亞磺醯氨基雜環的凝血酶抑制劑的製作方法

2023-04-27 00:33:51 5

專利名稱：亞磺醯氨基雜環的凝血酶抑制劑的製作方法
技術領域：
本發明是1993年8月26日申請的編號為112153的部分繼續申請，而該申請是1992年12月2日申請的編號為984640的部分繼續申請。
本發明涉及亞磺醯氨基雜環化合物，它們是凝血酶抑制劑，因而可用於抑制血栓的形成。
本發明的亞磺醯氨基雜環的凝血酶抑制劑具式Ⅰ結構並包括其所有的立體異構體及其所有藥學上可接受的鹽 式中G是下式所示的醯氨基基團
R是氫、羥基烷基、氨基烷基、醯氨基烷基、烷基、環烷基、芳基、芳基烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基烷氧基烷基，或者是保護的或未保護的胺基酸側鏈;
R1和R2獨立地為氫、低級烷基、環烷基、芳基、羥基、烷氧基、酮基、酮縮硫醇、烷硫基、芳硫基、氨基或烷基氨基，或者R1及R2和與其相連的碳一起形成環烷基、芳基或雜芳基環;及R3是低級烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、喹啉基或四氫喹啉基;
n是0、1或2;
m是0、1、2或3;
Y是NH或S;
p是0、1或2;
Q是單鍵或 A是芳基或環烷基，或者是環上有4至8個碳的氮雜環烷基A或環上有4至8個碳的氮雜雜環烷基AA
式中X是CH2、O、S或NH;
若X是CH2，q是0、1、2、3或4;
若X是O、S或NH，q是2、3或4;
Y1和Y2獨立地為H、低級烷基、滷素或酮基;及R4是胍、脒或氨甲基;
當A是芳基或環烷基時，R4是胍、脒或氨甲基;
當A是氮雜環烷基或氮雜雜環烷基時，R4是脒基;
若X是雜原子(即A是氮雜雜環烷基)，則在X與環A中或環A外的任何一個N原子之間一定至少有個2-碳鏈;
及若G是G1，則當R3是烷基時，該烷基一定含至少3個碳。
此外可用的A環(氮雜環烷基或氮雜雜環烷基)的例子包括下列基團等
本文所用的術語「低級烷基」或「烷基」本身或作為另一基團的一部分，包括不超過18個碳、優選1至8個碳的直鏈和支鏈基團，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基、異己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基，其各種支鏈異構體等，以及包括1、2或3個滷素取代基的這類基團(例如形成CF3或CF3CH2)和/或包括1或2個下列取代基的這類基團芳基取代基(例如形成苄基或苯乙基)、烷基芳基取代基、滷代芳基取代基、環烷基取代基、烷基環烷基取代基，鏈烯基取代基、鏈炔基取代基、羥基或羧基取代基。應當懂得，上述「烷基」基團可以被任何一個或多個以上取代基取代。
術語「環烷基」本身或作為另一基團的一部分，包括含3至12個碳、優選3至8個碳的飽和環烴基，包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環癸基、和環十二烷基，任何一個所述基團均可被取代基諸如滷素、低級烷基、烷氧基和/或羥基取代。
本文中所用的術語「芳基」或「Ar」本身或作為另一基團的一部分，均指在環部分含6至10個碳的一環的或二環的芳基，例如苯基或萘基。芳基(或Ar)、苯基或萘基可以包括在Ar、苯基或萘基上可以包含1或2個取代基的取代的芳基、取代的苯基或取代的萘基，所述的取代基包括例如低級烷基、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基、羧基、烷氧羰基、三氟甲基、滷素(Cl、Br、I或F)、低級烷氧基、芳基烷氧基、羥基、烷硫基、烷基亞磺醯基、烷基磺醯基、芳硫基、芳基亞磺醯基和/或芳基磺醯基。
本文所用的術語「芳烷基」、「芳基烷基」或「芳基低級烷基」本身或作為另一基團的一部分，均指具有芳基取代基的如上所述的低級烷基，例如苄基。
術語「低級烷氧基」、「烷氧基」或「芳烷氧基」包括上述任何一個與氧原子相連的低級烷基、烷基或芳烷基。
本文中所用的術語「滷素」或「滷代」本身或作為另一基團的一部分，均指氯、溴、氟或碘，優選氯。
本文中所用的術語「低級鏈烯基」或「鏈烯基」本身或作為另一基團的一部分，包括含一個雙鍵的不超過16個碳、優選3至10個碳的碳鏈，所述雙鍵藉助於至少一個飽和碳鏈例如-(CH2)q-(式中q可以是1至14)與「N」隔開，例如2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、4-戊烯基等，並且可以包括滷素取代基如I、Cl或F。
本文中所用的術語「低級鏈炔基」或「鏈炔基」本身或作為另一基團的一部分，包括含一個叄鍵的不超過16個碳、優選3-10個碳的碳鏈，所述叄鍵藉助於至少一個飽和碳鏈如-(CH2)q＇-(其中q′可以是1至14)與「N」隔開，例如2-丙炔基、2-丁炔基、3-丁炔基等。
術語「雜芳基」本身或作為另一基團的一部分，均指包含1或2個雜原子如氮、氧或硫的5元或6元芳環，例如下列基團等
所述雜芳基環可與前面定義的芳基環稠合。所述雜芳基環可以包含1或2個取代基例如滷素(Cl、Br、F或CF3)、低級烷基、低級烷氧基、羧基、氨基、低級烷基氨基和/或二低級烷基氨基。
術語「胺基酸側鏈」指任何已知的α-胺基酸，例如精氨酸、組氨酸、丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、穀氨醯胺、亮氨酸、纈氨酸、絲氨酸、高絲氨酸、別蘇氨酸、萘基丙氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸等。
優選式中取代基為如下定義的式(Ⅰ)化合物G為下式結構 式中Q是單鍵，A是氮雜環烷基
其中q是0或1，及R4是脒基;
R3是低級烷基或芳基;
R是芳烷基或羥基烷基;
R1和R2各自為H;
n是0或1。
本發明的雜環的凝血酶抑制劑的更優選的實例具有結構ⅠA 式中R是芳烷基(優選苄基)、芳基(優選苯基)或芳基烷氧基烷基(優選苄氧基甲基)且烷基優選甲基、乙基或丙基;包括其所有的立體異構體。
另一類優選的式Ⅰ化合物是式中取代基為如下定義的式Ⅰ化合物G是G1，n是0或1，m是2，R3是芳基或烷基，R是芳基烷基或羥基烷基如羥甲基，R1是氫或低級烷基如甲基或乙基，R2是H，及Y是-NH-;以及式ⅠB化合物 式中G為下式結構且Y是NH的本發明的式Ⅰ化合物可以按以下反應程序Ⅰ來製備。G結構如下
反應程序Ⅰ

式中G為下式結構且Y是NH的本發明的式Ⅰ化合物也可按以下反應程序Ⅱ來製備。G結構如下

由上述反應程序Ⅰ可以看出，式中Y是-NH-的式Ⅰ化合物按如下所述來製備。在鹽酸乙基3-(3-二甲基氨基)丙基碳化二亞胺(WSC)或二環己基碳化二亞胺(DCC)，和1-羥基苯並三唑-水合物(HOBT)，和N-甲基嗎啉(NMM)存在下，並在惰性有機溶劑如二甲基甲醯胺(DMF)、THF或N-甲基吡咯烷酮存在下，使酯Ⅱ與保護的胺基酸Ⅲ進行碳化二亞胺偶合反應，生成醯胺Ⅳ。將醯胺Ⅳ在有或沒有無水惰性有機溶劑如二氯甲烷、氯仿或THF存在下，在約-15℃至約20℃的溫度範圍內通過用三氟乙酸處理來去保護。加入磺醯氯V，然後加入有機鹼如三乙胺、吡啶或N，N-二異丙基乙胺，生成磺醯胺Ⅵ。將磺醯胺Ⅵ在醇溶劑如甲醇或乙醇存在下通過用鹼金屬鹼如NaOH或LiOH處理來水解。將反應混合物用HCl、KHSO4或H2SO4酸化，生成酸Ⅶ。然後使酸Ⅶ進行碳化二亞胺偶聯反應，其中，將Ⅶ在WSC或DCC，和HOBT，和NMM存在下並在惰性有機溶劑如二甲基甲醯胺、THF或N-甲基吡咯烷酮存在下用保護的胺Ⅷ處理，生成磺醯胺Ⅸ。然後將磺醯胺Ⅸ溶於已加了HCl的醇溶劑如乙醇或甲醇中，並且若p1是苄氧羰基，將混合物用Pd-C或Pd(OH)2-C氫化。將粗產物用常規方法分離，並將所需異構體在醇溶劑如乙醇存在下用脒磺酸X處理，生成本發明的化合物ⅠB。
按上述反應程序Ⅱ，式中Y是-NH-的式Ⅰ化合物按如下所述來製備。在鹽酸乙基3-(3-二甲基氨基)丙基碳化二亞胺(WSC)或二環己基碳化二亞胺(DCC)，和1-羥基苯並三唑-水合物(HOBT)，和N-甲基嗎啉(NMM)存在下，並在惰性有機溶劑如二甲基甲醯胺(DMF)、THF或N-甲基吡咯烷酮存在下，使保護的酸ⅡA與保護的胺基酸Ⅷ進行碳化二亞胺偶聯反應，生成醯胺ⅠXA。將醯胺ⅠXA在有或沒有無水惰性有機溶劑如二氯甲烷、氯仿或THF存在下，在約-15℃至約20℃的溫度範圍內通過用三氟乙酸(TFA)[當p是叔丁氧羰基(BOC)時]或H2-Pd/C[當p是苄氧羰基(CBZ)時]處理去保護，生成醯胺ⅠXB。然後使醯胺ⅠXB進行碳化二亞胺偶聯反應，其中，將ⅠXB在WSC或DCC，和HOBT，和NMM存在下並在惰性有機溶劑如二甲基甲醯胺、THF或N-甲基吡咯烷酮存在下用保護的胺Ⅲ處理，生成醯胺ⅠXC。然後將醯胺ⅠXC溶於已加了HCl的醇溶劑如乙醇或甲醇中，並進行下述處理若p1是CBZ，將混合物用Pd-C或Pd(OH)2-C氫化;或者若p1是BOC，將混合物用三氟乙酸處理。將粗產物用常規方法分離，並將所需異構體在醇溶劑如乙醇存在下用脒磺酸X處理，生成ⅠXD。然後將化合物ⅠXD如上述通過用TFA(當p是BOC時)或H2-Pd/C(當p是CBZ時)處理來去保護，加入磺醯氯V，隨後加入有機鹼如三乙胺、吡啶或N，N-二異丙基乙胺，生成磺醯胺ⅠB。
式中G為下式結構且Y是S的本發明的式Ⅰ化合物可按以下反應程序Ⅲ來製備。G結構如下
反應程序Ⅲ
參照上述反應程序Ⅲ，式中Y為S的式Ⅰ化合物可按如下所述來製備。在WSC或DCC、HOBT和NMM存在下以及惰性有機溶劑如二甲基甲醯胺、THF或N-甲基吡咯烷酮存在下，用氨基醇Ⅺ處理酸Ⅶ，而使酸Ⅶ進行碳化二亞胺偶聯反應，生成磺醯胺醇Ⅻ。使磺醯胺醇Ⅻ在吡啶中與對甲苯磺醯氯(TsCl)反應或在溶劑如二氯甲烷或氯仿中同N，N-二甲氨基吡啶與對甲苯磺醯氯反應，得到對甲苯磺酸酯ⅩⅢ。將ⅩⅢ在溶劑如DMF或DMSO中在約25至100℃的溫度範圍內用硫脲處理，製得化合物ⅠC(Y＝S)。
式中G為下式結構的式Ⅰ和式ⅠA化合物可按如下所示的反應程序Ⅳ來製備。G結構如下
式中A是氮雜環烷基或氮雜雜環烷基，及R4是脒。
反應程序Ⅳ


按以上反應程序Ⅳ，式中G為下式結構的式Ⅰ化合物按如下所述來製備 式中A是氮雜環烷基或氮雜雜環烷基。
在鹽酸乙基3-(3-二甲基氨基)丙基碳化二亞胺(WSC)或二環己基碳化二亞胺(DCC)，和1-羥基苯並三唑-水合物(HOBT)，和N-甲基嗎啉(NMM)存在下，並在惰性有機溶劑如二甲基甲醯胺(DMF)、THF或N-甲基吡咯烷酮存在下，使保護的酸ⅩⅤ與胺ⅩⅥ進行碳化二亞胺偶聯反應，生成醯胺ⅩⅦ。將醯胺ⅩⅦ通過用例如H2/Pd-C(當p1是CBZ時)處理來去保護，生成胺ⅩⅧ。將胺ⅩⅧ在醇溶劑如乙醇存在下用脒磺酸X處理，生成胺ⅪⅩ。將胺ⅪⅩ在有或沒有無水惰性有機溶劑如二氯甲烷、氯仿或THF存在下在約-15℃至約20℃的溫度範圍內通過用三氟乙酸(若p＝BOC)處理去保護。加入磺醯氯Ⅴ，然後加入有機鹼如三乙胺、吡啶或N，N-二異丙基乙胺，生成本發明的磺醯胺ⅠD。
式ⅩⅥ原料是本領域已知的，或可用本領域技術人員使用的常規技術來製備。
式中G為下式結構的式Ⅰ和式ⅠA化合物可按以下反應程序Ⅴ來製備。G結構如下
式中A是芳基或環烷基，及R4是脒或胍。
反應程序Ⅴ
如反應程序Ⅴ所示，式中G為下式結構的式Ⅰ和式ⅠA化合物按如下所述來製備 使保護的酸ⅩⅤ進行碳化二亞胺偶聯反應，其中，將ⅩⅤ在WSC或DCC，和HOBT，和NMM存在下，並在惰性有機溶劑如二甲基甲醯胺、THF或N-甲基吡咯烷酮存在下用保護的胺ⅩⅥA處理，生成醯胺ⅩⅦA。然後將醯胺ⅩⅧA溶於已加了HCl的醇溶劑如乙醇或甲醇中，並且若p是苄氧羰基，將混合物用Pd-C或Pd(OH)2-C氫化。將醯胺ⅩⅧA用磺醯氯Ⅴ處理，隨後用鹼處理，生成本發明的化合物ⅠE。
起始化合物ⅩⅥA是本領域已知的，或可以用常規方法來製備。
式中G為下式結構的式Ⅰ和式ⅠA化合物可按以下反應程序Ⅵ來製備。G結構如下 式中A是芳基或環烷基(即A1)，及R4是氨甲基(即R4′)。
反應程序Ⅵ
如以上反應程序Ⅵ所示，式中G為下式結構的式Ⅰ和式ⅠA化合物按如下所述來製備 在鹽酸乙基3-(3-二甲基氨基)丙基碳化二亞胺(WSC)或二環己基碳化二亞胺(DCC)，和1-羥基苯並三唑-水合物(HOBT)，和N-甲基嗎啉(NMM)存在下，並在惰性有機溶劑如二甲基甲醯胺(DMF)、THF或N-甲基吡咯烷酮存在下，使保護的酸ⅩⅤ與保護的胺基酸ⅩⅥB進行碳化二亞胺偶聯反應，生成醯胺ⅩⅦB。將醯胺ⅩⅦB在有或沒有無水惰性有機溶劑如二氯甲烷、氯仿或THF存在下，在約-15℃至約20℃的溫度範圍內通過用三氟乙酸(TFA)[當p是叔丁氧羰基(BOC)時]或H2-Pd/C[當p是苄氧羰基(CBZ)時]處理來去保護，生成醯胺ⅩⅧB。然後使醯胺ⅩⅧB進行磺化反應，其中，將醯胺ⅩⅧB在有機鹼如三乙胺、吡啶或N，N-二異丙基乙胺存在下與磺醯氯Ⅴ反應，生成本發明的磺醯胺ⅠF。
起始化合物ⅩⅥB是本領域已知的，或可用常規方法來製備。
起始酸ⅩⅤ可由酯Ⅳ按下述方法製備將酯Ⅳ通過用鹼如NaOH、KOH或LiOH處理水解，然後用強酸如HCl或草酸中和得到的鹼金屬鹽。
本發明式Ⅰ化合物可以通過使游離鹼與酸反應而以藥學上可接受的酸加成鹽形式製得，所述酸包括例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、馬來酸、琥珀酸、乳酸、酒石酸、葡糖酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸等。
本發明化合物是絲氨酸蛋白酶抑制劑，尤其是可抑制凝血酶、因子Xa和/或胰蛋白酶。本發明化合物可用於治療或預防涉及凝血酶的產生和/或作用的病變。這包括一些凝固級聯(coagulation cascade)被激活的血栓形成的和血栓形成前的(prothrombotic)狀態，包括深靜脈血栓形成(DVT)、擴散性血管內凝血病(DIC)、Kasabach-Merritt綜合症、肺栓塞、心肌梗塞、中風、外科(例如髖部置換和動脈內膜切除術)的血栓栓塞併發症和外周動脈閉塞，但不限於這些。除其對凝固過程的作用外，凝血酶已被證明能激活大量的細胞(例如中性白細胞、成纖維細胞、內皮細胞、平滑肌細胞)。因此，本發明化合物也可用於治療或預防成人呼吸窘迫綜合症，膿毒性休克，敗血症，炎性反應，包括但不限於水腫，急性或慢性動脈粥樣硬化和再灌注損傷。
本發明化合物也可用於治療瘤形成/轉移(特別是利用纖維蛋白的那些)和神經變性疾病，例如阿耳茨海默氏病和巴金森氏病。此外，本發明化合物可用於預防由內原情況(動脈粥樣硬化斑塊破裂)或外原情況(侵入性心臟病學手術(invasive cardiological procedure)所致動脈損傷後的再狹窄。
本發明化合物也可用作體外血液循環的抗凝劑，例如在透析和外科手術(例如冠狀動脈分流術外科手術)中所需的抗凝劑。
本發明化合物也可與血栓溶解劑配合使用。所述血栓溶解劑包括例如組織纖維蛋白溶酶原激活劑(天然的或重組體的)、鏈激酶、尿激酶、尿激酶原(prourokinase)、未分離的(anisolated)鏈激酶纖維蛋白溶酶原激活劑複合體(ASPAC)、動物唾液腺纖維蛋白溶酶原激活劑，等。本發明化合物可以協同的方式作用，以預防成功的血栓溶解治療後的再閉塞和/或減少再灌注的時間。本發明化合物也可使所用的血栓溶解劑的劑量降低，因而使可能的出血性的副作用減到最小。
本發明化合物也可與其它抗血栓形成的或抗凝血的藥物如血栓烷受體拮抗劑、擬前列環素(prostacyclin mimetics)、磷酸二酯酶抑制劑、纖維蛋白原拮抗劑等組合使用。
抑制胰蛋白酶的本發明化合物也可用於治療胰腺炎。
本發明化合物可以有效量經口或腸道外途經給已知患有這類疾病的哺乳動物類例如人、貓、狗等使用，所述有效量在約0.1-100mg/Kg的劑量範圍內，優選約0.2-50mg/kg，更優選約0.5-25mg/kg(或約1-2500mg，優選約5-2000mg)，服用方式為日劑量一次服用或分為2-4次服用。
活性物質可用在組合物如片劑、膠囊劑、溶液劑或懸浮劑中，所述組合物每單位劑量含約5-500mg式Ⅰ的化合物或式Ⅰ化合物的混合物。它們可按常規方式與生理上可接受的被公認的製藥實踐所需的媒介物或載體、賦形劑、粘合劑、防腐劑、穩定劑、芳香劑等混合。
下列實施例代表本發明的優選的實施方案。除另有說明外，所有的溫度均以攝氏度來表示。
實施例1[1(S)，2α、4β]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-4-甲基-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽。
A.(2R-反式)-1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯A(1).4-甲基-2-哌啶腈將33.6g(340mmol，Aldrich)4-甲基哌啶用40分鐘滴加至在冰浴中冷卻的500g次氯酸鈉液(5%Cl，Aldrich)中。將反應混合物攪拌20分鐘，然後倒入分液漏鬥中，並用乙醚提取兩次，每次400ml。將提取液合併，乾燥(硫酸鈉)並真空濃縮，得到約44g N-氯代中間體，為黃色液體。
將上面得到的N-氯代哌啶粗品的95%乙醇(20ml)溶液用40分鐘滴加至加熱到80℃的氫氧化鉀(19.1g，340mmol)的95%乙醇(140ml)溶液中。該滴加過程中適度放熱，並生成沉澱。將反應混合物攪拌10分鐘，冷卻至室溫，真空濃縮，然後將85ml2N NaOH水溶液加至殘留物中，將得到的混合物用乙醚提取3次，每次75ml。將乙醚提取液合併，乾燥(硫酸鈉)並真空濃縮，得到粗亞胺，為粘性黃色油狀物。
用約一小時時間向在冰浴中冷卻的氰化鉀(110g，1.7mol，Mallinckrodt)的水(400ml)溶液中加入183ml(2.20mol)濃HCl，隨後加入上面得到的粗亞胺。將反應混合物在10-20℃之間攪拌4小時，然後在冰浴中冷卻，並通過加入約80g氫氧化鉀片將混合物鹼化至pH12。將得到的溶液倒入分液漏鬥中並用乙醚提取3次，每次300ml。將乙醚層合併，乾燥(硫酸鈉)並真空濃縮，得黃色油狀物。將粗產物經簡單的減壓蒸餾純化，得13.2g(106mmol，31%)標題腈，為透明液體，bp72-74℃(3mm)。
A(2).4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯將13.0g(105mmol)A(1)項的腈於室溫加至250ml 6N HCl水溶液中。將反應混合物加熱回流(浴溫145℃)6小時，然後冷卻至室溫並真空濃縮，得酸的鹽酸鹽粗品，為固體。
將40ml(550mmol)亞硫醯氯用30分鐘滴加至在冰浴中冷卻的250ml無水乙醇中。將溶液再攪拌15分鐘，然後加至上面得到的酸的鹽酸鹽粗品中。將得到的漿液加熱回流4小時，然後冷卻至室溫並濾除固體。將濾液真空濃縮，得到粗的酯胺鹽酸鹽，為棕色油狀物。將該油狀物在150ml飽和碳酸鉀水溶液和150ml氯仿之間進行分配。分出水層，並用氯仿提取2次，每次100ml。將有機提取液合併，乾燥(硫酸鈉)並濃縮，得標題酯粗品，為棕色油狀物。將粗產物通過-10cm填充柱(玻璃單環填充物，3mm)減壓蒸餾純化，得11.0g(64.3mmol，61%)標題胺，為無色液體，bp37-38℃(0.4mm)。反式/順式比率經270MHz1HNMR測定，為約6∶1。
A(3).(2R-反式)-1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯將9.8ml(70mmol，蒸餾自氫化鈣)三乙胺一次加至冷卻至0℃的10.0g(58.5mmol)A(2)項的胺的二氯甲烷(100ml)溶液中，然後用20分鐘滴加11.9g(70mmol，Aldrich)氯甲酸苄酯。將反應混合物攪拌30分鐘，然後用100ml 1N HCl水溶液、100ml飽和碳酸氫鈉水溶液、50ml鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)，然後真空濃縮，得油狀物。將該粗油狀物用閃層析(Merck二氧化矽，30×10cm，600g，1∶9乙酸乙酯/己烷)純化，得12.7g(41.6mmol，71%)標題化合物(反式異構體)，為無色油狀物。還得到2.95g(9.67mmol，17%)反式/順式異構體(約1∶1)的混合物，為無色油狀物。
B.(2R-反式)-4-甲基哌啶羧酸乙酯將A項外消旋的CBZ酯(2.36g，7.73mmol)溶於無水乙醇(50ml)中，並用Pd-C(10%，250mg)於室溫(RT)和1個大氣壓下氫化。6小時後再加入催化劑(50mg)。使反應繼續進行2小時。過濾並真空蒸發，得標題游離胺(1.22g，7.13mmol，92%)。
C.(2R-反式)-1-[N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-0-(苯基甲基)-L-絲氨醯基]-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯將B項的2-哌啶酸酯(1.22g，7.13mmol)和BOC-Ser(OBn)-OH(2.36g，8.0mmol)於RT溶於DMF(15ml)中，加入HOBT(1.08g，8.0mmol)、WSC(1.54g，8.0mmol)和N-甲基嗎啉(NMM)(0.88ml，8.0mmol)。pH為約8.5。將反應混合物攪拌90分鐘，分配於乙酸乙酯和10%KHSO4之間，將水層反萃取，並將有機層合併。將合併的有機層用飽和NaHCO3(2X)、飽和NaCl洗滌，硫酸鎂乾燥並真空汽提，得到標題酯，為油狀物(2.99g，6.67mmol，93%)。
D.(2R-反式)-1-[N-(2-萘磺醯基)-0-(苯基甲基)-L-絲氨醯基]-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯將C項的BOC-Ser-2-哌啶酸酯(2.80g，6.25mmol)於0℃溶於三氟乙酸(TFA)中，並用60分鐘使其升溫至RT。將TFA真空蒸發2小時，得到TFA鹽，為油狀物(4.2g)。將TFA鹽粗品溶於二氯甲烷(15ml)中，加入2-萘磺醯氯(Aldrich，1.58g，7.0mmol)，隨後加入三乙胺(3.5ml，25mmol)，劇烈放熱。將反應混合物置冰浴中10分鐘，然後升溫至RT。6小時後蒸發二氯甲烷，並將反應混合物分配於乙酸乙酯和10%KHSO4之間(2X)，用飽和NaHCO3洗滌(2X)，硫酸鎂乾燥並蒸發，得標題酯粗品(3.18g)。對粗產物進行矽膠層析(1∶3 / 1∶2乙酸乙酯(EtOAc)∶己烷)，得兩個油狀非對映體[2.29g，4.25mmol，68%(二步)]。
E.(2R-反式)-1-[N-(2-萘磺醯基)-0-(苯基甲基)-L-絲氨醯基]-4-甲基-2-哌啶羧酸將D項的酯溶於甲醇(MeOH)(30ml)中，並用1N NaOH(10ml，10mmol)處理。攪拌12小時，再加入NaOH(5ml)。24小時後，將反應混合物用HCl(50ml，1N)酸化，用乙酸乙酯(2X)提取並真空乾燥，得標題游離酸(1.99g，3.90mmol，99%)。
F.(4-氨基丁基)氨基甲酸苯基甲酯將1，4-丁二胺二鹽酸鹽(5.96g，37mmol)溶於水(15ml)中，並加入DMF(50ml)。在快速攪拌下，用2分鐘滴加CBZ-Cl(1.0ml，7.0mmol)。該渾濁溶液的pH約為2.8。將pH用5N NaOH調至9.0(澄清溶液)並攪拌2小時。將反應混合物酸化至pH＝1.25，用乙醚提取(2X)，用5N NaOH使成鹼性(pH＞10)並用二氯甲烷提取(2X)。將二氯甲烷部分合併，用水洗滌(2X)，乾燥並真空蒸發，得到單一CBZ胺粗品(0.72g，3.24mmol，46%)，將其用於下一步。
G.(2R-反式)-1-[N-(2-萘磺醯基)-0-(苯基甲基)-L-絲氨醯基]-N-[4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]-4-甲基-2-哌啶甲醯胺將HOBT(170mg，1.25mmol)、WSC(0.25g，1.3mmol)和NMM(138μl，1.3mmol)加至E項的單-CBZ胺(400mg，1.8mmol)和E項的酸(640mg，1.25mmol)在DMF(5ml)中的溶液中，pH約為8.5。將反應混合物攪拌2小時(用HPLC鑑定反應完全)，分配於乙酸乙酯和10%KHSO4之間，反萃取，並將合併的有機層用10%KHSO4、飽和NaHCO3(2X)、飽和NaCl洗滌，並蒸發，以定量收率得到粗產物。將粗產物進行矽膠層析(2∶1;EtOAc己烷)，得標題的兩個非對映體的混合物(671mg，0.94mmol，75%)。
H.[1(S)，2α，4β]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-4-甲基-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽將G項的0-苄基CBZ衍生物溶於已加有乙醯氯(0.71ml，10mmol，得0.5M HCl的溶液)的乙醇(20ml)中。將該混合物於1個大氣壓及回流溫度下用Pd-C(10%，150mg)氫化。5小時後，將反應混合物過濾，汽提，並加入新鮮乙醇和催化劑。再過2小時後，測定反應完成約80%，這時將其過濾並汽提，得粗胺(412mg)。將粗產物用製備HPLC(80∶20 / 50∶50)純化，得到去苄基、去CBZ的非對映體(281mg，0.57mmol，71%)和0-苄基、去CBZ化合物(69mg，0.12mmol，15%)。
將上述去苄基、去CBZ產物(208mg，0.46mmol)溶於乙醇(5ml)中，加入脒磺酸(78mg，0.65mmol)和三乙胺(176μl，1.26mmol)。20小時後，將溶劑蒸發，產物用製備HPLC(80∶20 / 50∶50)純化。將含兩個主要成分的部分合併，凍幹，得標題化合物，為異構體A∶B為40∶60的混合物(255mg，78%)，純度≥98%。D(c＝1.0，MeOH)＝-11.7°.
計算值，對於1.30 TFA+ 0.80 H2Oc，47.68;H，5.64;N，12.09;F，10.66.
實測值c，47.68;H，5.34;N，11.97;F，10.83.
實施例2[1(S)，2α，4β]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代-3-(苯基甲氧基)丙基]-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽將實施例1H項所述的O-苄基、去CBZ化合物(69mg，0.099mmol)溶於乙醇(2ml)中，加入按Synthesis((1986)777-779)中所述製備的脒磺酸(22mg，0.18mmol)和三乙胺(50μl，0.36mmol)。20小時後，將溶劑蒸發，產物用製備HPLC純比(80∶20 / 50∶50)。將含兩個主要成分的部分合併，凍幹，得標題化合物，為異構體A∶B的1∶3混合物(76mg，100%)，純度≥98%。D(c＝1.0，MeOH)＝-5.6°.
計算值，對於1.10TFA+0.30H2Oc，54.51;H，5.84;N，11.15;F，8.32.
實測值c，54.19;H，5.84;，N，11.04;F，8.29.
實施例3[2R-[1(S＊)，2α，4β]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-4-甲基-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽將實施例1化合物(約220mg)溶於水(15ml)中並用YMC S-1020mm×500mm ODS柱層析，用80∶20 / 50∶50梯度洗脫。凍幹後，洗脫液的第一峰(異構體A)有95mg。立體化學(2R，4R)通過與由非外消旋的原料製備的樣品相比較來確定。D(c＝1.00，MeOH)+11.0°.
計算值，對於1.16 H2O+1.07 TFAc，48.25;H，5.88;N，12.44;F，9.03;S，4.75.
實測值c，48.25;H，5.61;N，12.25;F，9.25;S，5.19.
實施例4[2S-[1(R＊)，2α，4β]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-4-甲基-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽將實施例1化合物(約220mg)溶於水(15ml)中並用YMC S-1020mm×500mm ODS柱層析，用80∶20 / 50∶50(乙腈∶水)梯度洗脫。凍幹後，洗脫液的第二峰(異構體B)有103mg。立體化學(2S，4S)通過將這兩個異構體相比較來確定。D(c＝1.00，MeOH)-29.0°.
計算值，對於1.39 H2O+1.17 TFAc，47.52;H，5.83;N，12.16;F，9.65;S，4.64.
實測值c，47.52;H，5.49;N，11.96;F，9.60;S，5.25.
離分辨MS表明 (M+H)+＝533.2546(C25H37O5N6S).
實施例5(2S-反式)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[[[(1，2，3，4-四氫-3-甲基-8-喹啉基)磺醯基]氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸鹽A.[2S-反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯在室溫向無水乙醇(65ml)和乙醯氯(6.52ml，於0℃滴加)的溶液中加入(2S，4S)-4-甲基-2-哌啶酸(2.8g，19.6mmol)。將反應混合物於室溫攪拌16小時，然後真空濃縮，得標題化合物(3.01g，90%)。
B.(2S-反式)-1-[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙醯基]-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯將WSC(0.44g，2.25mmol)和A項的乙酯(0.35g，2.04mmol)加至L-Boc-甘氨酸(0.4g，2.25mmol)和HOBT(0.31g，2.25mmol)的DMF(7ml)溶液中，隨後加入NMM(240μl，2.25mmol)，以調節溶液的pH至8。將反應混合物於室溫攪拌16小時，並通過用飽和NaHCO3溶液、飽和KHSO4溶液、鹽水洗滌來處理，用Na2SO4乾燥並蒸發，得標題化合物(0.60g，89%)。
(M+H)+＠329C.(2S-反式)-1-[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙醯基]-4-甲基-2-哌啶羧酸在0℃將1N NaOH(6.5ml)加至B項化合物(560mg，1.71mmol)的乙醇(6.5ml)溶液中。將反應混合物於室溫攪拌16小時並真空濃縮。將反應混合物用1N HCl酸化至pH2，並用EtOAc提取。將EtOAc提取液用飽和KHSO4溶液、鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥並濃縮，得標題化合物(512mg，定量)。
(M+H)+＠301D.(4-氨基丁基)氨基甲酸苯基甲酯將5N NaOH加至1，4-二氨基戊烷(25g，155mmol)的DMF/H2O(1∶1)(100)溶液中，以調節pH至9。將CBZ-Cl(3.7ml，26mmol)一次加至其中，並於室溫攪拌16小時。將反應混合物酸化至pH1.25，並用乙醚洗滌。然後將反應混合物的pH調至9.5，並用EtOAc提取。將有機層用水、鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥並蒸發，得標題化合物(1.57g，30%)。
E.(2S-反式)-1-[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙醯基]-4-甲基-N-[4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]-2-哌啶甲醯胺將WSC(363mg，1.89mmol)和D項的CBZ胺(381mg，1.72mmol)加至C項的化合物(516mg，1.72mmol)和HOBT(256mg，1.89mmol)的DMF(10ml)溶液中，隨後加入NMM(198μl，1.89mmol)，以調節溶液的pH至8。將反應混合物於室溫攪拌16小時。通過將反應混合物倒入飽和NaHCO3溶液中並用EtOAc提取對反應混合物進行處理。將EtOAc層用飽和KHSO4溶液、鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥並真空濃縮，得標題化合物(900mg，定量)。
F.(2S-反式)-1-(氨基乙醯基)-4-甲基-N-[4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]-2-哌啶甲醯胺鹽酸鹽將4.5ml 4N HCl/二噁烷於0℃加至E項的化合物(0.76g，1.51mmol)的甲醇(5ml)溶液中，於室溫2小時後，將反應混合物通過加入乙醚進行處理，沉澱標題化合物(0.70g，定量)。
G.(2S-反式)-4-甲基-1-[[[(3-甲基-8-喹啉基)磺醯基]氨基]乙醯基]-N-[4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]-2-哌啶甲醯胺將三乙胺(475ml，3.39mmol)於0℃加至F項的化合物(500mg，1.13mmol)的氯仿(11ml)溶液中。5分鐘後，加入6-甲基-8-喹啉磺醯氯(273mg，1.13mmol)。將反應混合物於0℃再攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌3小時。將反應混合物用飽和NaHCO3溶液、飽和KHSO4溶液、鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥並蒸發，得粗產物。將其用矽膠柱層析純化，用二氯甲烷甲醇作洗脫劑，得標題化合物(150mg，22%)。
H.(2S-反式)-N-(4-氨基丁基)-4-甲基-1-[[[(1，2，3，4-四氫-3-甲基-8-喹啉基)磺醯基]氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺鹽酸鹽將G項的化合物(140mg，0.23mmol)和230μl 1N HCl在5ml乙醇中的溶液在1個大氣壓下用10% Pd/C(40mg)氫化。16小時後，將懸浮液用硅藻土過濾並真空濃縮，得標題游離胺(130mg，定量)。
I.(2S-反式)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[[[(1，2，3，4-四氫-3-甲基-8-喹啉基)磺醯基]氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺將三乙胺(60ml，0.43mmol)加至H項的化合物(80mg，0.145mmol)的乙醇(0.8ml)溶液中，然後加入脒磺酸(27mg，0.22mmol)。於室溫16小時後，將反應混合物真空濃縮，並進行製備HPLC純化，用80∶20至50∶50梯度(H2O∶CH3CN)，歷時50分鐘，得標題化合物(40mg，50%)。
(M+H)+＠522計算值，對於C24H39N7O4S·1.2TFA·1.1 H2c，43.54;H，6.04;N，13.46;F，9.39實測值c，43.87;H，5.72;N，13.09;F，9.33.D＝-6.7(c＝0.51，甲醇)實施例6反式-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-(甲硫基)-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸鹽A.順-4-羥基-1-[(苯基甲氧基)羰基]-L-脯氨酸甲酯將N-CBZ-L-酮基脯氨酸溶於甲醇(150ml)中，冷卻至0-5℃，滴加NaBH4(2.875g)的水(10ml)溶液。將混合物維持在0-5℃19小時。真空除去甲醇。殘留物用75ml 3N NaOH處理，並於室溫攪拌40分鐘。在冰浴中冷卻後，將混合物用濃HCl酸化。將產物提取至乙酸乙酯(3×50ml)中。將合併的提取液用鹽水(2×40ml)洗滌，乾燥(硫酸鎂)並真空除去溶劑，得順式-羥基酸。用下述方法將其轉化成甲酯將其溶於甲醇(75ml)中，用乙醯氯(7.5ml)處理，並於室溫攪拌過夜。除去溶劑，將殘留物溶於乙酸乙酯(75ml)中，用碳酸氫鈉溶液(2×25ml)洗滌，乾燥(硫酸鎂)，並真空除去溶劑，得標題化合物，為粘性油狀物(4.315g，81%)。
B.順-4-[[(4-甲基苯基)磺醯基]氧基]-1-[(苯基甲氧基)羰基]-L-脯氨酸甲酯將A項的醇(4.315g，16.84mmol)溶於無水吡啶(23ml)中，將其在冰浴中冷卻並用甲苯磺醯氯(6.8g)處理。將混合物緩慢升至室溫，並攪拌60小時。冷卻後，加入冷的2N HCl，並將混合物於0-5℃放置4小時。過濾收集固體並將其溶於二氯甲烷中。將該溶液用1N HCl溶液和鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)並真空除去溶劑，得標題化合物，為結晶狀物。
C.4-(甲硫基)-1-[(苯基甲氧基)羰基]-L-脯氨酸甲酯將B項的甲苯磺酸酯(2.09g，4.8mmol)在氬氣氣氛下溶於無水乙醇(20ml)和丙酮(20ml)中，並用甲硫醇鈉(1.39g，19.9mmol)處理。將混合物加熱回流1小時，冷卻並真空除去大部分溶劑。將殘留物分配於1N HCl和乙酸乙酯之間。將乙酸乙酯層用水洗滌，乾燥(硫酸鎂)並真空除去溶劑。NMR和TLC表明該物主要為游離酸。將其用以下方法轉化成甲酯將其溶於甲醇(20ml)中，加入乙醯氯(2ml)並於室溫攪拌2小時。除去溶劑後，將產物用矽膠層析純化，用乙酸乙酯己烷(1∶2)洗脫，得標題甲硫基化合物(1.364g，99%)。
D.4-(甲硫基)-L-脯氨酸甲酯氫溴酸鹽將C項的化合物(945mg，3.3mmol)用30%HBr的乙酸(8ml)液處理1小時，然後真空濃縮。將殘留物用乙醚研製，產生固體，過濾收集該固體並用更多的乙醚洗滌，得到標題去保護的胺(749mg，89%)。
E.反式-1-[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙醯基]-4-(甲硫基)-L-脯氨酸甲酯以及F.順式-1-[N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]甘氨醯基]-4-(甲硫基)-L-脯氨酸甲酯將D項的L-脯氨酸衍生物(1.012g，3.95mmol)和BOC-甘氨酸(900mg，5.1mmol)於RT溶於DMF(20ml)中，加入HOBT(688mg，5.1mmol)、WSC(974mg，5.1mmol)和NMM(1.0ml，9.1mmol)。將反應混合物攪拌16小時，在乙酸乙酯(50ml)和10%KHSO4(100ml)之間進行分配。水層用乙酸乙酯(2×50ml)提取，並將有機層合併，將合併的有機層用飽和NaHCO3溶液、飽和NaCl溶液洗滌，硫酸鎂乾燥並真空濃縮，得到油狀物。TLC表明其為兩個主要產物。將該產物粗品用矽膠層析純化，用乙酸乙酯己烷(1∶2，隨後1∶1)洗脫，得主產物(初步確定為反式構型的標題化合物，603mg，46%)和次要產物(初步確定為順式構型的標題化合物，204mg，16%)以及一些混合級分(438mg，33%)。
G.反式-4-(甲硫基)-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-L-脯氨酸甲酯將E項的BOC衍生物(600mg，1.8mmol)溶於三氟乙酸(TFA)(15ml)中，並於RT攪拌1小時。將TFA通過減壓蒸餾和與甲苯共蒸發除去。將TFA鹽粗品溶於二氯甲烷(20ml)中，在冰浴中冷卻，並加入2-萘磺醯氯(Aldrich，450mg，2.0mmol)，隨後加入三乙胺(1.5ml)。將該溶液升溫至RT並攪拌1.5小時後用二氯甲烷(75ml)稀釋。將該溶液用硫酸氫鉀溶液(2×40ml)和飽和NaHCO3溶液(2×40ml)洗滌，硫酸鎂乾燥並蒸發，得粗的標題化合物。對粗產物進行矽膠層析，用50%的EtOAc己烷液洗脫，得標題磺醯胺，為泡沫狀物(700mg，兩步總計92%)。
H.反式-4-(甲硫基)-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-L-脯氨酸將G項的甲酯(700mg，1.65mmol)的甲醇(20ml)溶液用1N NaOH溶液(8ml)處理，並於室溫攪拌3小時。用1N HCl溶液酸化後，將產物提取至二氯甲烷(2×50ml)中，用硫酸鎂乾燥並真空除去溶劑，得到標題化合物，為白色泡沫狀物(687mg，100%)。
I.反式-4-(甲硫基)-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-N-[4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]-L-脯氨醯胺將HOBT(230mg，1.7mmol)、WSC(325mg，1.7mmol)和NMM(373μl，3.4mmol)加至單-CBZ丁基二胺(484mg，2.18mmol)和H項的酸(687mg，1.65mmol)在DMF(25ml)中的溶液中。將反應混合物於RT攪拌20小時，將其分配於乙酸乙酯(50ml)和KHSO4溶液(50ml)之間，並用乙酸乙酯(2×50ml)反萃。將合併的有機層用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌。乾燥(硫酸鎂)，過濾並濃縮。對粗產物進行矽膠層析，用50-67%的EtOAc己烷液洗脫，然後用EtOAc洗脫，得標題化合物(577mg，58%)。
J.反式-N-(4-氨基丁基)-4-(甲硫基)-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-L-脯氨醯胺氫溴酸鹽將CBZ基團經用30% HBr的HOAc(10ml)液處理1.5小時而從Ⅰ項化合物(577mg，0.96mmol)中去除，然後真空濃縮。將殘留物用乙醚研製，得到固體。過濾收集固體並用較多的乙醚洗滌，得標題去保護的胺(100%)。
K.反式-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-(甲硫基)-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸鹽將J項化合物(0.96mmol)溶於乙醇(20ml)中，加入脒磺酸(173mg，1.4mmol)和三乙胺(375μl，2.7mmol)。4小時後，將混合物用硅藻土墊過濾，用乙醇洗滌，將濾液濃縮至幹。將粗產物經製備HPLC純化(YMC S-10 ODS 50×500mm柱，用含0.1%TFA的54%的甲醇水溶液洗脫)。將含純標題化合物的級分合併並凍幹，得到白色固體(279mg，44%)，純度≥98%。D＝-12.7°，(c＝0.7，MeOH).
計算值，對於1.10 TFA+0.90 H2Oc，45.70;H，5.31;N，12.69;F，9.68;S，9.47.
實測值c，45.65;H，5.09;N，12.51;F，9.74;S，9.37.
實施例7N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸鹽半水合物A.N-[4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]丁基]-L-脯氨醯胺鹽酸鹽A(1).(4-氨基丁基)氨基甲酸1，1-二甲基乙酯將二碳酸二叔丁酯(15.7g，71.9mmol)的二噁烷(195ml)溶液用3.5小時於室溫及氬氣條件下滴加至攪拌的1，4-二氨基丁烷(50g，567mmol)的二噁烷(195ml)溶液中。在滴加過程中出現一些白色沉澱。將混合物於室溫攪拌22小時，真空濃縮。將殘留物用320ml水稀釋並濾除沉澱。將水性濾液用二氯甲烷(3×300ml)提取。將合併的二氯甲烷提取液用水(2×200ml)和鹽水(1×200ml)洗滌。將有機層乾燥(硫酸鎂)，過濾並真空濃縮，得到9.79g(72%)標題單-BOC·胺。
TLC矽膠，2% NH4OH的10%CH3OH/CH2Cl2液，Rf0.30，水合茚三酮A(2).N-[4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]丁基]-1-[(苯基甲氧基)羰基]-L-脯氨醯胺將4-甲基嗎啉(11.2ml，102mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(9.76g，50.9mmol)在攪拌下依次加至N-CBZ-L-脯氨酸(12.7g，50.9mmol)、1-羥基苯並三唑-水合物(6.49g，50.9mmol)和A(1)項的BOC胺(9.57g，50.9mmol)的DMF(250ml)溶液中。將反應溶液於室溫攪拌22小時，在泵真空下於50℃濃縮。殘留物用600ml EtOAc稀釋，並用1N HCl溶液(2×250ml)、飽和NaHCO3溶液(2×250ml)和鹽水(1×250ml)洗滌。將EtOAc層乾燥(硫酸鎂)，過濾並真空濃縮，得到20.7g(97%)標題CBZ胺。
TLC矽膠 4%CH3OH/CH2Cl2，Rf0.44，UV，Ce(SO4)2A(3).N-[4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]丁基]-L-脯氨醯胺鹽酸鹽將20%Pd(OH)2/C[4.04g，20%(基於A(2)項化合物的重量)]在氬氣下加至攪拌的A(2)項的CBZ胺(20.2g，48.2mmol)的甲醇(250ml)溶液中。將氣氛用若干次真空填充循環(vaccum-fillcycles)用氫氣置換。將反應混合物於室溫攪拌21小時。將催化劑用4μm聚碳酸酯膜濾出，並用甲醇(3×50ml)漂洗。將濾液真空濃縮。將油狀殘留物溶於200ml乙醚中並用1N HCl溶液在乙醚(53.0ml，53.0mmol)中處理。將溶液真空濃縮。將殘留物與200ml甲苯和30ml甲醇混合併真空濃縮，以定量收率(15.5g)得到標題胺鹽酸鹽，為油狀物。
B.N-[4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]丁基]-1-[N-[(苯基甲氧基)羰基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺將攪拌的N-α-CBZ-D-苯丙氨酸(0.56g，1.9mmol)的DMF(6.5ml)溶液於室溫、氬氣下用1-羥基苯並三唑(0.29g，1.9mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.36g，1.9mmol)處理。20分鐘後，加入A項的化合物(0.50g，1.6mmol)並攪拌16小時。通過加入75ml 0.25M KHSO4溶液將反應終止。將該懸浮液用EtOAc(2×40ml)洗滌，將合併的EtOAc層用0.25M KHSO4溶液(2×40ml)、飽和KHCO3水溶液(2×40ml)、鹽水洗滌，乾燥(硫酸鈉)並濃縮，得1.07g白色太妃糖狀物，經TLC分析表明，它含未反應的N-α-CBZ-D-苯丙氨酸。將粗產物再溶於60ml EtOAc中，用飽和KHCO3水溶液(3×40ml)、鹽水洗滌、乾燥(硫酸鈉)，濃縮，與乙醚和己烷共蒸發幾次，並用50ml己烷研製，得標題化合物(0.78g，88%)，為白色固體。
C.N-[4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]丁基]-1-D-苯丙氨醯基-L-脯氨醯胺將含有0.12g Pd(OH)2/C的B項化合物(0.58g，1.0mmol)在5.0ml甲醇中的溶液在1個大氣壓下氫化3.75小時。將催化劑用多孔膜(Whatman 0.2μ Nylon Autovial)濾除，並將濾液濃縮，得標題化合物(0.39g，88%)，為白色吸溼性固體。
D.N-[4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺將三乙胺(0.25ml，1.8mmol)滴加至在0℃攪拌的C項化合物(0.39g，0.90mmol)和2-萘磺醯氯(0.21g，0.95mmol)的二氯甲烷(7.0ml)溶液中。將該反應於室溫進行45分鐘。真空去除二氯甲烷。將殘留物分配於EtOAc(50ml)和0.25M KHSO4水溶液(15ml)之間。將乙酸乙酯層用0.25M KHSO4溶液(3×15ml)、鹽水洗滌，乾燥(硫酸鈉)並濃縮，得到0.61g無色玻璃狀物，用50ml己烷研製，得標題化合物(0.52g，93%)，為白色固體。
E.N-(4-氨基丁基)-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸鹽將三氟乙酸(5.0ml)加至冰冷卻的D項化合物(0.48g，0.77mmol)中。將該反應溶液於室溫攪拌45分鐘。將三氟乙酸在真空下去除並與乙醚及己烷共蒸發若干次。直至得到白色固態標題化合物，(0.51g，約100%)。
F.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸鹽半水合物將E項化合物(0.49g，0.77mmol)的無水乙醇(6.0ml)溶液用脒磺酸(0.14g，1.2mmol)處理，然後用三乙胺(3.2ml，2.3mmol)處理。在幾分鐘的反應時間內出現沉澱。反應5小時後，反應混合物的TLC分析(二氧化矽，3∶1∶1正丁醇∶乙酸∶H2O)表明尚有少量未消耗掉的E項化合物。再加入一些脒磺酸(0.05g)和三乙胺(0.53ml)，並使反應繼續進行16小時。按上述進行的TLC分析表明E項化合物已全部消耗掉。將反應混合物濃縮，溶於25ml甲醇中，並用多孔膜(Gelman Acrodisc CR PFTE，0.45μ)過濾。將濾液進行製備HPLC(25%B至100%B，30分鐘梯度)純化，然後將合併的級分凍幹，得到標題化合物(258mg，48%)，為無色固體，mp100-120℃發泡。D＝+19.4°(c＝0.5，CH3OH).
TLCRf＝0.70(二氧化矽3∶1∶1nBuOH;HOAc;H2O).
計算值，對於C31H37N6O6F3S·1.1 C2HF3O2·0.50H2Oc，53.60;H，5.49;N，12.02;F，8.97;S，4.59實測值C，53.61;H，5.50;N，11.81;F，9.03;S，4.36實施例8N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-穀氨醯胺醯基]-L-脯氨醯胺A.N-[4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]丁基]-1-[N-[(苯基甲氧基)羰基]-D-穀氨醯胺醯基]-L-脯氨醯胺將4-甲基嗎啉(0.57ml，5.23mmol)和乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.33g，1.74mmol)依次加至攪拌著的實施例7A項的胺鹽酸鹽(0.56g，1.74mmol)、1-羥基苯並三唑-水合物(0.29g，1.74mmol)和N-CBZ-D-穀氨醯胺(0.49g，1.74mmol)的DMF(15ml)溶液中。將該溶液於室溫攪拌19小時，並於45℃在泵真空下濃縮。將油狀殘留物用160ml EtOAc稀釋，並用1N HCl溶液(2×60ml)飽和的NaHCO3溶液(2×60ml)和鹽水(1×60ml)洗滌。將EtOAc層乾燥(硫酸鎂)，過濾並真空濃縮，得到0.75g(77%)標題CBZ胺。
TLC矽膠，6%CH3OH/CH2Cl2，Rf0.22，Ce(SO4)2B.N-[4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-穀氨醯胺醯基]-L-脯氨醯胺將Pd(OH)2/C[146mg，20%(基於A項化合物的重量)]在氬氣下加至攪拌的A項的CBZ胺(0.73g，1.33mmol)的甲醇(12ml)溶液中。將氣氛用若干次真空填充循環用氫氣置換。將反應溶液於室溫攪拌22小時，用4μm聚碳酸酯膜濾除催化劑。將該固體用甲醇(2×20ml)漂洗。將濾液真空濃縮，得到0.54g中間體胺。將三乙胺(0.33ml，2.34mmol)加至於0℃氬氣下攪拌的所述胺(0.44g，1.07mmol)和2-萘磺醯氯(0.27g，1.18mmol)的無水二氯甲烷(10ml)溶液中。將反應溶液於室溫攪拌2小時，用180mlEtOAc稀釋。將該溶液用1NHCl溶液(2×60ml)、飽和NaHCO3溶液(1×60ml)和鹽水(1×60ml)洗滌。將有機層乾燥(硫酸鎂)，過濾真空濃縮。用30gMerck矽膠60進行閃層析純化，用240ml4%CH3OH/CH2Cl2和480ml 6%CH3OH/CH2Cl2作洗脫劑，得到純的標題磺醯胺(310mg，48%)。
TLC矽膠，4%CH3OH/CH2Cl2，Rf 0.20，UV，I2.
C.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-穀氨醯胺醯基]-L-脯氨醯胺將0℃的4N HCl的二噁烷液(6.00ml，24.0mmol)加至攪拌的B項磺醯胺(310mg，0.51mmol)的無水二氯甲烷(5ml)溶液中。將該溶液於室溫攪拌2小時，用120ml乙醚稀釋。濾出固體，並用乙醚(2×30ml)漂洗。將固體溶於60ml甲醇中並真空濃縮，得到中間體胺鹽酸鹽。將氨基亞氨基甲磺酸(204mg，1.64mmol)加至在氬氣下攪拌的所述胺鹽酸鹽、三乙胺(0.39ml，2.31mmol)和5ml無水乙醇的混合物中，將混合物於室溫攪拌5小時並真空濃縮。將反應混合物用製備HPLC純化，用37%的含0.2%H3PO4的水甲醇(90∶10和10∶90)的組合物洗脫。將級份真空濃縮並凍幹，得到260mg(93%)的標題化合物。
m.p.72-74℃[α]D＝+5.80(c＝0.69，甲醇)，計算值，對於C25H35N7O5S·1.60TFA·1.0 H2Oc，45.40;H，5.21;N，13.14;S，4.30;F，12.22實測值c，45.45;H，4.98;N，12.95;S，4.32;F，11.90按照實施例1至8和上述的方法，還可製得以下各例化合物(並列出可以得到的熔點℃、旋光度和/或元素分析值)。
9.[2R-[1(S＊)，2α，4β)]-N-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-1-[4-羥基-3-[(2-萘磺醯基)氨基]-1，2-二氧代丁基]-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝+11.0(c＝1.09MeOH)計算值，對於C24H34N6O5S·1.1TFA·1.34 H2Oc，47.10;H，5.70;N，12.58;S，4.80;F，9.38實測值c，47.39;H，5.41;N，12.29;S，5.21;F，9.5610.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-絲氨醯基]-L-脯氨醯胺[α]D＝-70.2(c＝0.5，MeOH)
計算值，對於C23H32N6O5S·1.15TFA·0.5 H2Oc，47.13;H，5.34;N，13.03;S，4.97;F，10.17實測值C，46.83;H，5.28;N，12.84;S，5.14;F，10.4311.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-絲氨醯基]-D-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝-14.8(c＝0.5，MeOH)計算值，對於C23H32N6O5S·1.15TFA·1.6 H2Oc，45.73;H，5.51;N，12.65;S，4.82;F，9.86實測值C，45.58;N，5.19;N，12.41;S，5.14;F，10.0112.(2R-反式)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸鹽水合物[α]D＝+33.0(c＝1.08MeOH)計算值，對於C24H34N6O4S·1.35TFA·0.85 H2Oc，47.73;H，5.56;N，12.51;S，4.77;F，11.45實測值C，47.73;H，5.51;N，12.13;S，4.95;F，11.4213.[2R-[1(S＊)，2α，4β]]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-4-甲基-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸鹽水合物D＝+18.8(c＝1.06MeOH)計算值，對於C26H38N6O5S·1.36TFA·1.00 H2Oc，47.93;H，5.79;N，11.68;S，4.45;F，10.77實測值c，47.92;H，5.66;N，11.53;S，4.89;F，10.7514.[1(S)]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1，2，3，4-四氫-2-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-3-異喹啉甲醯胺，異構體A，三氟乙酸鹽水合物[α]D＝-30.9(c＝0.5，MeOH)計算值，對於C28H34N6O5S·1.25TFA·1.0H2Oc，50.37;H，5.16;N，11.56;S，4.41;F，9.80實測值c，50.31;H，5.05;N，11.58;S，4.44;F，9.6515.[1(S)]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1，2，3，4-四氫-2-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-3-異喹啉甲醯胺，異構體B，三氟乙酸鹽水合物[α]D＝-22.8(c＝0.6，MeOH)計算值，對於C28H34N6O5S·1.25TFA·1.0 H2Oc，50.15;H，5.13;N，11.47;S，4.37;F，10.11實測值c，50.04;H，4.95;N，11.36;S，4.51;F，10.17
16.(4S＊)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-羥基-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-絲氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝-29.0(c＝0.6，MeOH)計算值，對於C23H32N6O6S·1.15 TFA·1.0 H2Oc，45.25;H，5.31;N，12.51;S，4.77;F，9.76實測值c，45.28;H，4.98;N，12.52;S，4.86;F，9.8617.(4S＊)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲氧基-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-絲氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝-24.5(c＝0.6，MeOH)計算值，對於C24H34N6O6S·1.15 TFA·1.0 H2Oc，46.04;H，5.56;N，12.30;S，4.69;F，9.17實測值c，46.04;H，5.48;N，12.16;S，4.78;F，9.2218.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽m.p.172-178℃發泡[α]D＝-27.0(c＝0.5，CH3OH)
計算值，對於C31H37N6O6F3S·1.2 C2HF3O2·0.80 H2Oc，52.68;H，5.46;N，11.74;F，9.55;S，4.48實測值c，52.71;H，5.35;N，11.50;F，9.33;S，4.2619.(2S-反式)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺[α]D＝-36.4(c＝0.98，MeOH)計算值，對於C26H35N6O6S·0.25TFA·1.20 H2Oc，47.74;H，5.69;N，12.60;F，10.68;S，4.81實測值c，47.75;H，5.51;N，12.62;F，10.86;S，4.9520.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-穀氨醯胺醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝-48.1(c＝0.68，甲醇)計算值，對於C25H35N7O5S·1.27 TFA·1.57 H2Oc，46.02;H，5.53;N，13.64;S，4.46;F，10.07實測值c，46.02;H，5.18;N，13.33;S，4.86;F，10.0621.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-蘇氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽m.p.68-78℃[α]D＝-72.6(c＝0.69，甲醇)
計算值，對於C24H34N6O5S·1.25 TFA·1.20 H2Oc，46.62;H，5.56;N，12.31;S，4.70;F，10.43實測值c，46.75;H，5.50;N，12.08;S，4.82;F，10.4022.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-別蘇氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽m.p.85-96℃[α]D＝-70.8(c＝0.76，甲醇)計算值，對於C24H34N6O5S·1.16 TFA·0.97 H2OC，47.30;H，5.59;N，12.57;S，4.80;F，9.89實測值c，47.30;H，5.16;N，12.39;S，5.19;F，9.4823.(S)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-(甲硫基)-1-[N-(2-萘磺醯基)甘氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝+13.4(c＝0.6，MeOH)計算值，對於C23H32N6O5S2·1.10 TFA·1.0 H2Oc，45.58;H，5.33;N，12.65;S，9.44;F，9.66實測值c，45.52;H，5.11;N，12.46;S，9.49;F，9.6524.(R)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-(甲硫基)-1-[N-(2-萘磺醯基)甘氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽D＝-12.7 (c＝0.7，MeOH)計算值，對於C23H32N6O4S2·1.10 TFA·0.9 H2OC，45.70;H，5.31;N，12.69;S，9.47;F，9.68實測值C，45.65;H，5.09;N，12.51;S，9.37;F，9.7425.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺高分辨質譜(M+H)+＝489.228726.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-色氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽m.p.100-160℃泡沫/分解[α]D＝+44.4(c＝0.5，CH3OH)計算值，對於C31H37N7O4S·1.06 C2HF3O2·1.35 H2Oc，53.12;H，5.49;N，13.09;F，8.07;S，4.28實測值c，53.51;H，5.35;N，12.73;F，8.10;S，4.2827.(2S-反式)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[[[(3-甲基-8-喹啉基)磺醯基]氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸鹽[α]D＝-24.1(c＝0.99MeOH)
計算值，對於C24H35N7O4S·1.37TFA·1.00 H2OC，46.42;H，5.59;N，14.17;F，11.29;S，4.63實測值C，46.51;H，5.32;N，14.06;F，11.28;S，4.5528.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[[(8-喹啉基磺醯基)氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺三氟乙酸鹽計算值，對於C22H31N7O6S·2C2HF3O2·2.20 H2OC，41.21;H，5.04;N，12.84;F，14.93;S，4.20實測值C，41.34;H，4.69;N，12.39;F，14.91;S，4.5529.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-α-穀氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝(c＝0.60，甲醇)計算值，對於C25H34N6O6S·1.35 TFA·1.13 H2OC，46.42;H，5.31;N，12.16;S，4.35;F，10.43實測值C，46.42;H，5.33;N，11.84;S，4.66;F，10.50實施例29N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(甲磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽
A.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-D-苯丙氨醯基-L-脯氨醯胺三氟乙酸鹽A(1).N-[4-(氨基丁基)]-1-[N-[(苯基甲氧基)羰基]-D-苯丙氨醯基-L-脯氨醯胺三氟乙酸鹽將實施例7B項的標題化合物(0.78g，1.38mmol)溶於三氟乙酸(3.2ml)中。3小時後將溶劑蒸發，然後與己烷/乙醚共蒸發5次並真空乾燥16小時，得無色太妃糖狀物。將其用於下一步反應。
A(2).N-[4-(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-[(苯基甲氧基)羰基]-D-苯丙氨醯基-L-脯氨醯胺三氟乙酸鹽將A(1)項化合物(0.80g，1.38mmol)溶於無水乙醇(10.9ml)中，並依次用脒磺酸(0.26g，1.5當量)和三乙胺(0.58ml，3當量)處理。攪拌2小時後蒸發溶劑。將粗產物用反相HPLC純化，得到無色固體(414mg，45%)。
A(3).N-[4-[氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-D-苯丙氨醯基-L-脯氨醯胺三氟乙酸鹽將A(2)項的標題化合物(0.20g，0.30mmol)溶於甲醇(1.5ml)中，並在1個大氣壓和室溫下用Pd(OH)2(40mg的20%催化劑)氫化3小時。將催化劑濾除，並汽提溶劑，得到油狀物。將其溶於甲醇中，用三氟乙酸(0.2ml)酸化並蒸發至幹，然後溶於水中並凍幹，得到標題化合物(152mg)。
旋光度＝-75.8°(c＝0.5，CH3OH).
計算值，對於C19H30N6O2·2.07 C2HF3O2·0.90 H2O)C，44.35;H，5.45;N，13.41;F，18.82實測值C，44.52;H，5.01;N，13.26;F，18.52.
B.N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(甲磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽將三乙胺(Et3N)(0.44ml，3.20mmol)和甲磺醯氯(68.0μl，0.88mmol)在氬氣下依次加至攪拌的A項的胺(550mg，0.80mmol)在15ml無水二氯甲烷和15ml無水THF中的溶液中。將此混濁的混合物於室溫攪拌3小時，並用0.50ml水稀釋。將該混合物於室溫攪拌10分鐘並真空濃縮。將殘留物用30ml甲醇稀釋，真空濃縮並用製備HPLC純化。將所需級分真空濃縮並凍幹，得到300mg(75%)標題化合物。
旋光度[α]D＝-68.7°(C＝1.00，甲醇).
元素分析(%)計算值C，43.59;H，5.31;N，13.09;S，4.99;F，14.65實測值C，43.59;H，5.33;N，13.08;S，4.80;F，14.69實施例30
N-[[(1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-(甲磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺A.4-(氨基甲基)-N，N′-雙[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-1-哌啶甲脒(carboximidamide)將苯甲醛(0.78ml，6.94mmol)加至攪拌的4-氨基甲基哌啶(0.72g，6.31mmol)的甲苯(40ml)溶液中。將反應溶液回流18小時，用Dean Stark分水器除去水。將反應液冷卻至室溫時加入雙-Boc脒基吡唑(1.96g，6.31mmol)。將反應液於室溫攪拌48小時並真空濃縮。將油狀殘留物用15ml 1M(水)KHSO4溶液稀釋，並於室溫攪拌5小時。將該水溶液用乙醚(2×20ml)洗滌，並通過加入1N NaOH溶液鹼化至pH12。然後將該鹼性溶液用NaCl飽和，並用二氯甲烷(3×60ml)提取。將合併的二氯甲烷提取液乾燥(硫酸鎂)，過濾並真空濃縮，得到2.10g(93%)標題胺，無需進一步純化，將其用於下一步變換。
B.(S＊)-N-[[1-[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基][[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]亞氨基]甲基]-4-哌啶基]甲基]-1-[1-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-苯基乙基]-L-脯氨醯胺將4-甲基嗎啉(0.66ml，6.05mmol)和乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.39g，2.02mmol)依次加至攪拌的N-Boc-D-Phe-L-Pro-OH(0.73g，2.02mmol)、A項的胺(0.72g，2.02mmol)和1-羥基苯並三唑-水合物(0.34，2.02mmol)的DMF(30ml)溶液中。將反應溶液於室溫攪拌19小時，並在泵真空下於45℃濃縮。將殘留物用100ml飽和NaHCO3溶液稀釋，並用二氯甲烷(4×100ml)提取。將合併的二氯甲烷提取液乾燥(硫酸鎂)，過濾並真空濃縮，進行矽膠層析，得到0.70g(50%)標題雙-Boc胍。
C.N-[[(1-氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-D-苯丙氨醯基-L-脯氨醯胺將三氟乙酸(TFA)(6.00ml，77.9mmol)加至攪拌的B項雙-Boc胍(0.68g，0.97mmol)的二氯甲烷(6.0ml)溶液中。將反應液於室溫攪拌3小時並真空濃縮。將其用製備HPLC純化，得到310mg(45%)標題化合物。
D.N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-(甲磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺將三乙胺(0.38ml，2.74mmol)和甲磺醯氯(69μl)在氬氣及0℃下依次加至攪拌的C項胍(275mg，0.68mmol)的二氯甲烷(4.0ml)和THF(2.0ml)溶液中。將反應混合物於室溫攪拌2.5小時，並用2.0ml水稀釋。將混合物真空濃縮，並用製備HPLC純化，得到160mg(37%)標題化合物。
實施例31N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-3-哌啶基]甲基]-1-[N-(甲磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺
A.N-Boc-3-羥甲基哌啶將二碳酸二叔丁酯(31.5g，144mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液用1小時時間滴加至攪拌的3-羥甲基哌啶(15.1g，131mmol)和三乙胺(21.9ml，158mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中。將反應混合物於室溫攪拌18小時，然後用200ml二氯甲烷稀釋。將得到的溶液用1N HCl溶液(3×100ml)、飽和NaHCO3溶液(2×100ml)和鹽水(1×100ml)洗滌。將有機層乾燥(硫酸鎂)，過濾並真空濃縮，得到N-Boc-3-羥甲基哌啶(27.0g，96%)。
B.3-(疊氮基甲基)-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙酯將三乙胺(22.7ml，163mmol)和甲磺醯氯(11.7ml，151mmol)在氬氣及0℃下依次加至攪拌的A項N-Boc-3-羥甲基哌啶(27.0g，126mmol)的無水二氯甲烷(150ml)溶液中。將反應混合物於室溫攪拌1.5小時，用450ml二氯甲烷稀釋。將反應混合物用0℃ 1N HCl溶液(2×100ml)和鹽水(1×100ml)洗滌。將二氯甲烷層乾燥(硫酸鈉)，過濾並真空濃縮。將殘留物溶於200ml DMF中並與疊氮化鈉(24.5g，377mmol)混合。將混合物於室溫攪拌33小時，濾除固體。將濾液在泵真空下於45℃濃縮。將殘留物分配於400ml乙酸乙酯和10%硫代硫酸鈉溶液(2×100ml)和鹽水(1×100ml)之間。將乙酸乙酯層乾燥(硫酸鎂)，過濾並真空濃縮，矽膠閃柱層析純化，得到19.5g(65%)標題疊氮化物。
C.3-(氨基甲基)-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙酯將10% Pd/C[3.80g，20%(基於B項疊氮化物重量)]在氬氣下加至攪拌的B項疊氮化物(19.0g，79.2mmol)的甲醇(250ml)溶液中。將所述氣氛經若干次真空填充循環用氫置換。將該混合物於室溫攪拌15小時。將催化劑用4μm聚碳酸酯膜濾出，並用甲醇(4×30ml)漂洗。將濾液真空濃縮，得到16.3g(96%)標題胺。
D.N-[[1-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲氧基)羰基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺將乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(1.79g，9.35mmol)加至攪拌的C項胺(2.00g，9.35mmol)、N-Cbz-D-Phe-L-Pro(3.70g，9.35mmol)、1-羥基苯並三唑-水合物(1.58g，9.35mmol)和4-甲基嗎啉(3.07ml，28.0mmol)的溶液中。將反應溶液於室溫攪拌17小時並在泵真空下於45℃濃縮。將殘留物溶於360ml乙酸乙酯中，並用1N HCl溶液(2×120ml)、飽和NaHCO3溶液(1×120ml)和鹽水(1×120ml)洗滌。將乙酸乙酯層乾燥(硫酸鎂)，過濾，真空濃縮，並進行矽膠層析，得到1.30g(23%)標題氨基甲酸酯。
E.N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-3-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲氧基)羰基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺將0℃ 4N HCl二噁烷液(15.0ml，60.0mmol)加至攪拌的D項氨基甲酸酯(2.30g，3.89mmol)的無水二氯甲烷(10ml)溶液中。將該溶液於室溫攪拌3小時，用300ml乙醚稀釋，濾出沉澱並用乙醚(3×30ml)漂洗。將沉澱在泵真空下於室溫乾燥，並用製備HPLC純化，。得到1.39g(59%)中間體胺TFA鹽。將1H-吡唑-1-甲脒(133mg，0.91mmol)加至攪拌的所述中間體胺TFA鹽(500mg，0.83mmol)和二異丙基乙基胺(0.35ml，1.98mmol)的DMF(2.0ml)溶液中。將該反應溶液於室溫攪拌6小時，用100ml乙醚稀釋。將所需的油狀沉澱物由該乙醚溶液中分出並用製備HPLC純化，得到250mg(47%)標題Cbz-氨基甲酸酯。
F.N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-3-哌啶基]甲基]-1-D-苯丙氨醯基-L-脯氨醯胺將20% Pd(OH)2/C[48mg，20%(基於E項Cbz-氨基甲酸酯的重量)]在氬氣下加至攪拌的E項Cbz-氨基甲酸酯(240mg，0.37mmol)的甲醇(10ml)溶液中。將該氣氛經若干次真空填充循環用氫氣置換。將反應混合物於室溫攪拌24小時。將催化劑濾出，並用甲醇(4×20ml)漂洗。將濾液真空濃縮。將殘留物溶於50ml 0.1% TFA的水溶液中並凍幹，得到220mg(82%)標題化合物。
G.N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-3-哌啶基]甲基]-1-[N-(甲磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺按照實施例30D項的方法，所不同的是，用F項的脒代替實施例30C項的脒，得到標題化合物。
實施例32N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-D-丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽A.N-[[(苯基甲氧基)羰基]-D-丙氨醯基]-L-脯氨酸甲酯將L-脯氨酸甲酯HCl(24.6g，0.149mmol)、1-羥基苯並三唑水合物(22.2g，0.164mmol)、乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺·HCl(31.4g，0.164mmol)和4-甲基嗎啉(22.6g，0.224mmol)加至0℃的N-CBZ-D-丙氨酸(28.1g，0.149mmol)的DMF(250ml)溶液中。將反應混合物加熱至室溫，同時攪拌12小時。將反應混合物倒入水(750ml)中並用乙酸乙酯(2×150ml)提取。將合併的有機提取液用KHSO4(0.25M，2×50ml)、水(1×50ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×50ml)和飽和NaCl(1×50ml)洗滌。將有機層用硫酸鎂乾燥，過濾，真空除去溶劑，得到標題化合物，41.16g(92%)，為油狀物。MS(M+H)+＝301+。
B.N-[[[(苯基甲基)磺醯基]羰基]-D-丙氨醯基]-L-脯氨酸甲酯將A項化合物(1.56g，5.2mmol)的三氟乙酸(3ml)溶液於0℃攪拌1.5小時並真空濃縮，得到相應的TFA鹽。將該鹽溶於氯仿(10ml)中，並於0℃向其中加入三乙胺(2.2ml，15.6mmol)和苄磺醯氯(1.48，7.8mmol)。將反應混合物攪拌至室溫過夜。25小時後，將反應混合物倒入乙酸乙酯(50ml)中，依次用0.25M KHSO4水溶液(2×20ml)、水(1×20ml)飽和NaHCO3水溶液(2×20ml)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾並真空蒸發，得到標題化合物，為油狀物(1.56g，85%)∶MS(M+H)+＝355+。
C.N-[[[(苯基甲基)磺醯基]羰基]-D-丙氨醯基]-L-脯氨酸將NaOH水溶液(1.0N，9.5ml)於0℃加至B項化合物(1.33g，3.75mmol)的THF(10ml)溶液中，30分鐘後將反應混合物加熱至室溫，並再繼續攪拌4小時。真空除去有機溶劑。將水層酸化至pH2-3，並用乙酸乙酯(3×10ml)提取。將合併的提取液用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物，1.21g(94%)，為白色固體。MS(M+H)+＝341+。
D.N-[[[1-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-D-丙氨醯基]-L-脯氨醯胺於0℃向C項化合物(1.09g，3.2mmol)的DMF(15ml)溶液中加入N-1，1-[(二甲基乙氧基)羰基]-4-甲基氨基哌啶(實施例33A項中製備的)(0.685g，3.2mmol)、1-羥基苯並三唑水合物(0.476g，3.5mmol)、乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺.HCl(0.675g，3.5mmol)和4-甲基嗎啉，直至pH試紙顯鹼性。將反應混合物攪拌12小時，同時將其加熱至室溫。將反應混合物倒入0.25M KHSO4水溶液(50ml)中並用乙酸乙酯(2×20ml)提取。將有機層合併並用0.25M KHSO4水溶液(1×30ml)、水(1×25ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×25ml)和水(1×20ml)洗滌。有機層用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物，1.67g(9%)，為油狀物。MS(M+H)+＝537+。
E.N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-D-丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽將D項化合物(1.17g，2.2mmol)的三氟乙酸(10.0ml)溶液於0℃攪拌5小時。將反應混合物真空濃縮，得到相應的TFA鹽。向該鹽(2.2mmol)的溶液中加入在DMF(3.0ml)中的1H-吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(0.474g，3.3mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(1.1ml，6.5mmol)並攪拌3天。將反應混合物真空濃縮並用製備HPLC純化(CH3CN/H2O，含有TFA緩衝劑，用C-18矽膠柱)。將合適的流份合併，真空濃縮，溶於水中並凍幹，得到標題化合物(0.486g，38%)，為白色固體。D＝+1.4(c 1.0，MeOH)MS(M+H)+＝479+計算值，對於C22H34N6O4S·1.3 TFA·0.7 H2OC，46.21;H，5.78;N，13.14;S，5.01;F，11.59實測值C，46.42;H，5.83;N，12.88;S，4.97;F，11.82實施例33N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(2，2，2-三氟乙基)磺醯基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽
A.N-1，1-[(二甲基乙氧基)羰基]-4-甲基氨基哌啶將苯甲醛(14.6g，0.138mmol)、4-(氨基甲基)哌啶(14.29g，0.125mmol)和甲苯(250ml)混合併加熱回流4.5小時，同時除水。將反應混合物冷卻至-25℃，並加入二碳酸二叔丁酯(28.7g，0.131)。將反應混合物加熱至室溫並再攪拌8小時。向該反應混合物中加入KHSO4水溶液(1.0M，120ml)並攪拌3小時。分出有機層，剩下的水層用乙醚(3×75ml)提取。通過加入NaOH水溶液(1.0M，130ml)使水層成鹼性，並用乙醚(3×75ml)提取。將合併的有機提取液用硫酸鈉乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物，24.4g(9%)，為白色固體。
B.N-[[(苯基甲氧基)羰基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨酸甲酯將L-脯氨酸甲酯HCl(25.0g，0.151mmol)、1-羥基苯並三唑水合物(20.28g，0.166mmol)、乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺HCl(31.8g，0.166mmol)和4-甲基嗎啉(16.0g，0.159mmol)於0℃加至N-CBZ-D-苯丙氨酸(47.3g，0.158mmol)的DMF(300ml)溶液中。將反應混合物攪拌8小時，同時將反應混合物加熱至室溫。將反應混合物倒入水(1.2L)中並用乙酸乙酯(3×300ml)提取。將合併的有機提取液用KHSO4(0.25M，2×200ml)、水(1×200ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×200ml)和飽和NaCl(1×200ml)洗滌。將有機層用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物，60.9g(98%)，為油狀物。MS(M+H)+＝411+。
C.N-[[(苯基甲氧基)羰基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨酸將NaOH水溶液(1.0N，183ml)於0℃加至B項化合物(57.8g，0.141mol)的MeOH(180ml)溶液中。30分鐘後，將反應混合物加熱至室溫，並再繼續攪拌4小時。加入HCl水溶液(1.0N，42ml)，並真空除去有機溶劑。將得到的水層酸化至pH2-3，並用乙酸乙酯(2×300ml)提取。將合併的提取液用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物，45.53g(97%)，為白色固體。MS(M+H)+＝397+。
D.N-[[[1-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲氧基)羰基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺將A項化合物(9.98g，46.57mmol)、1-羥基苯並三唑水合物(6.26g，51.23mmol)和乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺HCl(9.82g，51.23mmol)於0℃加至C項化合物(19.39g，48.90mmol)的DMF(120ml)溶液中。將反應混合物攪拌12小時，同時使反應溫度升至室溫。將反應混合物倒入水(500ml)中並用乙酸乙酯(3×100ml)提取。將合併的有機提取液用KHSO4(0.25M，2×50ml)、水(1×75ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×75ml)和飽和NaCl(1×50ml)洗滌。將有機層用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物，23.4g(85%)，為油狀物。MS(M+H)+＝593+。
E.N-[[[[1-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-哌啶基]甲基]-1-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺將Pd/C(1.50g)加至攪拌的D項化合物(15.00g，25.3mmol)的MeOH(150ml)溶液中，並將反應混合物置於1個大氣壓的氫氣下。攪拌2小時後再加入Pd/C(2.5g)。攪拌8個多小時後反應完畢。將反應混合物過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物，11.41g(91%)，為白色固體。MS(M+H)+＝459+。
F.N-[[[1-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(2，2，2-三氟乙基)磺醯基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺將三氟乙基磺醯氯(0.5ml，4.5mmol)於0℃在氬氣下加至E項化合物(1.71g，3.5mmol)和三乙胺(2.5ml，17.9mmol)的氯仿(10ml)溶液中。24小時後，於0℃加入三乙胺(2.0ml，14.3mmol)和三氟乙基磺醯氯(0.5ml，4.5mmol)。除去冰浴，並將反應混合物攪拌6小時。將混合物用0.25M KHSO4水溶液和乙酸乙酯稀釋。將兩層分開後，有機層依次用0.25M KHSO4水溶液、水、飽和NaHCO3水溶液和水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾並真空濃縮，得到標題化合物(1.60g，75%)∶MS(M+H)+＝605+。
G.N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(2，2，2-三氟乙基)磺醯基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽將三氟乙酸(3.0ml，38.9mmol)於0℃在氬氣下加至F項化合物(1.60g，2.6mmol)的二氯甲烷(4.4ml)溶液中。5.5小時後，將反應混合物真空濃縮，得到相應的TFA鹽。將N，N-二異丙基乙胺(0.7ml，4.0mmol)在氬氣下加至所述鹽(1.3mmol)和1H-吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(0.311g，2.1mmol)的DMF(1.3ml)溶液中。2天後，加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(0.150g，1.0mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.5ml，2.9mmol)。1天後，加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(0.150g，1.0mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.5ml，2.9mmol)。2天後，將反應混合物真空濃縮並用製備HPLC純化(CH3CN/H2O，含有TFA緩衝劑，用C-18矽膠柱)。將合適的流份合併，真空濃縮，溶於水中並凍幹，得到標題化合物(0.256g，29%)，為白色固體。D＝-56.0(c 0.50，MeOH)MS(M+H)+＝547+計算值，對於C23H33N6O4SF3·1.22 TFA·1.14 H2OC，43.26;H，5.21;N，11.90;S，4.54;F，17.92實測值C，42.82;H，4.87;N，11.48;S，4.98;F，17.52實施例34N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-L-丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽A.N-[[(叔丁氧基)羰基]-L-丙氨醯基]-L-脯氨酸甲酯將脯氨酸甲酯HCl(150mmol)、1-羥基苯並三唑水合物(22.2g，0.164mmol)、乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺HCl(31.4g，0.164mmol)和4-甲基嗎啉(22.6g，0.224mmol)於0℃加至N-BOC-L-丙氨酸(150mmol)的DMF(250ml)溶液中。將反應混合物攪拌12小時，同時將反應溫度升至室溫。將反應混合物倒入水(750ml)中，並用乙酸乙酯(2×150ml)提取。將合併的有機提取液用KHSO4(0.25M，2×50ml)、水(1×50ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×50ml)和飽和NaCl(1×50ml)洗滌。將有機層用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物。
B.N-[[(苯基甲基)磺醯基]羰基]-L-丙氨醯基]-L-脯氨酸甲酯將A項化合物(5.2mmol)的三氟乙酸(3ml)溶液於0℃攪拌1.5小時並真空濃縮，得到相應的TFA鹽。將該鹽溶於氯仿(10ml)中，並於0℃向其中加入三乙胺(2.2ml，15.6mmol)和苄磺醯氯(1.48，7.8mmol)。將反應混合物攪拌至室溫過夜。25小時後，將反應混合物倒入乙酸乙酯(50ml)中，依次用0.25M KHSO4水溶液(2×20ml)、水(1×20ml)飽和NaHCO3水溶液(2×20ml)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾並真空蒸發，得到標題化合物。
C.N-[[[(苯基甲基)磺醯基]羰基]-L-丙氨醯基]-L-脯氨酸將NaOH水溶液(1.0N，9.5ml)於0℃加至B項化合物(3.75mmol)的THF(10ml)溶液中，30分鐘後將反應混合物加熱至室溫，並再繼續攪拌4小時。真空除去有機溶劑。將水層酸化至pH2-3，並用乙酸乙酯(3×10ml)提取。將合併的提取液用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物。
D.N-[[[1-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-L-丙氨醯基]-L-脯氨醯胺於0℃向C項化合物(3.2mmol)的DMF(15ml)溶液中加入N1-BOC-4-甲基氨基哌啶(3.2mmol)、1-羥基苯並三唑水合物(0.476g，3.5mmol)、乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺HCl(0.675g，3.5mmol)和4-甲基嗎啉直至pH試紙顯鹼性。將反應混合物攪拌12小時，同時將其加熱至室溫。將反應混合物倒入0.25M KHSO4水溶液(50ml)中並用乙酸乙酯(2×20ml)提取。將有機層合併並用0.25M KHSO4水溶液(1×30ml)、水(1×25ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×25ml)和水(1×20ml)洗滌。有機層用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物。
E.N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-L-丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽將D項化合物(2.2mmol)的三氟乙酸(10.0ml)溶液於0℃攪拌5小時。將反應混合物真空濃縮，得到相應的TFA鹽。向該鹽(2.2mmol)的溶液中加入在DMF(3.0ml)中的1H-吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(0.474g，3.3mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(1.1ml，6.5mmol)並攪拌3天。將反應混合物真空濃縮並用製備HPLC純化(CH3CN/H2O，含有TFA緩衝劑，用C-18矽膠柱)。將合適的流份合併，真空濃縮，溶於水中並凍幹，得到標題化合物。
實施例35N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-甘氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽A.N-[[(叔丁氧基)羰基]-甘氨醯基]-L-脯氨酸甲酯將脯氨酸甲酯HCl(150mmol)、1-羥基苯並三唑水合物(22.2g，0.164mmol)、乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺HCl(31.4g，0.164mmol)和4-甲基嗎啉(22.6g，0.224mmol)於0℃加至N-BOC-甘氨酸(150mmol)的DMF(250ml)溶液中。將反應混合物攪拌12小時，同時將反應溫度升至室溫。將反應混合物倒入水(750ml)中，並用乙酸乙酯(2×150ml)提取。將合併的有機提取液用KHSO4(0.25M，2×50ml)、水(1×50ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×50ml)和飽和NaCl(1×50ml)洗滌。將有機層用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物。
B.N-[[[(苯基甲基)磺醯基]羰基]-甘氨醯基]-L-脯氨酸甲酯將A項化合物(5.2mmol)的三氟乙酸(3ml)溶液於0℃攪拌1.5小時並真空濃縮，得到相應的TFA鹽。將該鹽溶於氯仿(10ml)中，並於0℃向其中加入三乙胺(2.2ml，15.6mmol)和苄磺醯氯(1.48，7.8mmol)。將反應混合物攪拌至室溫過夜。25小時後，將反應混合物倒入乙酸乙酯(50ml)中，依次用0.25M KHSO4水溶液(2×20ml)、水(1×20ml)飽和NaHCO3水溶液(2×20ml)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾並真空濃縮，得到標題化合物。
C.N-[[[(苯基甲基)磺醯基]羰基]-甘氨醯基]-L-脯氨酸將NaOH水溶液(1.0N，9.5ml)於0℃加至B項化合物(3.75mmol)的THF(10ml)溶液中，30分鐘後將反應混合物加熱至室溫，並再繼續攪拌4小時。真空除去有機溶劑。將水層酸化至pH2-3，並用乙酸乙酯(3×10ml)提取。將合併的提取液用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物。
D.N-[[[1-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-甘氨醯基]-L-脯氨醯胺於0℃向C項化合物(3.2mmol)的DMF(15ml)溶液中加入N1-BOC-4-甲基氨基哌啶(3.2mmol)、1-羥基苯並三唑水合物(0.476g，3.5mmol)、乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳化二亞胺HCl(0.675g，3.5mmol)和4-甲基嗎啉直至pH試紙顯鹼性。將反應混合物攪拌12小時，同時將其加熱至室溫。將反應混合物倒入0.25M KHSO4水溶液(50ml)中並用乙酸乙酯(2×20ml)提取。將有機層合併並用0.25M KHSO4水溶液(1×30ml)、水(1×25ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×25ml)和水(1×20ml)洗滌。有機層用硫酸鎂乾燥，過濾並真空除去溶劑，得到標題化合物。
E.N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-甘氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽將D項化合物(2.2mmol)的三氟乙酸(10.0ml)溶液於0℃攪拌5小時。將反應混合物真空濃縮，得到相應的TFA鹽。向該鹽(2.2mmol)的溶液中加入在DMF(3.0ml)中的1H-吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(0.474g，3.3mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(1.1ml，6.5mmol)並攪拌3天。將反應混合物真空濃縮並用製備HPLC純化(CH3CN/H2O，含有TFA緩衝劑，用C-18矽膠柱)。將合適的流份合併，真空濃縮，溶於水中並凍幹，得到標題化合物。
按照實施例30至33的方法，可以製得以下各例化合物。



實施例49N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-(乙磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝-49.2(c 1.08，MeOH)MS(M+H)+＝493+計算值，對於C23H36N6O4S·1.4 TFA·1.0 H2OC，46.23;H，5.92;N，12.54;S，4.78;F，11.90實測值C，46.23;H，6.08;N，12.39;S，4.71;F，11.98實施例50N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-(丙磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝-47.0(c 1.02，MeOH)MS(M+H)+＝507+計算值，對於C24H38N6O4S·1.15 TFA·1.2 H2OC，47.91;H，6.35;N，12.74;S，4.86;F，9.94實測值C，47.90;H，6.21;N，12.50;S，4.82;F，10.06實施例51
N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝-44.6(c 0.8，MeOH)MS(M+H)+＝555+計算值，對於C28H38N6O4S·1.55 TFA·0.67 H2OC，50.31;H，5.42;N，11.32;S，4.32;F，11.90實測值C，50.31;H，5.69;N，11.24;S，4.26;F，11.97實施例52N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-(苯磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(1∶1)鹽[α]D＝+10.1(c 1.0，MeOH)MS(M+H)+＝541+計算值，對於C27H36N6O4S·1.3 TFA·0.83 H2OC，50.51;H，5.58;N，11.94;S，4.55;F，10.53實測值C，50.51;H，5.47;N，11.83;S，4.71;F，10.52實施例53N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-(1-甲基乙基)磺醯基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺三氟乙酸(2∶3)鹽[α]D＝-43.1(c 1.10，MeOH)MS(M+H)+＝507+計算值，對於C24H38N6O4S·1.5 TFA·1.35 H2OC，46.20;H，6.06;N，11.97;S，4.57;F，12.18實測值C，46.61;H，5.86;N，11.95;S，4.44;F，12.0權利要求
1.具有下式結構的化合物，包括所有的立體異構體，包括它們的藥學上可接受的鹽 式中n是0、1或2；G是包含環的醯氨基基團；R是氫、羥基烷基、氨基烷基、烷基、環烷基、芳基烷基、鏈烯基、鏈炔基、醯氨基烷基、芳基烷氧基烷基，或者是保護的或未保護的胺基酸側鏈；R1和R2獨立地為氫、低級烷基、環烷基、芳基、羥基、烷氧基、酮基、酮縮硫醇、烷硫基、芳硫基、氨基或烷基氨基，或者R1及R2和與其相連的碳一起形成環烷基、芳基或雜芳基環；R3是烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、喹啉基或四氫喹啉基。
2.如權利要求1中定義的化合物，其中G為下式結構 式中P是0、1或2;Q是單鍵或 A是芳基或環烷基，或者是環上有4至8個碳的氮雜環烷基或環上有4至8個碳的氮雜雜環烷基，所述環的結構如下 式中X是CH2、O、S或NH;q是0、1、2、3或4，但條件是若X是CH2，則q是0、1、2、3或4;若X是O、S或NH，則q是2，3或4;Y1和Y2獨立地為H、低級烷基、滷素或酮基;R4是胍基、脒基或氨甲基，但條件是當A是芳基或環烷基時，R4是胍基、脒基或氨甲基;當A是氮雜環烷基或氮雜雜環烷基時，R4是脒基;若A是氮雜雜環烷基，則在X與在所述環中或所述環外的任何一個N原子之間一定至少有個2-碳鏈。
3.按權利要求1所定義的化合物，其中A是芳基或環烷基，Q是單鍵及q是0或1。
4.按權利要求1所定義的化合物，其中A是
5.按權利要求4所定義的化合物，其中X是CH2或NH，且Y1和Y2各自是H。
6.按權利要求4所定義的化合物，其中，G為下式結構 X是CH2;q是0或1;R1和R2各自為H;R3是烷基、芳基烷基或芳基;n是0或1及R是芳烷基或羥基烷基。
7.按權利要求1所定義的化合物，它們是N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-(甲磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺或其鹽;N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-3-哌啶基]甲基]-1-[N-(甲磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺或其鹽;N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-D-丙氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(2，2，2-三氟乙基)磺醯基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-L-丙氨醯基]-4-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-甘氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-(乙磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-(丙磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(苯基甲基)磺醯基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-(苯磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-4-哌啶基]甲基]-1-[N-[(1-甲基乙基)磺醯基]-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(2∶3)鹽。
8.具有下式結構的化合物，包括所有的立體異構體，並包括其藥學上可接受的鹽 式中n是0、1或2;G是下式所示的醯氨基基團 式中m是0、1、2或3，及Y是NH或S;R是氫、羥基烷基、氨基烷基、烷基、環烷基、芳基烷基、鏈烯基、鏈炔基、醯氨基烷基、芳基烷氧基烷基，或者是保護的或未保護的胺基酸側鏈;R1和R2獨立地為氫、低級烷基、環烷基、芳基、羥基、烷氧基、酮基、酮縮硫醇、烷硫基、芳硫基、氨基或烷基氨基，或者R1及R2和與其相連的碳一起形成環烷基、芳基或雜芳基環;及R3是烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、喹啉基或四氫喹啉基;但若R3是烷基，則該烷基具有至少3個碳。
9.具如下結構的按權利要求8所定義的化合物
10.按權利要求9定義的化合物，其中n是1及m是2;R3是2-萘基，具至少3個碳的低級烷基，或苄基;R是羥基烷基或芳烷基;R1是H或烷基;R2是H及Y是-NH-。
11.具如下結構的按權利要求9所定義的化合物
12.按權利要求9所定義的化合物，它們是[1(S)，2α，4β]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-4-甲基-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;[1(S)，2α，4β]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[2-[(2-苯磺醯基)氨基]-1-氧代-3-(苯基甲氧基)丙基]-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;[2R-[1(S＊)，2α，4β]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-4-甲基-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;[2S-[1(R＊)，2α，4β]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-4-甲基-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;(2S-反式)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[[[(1，2，3，4-四氫-3-甲基-8-喹啉基)磺醯基]氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸鹽;反式-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-(甲硫基)-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸鹽半水合物;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-穀氨醯胺醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸鹽;[2R-[1(S＊)，2α，4β)]-N-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-1-[4-羥基-3-[(2-萘磺醯基)氨基]-1，2-二氧代丁基]-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-絲氨醯基]-L-脯氨醯胺或其鹽，或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-絲氨醯基]-D-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;(2R-反式)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸鹽水合物;[2R-[1(S＊)2α，4β]]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-4-甲基-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸鹽水合物;[1(S)]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1，2，3，4-四氫-2-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-3-異喹啉甲醯胺，異構體A，或其鹽或其三氟乙酸鹽，水合物;[1(S)]-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1，2，3，4-四氫-2-[3-羥基-2-[(2-萘磺醯基)氨基]-1-氧代丙基]-3-異喹啉甲醯胺，異構體B，或其鹽或其三氟乙酸鹽，水合物;(4S＊)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-羥基-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-絲氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;(4S＊)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲氧基-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-絲氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽(2S-反式)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-穀氨醯胺醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-蘇氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-L-別蘇氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;(S)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-(甲硫基)-1-[N-(2-萘磺醯基)甘氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;(R)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-(甲硫基)-1-[N-(2-萘磺醯基)甘氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[[(2-萘磺醯基)氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-色氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;(2S-反式)-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-4-甲基-1-[[[(3-甲基-8-喹啉基)磺醯基]氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[[(8-喹啉基磺醯基)氨基]乙醯基]-2-哌啶甲醯胺，或其鹽或其三氟乙酸鹽;N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(2-萘磺醯基)-D-α-穀氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽;或N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[N-(甲磺醯基)-D-苯丙氨醯基]-L-脯氨醯胺，或其鹽或其三氟乙酸(1∶1)鹽。
13.抑制或預防血栓形成的方法，它包括對需要治療的病人給予治療有效量的按權利要求1所定義的化合物。
14.亞磺醯氨基雜環化合物或含亞磺醯氨基雜環化合物的藥用組合物在抑制或預防血栓方面的用途，它包括使用按權利要求1或權利要求8所定義的化合物。
全文摘要
本發明提供具有如下所示結構的亞磺醯氨基雜環的凝血酶抑制劑，包括其所有的立體異構體及其鹽，式中n、G、R、R
文檔編號C07K5/00GK1109468SQ9410373
公開日1995年10月4日 申請日期1994年3月31日 優先權日1994年3月31日
發明者S·D·金波爾, J·達斯, W·F·劉 申請人:布里斯托-邁爾斯斯奎布公司