用於治療糖尿病性心血管病變的藥物組合物及其製備方法
2023-04-30 08:37:56 2
專利名稱：：用於治療糖尿病性心血管病變的藥物組合物及其製備方法
技術領域：
：本發明涉及以植物材料提取物為活性成分的藥物組合物，具體涉及一組用於治療糖尿病性心血管病變的組合物及其製備方法。發明背景目前全世界糖尿病發病率約4.6%，累計達2億人。其發病率逐年上升，預計至2025年，糖尿病發病率約5.4%，達3億人。糖尿病心血管併發症是糖尿病患者最常見和最嚴重的慢性併發症，如大、中動脈的粥樣硬化和微血管病變(糖尿病腎病、糖尿病視網膜病變及糖尿病腦血管功能障礙等)，是預後不良及致死的主要原因。糖尿病可引起內皮細胞損傷及功能不全，導致炎性細胞浸入、血管平滑肌細胞增殖，增加細胞死亡，引發血管增生，最終導致粥樣硬化、斑塊破裂及血管再狹窄。糖尿病血管併發症在很大程度上是由於血管內皮細胞損傷或功能障礙所致。血管內皮功能改變是血管病變的病理基礎，而內皮功能的異常也加速了糖尿病及其併發症的進程。血管內皮細胞也是胰島素的靶器官之一，胰島素與內皮細胞表面胰島素受體結合後，促使其釋放一氧化氮(NO)增加而實現其血管舒張的生理功能。包括內皮細胞在內的細胞膜損傷引起胰島素受體分布和功能變化，從而產生胰島素抵抗，又促使內皮細胞功能進行性損害，使血管功能障礙發生、發展。血管內皮功能異常在糖尿病前期就己存在，隨著血糖升高，血管內皮功能受損會逐漸加重。，內皮釋放的NO具有一種血管舒張效應並抑制血小板的聚集、白細胞到內皮的粘附和內膜平滑肌細胞的增殖，它在許多關健性的心血管機理中是至關重要的。心血管疾病的形成中的關健步驟由於內皮NO釋放的降低，例如，低密度脂蛋白的氧化作用，血管內膜中的單核細胞的補充和沉積，內膜細胞的增殖加速。動脈粥樣化形成的後果是在血管的內壁上形成斑塊，其可以反過來通過剪應力的減少而導致內皮NO釋放的進一步下降以及病狀的進一步惡化。由於內皮N0也是一種血管擴張劑，它們的降低還經常導致高血壓，後者作為獨立的危險因素可導致進一步的器官損壞。目前，糖尿病並發心血管疾病的藥物防治的常用措施為1、採用降糖藥物控制血糖。但僅僅控制血糖是不夠的，必須兼顧控制心血管疾病的危險因素。2、採用降壓藥物控制血壓。大量臨床資料表明，控制血壓可以使糖尿病人群心血管病風險減少25%50%。3、採用降脂藥物調理血脂。如用他丁類或貝特類調理血脂，可使各種心血管疾病的危險降低25%55%。4、採用抗血小板聚集藥物改善高凝狀態。抗血小板聚集藥物，如阿斯匹林，有助於改善高凝狀態，使糖尿病患者的心血管事件與心肌梗死的發生率分別下降15%和46%。(吳秋楓，糖尿病並發心血管疾病的防治，欲s:^西^"裙合i^吉，2007年第17巻第7期，第397418頁；陳立新、李珏，糖尿病患者心血管併發症的幹預性治療進展，《V5:厲^"度學腐學/見第24巻第4期，第601602頁)。這些治療措施的缺陷顯而易見，西藥治療糖尿病及其心血管併發症注重於控制血糖及併發症的症狀，但不能阻止糖尿病心血管併發症的發生，對心血管併發症常沒有治本僅有治標的作用且療效較低，而且還有一定的毒副作用。而傳統中藥藥方存在有效成分不明確、含量偏低或極低，不利於生產質量控制及療效較西藥偏低等缺陷，儘管毒副作用較西藥很低或無。牛蒡子(Fructusarctii)是牛蒡的乾燥成熟果實，為歷版《中國藥典》收載，具有疏散風熱、宣肺透疹、解毒利咽的功效。傳統中醫臨床多用於風熱感冒、咳嗽痰多、麻疹、風疹、咽喉腫痛、癢腮丹毒等。現代藥理學研究證明牛蒡子有抗腫瘤、降血糖、抗HIV和抑制血小板聚集等作用。臨床上用牛蒡子治療糖尿病及其併發症糖尿病腎病效果顯著。藥理實驗也證明牛蒡子具有降低血糖和尿中蛋白質的作用。但是目前國內外均採用牛蒡子有效部分進行降血糖實驗，而且其活性成分並不明確。近年來，國內研究表明牛蒡子水提物、醇提物能顯著而持久地降低大鼠血糖，對碳水化合物耐量增高，毒性較小；牛蒡子提取物對糖尿病大鼠腎臟病變有一定的改善，其作用機制可能與減輕細胞內蛋白非酶糖基化有關。牛蒡子提取物中的成分中含有牛蒡子苷及牛蒡子苷元，牛蒡子苷(arctiin)及牛蒡子苷元(arctigenin)如下結構式(I)、結構式(II)所示結構式(I)結構式(II)專利ZL02133954.6公開了一種用於治療糖尿病腎病或糖尿病的牛蒡子總木脂素苷類提取物。其技術方案為:用乙醇等有機溶媒提取，精製，乾燥，獲得含牛蒡子總木脂素苷類物質5090%(用紫外分光光度法測定)，或含牛蒡子苷1570%(高效液相法測定)的提取物為原料藥配製用於治療糖尿病腎病或糖尿病的藥物製劑。專利申請CN200610013120.0公開了一種以牛蒡子總木脂素苷類提取物為原料製成的具有降糖益腎作用的中藥，其牛蒡子總木脂素的含量5089%之間，牛蒡子苷的含量在30%以上。專利申請CN200510025834.9公開了一種牛蒡子提取物及其製備方法及應用，該提取物中包含以牛蒡子苷元為主的總木質素類化合物和牛蒡子苷，總木質素類化合物和牛蒡子苷的重量含量佔52%—80%，其他成分的重量含量佔20%一49%。以上發明的不足是僅發現牛蒡子提取物的降糖效果；藥用成分為混合物，不利於生產質量控制和藥效的提高；牛蒡子苷純度不高。本發明人經過研究後發現，牛蒡子苷和牛蒡子苷元可以用於治療糖尿病性心血管病發症，牛蒡子苷和牛蒡子苷元對心血管血管內皮具有保護作用。
發明內容本發明的目的在於提出一種對糖尿病性心血管病變標本兼治，且療效較高、毒副作用較低的藥物。為了實現發明目標，本發明人進行了牛蒡子苷和牛蒡子苷元對心血管內皮的保護作用的研究。結果發現，小劑量牛蒡子苷和苷元能顯著增加內皮細胞內皮型一氧化氮合酶的表達。本發明人同時發現，牛蒡子苷和牛蒡子苷元在一定劑量下，能夠顯著對抗高糖對內皮細胞增殖的抑制作用，改善內皮細胞功能，給予牛蒡子苷幹預後內皮細胞在高糖條件下分泌NO的能力顯著提高，此劑量下的牛蒡子苷能夠顯著的保護內皮細胞免受高糖條件所致的損傷。在此基礎上，本發明人進行了更深入廣泛的研究，實現了這一目標。為實現上述目的，本發明採用以下技術方案一種治療和預防糖尿病性心血管病變的組合物，其特徵在於其特徵在於述組合物包含(a)牛蒡子苷、藥用添加劑和/或藥用載體；或(b)牛蒡子苷元、藥用添加劑和/或藥用載體；或(c)牛蒡子苷、牛蒡子苷元、藥用添加劑和/或藥用載體。其中所述組合物(c)中牛蒡子苷的含量為50-99重量份，牛蒡子苷元的含量為l一50重量份；優選為牛蒡子苷75—95重量份，牛蒡子苷元5—25重量份。所述組合物中牛蒡子苷純度為90%(高效液相色譜法測定)以上，牛蒡子苷元的純度為90%(高效液相色譜法測定)以上。藥用添加劑和/或藥用載體的含量為100—20000重量份；所述組合物中的藥用添加劑和藥用載體包括填充劑、崩解劑、粘合劑、滑潤劑、溼潤劑、穩定劑、乳化劑、分散劑、防腐劑、甜味劑、著色劑、調味劑、芳香劑、增稠劑、稀釋劑、緩衝物質、溶劑、增溶劑、旨在獲得貯存效果的試劑、旨在改變滲透壓的鹽、塗布劑或抗氧化劑。所述組合物可製備成片劑、丸劑、膠囊劑、注射劑、噴霧劑或栓劑；本說明書中各組分的重量以重量份計，有特殊說明的除外；其中片劑或丸劑的片芯中含有組合物(a)中牛蒡子苷I一IOO，從乳糖、澱粉、糊精、羥丙基纖維素中選出的至少一種250~350，從滑石粉、硬脂酸鎂中選出的至少一種5—10，包衣預混劑歐巴代OY-C-7000A3—5;組合物(b)中牛蒡子苷元I一IOO，從乳糖、澱粉、糊精、羥丙基纖維素中選出的至少一種250—350，從滑石粉、硬脂酸鎂中選出的至少一種5—10，包衣預混劑歐巴代0Y-C-7000A3—5;組合物(c)中牛蒡子苷50—99，牛蒡子苷元1一50，從乳糖、澱粉、糊精、羥丙基纖維素中選出的至少一種250—350，從滑石粉、硬脂酸鎂中選出的至少一種5—10，包衣預混劑歐巴代0Y-C-7000A3—5;其中含速釋層的雙層緩釋片劑或丸劑的片芯中含有組合物(a)中牛蒡子苷1一IOO，從乳糖、澱粉、羥丙基纖維素，聚乙烯基吡咯垸酮中選出的至少一種80—150，從滑石粉、硬脂酸鎂中選出的至少一種5—10;組合物(b)中牛蒡子苷元I一IOO，從乳糖、澱粉、羥丙基纖維素，聚乙烯基吡咯垸酮中選出的至少一種80—150，從滑石粉、硬脂酸鎂中選出的至少一種5—10;組合物(c)中牛蒡子苷50—99，牛蒡子苷元1一50，從乳糖、澱粉、羥丙基纖維素，聚乙烯基吡咯垸酮中選出的至少一種80—150，從滑石粉、硬脂酸鎂中選出的至少一種5—10;所述雙層緩釋片劑或丸劑的包衣液中含有羥丙基纖維素70—100，聚乙二醇-400l—5、聚山梨酯-801—5，從檸檬黃、鈦白粉中選出的至少一種1—5;其中膠囊劑中含有組合物(a)中牛蒡子苷I一IOO，乳糖、澱粉、糊精、羥丙基纖維素中選出的至少一種200—300，從滑石粉、硬脂酸鎂中選出的至少一種l-4;組合物(b)中牛蒡子苷元I一IOO，從乳糖、澱粉、糊精、羥丙基纖維素中選出的至少一種200—300，從滑石粉、硬脂酸鎂中選出的至少一種1~4;組合物(c)中牛蒡子苷50~99，牛蒡子苷元1一50，從乳糖、澱粉、糊精、羥丙基纖維素中選出的至少一種200—300，從滑石粉、硬脂酸鎂中選出的至少一種1-4;其中注射劑中含有組合物(a)中牛蒡子苷1—100，氯化鈉18，注射用水定容至2000;組合物(b)中牛蒡子苷元I一IOO，氯化鈉18，注射用水定容至2000;組合物(c)中牛蒡子苷50—99，牛蒡子苷元1一50，氯化鈉18，注射用水定容至2000;其中栓劑中含有組合物(a)中牛蒡子苷1—100,半合成脂肪酸酯600—800;組合物(b)中牛蒡子苷元I一IOO，半合成脂肪酸酯600—800;組合物(c)中牛蒡子苷50一99，牛蒡子苷元i一50，半合成脂肪酸酯600—800;其中噴霧劑中含有組合物(a)中牛蒡子苷I一IOO，甜菊素50，山梨酸鉀30，注射用水加至10000;組合物(b)中牛蒡子苷元I一IOO，甜菊素50，山梨酸鉀30，注射用水加至10000;組合物(c)中牛蒡子苷50—99，牛蒡子苷元1—50，甜菊50，山梨酸鉀30，注射用水加至10000。所述的重量份可以是克、市兩、公斤、市斤、噸等。本發明分別提純了純度大於90%(高效液相色譜測定)的牛蒡子苷和牛蒡子苷元，牛蒡子苷、牛蒡子苷元單獨用藥可以分別作用於心血管內皮細胞治療和預防糖尿病性心血管併發症，將牛蒡子苷和牛蒡子苷元組合用藥對於治療糖尿病性心血管併發症變具有協同的治療效果。提純後的牛蒡子和牛蒡子苷元中的雜質包括牛蒡酚B(lappaolB)、牛蒡酚A(lappaolA)、牛蒡酚F(lappaolF)、羅漢松脂素(matairesinol)、8-羥基松脂素(8-hydroxypinoresino1)、(+)-秦皮樹月旨醇((+)-Fraxiresino1)、山萘酚(kaempferol)、無梗五加苷B(acanthosideB)、槲皮素(quercetin)和異槲皮素(isoquercitrin)等。本發明採取的用於治療和預防糖尿病性心血管併發症的組合物的製備方法1、牛蒡子苷、牛蒡子苷元的分離提純方法(1)牛蒡子苷的製備①牛蒡子苷的粗提牛蒡子粉碎後，置索氏提取器中，經沸程60—90'C石油醚回流脫脂2—4次，脫脂後取出晾乾，60%—80%8倍乙醇回流提取2—4次，每次0.5—2h，提取液6(TC—8(TC減壓濃縮，得深褐色浸膏；②大孔樹脂精製將深褐色浸膏加15—35%乙醇，超聲處理15—35分鐘，使其恰恰充分溶解，過濾調至成濃度約為5—7mg/mL的溶液，通過AB-8型大孔吸附樹脂，大孔吸附樹脂體積為藥液體積的l-2倍，流速控制為1.5—2.5BV/h，柱徑高比控制為1:5，水洗3倍樹脂體積，水洗速度0.5—3BV/h;再換以4一6BV50。/。乙醇洗脫，醇洗速度1—3BV/h，收集洗液，濃縮乾燥得牛蒡子苷粗品；③牛蒡子苷的分離牛蒡子粗品用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷粗品的1-2倍，經200—300目矽膠柱層析，矽膠柱為牛蒡子苷粗品的10—50倍，氯仿-甲醇95:l洗脫，薄層色譜跟蹤流出液，收集牛蒡子苷單點的流份，合併濃縮，得牛蒡子苷；(2)牛蒡子苷元製備①牛蒡子苷元粗提牛蒡子藥材粉碎後，過80目篩，置索氏提取器中，經沸程6090。C的油醚回流脫脂3次，晾乾後用乙酸乙酯回流提取2—4次，每次1.5—2.5h，提取液70。C減壓濃縮，得褐色浸膏；②牛蒡子苷元的精製將褐色浸膏用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷元粗品的1-2倍，水浴烘乾，幹法上樣，經200—300目矽膠柱層析，氯仿-甲醇98:l洗脫，洗脫液濃縮合併得到牛蒡子苷元。其中大孔樹脂精製牛蒡子苷提取物時的優選方案為取牛蒡子苷醇提物，加15—30%乙醇，充分攪拌，超聲處理15—30分鐘，使其恰恰充分溶解，過濾調至成上樣藥液濃度為3—6.5mg/mL的溶液，使用AB-8型大孔吸附樹脂，大孔吸附樹脂體積為藥液體積的l-2倍，上樣流速控制為2BV/h，柱徑高比控制為1:5。水洗2—3倍樹脂體積，水洗速度1—2BV/h;再換以3.5—4.5BV50%乙醇洗脫，醇洗速度l一2BV/h，收集醇洗液，濃縮乾燥得牛蒡子粗品。2、按牛蒡子苷、牛蒡子苷元、藥用添加劑和/或藥用載體的比例配置混合。本發明涉及的組合物可通過任何適宜的途徑給予，例如，通過口服、眼局部、靜脈內、肌內、真皮內、表皮下、直腸、經皮、或經肺給藥。本發明涉及的組合物可通過任何符合上述組合物的口服的給藥形式包括但不限於丸劑、普通片劑、雙層片劑、多層片劑、緩釋片劑、單室控釋片劑、雙室控釋片劑、微孔型控釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片、顆粒劑、延遲釋放片、定時/位釋放片、普通膠囊、腸溶膠囊、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的PH依賴型膠囊、顆粒劑、膜劑或貼劑、水溶液、酒精溶液或油溶液、乳劑或混懸劑；眼局部給藥的形式包括但不限於滴眼液、眼用軟膏劑、眼用貼劑；直腸給藥的形式包括但不限於栓劑;注射給藥的形式包括但不限於溶液、固體粉未或塊狀物、乳劑或混懸劑。其它適用的給藥形式還包括不限於經皮膚或局部給藥，例如以軟膏劑、酊劑、噴霧或透皮治療劑體系的形式，或以鼻噴入法或氣霧劑混合物的形式的吸入給藥，或採取微囊劑、植入劑或植入棒的形式給藥。本優選的給藥形式為口服和注射給藥形式給藥。藥物給藥形式的製備方法通常依據其具體形式、組合物實際情況和添加劑的性質等來確定。用於製備本發明的藥物給藥形式的方法在本領域中是已知的，對於本領域的普通技術人員是顯而易見的。在這一方面，將牛蒡子苷、牛蒡子苷元或牛蒡子苷及牛蒡子苷元與一種或多種固體或液體藥物載體和/或藥用添加劑並且與其他具有治療或預防功能的具有藥物活性的化合物結合在一起，製成適當的給藥形式或配藥形式。本發明涉及的組合物的給藥形式也可以包含添加劑，例如填充劑、崩解劑、粘合劑、滑潤劑、溼潤劑、穩定劑、乳化劑、分散劑、防腐劑、甜味劑、著色劑、調味劑、芳香劑、增稠劑、稀釋劑、緩衝物質、溶劑、增溶劑、旨在獲得貯存效果的試劑、旨在改變滲透壓的鹽、塗布劑或抗氧化劑。本發明涉及的藥用載體或藥用添加劑的選擇及其用量的選擇根據具體的應用形式、口腔組合物實際情況、製備方法和主觀需求等來確定。口服給藥形式通常包含惰性稀釋劑或可食用載體。它們可以包封在明膠膠囊中或壓成片劑。為了口服給藥治療，可以將活性化合物或其前體藥物衍生物與賦形劑混合併以片劑，錠劑或膠囊劑的形式使用。也可以包含在藥學上可配伍的粘合劑和/或佐劑物質，作為組合物中的一部分。片劑、丸劑、膠囊劑、錠劑等等可以包含任何下列組分或性質類似的化合物粘合劑如微晶纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素或明膠；賦形劑如澱粉、甘露醇或乳糖；增塑劑為甘油、丙二醇或聚乙二醇；分散劑如藻酸或玉米澱粉；遮光劑為二氧化鈦；抗粘劑如硬脂酸鎂或滑石粉；潤滑劑如膠態二氧化矽；增甜劑如糖精、阿斯巴甜或甜菊素；矯味劑如薄荷，橙皮油。當劑量單位形式為膠囊劑時，除上述種類的物質外，它可以包含液體載體如脂油。另外，劑量單位形式可以包含各種其它能夠改變劑量單位物理形態或性能的物質，例如包衣劑。軟明膠膠囊和栓劑的載體是例如脂肪、蠟、半固體和液體多元醇、天然或硬化油等。適用於微囊劑、植入劑或植入棒的載體是例如羥基乙酸和乳酸的共聚物。也可以將牛蒡子苷、牛蒡子苷元或牛蒡子苷及牛蒡子苷元的凍乾物，例如將其用於製備用於注射和輸注的製劑中。用於非腸道，真皮內，皮下或局部給藥的溶液或懸浮液可包含下列組分:滅菌的稀釋劑如注射用水，鹽水溶液，固定油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶劑；抑菌劑如苯甲醇或對羥苯甲酸甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；鰲合劑如乙二胺四乙酸；緩衝劑如乙酸鹽，枸椽酸鹽或磷酸鹽和調節張力的試劑如氯化鈉。非腸道給藥的製劑可包封在由玻璃或塑料製成的安瓿，可處理注射器或多劑量小瓶中。如果通過靜脈注射給藥，優選的載體是生理鹽水或磷酸鹽緩衝的鹽水。本發明涉及的組合物在藥物製劑中的量一般為每劑0.11000mg(以牛蒡子苷、牛蒡子苷元或牛蒡子苷及牛蒡子苷元計，下同)，優選0.5500mg，特別是1200mg。典型的局部給藥劑量為0.013%wt/wt(在適宜的載體中)。給予本發明涉及的組合物來獲得活性化合物的血漿峰濃度，其值為0.0000110mmol/L,優選為0.001300|amol/L,進一步優選為0.0130pmol/L。例如，這可以通過靜脈注射活性組分的溶液或製劑，可有可無的鹽水或水性溶媒，或者可以通過給予活性組分的藥團來獲得。組合物中的活性化合物(牛蒡子苷、牛蒡子苷元或牛蒡子苷及牛蒡子苷元)的血藥濃度依賴於藥物的吸收，分布，滅活和排洩速率以及本領域技術人員己知的其它因素。在本發明涉及的組合物中，也可以將牛蒡子苷、牛蒡子苷元或牛蒡子苷及牛蒡子苷元與其它不削弱所需作用的活性物質，或與補充所需作用的物質，如其它相同活性的藥物、降糖藥、抗氧化劑、醛糖還原酶抑制劑、內皮生長因子抑制劑、抗血小板聚集藥或它們的混合物。本發明還涉及上述的組合物的用途。其可用於治療和預防糖尿病性視網膜病變的藥物、保健品或食品添加劑。本發明還涉及一種治療和預防糖尿病性心血管併發症的組合物，包括I.牛蒡子苷、牛蒡子苷元或牛蒡子苷及牛蒡子苷元II.其它治療藥，所述的治療藥選自其它與牛蒡子苷相同活性的藥物、降糖藥、抗氧化劑、醛糖還原酶抑制劑、內皮生長因子抑制劑、抗血小板聚集藥或它們的混合物。上述的方法中，施用牛蒡子苷、牛蒡子苷元或牛蒡子苷及牛蒡子苷元的給藥的劑量取決於各個實例，並且依慣例根據每一情況進行調整從而達到最好的效果。施用本發明涉及的組合物的給藥的劑量值也隨著疾病產重程度的減輕而改變。進一步應該知道，就任何特定的治療對象而言，特定的劑量方案應該根據個休需要和具體的療程或監督給予組合物的人的職業判斷，隨時間變化進行調節，並且本文所提出的濃度範圍僅作為實例說明並不限定所公開組合物的範圍或應用。由此，上述劑量取決於待處理的病症的性質和嚴重程度，也取決於患者的性別和體徵，取決於牛蒡子苷、牛蒡子苷元或牛蒡子苷及牛蒡子苷元的作用時間，取決於治療是急性的或長期的或預防性的，或者取決於除牛蒡子苷、牛蒡子苷元或牛蒡子苷及牛蒡子苷元外是否有其它活性化合物被給藥。一般而言，為了取得所希望的效果，適宜的每日劑量是約0.01500mg/kg，優選0.05200mg/kg，特別是0.1100mg/kg。每日劑量可以在一次給藥中使用，或者被分成幾次(例如兩次或三次)給藥。在有些情況下，取決於個體的反應，可能需要從給出的每日劑量向上或向下調整。本發明相對已有技術的優勢1、本發明發現了牛蒡子苷和牛蒡子苷元對於心血管內皮細胞的治療作用，可以顯著提高內皮細胞在高糖條件下分泌一氧化氮(nitrogenoxide，NO)的能力，顯著保護內皮細胞免受高糖條件所致的損傷。2、與以往治療糖尿病性心血管併發症的化學藥物相比，本發明涉及的組合物具有標本兼治的效果，即針對糖尿病具有很強的治療效果，又改善視網膜內皮細胞。因而具有多重療效，且毒性極低，副作用極小。3、與以往治療糖尿病性心血管併發症的傳統藥方、中成藥相比，本發明涉及的藥物或藥物組合物具有有效成分明確，純度高；有利於生產質量控制，有利於實施中藥現代化；療效較高，且毒副作用沒有明顯增加等優勢。圖1是牛蒡子苷、牛蒡子苷元、牛蒡子苷和牛蒡子苷元1:1混合物對高糖條件下大鼠主動脈內皮細胞(rataorticendothelialcells,RAECs)表達內皮型一氧化氮合酶(eNOS)表達的影響。具體實施方式由此已詳細地描述了本發明，對本領域技術人員而言在本發明的範圍內顯然還可有各種改變，本發明並不受說明書所述的限制。實施例1牛蒡子苷和牛蒡子苷元的製備方法(1)牛蒡子苷的製備①牛蒡子苷的粗提牛蒡子粉碎後，置索氏提取器中，經沸程60—9(TC石油醚回流脫脂2次，脫脂後取出晾乾，60%8倍乙醇回流提取2次，每次0.8h，提取液6(TC減壓濃縮，得深褐色浸膏；②大孔樹脂精製將深褐色浸膏加15%乙醇，超聲處理15分鐘，使其恰恰充分溶解，過濾調至成濃度約為5mg/mL的溶液，通過AB-8型大孔吸附樹脂，大孔吸附樹脂體積為藥液1倍，流速控制為1.5BV/h，柱徑高比控制為1:5，水洗3倍樹脂體積，水洗速度0.5BV/h;再換以4BV50。/。乙醇洗脫，醇洗速度lBV/h，收集洗液，濃縮乾燥得牛蒡子苷粗品；③牛蒡子苷的分離牛蒡子苷粗品用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷粗品的1倍，經200-300目矽膠柱層析，矽膠柱為牛蒡子苷粗品的IO倍，氯仿-甲醇95:l洗脫，薄層色譜跟蹤流出液，收集牛蒡子苷單點的流份，合併濃縮，得牛蒡子苷，高效液相色譜測定純度為90.3%;(2)牛蒡子苷元製備①牛蒡子苷元粗提牛蒡子藥材粉碎後，過80目篩，置索氏提取器中，經沸程6090°C的油醚回流脫脂3次，晾乾後用乙酸乙酯回流提取2次，每次1.5h，提取液70'C減壓濃縮，得褐色浸膏；②牛蒡子苷元的精製褐色將浸膏用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子粗品的1倍，水浴烘乾，幹法上樣，經200—300目矽膠柱層析，氯仿-甲醇98:l洗脫，洗脫液濃縮合併得到牛蒡子苷元，高效液相色譜測定純度為90.5%。實施例2牛蒡子苷和牛蒡子苷元的製備方法(1)牛蒡子苷的製備①牛蒡子苷的粗提:牛蒡子粉碎後，置索氏提取器中，經沸程60—9(TC石油醚回流脫脂4次，脫脂後取出晾乾，80%8倍乙醇回流提取4次，每次2h，提取液80"C減壓濃縮，得深褐色浸膏；②大孔樹脂精製將深褐色浸膏加35%乙醇，超聲處理35分鐘，使其恰恰充分溶解，過濾調至成濃度約為7mg/mL的溶液，通過AB-8型大孔吸附樹脂，大孔吸附樹脂體積為藥液的2倍，流速控制為2.5BV/h，柱徑高比控制為1:5，水洗3倍樹脂體積，水洗速度3BV/h;再換以6BV50。/。乙醇洗脫，醇洗速度3BV/h，收集洗液，濃縮乾燥得牛蒡子苷粗品；(D牛蒡子苷的分離牛蒡子苷粗品用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷粗品的2倍，經200-300目矽膠柱層析，矽膠柱體積為牛蒡子苷粗品的50倍，氯仿-甲醇95:l洗脫，薄層色譜跟蹤流出液，收集牛蒡子苷單點的流份，合併濃縮，得牛蒡子苷，高效液相色譜測定純度為90.7%;(2)牛蒡子苷元製備①牛蒡子苷元粗提牛蒡子藥材粉碎後，過80目篩，置索氏提取器中，經沸程609(TC的油醚回流脫脂3次，晾乾後用乙酸乙酯回流提取4次，每次2.5h，提取液7(TC減壓濃縮，得褐色浸膏；②牛蒡子苷元的精製將褐色浸膏用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷元粗品的2倍，水浴烘乾，幹法上樣，經200—300目矽膠柱層析，氯仿-甲醇98:1洗脫，洗脫液濃縮合併得到牛蒡子苷元，高效液相色譜測定純度為90.8%。實施例3牛蒡子苷和牛蒡子苷元的製備方法(1)牛蒡子苷的製備①牛蒡子苷的粗提牛蒡子粉碎後，置索氏提取器中，經沸程60—9(TC石油醚回流脫脂3次，脫脂後取出晾乾，70%8倍乙醇回流提取3次，每次lh，提取液7(TC減壓濃縮，得深褐色浸膏；②大孔樹脂精製將深褐色浸膏加20%乙醇，超聲處理20分鐘，使其恰恰充分溶解，過濾調至成濃度約為6mg/mL的溶液，通過AB-8型大孔吸附樹脂，大孔吸附樹脂體積為藥液體積的1.5倍，流速控制為2BV/h，柱徑高比控制為1:5，水洗3倍樹脂體積，水洗速度2BV/h;再換以5BV50%乙醇洗脫，醇洗速度2BV/h，收集洗液，濃縮乾燥得牛蒡子苷粗品；③牛蒡子苷的分離牛蒡子苷粗品用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷粗品的2倍，經200-300目矽膠柱層析，矽膠柱體積為牛蒡子苷粗品的25倍，氯仿-甲醇95:l洗脫，薄層色譜跟蹤流出液，收集牛蒡子苷單點的流份，合併濃縮，得牛蒡子苷，高效液相色譜測定純度為91.3%;(2)牛蒡子苷元製備①牛蒡子苷元粗提牛蒡子藥材粉碎後，過80目篩，置索氏提取器中，經沸程609(TC的油醚回流脫脂3次，晾乾後用乙酸乙酯回流提取3次，每次2h，提取液7(TC減壓濃縮，得褐色浸膏；②牛蒡子苷元的精製將褐色浸膏用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷元粗品的L5倍，水浴烘乾，幹法上樣，經200—300目矽膠柱層析，氯仿-甲醇98:1洗脫，洗脫液濃縮合併得到牛蒡子苷元，高效液相色譜測定純度為91.7%。實施例4牛蒡子苷和牛蒡子苷元的製備方法(1)牛蒡子苷的製備①牛蒡子苷的粗提牛蒡子粉碎後，置索氏提取器中，經沸程8(TC石油醚回流脫脂3次，脫脂後取出晾乾，75%8倍乙醇回流提取3次，每次lh，提取液7(TC減壓濃縮，得深褐色浸膏；②大孔樹脂精製將深褐色浸膏加25%乙醇，充分攪拌，超聲處理25分鐘，使其恰恰充分溶解，過濾調至成上樣藥液濃度為5mg/mL的溶液，使用AB-8型大孔吸附樹脂，大孔吸附樹脂體積為藥液體積的1.5倍，上樣流速控制為2BV/h,柱徑高比控制為k5，水洗3倍樹脂體積，水洗速度1.5BV/h;再換以4BV50。/。乙醇洗脫，醇洗速度1.5BV/h，收集醇洗液，濃縮乾燥得牛蒡子苷粗品；③牛蒡子苷的分離牛蒡子苷粗品用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷粗品的2倍，經200-300目矽膠柱層析，矽膠柱體積為牛蒡子苷粗品的40倍，氯仿-甲醇95:l洗脫，薄層色譜跟蹤流出液，收集牛蒡子苷單點的流份，合併濃縮得牛蒡子苷，高效液相色譜測定純度為90.8%;(2)牛蒡子苷元製備①牛蒡子苷元粗提牛蒡子藥材粉碎後，過80目篩，置索氏提取器中，經沸程6090。C的油醚回流脫脂3次，晾乾後用乙酸乙酯回流提取3次，每次2h，提取液70。C減壓濃縮，得褐色浸膏；②牛蒡子苷元的精製將褐色浸膏用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷元粗品的2倍，水浴烘乾，幹法上樣，經200—300目矽膠柱析層，氯仿-甲醇98:1洗脫，洗脫液濃縮合併得到牛蒡子苷元，高效液相色譜測定純度為91.2%。實施例5膠囊劑膠囊劑配方組合物(a)牛蒡子苷(活性成分)100g乳糖(賦形劑)130g澱粉(賦形劑)120g硬脂酸鎂(抗粘劑)2.5g共製成IOOO粒組合物(b)牛蒡子苷元(活性成分)訓g乳糖(賦形劑)130g澱粉(賦形劑)120g硬脂酸鎂(抗粘劑)2.5g共製成IOOO粒組合物(c)牛蒡子苷(活性成分)50g牛蒡子苷元(活性成分)50g乳糖(賦形劑)130g澱粉(賦形劑)120g硬脂酸鎂(抗粘劑)2.5g共製成IOOO粒製法將活性成份和藥用輔料均過IOO目篩，按處方分別準確稱量，在混合機中混合10—15min，加入硬脂酸鎂2.5g,混合2min後，裝入1000粒膠囊即得。實施例6注射劑注射劑配方組合物(a)牛蒡子苷(活性成分)100g氯化鈉(調節滲透壓的鹽)18g注射用水(藥用載體)至2000ml共製成IOOO支組合物(b)牛蒡子苷元(活性成分)100g氯化鈉(調節滲透壓的鹽)18g注射用水(藥用載體)至2000ml共製成IOOO支組合物(c)牛蒡子苷(活性成分)85gtableseeoriginaldocumentpage22製法稱取處方量的活性成份，加全量卯％的注射用水攪拌使溶解，按注射用水量的0.iy。(W/V)比例加入活性炭，攪拌20分鐘，布氏漏鬥鋪兩層無菌濾紙抽濾後，再將粗濾液經已滅菌的0.2pm微孔濾膜精濾。補加注射用水至足量，使牛蒡子苷和牛蒡子苷元含量為標示量的95.0%105.0%，灌裝，即得。實施例7片芯配方:片劑或丸劑組合物(a)牛蒡子苷(活性成分)100g糊精(賦形劑)162.5g乳糖(賦形劑)137.5g低取代羥丙基纖維素(粘合劑)18.75g4%羥丙基纖維素的50%乙醇(粘合劑)112.5ml滑石粉(抗粘劑)3.75g硬脂酸鎂(抗粘劑)3.75g共製成1250片組合物(b)牛蒡子苷元(活性成分)100g糊精(賦形劑)162.5g乳糖(賦形劑)137.5g低取代羥丙基纖維素(粘合劑)18.75g4%羥丙基纖維素的50%乙醇(粘合劑)112.5ml滑石粉(抗粘劑)3.75g硬脂酸鎂(抗粘劑)3.75g共製成1250片組合物(c)牛蒡子苷(活性成分)75g牛蒡子苷元(活性成分)25g糊精(賦形劑)162.5g乳糖(賦形劑)137.5g低取代羥丙基纖維素(粘合劑)lS.75g4%羥丙基纖維素的50%乙醇(粘合劑)112.5ml滑石粉(抗粘劑)3.75g硬脂酸鎂(抗粘劑)_3.75g共製成1250片包衣液配方包衣預混劑(歐巴代0Y-C-7000A)4.37g純水_30g製成1250片製備工藝將活性成份和其他輔料均過100目篩，稱取處方量的活性成份、糊精和佔處方量一半的低取代羥丙基纖維素,按等量遞加法混合均勻，以4%羥丙基纖維素的50%的乙醇為潤溼劑制軟材，18目篩制粒，溼顆粒於455(TC乾燥，20目篩整粒，加入剩餘量的低取代羥丙基纖維素、處方量的微粉矽膠、硬脂酸鎂混勻，測定主藥含量後，確定片重，於10.0mm淺凹衝模壓片。按常規方法包以白色薄膜衣，包衣增重12%。包衣液的配製在攪拌下把包衣預混劑(歐巴代0Y-C-7000A)加入純水中，5分鐘內加完，繼續攪拌45分鐘即得。實施例8噴霧劑噴霧劑配方組合物(a)牛蒡子苷(活性成分)100.0g甜菊素(增甜劑)50.0g山梨酸鉀(防腐劑)30.0g注射用水(藥用載體)_加至10000ml共製成500支組合物(b)牛蒡子苷元(活性成分)100.0g甜菊素(增甜劑)50.0g山梨酸鉀(防腐劑)30.Og注射用水(藥用載體)加至10000ml共製成500支組合物(c)牛蒡子苷(活性成分)80.Og牛蒡子苷元(活性成分)20.Og甜菊素(增甜劑)50.Og山梨酸鉀(防腐劑)30.Og注射用水(藥用載體)加至10000ml共製成500支製備方法稱取處方量的活性成份，加入約30%的溫度801:左右熱注射用水中，攪拌使其溶解，再將甜菊素、山梨酸鉀逐步加入其中，攪拌使其溶解，加入0.05%針用活性炭，於溫度708(TC吸附15分鐘，脫炭，補加注射用水至全量，攪勻，灌裝即得。實施例9栓劑栓劑配方組合物(a)牛蒡子苷(活性成分)80g半合成脂肪酸酯(藥用載體)700g_製成400粒組合物(b)牛蒡子苷元(活性成分)20g半合成脂肪酸酯(藥用載體)700g_製成400粒組合物(c)牛蒡子苷(活性成分)85g牛蒡子苷元(活性成分)15g半合成脂肪酸酯(藥用載體)700g_製成400粒製備方法稱取活性成分過100目篩，另取半合成脂肪酸酯1700g加熱熔融，待溫度降至60'C以下時，將牛蒡子苷藥粉加入，實施例IO含速釋層的雙層緩釋片劑緩釋片芯配方組合物(a)牛蒡子苷(活性成分)羥丙基纖維素(粘合劑)乳糖(賦形劑)聚乙烯基吡咯垸酮(崩解劑)硬脂酸(抗粘劑)攪拌均勻，澆模製成1000粒即得<100.Og28.7g58.Og8.0g5.3g製成667片組合物(b)牛蒡子苷(活性成分)100.0g羥丙基纖維素(粘合劑)28.7g乳糖(賦形劑)58.0g聚乙烯基吡咯烷酮(崩解劑)8.0g硬脂酸(抗粘劑)_5.3g製成667片組合物(c)牛蒡子苷(活性成分)85.0g牛蒡子苷元(活性成分)15.0g羥丙基纖維素(粘合劑)28.7g乳糖(賦形劑)58.0g聚乙烯基吡咯烷酮(崩解劑)8.0g硬脂酸(抗粘劑)5.3g包衣液處方:製成667片羥丙基纖維素(粘合劑)86g聚乙二醇-400(增溶劑)3ml聚山梨酯80(乳化劑)2ml鈦白粉(著色劑)3g檸檬黃(著色劑)6mg60%乙醇3200ml製成3200ml製備方法:1、預處理將活性成份過7號篩。輔料羥丙基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、硬脂酸分別過7號篩。2、煙酸片芯顆粒製備稱取處方量的活性成份、聚乙烯基吡咯垸酮和31%處方量的羥丙基纖維素，混合均勻，作為混合粉，用水制粒。溼粒置6(TC通風乾燥，幹顆粒經2號篩整粒後，加入處方量的硬脂酸和剩餘量的羥丙基纖維素，混勻。測顆粒含藥量，計算標準片重。3、壓片13mm淺凹衝壓片，片劑硬度控制在56千克力(kgf)。4、包衣液的配製稱取處方量的羥丙甲基纖維素、聚乙二醇-400和吐溫-80,溶於處方量的60%乙醇中，並用此液研磨處方量的鈦白粉，取上清液即得空白包衣液。5、包衣取片芯稱重，放入包衣鍋內，溫度控制在40士2'C，進行預包幾分鐘，將己過7號篩的牛蒡子苷分散到包衣液中，連續噴入包衣液，至片劑增重15%。實施例11牛蒡子苷、牛蒡子苷元和牛蒡子苷及牛蒡子苷元混合物對糖尿病性心血管的作用(一)實驗方法1.實驗材料實驗動物SPF級Wistar大鼠4隻，體重150180g;試驗藥物牛蒡子苷、牛蒡子苷元，純度均要求大於90.0%，實測值牛蒡子苷94.2X(HPLC法)，牛蒡子苷95.2X(HPLC法)，牛蒡子苷與牛蒡子苷元混合物(質量比1:1)。2.大鼠主動脈內皮細胞培養與鑑定2.1大鼠主動脈內皮細胞的培養(rataorticendothelialcells,RAECs)處死大鼠，無菌條件下取其胸腹主動脈,清除血管外膜及脂肪組織，將血管縱向剖開，用0.01PBS漂洗乾淨，用眼科剪剪成約1.5mmxl.5mm大小的組織塊，放入培養瓶中，放入37°C、5%C02的培養箱中貼壁4h後加入含20。/。FBS(小牛血清)、1OOug/mlECGS(endothelialcellgrowthsupplement,內皮細胞生長添加劑)、100ug/ml肝素及雙抗(100U/ml青黴素和100U/ml鏈黴素)的DMEM/F12培養基繼續培養。3天後去除組織塊並換液後繼續培養。以後每3天更換培養液1次。取25代用於試驗。差速消化法純化內皮細胞及其傳代培養吸棄培養液，用PBS液衝洗3次，加入0.1%的胰蛋白酶12ml，置相差顯微鏡下觀察，13min即可見大部分RAECs收縮變圓而雜細胞仍然貼壁，此刻立即加入小牛血清終止消化，用吸管輕輕吹散細胞，吸出離心後，置於培養瓶中培養。2.2RAECs的鑑定(1)RAECs的生長特性觀察:分別在培養l天、2天、3天及7天時用倒置相差顯微鏡觀察細胞的形態學特徵。(2)細胞免疫螢光染色細胞免疫螢光染色檢查Vfll因子相關抗原來鑑定大鼠主動脈內皮細胞。3.採用四甲基偶氮唑藍(methylthiazoletetrazoliumm,MTT)法檢測牛蒡子苷、牛蒡子苷元和牛蒡子苷及牛蒡子苷元混合物對RAECs增殖能力的影響取生長良好的細胞，加入適量的0.25%胰蛋白酶消化吹打分散細胞後，再加入10X的新生小牛血清的DMEM/F12培養液，製備成細胞懸液，並調整細胞濃度至lxlS個/ml。按200pl/孔接種於96孔細胞培養板，6h後各孔內加牛蒡子苷使其終濃度分別為10ng.mr1、100ng.mr1、l嗎.mr1、10嗎.mr1、100嗎.mr1、lmg.mr1、5mg.ml"及10mg.mr1，同時設立空白對照組，每組設6復孔，繼續培養48小時。在培養結束前4小時，每孔加入MTT(5mg'ml—1)2(^1，培養結束後傾去培養上清液，加入二甲基亞碸150mJ，振蕩至完全熔解後，將96孔板放入酶標儀，在490nm處測定光密度(opticaldensity,OD)值。牛蒡子苷元、牛蒡子苷與牛蒡子苷元混合物加藥劑量和實驗方法同牛蒡子苷。4.牛蒡子苷、牛蒡子苷元和牛蒡子苷及牛蒡子苷元混合物對高糖條件下RAECs活性的影響方法同前3。各孔內加葡萄糖使其終濃度30mmo1同時加入牛蒡子苷，其終濃度同上，同時設立正常對照(不加葡萄糖及牛蒡子苷)及空白對照組(加葡萄糖，不加牛蒡子苷)，每組設6復孔。牛蒡子苷元、牛蒡子苷與牛蒡子苷元混合物加藥劑量和實驗方法同牛蒡子苷。5.牛蒡子苷、牛蒡子苷元和牛蒡子苷及牛蒡子苷元混合物對RAECs釋放乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase，LDH)、丙二醛(maleicdialdehyde,MDA)禾口一氧化氮(nitrogenoxide,NO)的影響實驗方法選用三種藥物濃度(l嗎'mr1、10嗎'mr1、100昭'ml")進行實驗。參照上述方法，按200nl/孔接種於96孔細胞培養板和lml/孔接種於24孔細胞培養板中進行細胞培養。24h後各孔內加牛蒡子苷使其終濃度分別為l嗎'mr1、10嗎'mr1、100嗎'mr1，同時設立空白對照組，每組設6復孔，分別收集24孔細胞培養板細胞培養液，按照試劑盒說明書測定培養液中LDH、MDA和NO含牛蒡子苷元、牛蒡子苷與牛蒡子苷元混合物加藥劑量和實驗方法同牛蒡子苷。6.牛蒡子苷、牛蒡子苷元和牛蒡子苷及牛蒡子苷元混合物對高糖條件下RAECs釋放LDH、MDA和NO的影響方法同5。培養24h後各孔內加葡萄糖使其終濃度30mmo11/1，同時加牛蒡子苷使(濃度同5)，同時設立正常對照組(不加葡萄糖及牛蒡子苷)高滲對照組(加甘露醇終濃度為30mmol丄")及模型對照組(加葡萄糖，不加牛蒡子苷)，每組設6復孔。牛蒡子苷元、牛蒡子苷與牛蒡子苷元混合物加藥劑量和實驗方法同牛蒡子苷。7.牛蒡子苷、牛蒡子苷元和牛蒡子苷及牛蒡子苷元混合物對高糖條件下RAECs表達內皮型一氧化氮合酶(eNOS)表達的影響將細胞接種至培養瓶中，培養24h後加葡萄糖使其終濃度30mmoH/1，同時加牛蒡子苷使其終濃度分別為l嗎'ml'1、10嗎'mr1、100嗎'mr1，同時設立正常對照組(不加葡萄糖及牛蒡子苷)高滲對照組(加甘露醇終濃度為30mmol丄")及空白對照組(加葡萄糖，不加牛蒡子苷)，待細胞達90%融合後，用0.25%胰酶消化收集、裂解細胞，用免疫沉澱法分離eNOS蛋白，並運用蛋白考馬斯亮藍法定量;蛋白免疫印跡增強化學發光法檢測eNOS表達水平。牛蒡子苷元、牛蒡子苷與牛蒡子苷元混合物加藥劑量和實驗方法同牛蒡子苷。8.統計方法所有數據結果用均數士標準差(^士SD)表示，採用SPSSIO.O專用統計分析程序對各組數據進行t檢驗或單因素方差分析，以PO.05為具有統計學意義。(二)實驗結果(1)對高糖條件下大鼠血管內皮細胞保護作用1.大鼠主動脈內皮細胞(mtaorticendothelialcells,RAECs)的鑑定原代和傳代培養的大鼠主動脈內皮細胞體外生長情況及形態原代內皮細胞23天即可由組織塊邊緣爬出並逐漸向外延伸，呈扁平短梭形或多角形，約7一10天融合成層，呈鵝卵石樣排列；傳代細胞12h後，可見細胞生長增殖，呈小簇狀生長，24h後，細胞生長形成細胞群。細胞團塊中間較密,呈魚貫狀相連或旋窩狀排列,周邊細胞多為長梭形並游離向外生長。7天後各細胞群相互融合成層，細胞成鵝卵石樣排列。細胞免疫螢光染色結果vwF抗原免疫螢光染色呈陽性，表明培養的細胞表達vwF抗原。2.對內皮細胞增殖能力的影響表l(a)不同濃度牛蒡子苷對內皮細胞增殖能力的影響(；土SD,n=6)tableseeoriginaldocumentpage30表l(b)不同濃度牛蒡子苷元對內皮細胞增殖能力的影響(；土SD,n=6)tableseeoriginaldocumentpage30表i(c)不同濃度的牛蒡子苷和牛蒡子苷元混合物對內皮細胞增殖能力的影響(；土SD,=6)tableseeoriginaldocumentpage30注與正常對照組比較*P<0.05，**p<0.01結果表明在10ng'ml"100昭Tnl"之間，各給藥組呈劑量依賴性地增強內皮細胞增殖能力，空白對照組490nm吸光光度值為0.48士0.06，各給藥組組有增強內皮細胞增殖能力的趨勢，與對照組相比有顯著性差異(11=6，p〈a^)，而l嗎'mr1、10吸mr1、100附ml"的各給藥組能顯著增強內皮細胞增殖，與對照組相比有極顯著性差異(n-6，p<aW);lmg'mr1、5mg'ml"及10mg'ml"組，與對照組相比儘管仍能增強內皮細胞的增殖能力，但與ioo嗎.mr1的濃度相比其作用有逐漸減弱的趨勢。3.對高糖條件下RAECs增殖能力的影響表2(a)不同濃度牛蒡子苷對高糖條件下RAECs增殖能力的影響(x土SD,n=6)tableseeoriginaldocumentpage31注與正常對照組相比，*p<0.05，,<0.01;與高糖對照組相比，Ap<0.05，AAp<<表2(b)不同濃度牛蒡子苷元對高糖條件下RAECs增殖能力的影響(；±SD,n=6)tableseeoriginaldocumentpage31注與正常對照組相比，*p<0.05，**p<0.01;與高糖對照組相比，Ap<0.05，AAp<0.01;表2(c)不同濃度的牛蒡子苷和牛蒡子苷元混合物對高糖條件下RAECs增殖能力的影響(；±SD,n=6)tableseeoriginaldocumentpage31高糖對照組(含GS:30mmol)10ngml—'+30mmolGSlOOngmr'+30mmolGSlugml—'+30畫lGS10ygml—'+30,lGS100ugmr+30,lGSlmgmr'+30咖olGS5mgml—'+30咖olGS10mgml—'+30,lGS高滲對照組(甘露醇30咖o1)注與正常對照組相比，*p<0.05，**p<0.01;與高糖對照組相比，Ap<0.05,AAp<0.01;結果表明與正常對照組相比，高糖能顯著降低細胞增殖能力(n二6，/7<0.0/)，高滲甘露醇(30mmol'L")溶液對細胞增殖能力無影響(n二6，p〉a05)。l嗎'mr1、10吸mr1、100嗎'ml"的牛蒡子各組呈劑量依賴性地增強高糖條件下內皮細胞的增殖能力，與高糖對照組相比有顯著性差異^<^.0";10ng，ml"及lOOngTnr1的牛蒡子各組對高糖條件下內皮細胞增殖能力無影響，與空白對照組相比無顯著性差異(^〉0.0";lmg'mr1、5mg'ml"及10mg.mr1的牛蒡子各組作用於內皮細胞時與空白對照組相比儘管仍能增強內皮細胞的增殖能力(^<0.05入但與ioo嗎'mr1的濃度相比其作用呈逐漸減弱趨勢。4.對高糖條件下RAECs細胞釋放乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,LDH)、丙二醛(maleicdialdehyde，MDA)、一氧化氮(nitrogenoxide，NO)禾口內皮素(endothelium,ET)的影響表3(a)牛蒡子苷對髙糖條件下RAECs細胞釋放MDA、N0、LDH和ET的影響(；±SD,n==6)組別MDA(nmol/L)NO(nmol/L)LDH(U/L)ET(pg/ml)~58.5±2.16~~54.02±9.71139.0士17.65'71.42±6.55*117.1±19.30A65.44±8.94A89.1±7.65A60.61±12.69A69.7±8.75A58.26士5.54厶010ngml_llOOngml—1lug*ml—1lOugml—1訓ugml—'lmgmF'5mgml-110mgml—100.19±0.08**0.22土0.04**0.17±0.02**0.24±0.05**厶0.35±0.06**"0.42±0.05**"0.34±0.03**厶'0,28±0.03**"0.31±0.0.03**'0.51±0.12正常對照高糖對照(含GS:30mmol)30腿olGS30mmolGS100lag.ml"十30mmolGS4.5±0.813.5±0.7**9.6士0.5厶6.5±0.5A7.42±0.64.46±0.5*4.92±0.6A5.78士0.7厶6.22士0.4厶高滲對照4.3±0.3#7.65±0.8#57.8±2.54#53.62±6.88#注與正常對照組相比，*p<0.05，**p0.05;與高糖對照組相比，Ap<0.05，AAp<0.01表3(b)牛蒡子苷元對高糖條件下RAECs細胞釋放MDA、NO、LDH和ET的影響(5±SD,n=6)組別MDA(umol/L)N0(umol/L)LDH(U/L)ET(pg/ml)54.02±9.71~71.39±6.68*63.42±4.51A67.02±4.03A55.81±4.71A53.59±6.88*注與正常對照組相比，*p<0.05，**p<0.01，ttp〉0.05;與高糖對照組相比，Ap<0.05，AAp<0.01表3(c)牛蒡子苷和牛蒡子苷元混合物對高糖條件下RAECs細胞釋放MDA、N0、LDH和ET的影響±SD,n_^_組別MDA(iimol/L)N0(umol/L)LDH(U/L)ET(pg/ml)54.02±9.71"~71.39±6.68*69.19±5.37A58.98±4.71A61.69±4.96A53.59±6.88*注與正常對照組相比，*p<0.05，**p0.05;與高糖對照組相比，Ap<0.05，AAp<0.01試驗結果與正常對照組相比，高糖對照組MDA的含量顯著增加(^^O.W力高滲對照與正常對照組相比，MDA釋放量無顯著差異(^〉a("。與空白對照組相比，ljig'ml"、10嗎'ml"及100嗎'ml"的牛蒡子各組均能顯著減少高糖誘導的MDA釋放，呈劑量依賴性。33正常對照高糖對照(含GS:30mmol)1ygml—'+30畫1GS10ng*ml—l+30腸1GSlOOugmr'+30畫1GS高滲對照4.5±0.813.7±0.7**11.6±0.4'9.8±0.5厶7.0±0.3A4.5±0.5*7.42±0.64.43±0.9*4.81±0.2厶5.81±0.5厶5.99±0.3A7.75±0.7*58.5±2.16140.0±17.65*122.29±10.05A86.54±4.39'73.84±5.20'58.0±2.44s正常對照高糖對照(含GS:30腿o1)1lig*mr1+30腸1GS10ygm廣十30畫1GSlOOugml-1+30腸1GS高滲對照4.5±0.813.7±0.7**11.1±0.7'9.7±0.1'6.3±0.6'4.5±0.5*7.42±0.64.43±0.9*5.20±0.3^6.01±0.8'6.54±0.7'7.75±0.7"58.5±2.16140.0土17.65*127.06土13.01厶92.27±6.7568.67±7.25'58.0±2.44*與正常對照組相比，高滲對照組NO的含量無顯著性差異(^^.05,而高糖對照組NO的含量顯著降低(^<0.0"。l嗎'mr1、10嗎'ml"及100嗎'ml"濃度的牛蒡子各組能顯著增加高糖條件下內皮細胞分泌NO的能力，與高糖對照組相比有顯著性差異^<^.05人呈劑量依賴性。與正常對照組相比，高糖對照組LDH的含量顯著增加^^O.0》；高滲對照與正常對照組相比，LDH釋放量無顯著差異(^〈O.0"。與高糖對照組相比，l昭，mr1、lO嗎'mr1及100吸mr1的牛蒡子各組均能顯著減少高糖誘導的LDH釋放，呈劑量依賴性。與正常對照組相比，高糖對照組ET的含量顯著增加(^^aO";高滲對照與正常對照組相比，ET釋放量無顯著差異^〈a05入與空白對照組相比，l嗎'ml"、10吸mr1及100嗎'mr1的牛蒡子各組均能顯著減少高糖誘導的ET釋放，呈劑量依賴性。5.對高糖條件下RAECs表達內皮型一氧化氮合酶(eNOS)表達的影響表4牛蒡子苷、牛蒡子苷元、牛蒡子苷和牛蒡子苷元混合物對高糖條件下RAECs表達內皮型一氧化氮合酶(eNOS)表達的影響分組(n-3)eN0S含量(e5ng)(;土SD)正常對照2.06±0.03高糖對照組(含GS:30咖o1)1.05±0.01*牛蒡子苷10ug'm1—1+30mmolGS1.18±0.06厶牛蒡子苷元10ug'ml—i+30mmolGS1.56±0.04厶混合物+30mmolGS1.76±0.04A高滲對照2.05±0.02#注與正常對照組相比，*p<0.05，**p0.05;與高糖對照組相比，Ap<0.05，AAp<0.01電泳圖見說明書附l，其中M為marker,1為正常對照組，2為高糖對照組，3為牛蒡子苷10嗎'mr1，4為牛蒡子苷元組10吸mr1，5為混和物組(牛蒡子苷元5吸ml"+牛蒡子苷5嗎'mr1)，6為高滲對照。實驗結果與正常對照組相比，高滲對照組eNOS的表達無顯著性差異(^〉a05)，而高糖對照組eNOS的表達顯著降低(^〈ft0";牛蒡子苷組、牛蒡子苷元組1及其混和物組能增加高糖條件下內皮細胞eNOS的表達，與高糖對照組相比有顯著性差異(^<0.05入實施例13牛蒡子苷和牛蒡子苷元的急性毒性試驗將本發明所述的牛蒡子苷和牛蒡子苷元用於進行小鼠的急性毒性試驗，，得牛蒡子苷的小鼠的口服半數致死量LD5o為139.8g/kg，得牛蒡子苷元的小鼠的口服半數致死量LD5。為64.6g/kg，遠遠高於前述試驗有效劑量，表明該牛蒡子提取物毒副作用小，在開發製備臨床用藥方面前景廣闊。一、試驗材料實驗動物昆明種小鼠，SPF級，6-8周齡，18—22g。飼養於全封閉動物房內，溫度20—22"C，相對溼度50_60%，光照12小時暗，12小時明，中央空調集中通風8—15次/小時。自由攝食和飲水，每日更換飲用水一次。適應性詞養觀察2天後，禁食不禁水過夜，次日稱重、編號。二、實驗方案1.動物分組將給藥組分為5個劑量組，每組10隻小鼠，雌雄各半。2.給藥劑量以"不等濃度等容積"的原則給藥，牛蒡苷和牛蒡苷元用0.5%羧甲基纖維素鈉配成供灌胃用的混懸液，各組小鼠按等比級數1:0.5分別灌胃給予受試藥物。以後常規飼養，連續觀察7天動物的毛色、自發活動、飲食、體重等，記錄死亡症狀和時間，7天後處死動物，解剖觀察小鼠各組織、臟器有無異常變化。將本發明所述的牛蒡子提取物用於進行小鼠的急性毒性試驗，得牛蒡子苷的小鼠的口服半數致死量LD5o為139.8g/kg，得牛蒡子苷元的小鼠的口服半數致死量LD5。為64.6g/kg，遠遠高於前述試驗有效劑量，表明該牛蒡子提取物毒副作用小，在開發製備臨床用藥方面前景廣闊。表5牛蒡子苷的小鼠死亡率劑量(g/kg)雄性雌性總死亡率401.445/55/5100%200.723/54/570%100.361/51/520%50.181/5Ji^_10%25.090/50/50%注表內為"死亡數/動物數"。表6牛蒡子苷對雄性小鼠體重的影響(X土s，g)劑量(g/kg)第1天第7天401.4418.2±0.74(5)200.7221.5±1.01(5)33.2±1.27(2)100.3617.2±0.82(5)32.7±1.08(4)50.1817.8±1.27(5)31.9±0.85(4)25.0921.7±1.55(5)30.9±1.27(5)注""內為動物數，下同。表7牛蒡子苷對雌性小鼠體重的影響(X土s，g)劑量(g/kg)第l天第7天401.4419.l土O.73(5)200.7218.8±0.29(5)28.1±0.99(1)100.3620.3±1.26(5)29，6±1.65(4)50.1819.9±0.84(5)30.1±1.31(5)25.0920.7±1.04(5)29.5±0.87(5)表8牛蒡子苷元的小鼠死亡率劑量(g/kg)雄性雌性總死亡率240.485/55/5100%120.243/54/570%60.121/51/520%30.061/50/5腦15.030/50/50%表9牛蒡子苷元對雄性小鼠體重的影響(X土s，g)劑量(g/kg)第l天第7天240.4817,5±0.74(5)120.2419.4±1.15(5)32.6±1.32(2)60.1218.5±0.095(5)31.8±1.24(4)30.0618.1±1.17(5)31.7±0.98(4)15.0321.4±0.86(5)30.7±1.32(5)表10牛蒡子苷元對雌性小鼠體重的影響(X土s，g)劑量(g/kg)第l天第7天19.5±0.91(5)18.4±0.59(5)27.8±1.15(1)19.8±1.16(5)28.5±1.55(4)20.2±0.78(5)30.7±0.71(5)20.6±1.14(5)29.6±0.77(5)結論牛蒡子苷的小鼠口服LD5o為139.8g/kg，LDso的95^可信限為99.8195.9g/kg。牛蒡子苷元小鼠口服LD5o為64.6g/kg,1^50的95%可信限44.693.7g/kg。牛蒡子苷和牛蒡子苷元的小鼠LD5。遠遠高於其有效劑量，表明其毒副作用小，在開發製備臨床用藥方面前景廣闊。實施例14臨床試驗研究病例將80例糖尿病並高血壓患者隨機分為治療組(Aa組，Ab組，Ac組，各組『40)和對照組(B組，"=40)。A組治療前平均血壓(162士12)/(102士13)mmHg，平均空腹血糖為105士2.7mmol/L。B組治療前平均血壓為(171士11)/(105士14)mmHg，平均空腹血糖9.7士2.8mmo1/L。糖尿病的診斷採用國際糖尿病聯盟西太區委員會(IDFWPF)1999年公布的診斷標準；高血壓的診斷標準採用世界衛生組織(WHO)1999年新標準，舒張壓》100mmHg(g卩2，3級高血壓)者作為人選對象。治療方法各組均予糖尿病飲食，各組均予基礎治療試驗期間受試者根據適合個體需要的最佳用藥原則，各組均同時口服二甲雙胍以控制血糖，使受試者血糖達到控制標準或保持穩定的水平。在此基礎上，Aa組加服牛蒡子苷膠囊(100mg/粒,實施例5a樣品)，Ab組加服牛蒡子苷元膠囊(100mg/粒實施例5b樣品)，Ac組加服牛蒡子苷與牛蒡子苷元混合物膠囊(100mg/粒,實施例5c樣品)，每次2粒(每粒0.1g)，l天3次。(一)觀察內容1、實驗室檢査初查和3月療程結束後都進行系統的三大常規、空腹血糖(FBS)、餐後血糖(PBS)、血脂、肝腎功能、血內皮生長因子(VEGF)檢查、一氧化氮含量及血液流變學參數檢測，服藥1個月，和2個月則只查FBS。2、測定血壓降壓療效評定標準收縮壓或舒張壓下降^10mmHg並降至正常或下降20mmHg以上為顯效；下降雖未達到10mmHg，但降至正常或下降1019mmHg為有效；未達到上述水平者為無效。3、觀察副作用(二)臨床試驗結果-1、各組治療前後空腹血糖(FBG)、餐後血糖(PBG)、糖化血紅蛋白(HbAlc)的結果見表ll、12。表ll(a)試驗組(Aa)治療前後FBG、PBG、HbAlc比較&土5)tableseeoriginaldocumentpage38注碌示p〈0.05表ll(b)試驗組(Ab)治療前後FBG、PBG、HbAlc比較(冗土6)FBG(mmol/L)PBG(咖ol/L)HbAlc(%)治療前治療後tP11.88±1.496.89±0.8510.052.97X10-8*16.94±1.907,13±0.8613.392.69X10—"*9.88土0.546.54±0.7810.533.43X1(T5*注*表示？<0.05表ll(c)試驗組(Ac)治療前後FBG、PBG、HbAlc比較(f土5)_FBG(,1/L)_PBG(畫ol/L)_HbAlc(%)治療前14.89±1.1114.50±1.8810.55±0.82治療後6.78±0.657.40±0.528.32±0.56t9.5112.4110.19p3.43X10—8*2.53X10—"*3.68X10—5*注*表示。<0.05表12對照組治療前後FBG、PBG、HbAlc比較(，士6)FBG(畫1/L)PBG(畫1/L)HbAlc(%)治療前12.25±2.1616.78±3.3210.43±1.93治療後8.07±1.849.35±1.7510.27±1.85t_1.050.474.87P0.56tt0.63#3.05X10—2*注*表示口<0.05，#表示p〉0.05結果顯示各組均具有一定的降血糖作用。2、各組治療前後血清血管內皮生長因子(VEGF)的結果見表13。表13(a)血管內皮生長因子(VEGF)水平變化比較VEGF(pg/ml)(文土S)一^^_治療前治療後_試驗組Aa753.6±314.5357.2土153.3i^T^4.05X10—5*對照組B763.8±298.7_664.8±169.64.06_0.32tt注承表示p〈0.05，tt表示p〉0.05表13(b)血管內皮生長因子(VEGF)水平變化比較VEGF(pg/ml)0±S)""""J^_治療前治療後—_試驗組Ab681.5±168.8296.9±105.53.86X10—5*對照組B763.8±298.7_664.8±169.64.06_0.32tt注*表示口<0.05，#表示pX).05表13(c)血管內皮生長因子(VEGF)水平變化比較VEGF(pg/ml)(S土S)^^_治療前治療後_試驗組Ac717.2±274.4334.4±153.38.914.23X10—5*對照組B763.8±298.7_664.8±169.64.06_0.32tt注*表示口<0.05，tt表示pX).05結果顯示各試驗組治療前後血管內皮生長因子水平顯著下降。3、降壓療效評定結果見表14。表14(a)試驗組與對照組降血壓療效情況總痊癒顯效有效無效有效率一數例例例例(％)試驗組Aa4081312685對照組B400463025.0注碌示p〈0.05表14(b)試驗組與對照組降血壓療效情況總痊癒顯效有效I數例例例例試驗組Ab40713127對照組B4004630注-碌示p〈0.05表14(c)試驗組與對照組降血壓療效情況總痊癒顯效有效數例例例例試驗組Ac40714126對照組B4004630注*表示口0.05。P<0.01，**P<0.05;組間治療後比較，"*P<0.01，組間治表15(b)治療前後一氧化氮比較組別一氧化氮(X土S)試驗組Ab對照組B40治療前治療後96.33±7.71*48.10±6.9140治療前治療後93.75±18.67**86.81±16.56*"注組內治療前後比較，療前比較，*P〉0.05。P<0.01，*<0.05;組間治療後比較，",<0.01，組間治表15(c)治療前後一氧化氮比較組別n一氧化氮(s士s)試驗組Ac40治療前治療後96.25±9.72*53.82±6.64*"對照組B40治療前治療後93.75±18.67**86.81±16.56***注組內治療前後比較，***P<0.01，**P<0.05;組間治療後比較，***P0.05。結果顯示各治療組均能有效抑制一氧化氮含量下降。5、全血高切粘度(TlHb)、全血低切粘度(llLb)、血漿粘度(TlP)、紅細胞聚集指數(EAI)、纖維蛋白原(Fb)的結果見表16表16(a)治療前後血液流變學變化(文土6)tableseeoriginaldocumentpage41rip(mpa.s)2.87±0.211.84±0.18*EAI3.00±0.132.16±0.32*Fb(g/1)8.38±1.314.11±0.90*注*表示口<0.05結果顯示各治療組治療後患者全血高切粘度OlHb)、全血低切粘度(7lLb)、血漿粘度0lP)、紅細胞聚集指數(EAI)、纖維蛋白原(Fb)比治療前有明顯減低(P0.05)。6、安全性比較各試驗組及對照組服藥期間血尿常規、肝功能指標(丙氨酸轉氨酶ALT、天冬氨酸轉氨酶AST)和腎功能指標(血尿素氮BUN、肌酐Cr)均未顯示異常。各試驗組未見比對照組中有更重的副作用，也沒有出現與對照組不一樣副作用。以上各結果表明，牛蒡子苷、牛蒡子苷元、牛蒡子苷與牛蒡子苷元混合物均能安全有效控制糖病性心血管病變。權利要求1.一種治療和預防糖尿病性心血管病變的組合物，其特徵在於，所述組合物含純度為90％以上、按重量份計的50-99的牛蒡子苷或1-50的牛蒡子苷元。2.根據權利要求1的所述組合物，其特徵在於，所述組合物中含100—20000重量份的藥用添加劑或藥用載體。3.權利要求1所述的組合物，其特徵在於將所述組合物製備成片劑、丸劑、膠囊劑、注射劑、栓劑或噴霧劑。4.一種如權利要求3的所述組合物，其特徵在於所述組合物製得的片劑或丸劑含按重量份計的牛蒡子苷I一IOO或牛蒡子苷元I一IOO或牛蒡子苷50—99與牛蒡子苷元1一50的混合物；250—350重量份的從乳糖、澱粉、糊精和輕丙基纖維素中選出的至少一種，5—10重量份的從滑石粉和硬脂酸鎂中選出的中的一種，3—5重量份的包衣預混劑歐巴代OY-C-7000A。5.—種如權利要求3所述的組合物，其特徵在於所述組合物製得的含速釋層的雙層緩釋片劑或丸劑含按重量份計的牛蒡子苷I一IOO或牛蒡子苷元I一IOO或牛蒡子苷50—99和牛蒡子苷元1一50二者的混合物；80—150重量份的從乳糖、澱粉、羥丙基纖維素和聚乙烯基吡咯烷酮中選出的至少一種；5—10重量份的從滑石粉和硬脂酸鎂中選出的至少一種；70—100重量份的羥丙基纖維素，l一5重量份的聚乙二醇-400、l一5重量份的聚山梨酯-80，1—5重量份的從檸檬黃和鈦白粉中選出的至少一種。6.—種如權利要求3所述的組合物，其特徵在於所述組合物製得的膠囊劑含按重量份計的牛蒡子苷I一IOO或牛蒡子苷元I一IOO或牛蒡子苷50—99和牛蒡子苷元l一50二者的混合物，200—300重量份的從乳糖、澱粉、糊精和羥丙基纖維素中選出的至少一種，l一重量份的從滑石粉和硬脂酸鎂中選出的至少一種。7.—種製備上述任一權利要求的組合物的方法，所說方法包括(1)牛蒡子苷的製備①粗提牛蒡子粉碎後，置索氏提取器中，經沸程60—9(TC石油醚回流脫脂2—4次，脫脂後取出晾乾，用60%—80%的8倍量乙醇回流提取2—4次，每次0.5—2h，於6(TC—80'C下減壓濃縮，得深褐色浸膏；②大孔樹脂精製將深褐色浸膏加15—35%乙醇，超聲處理15—35分鐘，溶解，過濾，調至成濃度為5—7mg/mL的溶液，通過AB-8型大孔吸附樹脂，大孔吸附樹脂體積為藥液體積的l-2倍，流速控制為1.5—2.5BV/h，柱徑高比控制為L5，水洗3倍樹脂體積，水洗速度0.5—3BV/h;再換以4一6BV50M乙醇洗脫，醇洗速度1—3BV/h，收集洗液，濃縮乾燥得牛蒡子苷粗品；③分離牛蒡子苷粗品用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷粗品的1-2倍，經200-300目矽膠柱析層，矽膠柱體積為牛蒡子苷粗品的10-50倍，氯仿-甲醇95:1洗脫，薄層色譜跟蹤流出液，收集牛蒡子苷單點的流份，合併濃縮，得牛蒡子苷；(2)牛蒡子苷元製備①粗提牛蒡子藥材粉碎後，過80目篩，置索氏提取器中，經沸程609(TC的油醚回流脫脂3次，晾乾後用乙酸乙酯回流提取2—4次，每次1.5—2.5h，於70°C下減壓濃縮，得褐色浸膏；②精製褐色將浸膏用60目粗矽膠拌樣，粗矽膠體積為牛蒡子苷元粗品的1-2倍，水浴烘乾，幹法上樣，經200—300目矽膠柱層析，氯仿-甲醇98:l洗脫，洗脫液濃縮合併得到牛蒡子苷元；(3)按牛蒡子苷、牛蒡子苷元、藥用添加劑和/或藥用載體的比例配置混合。8.—種如權利要求7的製備方法，其特徵在於所說牛蒡子苷的精製為取牛蒡子苷醇提物，加15—303^乙醇，充分攪拌，超聲處理15—30分鐘，使其恰恰充分溶解，過濾調至成上樣藥液濃度為3—6.5mg/mL的溶液，使用AB-8型大孔吸附樹脂，大孔吸附樹脂體積為藥液體積的1-2倍，上樣流速控制為2BV/h，柱徑高比控制為1:5。水洗2—3倍樹脂體積，水洗速度l一2BV/h;再換以3.5一4.5BV50。/。乙醇洗脫，醇洗速度1—2BV/h，收集醇洗液，濃縮乾燥得牛蒡子粗品。9.權利要求l一6的任一組合物所述的用於治療和預防製備糖尿病性心血管病變的用途，其特徵在於，將所述的組合物與其他其它治療藥混合施用，所述的治療藥選自與牛蒡子苷相同活性的藥物、降糖藥、抗氧化劑、醛糖還原酶抑制齊U、內皮生長因子抑制劑、抗血小板聚集藥或它們的混合物。全文摘要本發明涉及一種包含純度為90％以上、按重量份計的50-99的牛蒡子苷或1-50的牛蒡子苷元的組合物及其製備方法，其作用是治療和預防糖尿病性心血管病變。本發明通過提純牛蒡子苷和牛蒡子苷元，經藥理、毒理和臨床試驗結果表明，本發明涉及的牛蒡子苷或牛蒡子苷元的組合物對於糖尿病性視網膜病變具有治療效果強，毒副作用小的特點。文檔編號A61P9/00GK101278940SQ20081009437公開日2008年10月8日申請日期2008年4月29日優先權日2008年4月29日發明者盧春來,周世文,周吉銀,懿應,蓉張,徐梓輝,茂邢,黃林清申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院