一種快速定量檢測hcg的試紙條的製作方法

2023-04-26 13:36:46

專利名稱：一種快速定量檢測hcg的試紙條的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及生物應用技術領域，特別涉及一種快速定量檢測HCG的試紙條。
背景技術：
當受精卵植入子宮後，孕婦體內就會分泌一種新激素，稱為人絨毛膜促性腺激素 (Human Chorionic Gonadotrophin,簡稱 HCG)。HCG 於 1927 年被 Aschheim 和 zondek 在孕婦尿中首次發現。HCG是細胞滋養層及合體滋養層分泌的一種激素，它首先存在於胎盤中，通過血液循環而排洩到尿中。在胎盤、血液和尿中均存在HCG及其代謝產物。在受孕後 10天左右，就可以在孕婦的晨尿中檢測到HCG。正常妊娠婦女血清中，HCG濃度在黃體達到峰值後的7 10天或受精卵植入子宮後的4 7天後開始增加，並以指數形式增長，平均每1. 5 2天濃度就翻倍，不過增加速率也因人而異。妊娠7 10周後HCG濃度就可達 20，000 100，000IU/L，在妊娠13 15周時濃度有所降低，之後又開始緩慢增加直至妊娠 30 33周，接著又緩慢降低直至妊娠結束。異位妊娠HCG上升則較緩慢，或懷孕的3 6 周，HCG不能持續翻倍增加，應考慮異位妊娠或先兆流產的可能。HCG是早期妊娠中的主要信號，特異性標誌，已成為臨床上診斷早期妊娠的常用指標。定量動態監測HCG量也作為異位妊娠的監控指標。早期檢測妊娠的方法主要有三種超聲檢測、基礎體溫測定和免疫層析檢測。超聲檢測由於只能檢測妊娠6周後子宮的情況，而通常被用於臨床上胎兒的監測。基礎體溫測定雖然簡單易行卻又比較繁瑣。免疫層析檢測由於它的操作簡便、具有直觀、快速、檢測效率高、方法簡便、無汙染、費用低廉、靈敏度高、特異性強等優點，被廣泛應用於臨床診斷、野外現場及家庭自我檢測。免疫層析檢測HCG的試劑運用雙抗體夾心法。當測試液浸泡或滴入試紙條的樣品墊後，通過吸水纖維的毛細作用，測試液迅速溼透金標結合墊，金標結合墊上的膠體金結合物被溶解，並隨測試液一起沿層析材料向前移動。若測試液中存在待測抗原Ag，則它就會和膠體金結合物中的抗體發生特異性免疫反應，形成膠體金結合物-待測抗原的免疫複合物。然後隨測試液一起流經固定在Nc膜上T線的捕獲試劑。T線的捕獲試劑捕獲膠體金結合物-待測抗原免疫複合物，即與該免疫複合物發生特異性免疫反應，形成膠體金結合物-待測抗原-捕獲試劑的免疫複合物，從而使膠體金結合物-待測抗原免疫複合物滯留在T線處。測試液繼續前移，在流經Nc膜上固定有羊抗鼠IgG抗體的C線時，未與待測抗原 Ag發生反應的膠體金結合物與C線上羊抗鼠抗體發生免疫反應，從而使得游離的膠體金結合物滯留在C線處。此時T線和C線處均有膠體金結合物滯留，即T線和C線處均能觀察到顏色(紅色或紫色)，則表示檢測結果為陽性結果，即測試液中有待測抗原；若僅C線處觀察到顏色，而T線處未觀察到顏色，則表示檢測結果為陰性結果，即測試液中無待測抗原； 待測液中HCG含量不同，所產生的T線顏色深淺也不相同，隨著HCG含量的增加，T線顏色就會越深。然而，在一些樣品中高濃度HCG則可導致高水平的「鉤狀效應(hook effect)
即HCG濃度遠遠大於膠體金試紙條的檢測上限時，HCG測得結果反而隨濃度的增加而下降，T線顏色反而變淺，在臨床診斷中造成HCG低水平的假象，使診斷結果出現不真實的問題。 發明內容鑑於現有技術的不足，本實用新型的目的在於提供一種快速定量檢測HCG的試紙條，尤其提供一種能快速定量檢測尿液或血液中HCG的試紙條。該試紙條不但能夠克服現有檢測試劑因HCG含量過高而產生的鉤狀效應，而且能夠對血液或尿液中的HCG定量監測， 定量範圍為10 15000mIU/ml，避免了樣本稀釋所帶來的麻煩和誤差。簡便、準確、快速定量、靈敏度和特異性高、經濟實用且與其它激素無交叉，可以更好的滿足臨床要求。為了實現本實用新型的目的，發明人通過大量試驗研究，獲得了如下技術方案一種快速定量檢測HCG的試紙條，包括上樣墊、標記物墊、NC膜、吸樣墊和塑料板， 其特徵在於所述的上樣墊、標記物墊、NC膜和吸樣墊依次粘附於塑料板，標記物墊上包被有膠體金標記的鼠抗HCG-β單克隆抗體，NC膜上分別包被有鼠抗HCG-α抗體構成的檢測線T線和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線，同時在NC膜上檢測線T線靠近標記物墊一側劃有用於標示加樣位置的加樣指示線。本實用新型針對目前臨床上缺乏快速定量HCG的簡便快速方法，採用雙抗體夾心法的免疫原理，硝酸纖維膜檢測區(Τ線)包被有鼠抗HCG-α ；在檢測卡加樣的一端固定有配對的鼠抗HCG-β單克隆抗體標記的膠體金顆粒。檢測時在NC膜標示線上加入3 5ul 被檢樣品(血液或尿液)，再向加樣墊上加入適量樣本稀釋液，當樣本中存在HCG抗原時，則被NC膜上的鼠抗HCG-α抗體捕獲，並與擴散到NC膜上的鼠抗HCG-β單克隆抗體-膠體金的抗體相結合，形成包被抗體-抗原-金標抗體複合物，當被捕獲的膠體金複合物達到一定數量時，則在檢測區上形成一條肉眼可見的紅色色帶。5分鐘內肉眼直接觀察C、T線的出現情況，即可判斷定性檢測結果。紅色色帶強度可用配套的免疫層析判讀儀定量測試，定量範圍為10 15000mIU/ml。與現有技術相比，本實用新型涉及的快速定量檢測HCG的試紙條具有如下優點和顯著的進步(1)多功能性本實用新型既可定性，又可定量檢測出尿液或血液中HCG的含量；(2)快速定量配套的免疫層析判讀記錄儀將人肉眼觀察到檢測區反應顯色的顏色深淺程度進行了量化，根據儀器內存標準曲線，在一定的範圍內，反應線條顏色的深淺與被測物的濃度可以呈現出一定的關係，可準確對樣本中HCG濃度進行定量；(3)克服了鉤狀效應本實用新型不但能夠克服現有檢測試劑因HCG含量過高而產生的鉤狀效應，而且能夠對血液或尿液中的HCG定量監測。具體為，檢測時加樣方式為先在NC膜上加入3 5ul被檢樣本，然後向上樣墊上加入適量稀釋液，既克服了現有檢測試劑因HCG含量過高而產生的鉤狀效應，避免了由此產生的誤判、假陰性結果，又提高了試劑的檢測靈敏度，靈敏度可達10mIU/ml ；

圖1為快速檢測HCG的膠體金試紙條結構示意圖；1、上樣墊；2、標記物墊；3、硝酸纖維素(NC)膜；4、吸樣墊；5、加樣指示線；6、檢測線T線；7、質控線C線；8、塑料板。
具體實施方式
以下是本實用新型涉及的快速定量檢測血液中毒品的方法的具體實施例，對本實用新型的技術方案做進一步作描述，但是本實用新型的保護範圍並不限於這些實施例。凡是不背離本實用新型構思的改變或等同替代均包括在本實用新型的保護範圍之內。實施例1 HCG檢測試紙條的製備及檢測應用(1)試紙條的裝配在乾燥室內溫度20 25°C，溼度小於30 %，取塑料支撐板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板的中部粘貼，在NC膜T線一側搭接標記物墊，在標記物墊另一側搭接粘貼上樣墊；在NC膜C線一側距邊緣搭接吸樣墊。然後用裁剪機將貼好的塑料板切成適當寬度的試紙條。切好的試紙條也可以裝入塑料卡內，形成檢測試劑卡。裝配後的試紙條包括上樣墊1、標記物墊2、NC膜3、吸樣墊4和塑料板8，其中上樣墊1、標記物墊2、NC膜3和吸樣墊4依次粘附於塑料板8，標記物墊2上包被有膠體金標記的鼠抗HCG-β單克隆抗體，NC膜3上分別包被有鼠抗HCG-α抗體構成的檢測線T線6 和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線7，同時在NC膜3上檢測線T線6靠近標記物墊2 — 側劃有用於標示加樣位置的加樣指示線5。具體參見附圖1。(2)臨床樣本檢測檢測時先在NC膜上加樣指示線位置加入3 5ul被檢樣品，再向上樣墊上加入適量稀釋液，靜置5分鐘內可肉眼直接觀察檢測線T線、質控線C線的出線情況，即可判斷定性檢測結果；10 15分鐘可通過配套的免疫層析判讀儀定量測試，定量範圍為10 15000mIU/ml。免疫層析判讀儀綜合應用機械、電子、光學、微機以及心理物理學的原理和方法， 達到智能人眼識別判讀功能，對免疫層析試劑反應線的視覺信號自動定位，背景剔除，顏色分辨，量化處理，通過一個量化的GOD值表現出來。即在一定的範圍內，線條顏色的深淺與被測物的濃度可以呈現出一定的關係，在測試反應過程中只要做一條標準曲線儲存在儀器自帶IC卡中，就能夠對免疫層析試劑條進行定量測試。按照上述檢測方法檢測臨床樣本30份，以奧普HCG定量試劑為對照，結果表明本產品靈敏度達10mIU/ml，特異性100%，和奧普HCG定量試劑結果符合率為98. 1%。
權利要求1.一種快速定量檢測HCG的試紙條，包括上樣墊(1)、標記物墊0)、NC膜(3)、吸樣墊 (4)和塑料板(8)，其特徵在於，所述的上樣墊(1)、標記物墊(2)、NC膜(3)和吸樣墊(4)依次粘附於塑料板(8)，標記物墊(2)上包被有膠體金標記的鼠抗HCG-β單克隆抗體，NC膜 (3)上分別設置有檢測線T線(6)和質控線C線(7)，同時在NC膜(3)上檢測線T線(6) 靠近標記物墊( 一側劃有用於標示加樣位置的加樣指示線(5)。
2.根據權利要求1所述的試劑條，其特徵在於，所述的檢測線T線(6)是由鼠抗HCG-α 抗體包被製成。
3.根據權利要求1所述的試劑條，其特徵在於，所述的質控線C線(7)是由羊抗鼠IgG 抗體包被製成。
專利摘要本實用新型公開了一種快速定量檢測HCG的試紙條，該試紙條包括上樣墊、標記物墊、NC膜、吸樣墊和塑料板，所述的上樣墊、標記物墊、NC膜和吸樣墊依次粘附於塑料板，標記物墊上包被有膠體金標記的鼠抗HCG-β單克隆抗體，NC膜上分別包被有鼠抗HCG-α抗體構成的檢測線T線和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線，同時在NC膜上檢測線T線靠近標記物墊一側劃有用於標示加樣位置的加樣指示線。本實用新型的試紙條通過膜上加樣方式不但能夠克服現有檢測試劑因HCG含量過高而產生的鉤狀效應，且通過配套的免疫層析判讀儀能夠對血液或尿液中的HCG進行定量檢測。
文檔編號G01N33/76GK202159067SQ20112025648
公開日2012年3月7日 申請日期2011年7月20日 優先權日2011年7月20日
發明者李洲, 許俊豔 申請人:天津中新科炬生物製藥有限公司