一種體外血型血清學實驗檢定使用的試劑盒的製作方法
2023-04-29 22:16:36 1
專利名稱：一種體外血型血清學實驗檢定使用的試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及酶製劑領域中的體外血型血清學檢定試劑盒，特別是一種木瓜凝乳蛋白酶試劑盒。
背景技術：
使用巰基蛋白酶進行紅細胞血型、免疫性血型抗體檢定已有近60年的應用歷史。目前，在體外血型血清學檢定實驗中常用的製劑有木瓜酶、菠蘿酶和無花果酶。其中木瓜酶是由多種巰基酶組成的混合酶，不同時期收穫、以及用不同工藝生產的木瓜酶中各種巰基酶比例漂移值較大，酶反應動力學為一非固定常數，容易導致體外血型血清學檢定實驗中產生明顯的「假陰性」、「假陽性」結果。
發明內容
本發明的目的是提供一種穩定的在體外血型血清學檢定實驗中所用的木瓜凝乳蛋白酶試劑盒。
本發明所提供的體外血型血清學檢定試劑盒，由木瓜凝乳蛋白酶製劑、木瓜凝乳蛋白酶溶劑、酶抑制劑-64製劑和酶抑制劑-64溶劑組成；所述木瓜凝乳蛋白酶製劑含有木瓜凝乳蛋白酶，L-半胱氨酸、普魯蘭、海藻糖；所述酶抑制劑-64含有反式-環氧琥珀醯-L-亮氨醯氨基(4-胍基)丁烷、甘露醇、海藻糖和普魯蘭。
所述的木瓜凝乳蛋白酶溶劑和酶抑制劑-64溶劑的基本配方是一樣的，均為0.02-0.07mol/L磷酸二氫鉀、0.003-0.04mol/L磷酸氫二鈉的水溶液，但在實際應用中，它們的濃度根據體外血型血清學檢定實驗不同階段需要的pH值進行調整，前者為pH5-6，後者為pH6-7。
木瓜凝乳蛋白酶製劑中每200000PU單位的木瓜凝乳蛋白酶中L-半胱氨酸和普魯蘭的含量分別為0.025-0.050mol和0.05-0.1mmol。酶抑制劑-64中每400000TU單位的反式-環氧琥珀醯-L-亮氨醯氨基(4-胍基)丁烷中甘露醇、海藻糖和普魯蘭的含量分別為0.2-0.3mol、0.01-0.02mol和0.05-0.1mol。
為了使木瓜凝乳蛋白酶製劑更加穩定，所述木瓜凝乳蛋白酶製劑中還含有甘露醇、海藻糖和維生素C鹽。每200000PU單位的木瓜凝乳蛋白酶中甘露醇、海藻糖和維生素C鹽的含量分別為0.2-0.3mol、0.01-0.02mol和0.01-0.02mol。
將木瓜凝乳蛋白酶，L-半胱氨酸、普魯蘭等輔料以水溶解，除菌過濾後，經冷凍乾燥得到木瓜凝乳蛋白酶製劑。其中，提取木瓜凝乳蛋白酶的方法，包括如下步驟
1)向原料中加入殼聚糖溶液，沉澱後去除沉澱物，保留清液；2)向清液中加入硫酸銨到溶液硫酸銨飽和度為30％-50％，去除沉澱，保留上清液；3)向上清液中加入過量酒石酸，絮凝沉澱後，去除沉澱保留上清液；4)向上清液中加入硫酸銨到溶液硫酸銨飽和度為65-70％，收集沉澱物；5)用純水溶解沉澱物，以截留分子量為1-2萬道爾頓的超濾膜濃縮溶液，收集濃縮液；6)用纖維素C-92層析柱分離濃縮液，收集木瓜凝乳蛋白酶的洗脫液；7)以截留分子量為1-2萬道爾頓的超濾膜濃縮木瓜凝乳蛋白酶的洗脫液，得到木瓜凝乳蛋白酶濃縮液。
為了使分離的效果更好，在所述步驟2)的上清液中，加入過量酒石酸之前，先加入硫酸銨到溶液硫酸銨飽和度為50％，去除沉澱，保留上清液，再進行後續步驟。
酶抑制劑-64製劑的製備方法為將反式-環氧琥珀醯-L-亮氨醯氨基(4-胍基)丁烷中甘露醇、海藻糖和普魯蘭以水溶解，除菌過濾後，經冷凍乾燥得到酶抑制劑-64製劑。
按照《中國生物製品規程》中規定的質控標準，對本發明的木瓜凝乳蛋白酶試劑盒進行衛生學、物理學、化學、生物學，血液免疫學等方面檢測，結果表明本發明完全符合要求。可廣泛用於人類ABO-IgG抗-A、IgG抗-B，Rh-抗-D、抗-C、抗-E、抗-c、抗-e，Kell-抗-K、抗-K，kiad-抗-JKa、抗-JKb，Lewis-抗-Lea、抗-Leb、抗-Lea+b，P-抗-P1等血型抗體及相應紅細胞血型抗原進行篩檢、檢定、效價滴定；被抗體包被紅細胞的清洗；注射用生物製品免疫性血型抗體檢定。
本發明由於採用了上述技術方案，具有以下優點1.在體外血型血清學檢定實驗中，利用本發明的具有標準化活力的木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液對紅細胞膜的水解修飾作用，使之在較短的時間內具備識別相應血型抗體——發生免疫凝集反應的能力，克服傳統的蛋白酶一步實驗方法中酶對紅細胞、抗體的同期水解效應。2.在木瓜凝乳蛋白酶試劑完成對紅細胞膜的水解修飾作用後；使用酶抑制劑-64快速抑制其酶活性，克服蛋白酶實驗中蛋白酶對紅細胞的過度性水解效應—產生「假陽性」反應；以及對血型抗體的水解效應—產生「假陰性」反應，具有減化實驗操作過程，提高檢定實驗的安全性與靈敏度。3.普魯蘭為一線型高分子物質，作為一種穩定-分散劑使用，可增加製品的穩定性；形成檢定實驗所必要的膠體保護，防止紅細胞滲透性溶血，杜絕「試劑型-假陽性」實驗結果的發生。4.依據檢定實驗不同階段的技術需要，設計具有相應的pH、離子強度的專用溶劑，以保證實驗檢定具有足夠的靈敏度。
具體實施例方式
實施例1、木瓜凝乳蛋白酶活力效價測定一、配製溶液1)0.067mol/L ph5.5磷酸鹽溶液配方磷酸二氫鉀 0.064mol磷酸氫二鈉 0.003mol將上述溶質溶解於900ml純水中，用純水稀釋至1000ml定容。
2)樣品溶液取標明活力效價≥400PU/瓶、≥1000PU/瓶、≥2000PU/瓶的木瓜凝乳蛋白酶製劑各1瓶，加入0.067mol/L ph5.5磷酸鹽溶液2毫升、5毫升、10毫升溶解，混合均勻。
3)底物溶液稱取磷酸氫二鈉0.93mol，磷酸二氫鈉0.06mol，用蒸餾水溶解，稀釋至1000ml定容。
稱取偶氮化白蛋白2.0g，溶解於100ml上述磷酸鹽溶液中。
二、木瓜凝乳蛋白酶製劑活力效價測定1)將樣品溶液，底物溶液預熱至37±0.5℃。
2)將底物溶液1.0ml，樣品溶液100μl注入試管中，混合均勻，置37±0.5℃水浴反應10分鐘。
3)加入5％三氯乙酸溶液1ml，混合。
4)1000×g離心反應液5分鐘，吸取上清液1ml。
5)加入0.5mol/L氫氧化鈉溶液1ml，混合。
6)在430nm下測定樣品OD值。
在上述條件下，水解產物在430nm產生0.002的吸光值的改變為一個活力效價單位(PU)。
三、產品的活力效價單位標示方法與規格產品的活力效價單位的標示可以從如下二種方法中任意選擇。
1、活力效價標示方法IPU＝每瓶酶製劑1/10分鐘所具有的活力效價單位。
2、活力效價標示方法IIPU＝每瓶酶製劑10分鐘所具有的活力效價單位。
實施例2、酶抑制劑-64活性效價測定一、配製溶液1)0.067mol/L ph5.5磷酸鹽溶液配方磷酸二氫鉀 0.064mol磷酸氫二鈉 0.003mol將上述溶質溶解於900ml純水中，用純水稀釋至1000ml定容。
2)木瓜凝乳蛋白酶溶液取活力效價為≥400PU/瓶的木瓜凝乳蛋白酶製劑1瓶，用2毫升0.067mol/L ph5.5磷酸鹽溶液溶解，混合均勻。
3)0.067mol/L pH7.0磷酸鹽溶液配方磷酸二氫鉀0.027mol磷酸氫二鈉0.040mol用純水溶解上述溶質，稀釋至1000ml定容。
4)樣品溶液取活性效價800TU/瓶、2000TU/瓶、4000TU/瓶的酶抑制劑-64製劑1瓶，加入0.067mol/L pH7.0磷酸鹽溶液2ml、5ml、10ml溶解，混合均勻。
5)底物溶液稱取磷酸氫二鈉13.2g、磷酸氫二鈉6.8g，用蒸餾水溶解，稀釋至1000ml定容。
稱取偶氮化白蛋白2.0g，溶解於100ml磷酸鹽溶液中。
二、酶抑制劑-64製劑活性效價測定1)將樣品溶液，木瓜凝乳蛋白酶溶液，底物溶液預熱至37±0.5℃。
2)取樣品溶液50μl，木瓜凝乳蛋白酶溶液150μl注入試管中，混合均勻，室溫放置5分鐘。(樣品)3)向上述試管加入底物溶液1.0ml，置37±0.5℃水浴反應10分鐘。
4)加入5％三氯乙酸溶液1ml，混合。
5)1000×g離心反應液5分鐘，吸取上清液1ml。
6)加入0.5mol/L氫氧化鈉溶液1ml，混合。
7)另取木瓜凝乳蛋白酶溶液150μl，底物溶液1.0ml注入試管中，混合均勻，按4)——6)所示方法進行實驗。(對照)8)在430nm下測定樣品OD值。
在上述條件下，與對照相比，樣品在430nm產生0.002的消光值的改變為一個酶抑制劑-64活性效價單位(TU)。
三、產品的活性效價單位的標示與規格產品的活性效價單位標示可以從如下二種方法中任意選擇。
活性效價標示方法ITU＝每瓶酶抑制劑-64製劑1/10分鐘所具有的活性效價單位。
活性效價標示方法IITU＝每瓶酶抑制劑-64製劑10分鐘所具有的活性效價單位。
實施例2、木瓜凝乳蛋白酶的提取取1000g的番木瓜果漿冰凍物，用微波加熱融化，加入1000ml 0.02mol/L磷酸鹽緩衝液(pH5.5)，在勻漿器中勻漿。
加入1％殼聚糖溶液100ml，勻漿攪拌，室溫靜置2小時後過濾，去除沉澱，保留濾液。
向濾液中加入硫酸銨至35％飽和度，室溫靜置60分鐘，在2-8℃、10000×g離心20分鐘，去除沉澱；向離心上清液中加入硫酸銨至50％飽和度，室溫靜置60分鐘，在2-8℃、10000×g離心20分鐘，去除沉澱；在上清液中加入過量酒石酸溶液，調節pH至＜2.5，室溫靜置60分鐘。10000×g離心20分鐘，棄去沉澱物；最後再向上清液中加入硫酸銨至70％飽和度，室溫靜置60分鐘，10000×g離心20分鐘，收集沉澱物。
將沉澱物用200ml純水溶解，然後用截留分子量為1萬的聚碸中空纖維超濾膜超濾，在超濾過程中分次加入2-8℃水，在0.1MPa的條件下循環超濾1h，得到超濾濃縮液。
向上述溶液中加入100ml 0.2mol/L磷酸鈉緩衝液(pH5.5)，混勻。用該磷酸鉀緩衝液預先平衡纖維素CM-92色譜柱，然後以5ml/min的速度，將溶液上柱，以0.7mol/L磷酸鈉緩衝液(pH5.5)為洗脫液，收集木瓜凝乳蛋白酶洗脫液，用截留分子量為1萬的聚碸中空纖維超濾膜濃縮洗脫液。
向濃縮液加入普魯蘭0.1mmol、L-半胱氨酸0.025mol，冷凍乾燥得到木瓜凝乳蛋白酶乾燥物30g，用實施例1的方法測定酶活為750PU/mg/分鐘。
實施例3、木瓜凝乳蛋白酶試劑盒的製備一、木瓜凝乳蛋白酶製劑配方普魯蘭 0.05mmol
甘露醇 0.3mol海藻糖 0.02mol抗壞血酸鈉 0.02molL-半胱氨酸 0.05mol木瓜凝乳蛋白酶 200000PU定量稱取上述溶質，溶解於純水中，定容至1000ml，用0.2μm微孔濾膜過濾除菌，然後按每瓶2000PU規格分裝至潔淨西林瓶。用冷凍乾燥機迅速降溫至-40℃，維持4小時；然後啟動乾燥乾燥程序，以每小時升溫5℃速率減壓乾燥，將被凍結產品升溫33℃維持3小時，停止減壓，密封包裝，得到木瓜凝乳蛋白酶製劑。
二、木瓜凝乳蛋白酶溶劑配方磷酸二氫鉀 0.064mol磷酸氫二鈉 0.003mol用純水溶解上述溶質，調解pH至5.5，定容至1000ml，用0.2μm微孔濾膜過濾除菌，然後按每瓶10ml分裝至至聚乙烯瓶內，密封。
三、酶抑制劑-64製劑配方反式-環氧琥珀醯-L-亮氨醯氨基(4-胍基)丁烷 40000TU普魯蘭0.05mmol甘露醇0.3mol海藻糖0.02mol定量稱取上述溶質，溶解於純水中，定容至1000ml，用0.2μm微孔濾膜過濾除菌。然後按每瓶4000TU規格分裝至潔淨西林瓶。用冷凍乾燥機迅速降溫至-40℃，維持4小時；然後啟動乾燥乾燥程序，以每小時升溫5℃速率減壓乾燥，將被凍結產品升溫33℃維持3小時，停止減壓，密封包裝，得到成品酶抑制劑-64製劑。
四、酶抑制劑-64溶劑配方磷酸二氫鉀 0.027mol磷酸氫二鈉 0.040mol用純水溶解上述溶質，調解pH至7.0，定容至1000ml，用0.2μm微孔濾膜過濾除菌，然後按每瓶10ml分裝至聚乙烯瓶內，密封。
將上述製造的木瓜凝乳蛋白酶製劑、木瓜凝乳蛋白酶溶劑、酶抑制劑-64製劑、酶抑制劑-64溶劑集中包裝在一個試劑盒中，標示木瓜凝乳蛋白2000PU/瓶、木瓜凝乳蛋白酶溶劑10ml、酶抑制劑-64 4000TU/瓶、酶抑制劑-64溶劑10ml，並配以使用說明書後即可出廠。
使用前用木瓜凝乳蛋白酶溶劑溶解木瓜凝乳蛋白酶製劑，形成木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液，用2％的偶氮化白蛋白溶液檢測活力效價。依照體外血型血清學實驗檢定靈敏度的評價標準，每50μl木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液應具有的活力效價單位按照上述的活力效價標示方法I計算為10-16PU；按照上述的活力效價標示方法II計算為100-160PU。
使用前用酶抑制劑-64溶劑溶解酶抑制劑-64製劑，形成酶抑制劑-64試劑溶液，用2％的偶氮化白蛋白溶液、木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液檢測活性效價。依照體外血型血清學實驗檢定安全性的評價標準，每50μl的酶抑制劑-64試劑溶液應具有的活性效價單位按上述的活性效價標示方法I計算為20-32TU；按上述的活性效價標示方法II計算為200-320TU。
實施例4、木瓜凝乳蛋白酶試劑盒的製備生產過程與實施例3基本相同，只是產品規格有差別。
一、木瓜凝乳蛋白酶製劑配方普魯蘭 0.048mmol甘露醇 0.3mol海藻糖 0.02mol抗壞血酸鈉 0.02molL-半胱氨酸 0.05mol木瓜凝乳蛋白酶 200000PU每瓶按1000PU規格分裝至潔淨西林瓶，冷凍乾燥。
二、木瓜凝乳蛋白酶溶劑配方磷酸二氫鉀 0.064mol磷酸氫二鈉 0.003mol按每瓶5ml規格分裝，密封。
三、酶抑制劑-64製劑配方反式-環氧琥珀醯-L-亮氨醯氨基(4-胍基)丁烷40000TU
普魯蘭 0.01mmol甘露醇 0.2mol海藻糖 0.01mol按每瓶2000TU規格分裝，冷凍乾燥。
四、酶抑制劑-64溶劑配方磷酸二氫鉀 0.027mol磷酸氫二鈉 0.040mol按每瓶5ml分裝，密封。
將上述製造的木瓜凝乳蛋白酶製劑、木瓜凝乳蛋白酶溶劑、酶抑制劑-64製劑、酶抑制劑-64溶劑集中包裝在一個試劑盒中，標示木瓜凝乳蛋白1000PU/瓶、木瓜凝乳蛋白酶溶劑5ml、酶抑制劑-64 2000TU/瓶、酶抑制劑-64溶劑5ml，並配以使用說明書後即可出廠。
使用前用木瓜凝乳蛋白酶溶劑溶解木瓜凝乳蛋白酶製劑，形成木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液，用2％的偶氮化白蛋白溶液檢測活力效價。依照體外血型血清學實驗檢定靈敏度的評價標準，每50μl木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液應具有的活力效價單位按照上述的活力效價標示方法I計算為10-16PU；按照上述的活力效價標示方法II計算為100-160PU。
使用前用酶抑制劑-64溶劑溶解酶抑制劑-64製劑，形成酶抑制劑-64試劑溶液，用2％的偶氮化白蛋白溶液、木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液檢測活性效價。依照體外血型血清學實驗檢定安全性的評價標準，每50μl的酶抑制劑-64試劑溶液應具有的活性效價單位按上述的活性效價標示方法I計算為20-32TU；按上述的活性效價標示方法II計算為200-320TU。
實施例5、木瓜凝乳蛋白酶試劑盒的製備生產過程與實施例3基本相同，只是產品規格有差別。
一、木瓜凝乳蛋白酶製劑配方普魯蘭 0.048mmol甘露醇 0.3mol海藻糖 0.02mol抗壞血酸鈉 0.02molL-半胱氨酸 0.05mol
木瓜凝乳蛋白酶 200000PU每瓶400PU規格分裝，冷凍乾燥。
二、木瓜凝乳蛋白酶溶劑配方磷酸二氫鉀 0.064mol磷酸氫二鈉 0.003mol按每瓶2ml規格分裝，密封。
三、酶抑制劑-64製劑配方反式-環氧琥珀醯-L-亮氨醯氨基(4-胍基)丁烷 40000TU普魯蘭 0.01mmol甘露醇 0.2mol海藻糖 0.01mol按每瓶800TU規格分裝，冷凍乾燥。
四、酶抑制劑-64溶劑配方磷酸二氫鉀 0.027mol磷酸氫二鈉 0.040mol按每瓶2ml規格分裝，密封。
將上述製造的木瓜凝乳蛋白酶製劑、木瓜凝乳蛋白酶溶劑、酶抑制劑-64製劑、酶抑制劑-64溶劑集中包裝在一個試劑盒中，標示木瓜凝乳蛋白400PU/瓶、木瓜凝乳蛋白酶溶劑2ml、酶抑制劑-64 800TU/瓶、酶抑制劑-64溶劑2ml，並配以使用說明書後即可出廠。
使用前用木瓜凝乳蛋白酶溶劑溶解木瓜凝乳蛋白酶製劑，形成木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液，用2％的偶氮化白蛋白溶液檢測活力效價。依照體外血型血清學實驗檢定靈敏度的評價標準，每50μl木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液具有的活力效價單位按照上述的活力效價標示方法I計算應為10-16PU；按照上述的活力效價標示方法II計算為100-160PU。
使用前用酶抑制劑-64溶劑溶解酶抑制劑-64製劑，形成酶抑制劑-64試劑溶液，用2％的偶氮化白蛋白溶液、木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液檢測活性效價。依照體外血型血清學實驗檢定安全性的評價標準，每50μl的酶抑制劑-64試劑溶液應具有的活性效價單位按照上述的活性效價標示方法I計算為20-32TU；按照上述的活性效價標示方法II計算為200-320TU。
實施例6、利用本發明試劑盒進行血型抗體特異性鑑定實驗利用本發明試劑盒進行血型抗體特異性鑑定實驗的步驟為1、取試管，標記I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI，依次置試管架排列。
2、向上述試管加入與其標記相符合的3％血型譜細胞懸液50μl，木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液50μl，混合均勻。
3、將試管移入37±0.5℃水浴孵育5分鐘。
4、向全部試管各加入酶抑制劑-64試劑溶液50μl；向全部試管各加入血清標本50μl，或紅細胞放散液100μl，混合均勻。
5、將試管移入37±0.5℃水浴孵育7分鐘。
6、將試管移入離心機，120×g離心1分鐘。
7、輕輕搖動試管，懸浮紅細胞，肉眼觀察實驗鑑定結果。依據受檢血清在不同血型譜細胞產生的凝集與否，判定受檢血清的血型抗體特異性。
經採用室溫鹽水實驗、37鹽水實驗、間接抗人球蛋白實驗等血型抗體特異性鑑定實驗方法與本發明的實驗方法作為平行試驗，對產自Immucor的人源型Rh-抗-D、抗-C、抗-E、抗-c、抗-e、Kell-抗-K、抗-k、kiad-抗-JKa、抗-JKb、Lewis-抗-Lea、抗-Leb、抗-Lea+b、P-抗-P1等血型抗體血清，以及臨床樣本血清進行抗體特異性鑑定。實驗結果表明，本實驗方法對上述血型抗體的實驗鑑定準確率為100％。
權利要求
1.一種體外血型血清學鑑定試劑盒，基本上由木瓜凝乳蛋白酶製劑、木瓜凝乳蛋白酶溶劑、酶抑制劑-64和酶抑制劑-64溶劑組成；所述木瓜凝乳蛋白酶製劑含有木瓜凝乳蛋白酶，L-半胱氨酸和普魯蘭；所述酶抑制劑-64含有反式-環氧琥珀醯-L-亮氨醯氨基(4-胍基)丁烷、甘露醇、海藻糖和普魯蘭。
2.根據權利要求1所述的體外血型血清學鑑定試劑盒，其特徵在於所述木瓜凝乳蛋白酶溶劑為0.02-0.07mol/L磷酸二氫鉀、0.003-0.04mol/L磷酸氫二鈉的水溶液，pH5-6；所述酶抑制劑-64溶劑為0.02-0.07mol/L磷酸二氫鉀、0.003-0.04mol/L磷酸氫二鈉的水溶液，pH6-7。
3.根據權利要求1所述的體外血型血清學鑑定試劑盒，其特徵在於所述木瓜凝乳蛋白酶製劑中每200000PU單位的木瓜凝乳蛋白酶中L-半胱氨酸和普魯蘭的含量分別為0.025-0.050mol和0.05-0.1mmol。
4.根據權利要求1或2或3所述的供體外血型血清學檢定實驗用試劑盒，其特徵在於所述木瓜凝乳蛋白酶製劑中還含有甘露醇、海藻糖和維生素C鹽。
5.根據權利要求4所述的供體外血型血清學檢定實驗用試劑盒，其特徵在於所述木瓜凝乳蛋白酶製劑中每200000PU單位的木瓜凝乳蛋白酶中甘露醇、海藻糖和維生素C鹽的含量分別為0.2-0.3mol、0.01-0.02mol和0.01-0.02mol。
6.根據權利要求4所述的供體外血型血清學檢定實驗用試劑盒，其特徵在於所述木瓜凝乳蛋白酶製劑的製備方法為將木瓜凝乳蛋白酶、L-半胱氨酸、普魯蘭、甘露醇、海藻糖和維生素C鹽以水溶解，除菌過濾後，經冷凍乾燥得到木瓜凝乳蛋白酶試劑。
7.根據權利要求1所述的供體外血型血清學檢定實驗用試劑盒，其特徵在於所述酶抑制劑-64中每40000TU單位的反式-環氧琥珀醯-L-亮氨醯氨基(4-胍基)丁烷中甘露醇、海藻糖和普魯蘭的含量分別為0.2-0.3mol、0.01-0.02mol和0.05-0.1mol。
8.根據權利要求1或2或7所述的供體外血型血清學檢定實驗用試劑盒，其特徵在於所述酶抑制劑-64的製備方法為將反式-環氧琥珀醯-L-亮氨醯氨基(4-胍基)丁烷中甘露醇、海藻糖和普魯蘭以水溶解，除菌過濾後，經冷凍乾燥得到酶抑制劑-64試劑。
9.根據權利要求1所述的供體外血型血清學檢定實驗用試劑盒，其特徵在於木瓜凝乳蛋白酶試劑溶液具有的活力效價為1/10分鐘10-16PU/50μl、或者是10分鐘100-160PU/50μl；酶抑制劑-64試劑溶液具有的活性效價為1/10分鐘20-32TU/50μl、或者是10分鐘200-320TU/50μl。
全文摘要
本發明公開了一種供體外血型血清學檢定實驗用的試劑盒。本發明的目的是提供一種穩定的在體外血型血清學檢定實驗中所用的木瓜凝乳蛋白酶試劑盒，包括木瓜凝乳蛋白酶製劑、木瓜凝乳蛋白酶溶劑、酶抑制劑－64製劑和酶抑制劑－64溶劑。所述木瓜凝乳蛋白酶製劑含有木瓜凝乳蛋白酶，L－半胱氨酸和普魯蘭等；所述酶抑制劑－64製劑含有反式－環氧琥珀醯－L－亮氨醯氨基(4－胍基)丁烷、甘露醇、海藻糖和普魯蘭等。本發明所提供的試劑盒可以簡化體外血型血清學檢定實驗的操作規程，提高檢定實驗的安全性與靈敏度，可廣泛用於血型抗體及相應紅細胞血型抗原的篩檢、鑑定、效價滴定；被抗體包被紅細胞的清洗；注射用生物製品免疫性血型抗體檢定。
文檔編號G01N33/536GK1584596SQ20041004610
公開日2005年2月23日 申請日期2004年5月31日 優先權日2004年5月31日
發明者盧世昌, 劉俊鳳 申請人:廣州偉仕科技有限公司