一種苦菜總黃酮的提取方法及其應用的製作方法
2023-04-26 03:14:41 2
一種苦菜總黃酮的提取方法及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種苦菜總黃酮的提取方法及其應用，具體涉及一種利用超聲波輔助醇提的方法。其處理步驟：將新鮮的野生苦菜烘乾→用粉碎機粉碎→超聲波提取→合併濾液→減壓濃縮→萃取→乾燥。本發明工藝簡單，提取效率高，節約能源，成本低、適於大規模工業化生產。本發明所述的苦菜總黃酮提取物尤其適合在製備抗腫瘤產品中的應用，所述的產品包括藥品、保健品、食品。
【專利說明】一種苦菜總黃酮的提取方法及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種天然藥用植物中活性成分的提取技術，特別是涉及一種利用超聲波輔助醇提提取天然植物中有效成分的方法，以及所得苦菜總黃酮在製備抗腫瘤產品中的應用。
【背景技術】
[0002]癌症是一大類惡性腫瘤的統稱。癌細胞的特點是無限制、無止境地增生，使患者體內的營養物質被大量消耗；癌細胞釋放出多種毒素，使人體產生一系列症狀；癌細胞還可轉移到全身各處生長繁殖，導致人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發熱以及嚴重的臟器功能受損等等。與之相對的有良性腫瘤，良性腫瘤則容易清除乾淨，一般不轉移、不復發，對器官、組織只有擠壓和阻塞作用，但癌症(惡性腫瘤)還可破壞組織、器官的結構和功能，引起壞死出血合併感染，患者最終由於器官功能衰竭而死亡。到了科學高速發展的今天，我們有理由相信癌症並非不治之症。致力於自然醫學研究的醫學專家們研究發現:負離子對抑制癌細胞轉移有令人鼓舞的效果，重要的是利用自然因子負離子對癌症患者治療對機體無任何損害，沒有任何毒副作用。
[0003]癌症嚴重威脅著人類的生命，是當今世界上大多數國家的主要死因之一。據世界衛生組織統計，全世界每年死於癌症的患者約500萬，因此癌症的治療和預防任務十分艱巨。
[0004]生物總黃酮是指黃酮類化合物，是一大類天然產物，廣泛存在於植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃(醇)、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等。
[0005]近年來，由於自由基生命科學的進展，使具有很強的抗氧化和消除自由基作用的類黃酮受到空前的重視。類黃酮參與了磷酸與花生四烯酸的代謝、蛋白質的磷酸化、鈣離子的轉移、自由基的清除、抗氧化活力的增強、氧化還原作用、螯合作用和基因的表達。它們對健康的好處有:(1)抗炎症(2)抗過敏(3)抑制細菌(4)抑制寄生蟲(5)抑制病毒
[6]防治肝病(7)防治血管疾病(8)防治血管栓塞(9)防治心與腦血管疾病(10)抗腫瘤
(11)抗化學毒物等。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能時入脂肪組織，進而體現出如下功能:消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環、活化大腦及其他臟器細胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老。
[0006]苦菜是菊科的一年生的或兩年生的草本植物，別名山苦菜。主要分布在分布於中國北部、東部和南部等地區，生長於山地草坡，路邊以及田野裡，取材範圍很廣。苦菜，味:辛、苦，性寒。功效:清熱解毒，涼血，祛瘀止痛，可以用來治療腸癰、肺癰高熱、咳吐膿血、熱毒瘡疔、瘡癤痛腫、胸腹疼痛、闌尾炎、腸炎、痢疾、產後腹痛、痛經等。本實驗發明採用的是液-液-液三相萃取，由於生物體系的組分特性以及產物的不穩定性，使得在生物體系中使用傳統的液-液萃取過程存在很多不足之處，如選擇性差、步驟繁多、產品活性損失過大。由於液-液-液三相萃取體系可在一定程度上改善萃取效果，彌補液-液兩相萃取的不足。並且現在目前傳統植物提取方法設備昂貴，提取天然植物有效成分效率低，汙染大，成本高，提取過程較複雜，使得天然藥用植物的價值得不到很好的利用。
[0007]苦菜在人類生活中的應用並不是很廣泛，尤其在在抗腫瘤藥物中的應用更是很少見報導。
【發明內容】
[0008]為了擴大苦菜的應用範圍，擴大抗腫瘤產品的應用品種，本發明特別提供了一種苦菜總黃酮的提取方法和其在抗腫瘤產品中的應用。
[0009]為實現上述目的，苦菜總黃酮的提取方法採用如下製作步驟:
O以新鮮的野生苦菜為原料，清洗乾淨，烘乾，用粉碎機粉碎；
2)稱取一定量苦菜粉末於提取器中，向提取器中加入料液比為1:1-10、50%-70%的乙醇溶液，超聲提取時間為5(T90min，提取溫度為6(T75°C，超聲波提取頻率為20_80KHz ；
3)冷卻抽濾，濾渣利用超聲提取2次，合併三次濾液後，將其減壓濃縮，減壓濃縮至原體積的1/3-1/2，然後轉至分液漏鬥中用石油醚和乙酸乙酯的混合物進行萃取，取下層，回收試劑，冷凍乾燥得到苦菜總黃酮。
[0010]步驟2)中所述的濃縮液、石油醚、乙酸乙酯體積比為1:2-5:2_6。
[0011]本發明的目的在於提供一種苦菜總黃酮在抗腫瘤方面的應用。
[0012]本發明製備的提取物在抗腫瘤作用上的藥理活性通過以下藥理實驗證明。
[0013]選用人肝癌(H22)或人大腸癌(HT-29)或艾氏腹水瘤(EAC)細胞系對數期細胞，用0.5%的胰蛋白酶分解細胞後，用含10%胎牛血清的1640培養液中配成單個細胞懸浮液，接種到96孔培養板中，每孔100 μ L，置37°C，5%C02的條件下培養24小時，倒置顯微鏡下觀察。(2)設置實驗組和對照組，實驗組換新的含不同濃度苦菜總黃酮培養基(苦菜總黃酮提取物的濃度為1.82,0.96,0.51,0.08,0.0020mg/ml)，對照組則換含等體積溶劑的培養基，每組設3組平行孔，置37°C，5%C02的條件下培養2?4天，離心(1000轉，5min),棄去上清液。
(3)每孔加入100 μ L新鮮配置的含0.15mg/ml MTT的無血清培養基。37°C繼續培養3h。小心棄去上清液，並加入200 μ LDMS0，用微型超聲振蕩器混勻後，在酶標儀上以實驗波長為570nm測定光密度值。並計算不同藥劑量對腫瘤細胞的抑制率。結果見表I。
[0014]腫瘤細胞抑制率=(1-OD實驗/OD對照)*100%
表I
苦荽總黃Si的濃度 _編邋CH33) 人大麗埔編邋犮氏應水嫿編邋 CMgtel)抻制聿(K)arr-29)押幸(K) (EAC)抑胡聿(1K)
1Λ267J0370.0369_56
0_9672*574J257134
0:5170.4169J23703t
OJOt40J2345j6350J3S
0002010.7515J231712
以上實驗數據表明苦菜總黃酮對人肝癌(H22)、人大腸癌(HT-29)、艾氏腹水瘤(EAC)細胞具有明顯的抑制作用。
[0015]本發明所製備的苦菜總黃酮提取物與一種或多種藥學上可接受的固體或液體賦形劑或輔劑結合，製成適合人或動物適合的劑型。
[0016]下面將結合【具體實施方式】進一步說明本發明，但本發明要求保護的範圍並不局限於下列實施方式。
[0017]【具體實施方式】:
實施例1:
苦菜總黃酮的提取方法
以新鮮野生苦菜為原料，清洗乾淨，烘乾，將其粉碎，取2kg苦菜粉末置於提取設備中，並加入料液比為1:1、50%的乙醇，超聲提取時間為50min，提取溫度為60°C，超聲波提取功率為20KHz，冷卻抽濾，濾渣超聲提取2次，合併3次濾液，減壓濃縮至原體積的1/3，並將其移至分液漏鬥中，加入濃縮液、石油醚、乙酸乙酯體積比為1:2:2進行萃取，取下層，回收試齊U，冷凍乾燥得到苦菜總黃酮。經UV檢測，得到提取物中總黃酮的含量為75.05%。
[0018]實施例2:
苦菜總黃酮的提取方法
以新鮮野生苦菜為原料，清洗乾淨，烘乾，將其粉碎，取2kg苦菜粉末置於提取設備中，並加入料液比為1:5、65%的乙醇，超聲提取時間為70min，提取溫度為70°C，超聲波提取功率為65KHz，冷卻抽濾，濾渣超聲提取2次，合併3次濾液，減壓濃縮至原體積的1/3，並將其移至分液漏鬥中，加入濃縮液、石油醚、乙酸乙酯體積比為1:3:3進行萃取，取下層，回收試齊U，冷凍乾燥得到苦菜總黃酮。經UV檢測，得到提取物中總黃酮的含量為75.05%。
[0019]實施例3:
苦菜總黃酮的提取方法
以新鮮野生苦菜為原料，清洗乾淨，烘乾，將其粉碎，取2kg苦菜粉末置於提取設備中，並加入料液比為1:10、70%的乙醇，超聲提取時間為90min，提取溫度為75°C，超聲波提取功率為80KHz，冷卻抽濾，濾渣超聲提取2次，合併3次濾液，減壓濃縮至原體積的1/2，並將其移至分液漏鬥中，加入濃縮液、石油醚、乙酸乙酯體積比為1:5:6進行萃取，取下層，回收試齊U，冷凍乾燥得到苦菜總黃酮。經UV檢測，得到提取物中總黃酮的含量為75.05%。
[0020]實施例4:
苦菜總黃酮製成注射劑
在實施例1、2、3中製得的苦菜總黃酮活性成分中加入乙醇或它們的混合物作為溶劑，並加入泊洛沙姆作為增溶劑，醋酸鹽作為PH調劑劑，氯化鈉作為滲透壓調節劑即可製成注射劑。
[0021]實施例5:
苦菜總黃酮製成片劑
在實施例1、2、3中製得的苦菜總黃酮總加入澱粉、蜂蜜、乙醇、幹澱粉、滑石粉、聚乙二醇即可製成片劑。
【權利要求】
1.一種苦菜總黃酮的提取方法，其特徵在於:以新鮮野生苦菜為原料，清洗乾淨，烘乾，用粉碎機粉碎，過2(Γ60目篩，將苦菜粉末放於提取裝置中，然後按照一定的料液比加入乙醇溶液，超聲提取；冷卻抽濾，濾渣重複提取2次；合併三次濾液後，減壓濃縮至原體積的1/3-1/2，濃縮液轉至分液漏鬥中用石油醚和乙酸乙酯的混合溶劑進行萃取，取下層，回收試劑，冷凍乾燥得到苦菜總黃酮。
2.根據權利要求1所述的一種苦菜總黃酮的提取方法，其特徵在於:所述的料液比為1:1-10。
3.根據權利要求1所述的一種苦菜總黃酮的提取方法，其特徵在於:所述的乙醇濃度為50%-70%，超聲提取時間為50-90min，提取溫度為60_75°C。
4.根據權利要求1所述的一種苦菜總黃酮的提取方法，其特徵在於:所述的超聲波提取頻率為20-80KHz。
5.根據權利要求1所述的一種苦菜總黃酮的提取方法，其特徵在於:所述的濃縮液、石油醚、乙酸乙酯體積比為1:2-5:2-6。
6.根據權利要求Γ5所述方法製備的苦菜總黃酮提取物在製備抗腫瘤產品中的應用。
7.根據權利要求6所述的抗腫瘤產品包括藥品、保健品、食品。
【文檔編號】A61P35/00GK104173403SQ201410445547
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年9月4日 優先權日:2014年9月4日
【發明者】張金芳, 楊存 申請人:南京標科生物科技有限公司