性感染結核病、假性結核病；乙型和C型肝炎、愛滋病毒感染、衣原體(導致的疾病)；自身免疫性疾病多發性硬化症、肌萎縮側索硬化症、腎小球腎炎、克羅恩氏病、神經性皮炎；過敏性疾病草花粉過敏、動物皮毛過敏、過敏性哮喘、接觸性過敏、飲食過敏等。已知基因修飾的微生物，特別是酵母可以作為異源蛋白生產菌。具體來說，利用基因工程和生物技術方法可以獲得具有細胞因子活性的蛋白的酵母重組生產菌。大多數動物細胞因子為分泌性蛋白。在分泌過程中，天然細胞因子蛋白得到它們的糖殘基，從而形成糖蛋白，達到其正確的空間構象和生物活性，並最終可溶。還已知異源蛋白經常以"包涵體"形式存在於生產菌微生物的細胞內。在"包涵體，，中，目的重組蛋白為不溶解(疏水性)且無活性的形式。具體來說，這是由於在生產菌微生物的細胞內合成過程中異源蛋白未採用正確構象而導致的。為了提供具有適宜狀態的蛋白以使其具有正確構象，提出了各種技術來溶解疏水性異源蛋白(美國專利申請20060052583、公開於2006年3月9曰)。然而，本發明提供了目的蛋白的所述性質在製備新型組合物中的應用。通過酵母產生的包括重組白細胞介素-2的疏水性重組蛋白趨向於保持在破碎的生產菌細^^的離心後的沉澱物中(EP0152358中第4頁最後一萃殳)。因此，在本說明書中，"異源疏水性細胞因子蛋白的酵母生產菌，，表示已將編碼細胞因子的基因導入到其中的酵母菌抹；該蛋白的產生對於所考慮的酵母菌抹來說不是常規的，因此該蛋白被稱為異源蛋白。本發明僅涉及在重組生產菌菌林的細胞中合成後在細胞內蓄積並表現出疏水性質的蛋白。儘管在天然狀態下細胞因子被糖基化、被分泌而且具有親水性，但是在所述生產菌微生物中它們可以被蓄積在細胞內，且因此是非糖基化和疏水性的。通過生產菌細胞合成這種重組蛋白過程中，其空間構象未正確形成，這種蛋白的主要特徵為其在所述生產菌細胞破碎後保持在水不溶性成分中。細胞因子蛋白被理解為控制血細胞和免疫系統的增殖、分化以及功能的生長因子(SedlacekH.—H.，MoroyT."Immunereactions:headlines,overviews,tablesandgraphics".〃Springer—VerlagBerlinHeidelberg.-1995.-p.1-53)。細胞因子包括幹擾素、集落刺激因子(CSF)、趨化因子、轉化生長因子、腫瘤壞死因子、白細胞介素及其它因子(A.S.Simbirtsev."Cytokines:classificationandbiologicalfunctions".〃Cytokinsandinflammation.—2004.—Vol.3,No.2,p.16-22)。更具體地說，細胞因子是小分子蛋白(分子量為8-80kDa)，以自分泌(即對產生它們的細胞起作用)和/或旁分泌(即對相鄰細胞起作用)形式起作用。細胞因子主要是由血細胞和免疫系統細胞分泌的，在免疫系統中參與細胞間的信號轉導。為了實現它們的功能，細胞因子應與在它們的靶細胞的膜上的特異性受體結合併將它們激活。由淋巴細胞合成，並且是增殖和分化的調節因子，特別是造血和免疫系統細胞增殖和分化的調節因子的細胞因子，也稱為淋巴因子。其包括白細胞介素(interleukine，IL)(該詞來源於z'"&r-在…之間和/ewh>w-白細胞)、幹擾素和集落刺激因子。一種細胞因子-白細胞介素-2(IL-2)的作用機理包括刺激CD4+和CD8+淋巴細胞的抗原依賴性增殖。IL-2的其它重要性質在於其對Thl/Th2平衡的影響、對Thl細胞的自分泌型作用以及對Th2細胞亞群的旁分泌型作用的影響(CarolB.andKendallA.S.，2002.SedlacekH.-H.,MoroyT."Immunereactions:headlines,overviews,tablesandgraphics".〃Springer-VerlagBerlinHeidelberg.-1995.-p.15-21)。同樣地對被選擇的類型和免疫反應的持續時間有影響，IL-2實際上表現出多方面的免疫生物學性質。在過去數十年間，細胞因子的治療應用，即，如IL-2的治療應用，成為深入研究的課題。在用各種生產菌得到重組細胞因子方面已取得了重大的進展。雖然酉良酒酵母(6"acc/zarowjceycereW57'ae)是最普遍的酵母生產菌,其它一些非致病性酵母也可以成為生產菌，例如布拉酵母(Sacc/^rawycesZ)OM/ani/),或畢赤酵母屬(屍z'c/z/a)酵母例如畢赤酵母CP/c/n'a/a^on、)，克魯維酵母屬(A7M^yv^73附j;ce)酵母如乳酸克魯維酵母(A7wywera/wyces/ac/^)或漢遜酵母屬(/za/we"w,a)酵母如多形漢遜酵母(/zawseww/a;o(ymorp/za)等。具體來說，在全俄微生物菌種保藏中心以No.Y-791保藏的釀酒酵母(Sacc/zaromyc^cereWw'ae)菌才朱可以作為人IL-2酵母生產菌的一例。衝艮據被導入到生產菌菌抹中的表達載體的結構，目的異源蛋白可以被分泌或保持在細胞內。若蛋白保持在細胞內，則其進一步純化應該通過破碎生產菌菌抹細胞進行。可以用能確保目的蛋白完整性的任意已知方法破碎酵母細胞，特別是通過物理方法，例如在高壓下通過凍-融法利用帶玻璃珠的高速破碎機破碎。在本說明書中，通過將蛋白酶抑制劑添加到破碎細胞懸浮液中來確保目的產品的完整性，從而在酵母細胞破碎時釋放的酵母蛋白酶不會被破壞目的蛋白，具體來說是IL-2。若可以避免所使用的試劑對目的蛋白的蛋白水解作用，則破碎酵母細胞的酶原方法也是可4亍的。可以通過離心分離水不溶性成分。因此，酵母細胞的幾乎所有水溶性組分被轉移到上清液中，然後被除去，而水不溶性成分則保留在沉澱中。在離心過程中除去蛋白酶、可溶性蛋白、核糖核酸(RNA)、染色體DNA和質粒DNA。也可以通過其它可行的方法，特別是過濾，來進行水不溶性成分的分離。其可以用0.005M的tris-HCl緩沖溶液洗滌一次和幾次或進4亍凍幹。也可以用丙酮對該成分進行處理使其完全脫水，除去丙酮成分後，可以容易地乾燥沉澱物而得到粉末狀物質。目的細胞因子蛋白在所述水不溶性成分的乾燥沉澱物中的重量百分比為1~4%。可以通過任意一種用於4企測目的蛋白的標準方法來測定該細^^因子蛋白的量，例如通過聚丙烯醯胺凝膠電泳(LaemmliU."CleavageofstructuralproteinsduringtheassemblyoftheheadofbacteriophageT4，，.〃Nature.—1970.—227.—p.680-685)或使用免疫酶分析法(GehmanL.O.andRobbR丄"AnELISA-basedassayforquantitationofhumaninterleukin-2."〃J.Immunol.Methods.-1984.-vol.74.-p.39)等觀'J定。該組合物的給藥劑量根據得到的細胞因子的活性決定。為此，溶解水不溶性成分，並通過任何標準試驗來測定液體相中的細胞因子蛋白活性。對於各種細胞因子都已經開發了其活性評價的專用標準試驗。例如，得到的IL-2的生物活性可以通過國際標準試驗來評價，所述標準試驗利用培養IL-2-依賴性腫瘤特異性細胞毒性的'J、鼠T-淋巴細胞的CTLL-2細胞系來進行(HammerlingU.etal.Developmentandvalidationbioassayforinterleukin-2.〃J.Pharmaceut.&Biochem.Analysis,-1992.-vol.10.-p.547.GearingA丄H.andThorpeR.Theinternationalstandardforhumaninterleukin-2.Calibrationbyinternationalcollaborativestudy.〃J.Immunol.Methods.-1984.-vol.74.-p.39)。有生物活性的重組IL-2應刺激這些細l包的增殖。生物活性通過使用四唑染料MTT的比色法來測定。被IL-2刺激的存活的細胞吸收該染料並在細胞質中蓄積水不溶性暗藍色甲蹈(formazan)晶體(還原的MTT)。在除去培養基後且該晶體完全溶解在二甲基亞碸中後，通過計算糹幾輔助的光度計方法在波長530nm和690nm下測定得到的溶液的光密度。含有IL-2的樣品中溶液的暗藍色呈色應取決於加入到培養基中的IL-2濃度。通過對比樣品的光密度和IL-2的活性標準的光密度，測定培養樣品中的IL-2的生物活性。具體來說，對於IL-2,約100mg的乾燥的水不溶性成分表現出400~500萬國際單位(IU)的活性水平。因此，若需要使用100萬IU劑量的IL-2,則取約20~25mg的乾燥水不溶性成分。向含有異源疏水性細胞因子蛋白的水不溶性成分中添加增溶劑和水使該蛋白轉換為其活性形式。增溶劑(去汙劑)是一種有助於疏水性物質溶解在水中的物質。十二烷基石克酸鈉、十二烷基肌氨酸鹽、脫氧膽酸鹽、脲和Triton-X100可以被用作增溶劑。在酵母細胞內製備的重組IL-2為水不溶性的，其與細胞壁相結合。還發現增溶劑可以使IL-2從細胞壁脫離。增溶劑在組合物中的含量可以在所述水不溶性成分乾重的4.0%-20.0%範圍內變動，優選為12%。含有上述水不溶性成分和增溶劑的組合物為一種在使用前需要向其中添加水的免疫調節劑。向含有乾燥的水不溶性成分和增溶劑的組合物中添加水使疏水性異源蛋白溶解，實現所述異源蛋白的正確構象，並由此形成活性細胞因子。每100mg水不溶性成分中可以加入1~10ml水。組合物還可以含有適於形成上述組合物的適當藥物劑型的任何可藥用的賦形劑。可以是通常用於製藥工業的賦形劑、穩定劑、抗氧化劑等。分、由本說明書中公開的任意適當的組分組成或主要由本說明書中公開的任意適當的組分組成，而且本發明組合物可以另外，或者可選擇地，以不使用用於由
背景技術：
已知的製劑中的或對於實現本發明的技術結果來說不是必須的任意組分、材料、成分或物質的方式製備。實施例1.所述組合物的製備為了製備該組合物，分取部分-7CTC下保存在甘油中的酵母菌抹釀酒酵母0^cc/2^w^cescerev/Wae)Y-791,將其接種到含有50mg/l組氨酸的營養培養基Sdl中。Sdl培養基的組成如下0.67%酵母胺基酸氮源("DifcoLaboratories",Detroit,MI)、2%葡萄糖。細胞質量與Sdl培養基的體積的比例約為0.2g/升。在Sdl培養基中進行培養直至光密度OD6。。達到2.5~4.0(優選OD,=3.0)。當達到所需的光密度值，將得到的接種轉移到IO倍體積的Sd2培養基中並進一步培養直至OD謹為6.0-9.0(優選OD6=7.5)。培養基Sd2的組成如表1所示。表1營養培養基Sd2的組成tableseeoriginaldocumentpage13在Sd2培養基中培養可以改變為在相同體積的PEP營養培養基中培養以達到相同的光密度值。PEP營養培養基的組成如表2所示。表2PEP營養培養基的組成tableseeoriginaldocumentpage13在Sd2培養基(或在PEP培養基)中培養結束時，將細胞從培養基中分離(通過離心或過濾)，通常收率為每1升營養培養基8~12g細胞。對細胞進行所有進一步操作，除去培養基。在添加有PMSF(終濃度為lmM)的緩衝溶液A中製備50。/。的細胞懸浮液。緩沖溶液A為0.005Mtris-HCl緩衝溶液，pH為7.2。在+2。C+10。C的溫度、3000rpm轉子轉速的條件下，使用DynoMill破碎機將酵母細胞破碎。在+4。C的溫度、4000~10000rpm轉子轉速的條件下，將破碎酵母細胞的懸浮液離心。除去上清液，用緩衝溶液A洗滌沉澱以除去酵母蛋白酶、RNA、染色體DNA、質粒DNA和可溶的酵母蛋白；然後在+4。C的溫度、4000~10000rpm轉子轉速的條件下，將該溶液再次離心。除去上清液。除了離心之外，也可以通過過濾分離水不溶性酵母成分。須如下所述添加水和增溶劑。以這種方式，可以獲得液體形式的本發明的組合物。從通過任意有效的方法，例如冷凍乾燥，進行乾燥的上迷破碎細胞沉澱物獲得的粉末為本發明組合物的另一實施方式。以重量計，基於破碎酵母乾燥產物重量，以4~20%、優選12%的量將增溶劑添加到所述乾燥沉澱物中以獲得本發明組合物的又一實施方式。也可以使用冷丙酮對破碎細胞的沉澱物進行處理。在這種情況下，在與增溶劑混合時無需進一步粉碎就得到更細的粉末。在冷卻到+4。C的水中製備得到的破碎細胞沉澱物的75%懸浮液用於上述處理過程。為此，將0.3ml水加7v到lg沉澱物中。上述懸浮液在水浴中製備。為了進一步進行處理，將所有玻璃器具和丙酮冷卻到-10°C~-30°C,優選-20°C。冷卻丙酮的體積應超過細胞懸浮液的體積15~20倍，優選20倍。將破碎酵母細胞的懸浮液緩慢加入到丙酮中並均化5分鐘。然後，在-10°C~-3(TC的溫度，優選-20°C，2000~5000卬m的轉速下通過真空過濾從丙酮中分離脫水的破碎的酵母細胞。用2倍~10倍、優選5倍體積的丙酮洗滌得到的破碎酵母細胞沉澱物，並再次在-10°C~-30。C的溫度，優選-20°C,2000~5000rpm的轉速下進行真空過濾。將沉澱物轉移到搪瓷容器中，並在排風罩中於室溫下乾燥15-30小時、伊二選18小時。最終，從lg的最初完整的酵母細胞得到含有破碎的IL-2生產菌細胞的水不溶性成分的細粉末約80~160mg。在此階段中得到的粉末為本發明組合物的實施方式之一。必須加入水和增溶劑來用於治療。以重量計，以粉末重量的4~20%、優選12%量將水和增溶劑添加到粉末中，以獲得本發明組合物的又一實施方式。為了使用以粉末和增溶劑的形式的該含有水不溶性成分的組合物，有必要用5ml水攪拌得到的組合物100g，這相當於IL-2的400~500萬IU的劑量。實施例2.用於HIV-感染的單一免疫治療治療方案以幾個療程進行治療。每個療程持續5天，每天糹會藥IL-2—次。以其間為2個月的間隔來完成四個療程。在每個療程後的四周內，對免疫圖譜、臨床和生物化學的血液試驗、病毒HIV負載進行研究。前兩個療程使用IL-2Roncoleukin(Biotech,俄羅斯)以100萬IU的量來進行注射，所述Roncoleukin⑧代表純化的蛋白。在後兩個療程中，以20mg組合物/5ml水的劑量口月良給予本發明的組合物，其相當於100萬IU的IL-2劑量。患者男性，38歲。在用本發明組合物治療之前4個月診斷出HIV感染。不知道疾病的持續時間。治療前-CD4+淋巴細胞血液計數-418/微升-HIV病毒負載-41000拷貝/ml-泌尿生殖系統衣原體。CD4+T-淋巴細胞的量表示迄今為止發生的HIV引發的對免疫系統損傷的程度。對於HIV陽性患者的疾病惡化危險性的確定來說，有必要進行HIV病毒RNA的血漿水平和CD4+T-淋巴細胞血液計數的有規律可重複的測定。CD4+血液計數小於500/微升、病毒負載大於10000拷貝/ml為無症狀的HIV感染下開始抗病毒治療的指徵。結果患者充分耐受該治療；無陳訴，且未觀察到不良反應。完全解決了衣原體感染。患者主觀上感覺到勞動能力增強。表3tableseeoriginaldocumentpage16有一些數據表明在某些情況下IL-2製劑的給藥會增加病毒負載。在上述公開的治療過程中無這種效果，甚至還有病毒負載的大幅降低，這是上述製劑的治療前景的證據。治療的第一階段(用Ronkoleukin)S第二階段(用本發明製劑)的動力學都被證明是良好的。與注射純IL-2相比，以本發明的製劑給藥時，CD4+含量動力學的顯著改進可能是由於該製劑具有附加的刺激活性。實施例3.HIV-感染下的單一免疫治療治療方案以幾個療程進行治療。每個療程持續5天、每天以100mg製劑/5ml水的劑量口服給予本發明製劑一次，共給藥5次，相當於400~500萬IU的IL-2劑量。以4個月的間隔完成兩個療程。患者男性，25歲。HIV感染伴發持續性全身淋巴結病。結果在每個療程完成後的四周內測定免疫圖譜。免疫圖譜表明了相對的CD3+、CD4+以及CD8+淋巴細胞血液總數(抗原陽性細胞含量在血液T-淋巴細胞亞群中的百分率)，以及以CD4+與CD8+淋巴細胞之間的比例計算的免疫調節指數。表4CD3+、CD4+和CD8+的動力學以及免疫調節指數tableseeoriginaldocumentpage17由免疫圖鐠的結果可知，治療使患者免疫狀態得到改善，其降低了患者對傳染因子的敏感性，生活質量得到提高。實施例4.過每文治療治療方案治療方案如下所述患者隔天與過敏因子接觸；表現出過敏症狀時以100mg組合物/5ml水的劑量給予患者本發明組合物，相當於400~500萬IU的IL-2劑量。l.患者女性，36歲，患有飲食過敏12年。根據臨床表現和皮下激發試驗來診斷飲食過敏。根據點刺試驗(PRICK-test),檢測對於8種過敏因子的反應。在上述研究中，對患者進行單抗原-綠蘋果試驗。根據上述方案治療療程持續5天；接觸綠蘋果並給予本發明組合物共三次。結果試驗開始後第15天重複點刺試驗。該試驗表明對綠蘋果無反應，而對其它七種激怒物有陽性反應。6個月後進行的檢查試驗表現出同樣的結果。2.患者14歲少女，患有貓皮毛過敏4年。根據直接接觸貓得到的觀察結果來進行臨床診斷。治療持續5天。結果在開始治療後第9天與貓接觸期間未檢測到過敏症狀。由此表明，本發明組合物具有治療效果，可以有效地用於治療多種疾病，包括以往未建議利用細胞因子進行治療的疾病。權利要求1、一種免疫調節組合物，包括異源疏水性細胞因子蛋白的酵母生產菌的水不溶性的破碎的細胞成分、增溶劑和水，其中，所述生產菌中已合成了目的疏水性細胞因子蛋白。2、根據權利要求1所述的組合物，其中，所述細胞因子蛋白為白細胞介素-2(IL-2)。3、根據權利要求2所述的組合物，其中，所述酵母生產菌為在全俄微生物菌種保藏中心以No.Y-791保藏的酉良酒酵母Sacc/z"ramycescereWw'ae菌林。4、根據權利要求1~3中任一項所述的組合物，其中，所述增溶劑為十二烷基硫酸鈉。5、一種用於製備權利要求1所述免疫調節組合物的組合物，包括異源疏水性細胞因子蛋白的酵母生產菌的水不溶性破碎細胞成分，其中，所述生產菌中已合成了目的疏水性細胞因子蛋白。6、根據權利要求5所述的組合物，其中，所述細胞因子蛋白為白細胞介素-2(IL-2)。7、根據權利要求6所述的組合物，其中，所述酵母生產菌為在全俄4效生物菌種保藏中心以No.Y-791保藏的酉良酒酵母Sacc/wramyc"cerev/w'ae菌才朱。8、根據權利要求5~7中任一項所述的組合物，其中，所述組合物進一步含有增溶劑。9、根據權利要求8所述的組合物，其中，所述增溶劑為十二烷基硫酸鈉。全文摘要本發明的組合物含有異源疏水性細胞因子蛋白的酵母生產菌細胞的水不溶性成分、增溶劑和水，其中，目的疏水性細胞因子蛋白已在所述生產菌中合成。具體來說，所述細胞因子蛋白為白細胞介素-2(IL-2)，酵母生產菌為在全俄微生物菌種保藏中心以編號No.Y-791保藏的釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)菌株。所述組合物表現出免疫調節活性，可用於免疫導向治療，特別是用於腫瘤、傳染性疾病、自身免疫疾病和過敏性疾病的治療。還公開了一種含有異源疏水性蛋白-細胞因子酵母生產菌破碎細胞的水不溶性成分的組合物，其中，在所述酵母生產菌中已合成了目的疏水性蛋白-細胞因子。所述組合物本身無活性，可通過向其中添加增溶劑和水來用於製備免疫調節組合物。文檔編號C07K14/52GK101410409SQ200780011564公開日2009年4月15日申請日期2007年3月16日優先權日2006年3月27日發明者卓婭·卡列尼克娃娜·尼古拉耶娃,米哈伊爾·尼古拉耶維奇·斯米爾諾夫,韋拉·謝爾蓋耶夫娜·賈科夫勒瓦申請人:米哈伊爾·尼古拉耶維奇·斯米爾諾夫