一種抑制近視的方法及製備藥物的應用與流程
2023-04-28 19:06:41 4
本發明具體涉及一種抑制近視的方法及製備藥物的應用。
背景技術：
人類近視普遍表現為眼軸的過度延長，是為了取得清晰視網膜成像造成眼軸過度延長而引起的屈光不正。眼軸延長主要表現為後極部的延展。通過動物實驗研究發現，小雞、樹鼩、猴子、豚鼠等的近視動物模型中均發現鞏膜變薄和後極部鞏膜擴張等病理學改變。以上證據提示，在近視發生發展過程中鞏膜組織發生了重塑。
鞏膜由細胞外基質和和分泌基質的成纖維細胞組成。哺乳動物近視模型研究發現近視眼鞏膜病理改變主要是由於膠原數量的改變，包括膠原合成減少和降解增加。鞏膜膠原的異常重塑將會改變鞏膜的生化性質，使其變薄，繼而使鞏膜蠕變率增加、抗張能力降低，變薄的鞏膜不能承受正常眼內壓從而促使眼軸延長，形成近視。因此，鞏膜是近視發生發展的一個重要靶點。
技術實現要素：
為了解決現有技術的不足，本發明在單細胞轉錄組分析發現在肌成纖維細胞中異常激活了與組織缺氧相關的eif2α和nrf2等通路，提示組織缺氧可能在鞏膜細胞外基質重塑中起重要作用。我們進一步研究發現，近視誘導時可特異性引起鞏膜缺氧誘導因子1α（hif1α）表達上調，並在近視恢復期回復正常，提示近視發生時鞏膜組織出現缺氧狀態，而缺氧也誘導近視形成的一個關鍵，本發明的提供了一種抑制近視的方法及製備藥物的應用，通過抑制hif-1α的表達抑制眼內缺氧的作用對近視進行幹預，找到一種抑制近視的方法。
本發明採用的技術解決方案是：一種抑制近視的方法，通過抑制眼內鞏膜組織缺氧抑制近視。
所述的方法包括：通過抑制鞏膜缺氧誘導因子-1α（hif-1α）的表達起到抑制眼內鞏膜組織缺氧從而抑制近視。
鞏膜缺氧誘導因子-1α的抑制劑在製備抑制近視藥物上的應用。
所述的鞏膜缺氧誘導因子-1α的抑制劑為紅景天苷或芒柄花黃素。
紅景天苷或芒柄花黃素在製備抑制眼內鞏膜組織缺氧藥物上的應用。
本發明的有益效果是：本發明提供了了一種抑制近視的方法及製備藥物的應用，通過抑制眼內hif-1α的表達起到抗缺氧作用而抑制近視，通過抑制眼內hif-1α的作用起到抗缺氧的作用，可以有效地延緩、抑制近視，本發明利用hif-1α抑制劑紅景天苷和芒柄花黃素抑制hif-1α活性起到抗缺氧作用，可明顯起到延緩近視的作用。
附圖說明
圖1是正常對照眼、形覺剝奪1周實驗眼和對側眼、形覺剝奪1周恢復2天實驗眼和對側眼鞏膜hif-1α蛋白表達量。
圖2是紅景天苷（sds）注射實驗眼和對側眼屈光度差值圖。
圖3是紅景天苷（sds）注射實驗眼和對側眼玻璃體腔深度差值圖。
圖4是紅景天苷（sds）注射實驗眼和對側眼眼軸長度差值圖。
圖5是芒柄花黃素（fmn）注射實驗眼和對側眼屈光度差值圖。
圖6是芒柄花黃素（fmn）注射實驗眼和對側眼眼軸長度差值圖。
圖7是紅景天苷（sds）注射後鞏膜hif-1α和膠原表達改變。
圖8是芒柄花黃素（fmn）注射後鞏膜hif-1α和膠原表達改變。
圖中，「差值」指實驗眼與對側眼屈光度或眼軸參數的差值；紅景天苷注射溶劑組和給藥組之間比較採用重複測量的雙因素方差分析：「*」表示p<0.05，「**」表示p<0.01，「***」表示p<0.001。芒柄花黃素注射溶劑組和給藥組之間比較採用單因素方差分析：「*」表示p<0.05。
具體實施方式
本實驗採用的實驗動物均為為3周齡英國種短毛三色豚鼠。採用面罩法作為單眼形覺剝奪（fd）近視模型。近視眼鞏膜hif-1α表達實驗將動物隨機分為3組：正常對照組，fd1周組，fd1周恢復2天組。模型構建結束後取鞏膜，westernblot檢測hif-1α表達水平，說明鞏膜存在缺氧；而恢復期hif-1α表達恢復正常水平，說明缺氧是和近視存在密切相關。
給藥實驗中對形覺剝奪眼給予hif-1α抑制劑紅景天苷和芒柄花黃素球旁註射，從而抑制眼內hif-1α活性。紅景天苷注射實驗中動物隨機分為3組：形覺剝奪+溶劑對照組（fd+0.9%生理鹽水(ns)），形覺剝奪+低濃度藥物組（fd+sds1μg）,形覺剝奪+高濃度藥物組（fd+sds10μg）。芒柄花黃素注射實驗中動物隨機分為3組：形覺剝奪+溶劑對照組（fd+dmso），形覺剝奪+低濃度藥物組（fd+fmn0.5μg）,形覺剝奪+高濃度藥物組（fd+fmn5μg）。每天上午9點進行球旁註射藥物，連續注射4周，對側眼不做處理。分別於實驗前、給藥2周、給藥4周用紅外偏心攝影驗光儀（eir）測量屈光度、a超（11mhz）測量玻璃體腔深度和眼軸長度等眼軸參數。給藥結束後取鞏膜，westernblot檢測hif-1α和ⅰ型膠原表達水平。
近視眼鞏膜hif-1α檢測發現fd1周實驗眼（fdt）hif-1α表達水平較其對側眼（fdf）明顯升高，fd1周恢復2天後（rc），hif-1α表達雙眼間的差異消失。提示近視發生時鞏膜組織出現缺氧狀態，缺氧可能參與調控近視發生發展。
比較實驗前後測量參數，發現給藥組的形覺剝奪眼，屈光近視程度和玻璃體腔及眼軸延長程度均小於形覺剝奪溶劑組，和溶劑對照組比較具有統計學意義。因此，球旁註射hif-1α抑制劑紅景天苷和芒柄花黃素抑制hif-1α活性的作用可以抑制豚鼠形覺剝奪性近視的形成。
給藥後檢測hif-1α和ⅰ型膠原表達水平，發現球旁註射hif-1α抑制劑紅景天苷和芒柄花黃素後hif-1α表達上調被抑制，ⅰ型膠原表達下調被抑制。因此，球旁註射hif-1α抑制劑紅景天苷和芒柄花黃素可調控鞏膜ⅰ型膠原表達。
由圖1可知，形覺剝奪1周後，剝奪眼鞏膜對側眼相比hif-1α表達明顯上調，而形覺剝奪恢復兩天組雙眼hif-1α表達無差異，說明近視發生時鞏膜組織處於缺氧狀態。
由圖2可知，實驗4周後，形覺剝奪注射紅景天苷與形覺剝奪注射溶劑組相比近視形成量明顯減少，說明hif-1α抑制劑紅景天苷能抑制形覺剝奪性近視的進展。
由圖3可知，實驗4周後，注射紅景天苷組玻璃體腔延長與溶劑組相比相對較小，說明hif-1α抑制劑紅景天苷能抑制形覺剝奪玻璃體腔的延長。
由圖4可知，實驗4周後，注射紅景天苷組眼軸延長與溶劑組相比相對較小，說明hif-1α抑制劑紅景天苷能抑制形覺剝奪眼軸的延長。
由圖5可知，實驗4周後，形覺剝奪注射芒柄花黃素與形覺剝奪注射溶劑組相比近視形成量明顯減少，說明hif-1α抑制劑芒柄花黃素能抑制形覺剝奪性近視的進展。
由圖6可知，實驗4周後，注射芒柄花黃素組眼軸延長與溶劑組相比相對較小，說明hif-1α抑制劑芒柄花黃素能抑制形覺剝奪眼軸的延長。
由圖7可知，紅景天苷注射後,fdm眼鞏膜hif-1α上調被抑制，膠原表達下調被抑制。說明hif-1α抑制劑紅景天苷可能通過調控鞏膜ⅰ型膠原抑制近視進展。
由圖8可知，芒柄花黃素注射後，fdm眼鞏膜hif-1α上調被抑制，膠原表達下調被抑制。說明hif-1α抑制劑芒柄花黃素可能通過調控鞏膜ⅰ型膠原抑制近視進展。
上述實驗，證明近視發生時鞏膜組織處於缺氧狀態，利用hif-1α抑制劑紅景天苷和芒柄花黃素抑制hif-1α活性起到抗缺氧作用，可明顯起到延緩近視的作用。紅景天苷和芒柄花黃素對近視的抑制作用可能通過調控鞏膜ⅰ型膠原實現。
以上所述僅是本發明的優選實施方式，本發明的保護範圍並不僅局限於上述實施例，凡屬於本發明思路下的技術方案均屬於本發明的保護範圍。應當指出，對於本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理前提下的若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護範圍。