一種可調節磁場的磁式細胞分選方法
2023-04-27 01:41:01 2
一種可調節磁場的磁式細胞分選方法
【專利摘要】本發明公開了一種可調節磁場的磁式細胞分選方法，包括樣品放入、攪拌混勻和靜止分選三個步驟。本發明通過調節磁場與磁珠懸濁液距離的方式，動態調節磁場大小。可以適應不同公司、不同直徑的磁珠，具有很高的兼容性。同時配合旋轉攪拌裝置，可以減小分選時間，在提高分選效率同時加大細胞分選的回收率和純度。
【專利說明】一種可調節磁場的磁式細胞分選方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物【技術領域】，具體地說，涉及一種可調節磁場的磁式細胞分選方法。
【背景技術】
[0002]磁式細胞分選的基本原理是藉助偶聯在磁性微粒上抗體高特異性識別並標記目標細胞表面抗原，再讓混有磁珠的細胞懸液通過磁場，結合了磁珠的細胞被吸附在磁場側壁上，而未結合的細胞被除去，得到純化的目標細胞，從而實現高效的分選和富集。磁式分選高效快速，可在2-30分鐘內實現105到1011個細胞分選。磁式細胞分選可手動完成，簡單快速，不需要特別昂貴的設備，對實驗和技術要求較低，實驗流程對細胞損傷小，無菌和細胞狀態更有保證，分選得到的細胞可進行培養、血液回輸或者流式分析。
[0003]磁式細胞分選產品比較著名的品牌包括德國美天旎(MACS), Invitrogen旗下Dynal,BD公司，StemCel I公司，R&D公司等等。根據生產公司的不同,磁珠大小差異很大。德國美天旎(MACS)磁珠是由多聚糖和氧化鐵組成的超順磁化微粒，無毒性，微珠直徑約有50nm ；Dynal公司的Dynabeads磁珠是由氧化鐵磁性材料合成的均一超順磁微球,大小有三種，直徑分別為4.5um、2.8um和Ium ；BD公司的IMag磁珠大小介於MACS磁珠和Dynabeads之間，直徑約為200nm ；R&D公司則提供了鏈酶親和素結合的磁珠，直徑約為150nm，有點像膠體顆粒。目前不同直徑的磁珠用於細胞分選時，只能使用各自公司的分選磁場。如美天旎公司的 μ MACS, MiniMACS 等產品、Dynal 的 DynaMag-15 和 DynaMag-50 分選架、BD 公司的 Imagnet、R&D 的 MagCel Iect 磁力架、StemCel I 公司的 EasySep 和 RoboSep 等。
[0004]由於各個公司提供的磁珠和磁場互不兼容，當使用不用公司的磁珠時，都需要單獨購買一套磁分選磁場設備，而這些設備往往價格特別昂貴。因此，本領域迫切需要開發一種可以兼容各個公司生產的不同直徑磁珠的細胞分選方法。
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是，提供一種可調節磁場的磁式細胞分選方法。通過調節磁場與磁珠懸濁液距離的方式，動態調節磁場大小。可以適應不同公司、不同直徑的磁珠，具有很高的兼容性。同時配合旋轉攪拌裝置，可以減小分選時間，在提高分選效率的同時加大細胞分選的回收率和純度。
[0006]為了解決上述技術問題，本發明採用的技術方案是:一種可調節磁場的磁式細胞分選方法，依次包括如下步驟:
[0007](I)樣品放入:將樣杯遠離磁分選磁場設備的磁鐵，將包含有目標細胞、標記磁珠和雜散細胞的混濁液放入樣杯中；
[0008](2)攪拌混勻:拌頭向下插入樣杯，緩慢加速旋轉，使磁珠與目標細胞充分結合；
[0009](3)靜止分選:停止攪拌,將樣杯放置於分選設備磁場的磁鐵上方,調節樣杯與磁鐵之間的距離，採用磁力計監測樣杯底部磁場強度，使樣杯底部磁場強度與使用的磁珠相匹配，將磁珠和磁珠標記的細胞吸附在樣杯底部，靜止5-15分鐘後，用移液的方式將上清液移出；剩餘在樣杯內的就是分選後的細胞。
[0010]所述步驟(I)中樣杯與磁鐵(3)之間的距離大於20cm。
[0011]所述標記磁珠為德國美天旎磁珠、Dynal公司的Dynabeads磁珠、BD公司的IMag磁珠、StemCel I公司磁珠和R&D公司的鏈酶親和素結合磁珠中的一種。
[0012]所述磁分選磁場設備為美天旎公司的μ MACS和MiniMACS產品、Dynal的DynaMag-15 和 DynaMag-50 分選架、BD 公司的 Imagnet、R&D 的MagCel Iect 磁力架、StemCelI公司的EasySep和RoboSep中的一種。
[0013]本發明的有益效果是:通過調節磁場與磁珠懸濁液距離的方式，動態調節磁場大小。可以適應不同公司、不同直徑的磁珠，具有很高的兼容性。同時配合旋轉攪拌裝置，可以減小分選時間，在提高分選效率同時加大細胞分選的回收率和純度。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014]圖1是本發明方法的磁力分選裝置的結構示意圖。
【具體實施方式】
[0015]下面結合附圖和【具體實施方式】對本發明作進一步詳細說明:
[0016]本發明的磁分選磁場設備的工作原理與現有技術是相同的，可以參考現有技術，所以不再敘述，本發明與現有技術的不同點是分選方法不同，下面進行詳細的說明:
[0017]本發明的可調節磁場的磁式細胞分選方法，依次包括如下步驟:
[0018](I)樣品放入:將樣杯遠離磁分選磁場設備的磁鐵，將包含有目標細胞、標記磁珠和雜散細胞的混濁液放入樣杯中；
[0019](2)攪拌混勻:拌頭向下插入樣杯，緩慢加速旋轉，使磁珠與目標細胞充分結合；
[0020](3)靜止分選:停止攪拌,將樣杯放置於分選設備磁場的磁鐵上方,調節樣杯與磁鐵之間的距離，採用磁力計監測樣杯底部磁場強度，使樣杯底部磁場強度與使用的磁珠相匹配，將磁珠和磁珠標記的細胞吸附在樣杯底部，靜止5-15分鐘後，用移液的方式將上清液移出；剩餘在樣杯內的就是分選後的細胞。
[0021]所述步驟(I)中樣杯與磁鐵(3)之間的距離大於20cm。
[0022]所述標記磁珠為德國美天旎磁珠、Dynal公司的Dynabeads磁珠、BD公司的IMag磁珠、StemCel I公司磁珠和R&D公司的鏈酶親和素結合磁珠中的一種。
[0023]所述磁分選磁場設備為美天旎公司的μ MACS和MiniMACS產品、Dynal的DynaMag-15 和 DynaMag-50 分選架、BD 公司的 Imagnet、R&D 的MagCel Iect 磁力架、StemCelI公司的EasySep和RoboSep中的一種。
[0024]如圖1所示，樣杯2中按照細胞分選的需要，可以裝有清洗液、收集液或者目標細胞、標記磁珠和雜散細胞的混濁液。磁鐵3安防在樣杯2的下面，可以將磁珠和磁珠標記的細胞吸附在樣杯2底部。樣杯2與磁鐵3之間的距離可以進行自動調整。用於細胞分選的磁鐵2強度在表面處最強，隨著距離的增加，磁場強度逐漸變小。
[0025]磁鐵2為汝鐵硼材質的永磁鐵，磁化方向為上面N極，下面S極，上表面中心位置處磁場強度最強，為lOOOmT。
[0026]具體地說，可調節磁場的磁式細胞分選方法包括三個步驟:
[0027](I)樣品放入:調節樣杯2與磁鐵3之間的距離大於20cm ;將包含有目標細胞、標記磁珠和雜散細胞的混濁液放入樣杯2。
[0028]在距離磁鐵20cm處的磁場強度已經很小，可近似認為是零。這樣做的做法，相當於將混濁液遠離磁場。
[0029](2)攪拌混勻:在遠離磁場的情況下，攪拌頭I向下插入樣杯2 ;緩慢加速旋轉，增加磁珠與目標細胞的接觸機會，使磁珠與目標細胞充分結合；
[0030](3)靜止分選:停止攪拌，調節樣杯2與磁鐵3之間的距離，採用磁力計監測樣杯2底部磁場強度，使樣杯2底部磁場強度為設定值,例如採用Dynabeads直徑4.5um的磁珠分選人類T細胞，需要的磁場強度為200mT。
[0031]然後靜止一段時間5?15分鐘，用移液的方式將上清液移出；剩餘在樣杯內的就是分選後的細胞。
[0032]以上所述的實施例僅用於說明本發明的技術思想及特點，其目的在於使本領域內的技術人員能夠理解本發明的內容並據以實施，不能僅以本實施例來限定本發明的專利範圍，即凡本發明所揭示的精神所作的同等變化或修飾，仍落在本發明的專利範圍內。
【權利要求】
1.一種可調節磁場的磁式細胞分選方法，其特徵在於，依次包括如下步驟: (1)樣品放入:將樣杯遠離磁分選磁場設備的磁鐵，將包含有目標細胞、標記磁珠和雜散細胞的混濁液放入樣杯中； (2)攪拌混勻:拌頭向下插入樣杯，緩慢加速旋轉，使磁珠與目標細胞充分結合； (3)靜止分選:停止攪拌，將樣杯放置於分選設備磁場的磁鐵上方，調節樣杯與磁鐵之間的距離，採用磁力計監測樣杯底部磁場強度，使樣杯底部磁場強度與使用的磁珠相匹配，將磁珠和磁珠標記的細胞吸附在樣杯底部，靜止5-15分鐘後，用移液的方式將上清液移出；剩餘在樣杯內的就是分選後的細胞。
2.根據權利要求1所述的可調節磁場的磁式細胞分選方法，其特徵在於，所述步驟(I)中樣杯與磁鐵(3)之間的距離大於20cm。
3.根據權利要求1所述的可調節磁場的磁式細胞分選方法，其特徵在於，所述標記磁珠為德國美天旎磁珠、Dynal公司的Dynabeads磁珠、BD公司的IMag磁珠、StemCell公司磁珠和R&D公司的鏈酶親和素結合磁珠中的一種。
4.根據權利要求1所述的可調節磁場的磁式細胞分選方法，其特徵在於，所述磁分選磁場設備為美天旎公司的μ MACS和MiniMACS產品、Dynal的DynaMag-15和DynaMag-50分選架、BD 公司的 Imagnet、R&D 的 MagCellect 磁力架、StemCell 公司的 EasySep 和 RoboSep中的一種。
【文檔編號】C12N5/00GK104388377SQ201410680428
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月24日 優先權日:2014年11月24日
【發明者】孫雪蓮, 朱建民, 魏華英, 劉江, 張道紅, 周洪銳, 田建國, 葉青, 梅劍春, 黃慧玲, 李洲, 劉曉華 申請人:關節動力安達（天津）生物科技有限公司, 天津中新科炬生物製藥有限公司