真菌葡聚糖檢測鱟試劑盒的製作方法
2023-04-28 16:59:01
專利名稱：真菌葡聚糖檢測鱟試劑盒的製作方法
技術領域：
本實用新型公開一種真菌葡聚糖檢測鱟試劑盒，按國際專利分類表(IPC)劃分屬於檢測試劑盒製造技術領域，尤其是涉及一種檢測血漿真菌(1，3) β -D葡聚糖水平的檢測試齊U盒。
背景技術：
近年來由於抗生素和免疫抑制劑的廣泛應用，真菌感染病症逐年增多。侵襲性真菌感染對患者的健康與生命構成嚴重威脅。由致病性真菌所引起的人體侵襲性感染，如侵及到皮膚深層和內臟，如肺、黏膜、肌肉、腦、消化道等器官，危害性很大。目前，侵襲性真菌感染已成為免疫功能低下患者發病和死亡最常見的原因。目前作為診斷真菌病的基本方法包括臨床表現，真菌學、免疫學和病理學。一般是通過真菌鏡檢、真菌培養、組織病理、生理生化等指標來診斷。最直接的方法是能夠證明真菌存在於組織中，或在滲出物中可分離培養。常用的微生物培養法的特點是耗時長，並由於大量廣譜抗生素的廣泛使用，其培養陽性率也是很低。(1，3)-β-D-葡聚糖為真菌細胞壁主要組成結構成分之一，所有真菌細胞壁結構均含有(1，3)-β-D-葡聚糖，因此，通過檢測細胞壁成分(1，3)-β-D-葡聚糖的含量，可以直接反應真菌的感染程度。鱟試劑中含有對(1，3)-β-D-葡聚糖敏感的G因子和會形成凝膠的凝固蛋白，目前還沒有專門檢測血漿真菌(1，3) β -D葡聚糖水平的檢測鱟試劑盒。
發明內容針對現有技術的不足，本實用新型提供了一種真菌葡聚糖檢測鱟試劑盒，檢測的檢品是病人血漿，通過檢測血漿中的(1，3) β-D葡聚糖水平，為臨床侵襲性真菌感染的早期診斷提供依據。為達到上述目的，本實用新型是通過以下技術方案實現的一種真菌葡聚糖檢測鱟試劑盒，是由檢品盒和標準品盒組成，其中檢品盒，其盒體內包含數支鱟試劑瓶和葡聚糖檢品處理液瓶，兩者的數量比例為 1:1 ；標準品盒，其盒體內包含鱟試劑瓶、葡聚糖檢品處理液瓶、(1，3)-β-D-葡聚糖標準品一支、溶解液瓶及空安瓿兩支以上。進一步，所述的標準品盒包含鱟試劑瓶八支、葡聚糖檢品處理液瓶四支、 (1,3)-β-D-葡聚糖標準品瓶一支、溶解液瓶三支及空安瓿四支，且上述的鱟試劑瓶、檢品處理液瓶、標準品瓶及溶解液瓶均為封口的無葡聚糖安瓿瓶。進一步，所述的鱟試劑瓶內鱟試劑裝量為0. Iml/支，(1，3)-β-D葡聚糖標準品瓶內灌裝有效價為l-20ng的(1，3) -β -D葡聚糖標準品，葡聚糖檢品處理液內處理液的裝量為0. 9ml/支，溶解液瓶內溶解液裝量為aiil/支。本實用新型試劑盒中的鱟試劑為只對(1，3)-β-D-葡聚糖起反應的鱟試劑。本試劑盒配有能排除血漿對鱟試驗幹擾的葡聚糖檢品處理液。血漿經葡聚糖檢品處理液稀釋10倍後，在70° C加熱10分鐘處理。處理後的血漿對鱟試驗的幹擾基本被排除。本試劑盒配套帶有恆溫裝置的光學檢測系統使用。檢品和鱟試劑在37°C反應，用軟體記錄反應液OD值的動態變化。根據反應液OD值上升到啟動OD所需要的啟動時間的對數與 (1，3)-β-D-葡聚糖濃度的對數成反比例線性關係的原理，用本實用新型中的標準品盒做標準曲線。再根據血漿和鱟試劑反應的OD值的動態變化情況從標準曲線上得出血漿中的 (1,3)-β-D-葡聚糖含量。本實用新型具有如下有益效果1、採用葡聚糖檢品處理液對血漿進行稀釋加熱處理，能有效地排除血漿中的幹擾因子對鱟試驗的幹擾，快速準確地檢測出血漿中(1，3) β-D葡聚糖水平。配套的鱟試劑為只對(1，3) β-D葡聚糖反應的試劑，特異性高；2、該試劑盒內的反應可在2小時內完成，比傳統的微生物培養法診斷侵襲性真菌感染縮短幾天時間；3、本實用新型檢測過程不受抗真菌藥物的影響。
圖1是本實用新型標準品盒示意圖；圖2是本實用新型檢品盒示意圖。
具體實施方式
以下結合附圖對本實用新型作進一步說明實施例請參閱圖1及圖2，本實用新型試劑盒由檢品盒1和標準品盒2組成，檢品盒1包含數支鱟試劑瓶11和葡聚糖檢品處理液瓶12，針對不同的測樣可以選擇不同數量的鱟試劑和內毒素檢品處理液，但兩者的數量比例為1 1 ；標準品盒2包含八支鱟試劑瓶 21、四支葡聚糖檢品處理液瓶22、一支(1，3)-β-D-葡聚糖標準品瓶23、三支溶解液M及四支空安瓿25。本試劑盒中的鱟試劑為只對(1，3)-β-D-葡聚糖起反應的鱟試劑。本實用新型，對葡聚糖特異反應的鱟試劑，裝量為0. Iml/支，灌裝於無葡聚糖安瓿中，冷凍乾燥封口 ；(1，3) β-D葡聚糖標準品，效價為l-20ng，灌裝於無葡聚糖安瓿中， 冷凍乾燥封口 ；葡聚糖檢品處理液，裝量為0.9ml/支，灌裝於無葡聚糖安瓿中，高壓滅菌； 溶解液，裝量為ani/支，灌裝於無葡聚糖安瓿中，高壓滅菌；無葡聚糖空安瓿，無菌狀態下封口。鱟試劑中含有對(1，3)- β -D-葡聚糖敏感的G因子和會形成凝膠的凝固蛋白。當葡聚糖激活G因子形成活化的G因子，會近一步激活凝固蛋白形成凝膠。在凝膠形成的過程中，反應液的OD值逐步升高。反應液OD達到某一預設值的反應時間是和反應液葡聚糖的濃度成反比例關係的。通過光學檢測儀器和軟體記錄反應液OD的變化，可以根據標準曲線計算出反應液中葡聚糖濃度。本實用新型的使用方法如下一.標準曲線的製作1.從標準品盒中取(1，3)-β-D-葡聚糖標準品一支加入適量溶解液溶解，在漩渦混合儀上劇烈震蕩2分鐘以上，按所標示效價用溶解液在空安瓿中逐步稀釋配製成 10000pg/ml, 1000pg/ml, 100pg/ml 的標準葡聚糖溶液；2.取 0. Iml 陰性對照液(即溶解液)及濃度為 10000pg/ml、1000pg/ml、100pg/ml 的標準葡聚糖溶液，分別加入到0. 9ml葡聚糖檢品處理液中，混勻。70°C保溫10分鐘，取出後立即放入冷水中冷卻；3.取處理後的陰性對照液、各濃度葡聚糖標準溶液混合液0.2 ml加入鱟試劑中， 輕輕振搖溶解鱟試劑後移取0. Iml反應混合液至除熱原96孔微板中，放置於光學檢測儀器中檢測。反應結束後，軟體自動進行標準曲線擬合；二.檢品檢測1.血漿採集用無熱原肝素鈉抗凝真空採血管採集靜脈血anl，進行3000rpm離心60s，分離得到富含血小板的血漿；2.檢測2. 1.取0. Iml血漿，加入到0. 9ml葡聚糖檢品處理液中，混勻後70°C保溫10分鐘，取出後立即放入冷水中冷卻；2. 2取經葡聚糖檢品處理液處理後的血漿混合液0. 2 ml加入鱟試劑中，溶解後移取0. Iml至除熱原96孔微板中，放置於光學檢測儀器中檢測，反應結束後自動計算出樣本 (1,3)-β-D-葡聚糖含量；三.檢測結果解釋正常體液中(1，3)-β-D-葡聚糖含量< 10pg/ml。檢測結果(1，3)_β _D_葡聚糖含量大於或等於10pg/ml表明該檢品有(1，3)-β-D-葡聚糖存在，病人有侵襲性真菌感染危險。檢測結果(1，3)-β-D-葡聚糖含量小於10pg/ml表明該檢品(1，3)-β-D-葡聚糖含量低，病人侵襲性真菌感染的可能性小。以上所記載，僅為利用本創作技術內容的實施例，任何熟悉本項技藝者運用本創作所做的修飾、變化，皆屬本創作主張的專利範圍，而不限於實施例所揭示者。
權利要求1.一種真菌葡聚糖檢測鱟試劑盒，其特徵在於是由檢品盒和標準品盒組成，其中 檢品盒，其盒體內包含數支鱟試劑瓶和葡聚糖檢品處理液瓶，兩者的數量比例為1:1 ; 標準品盒，其盒體內包含鱟試劑瓶、葡聚糖檢品處理液瓶、(1，3)-β-D-葡聚糖標準品一支、溶解液瓶及空安瓿兩支以上。
2.根據權利要求1所述的真菌葡聚糖檢測鱟試劑盒，其特徵在於所述的標準品盒包含鱟試劑瓶八支、葡聚糖檢品處理液瓶四支、(1，3)-β-D-葡聚糖標準品瓶一支、溶解液瓶三支及空安瓿四支，且上述的鱟試劑瓶、檢品處理液瓶、標準品瓶及溶解液瓶均為封口的無葡聚糖安瓿瓶。
3.根據權利要求1或2所述的真菌葡聚糖檢測鱟試劑盒，其特徵在於所述的鱟試劑瓶內鱟試劑裝量為0. Iml/支，(1，3)-β-D葡聚糖標準品瓶內灌裝有效價為l-20ng的 (1，3)-β-D葡聚糖標準品，葡聚糖檢品處理液內處理液的裝量為0. 9ml/支，溶解液瓶內溶解液裝量為anl/支。
專利摘要本實用新型公開一種真菌葡聚糖檢測鱟試劑盒，通過檢測血漿中的(1,3)β-D葡聚糖水平，為臨床侵襲性真菌感染的早期診斷提供依據。本實用新型檢測試劑盒由檢品盒和標準品盒組成，其中檢品盒包含的鱟試劑瓶和葡聚糖檢品處理液瓶的數量比例為1:1；標準品盒包含鱟試劑瓶八支、葡聚糖檢品處理液瓶四支、(1,3)β-D葡聚糖標準品瓶一支、溶解液瓶三支及空安瓿四支。本實用新型採用葡聚糖檢品處理液對血漿進行稀釋加熱處理，能有效地排除血漿中的幹擾因子對鱟試驗的幹擾，快速準確地檢測出血漿中(1,3)β-D葡聚糖水平，並不受抗真菌藥物的影響。
文檔編號G01N33/50GK202119774SQ201120213878
公開日2012年1月18日 申請日期2011年6月23日 優先權日2011年6月23日
發明者不公告發明人 申請人:廈門市鱟試劑實驗廠有限公司