一種二肽Fmoc-Ser（tBu）-Cys-OH的合成方法

2023-04-25 14:18:56

一種二肽Fmoc-Ser（tBu）-Cys-OH的合成方法
【專利摘要】本發明公開了一種合成Fmoc-Ser（tBu）-Cys-OH二肽模塊的新方法，包括以下步驟：L-絲氨酸、甲醇和二氯亞碸為反應物，反應得L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽；進一步反應得（S)-O-叔丁基絲氨酸甲酯對甲苯磺酸鹽；（S)-O-叔丁基絲氨酸甲酯皂化得到（S)-O-叔丁基絲氨酸，然後同芴甲氧羰醯氯或者芴甲氧羰醯琥珀醯亞胺反應得到（S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸；（S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳醯二亞胺鹽酸鹽做縮合劑同L-半胱氨酸反應得到（S)-N-(（S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基羰基)半胱氨酸；本發明步驟簡單，處理方便，生產周期短，成本低廉。
【專利說明】—種二肽 Fmoc-Ser (tBu) -Cys-OH 的合成方法

【技術領域】
[0001]本發明屬於生物和醫學【技術領域】,涉及一種Fmoc-Ser (tBu)-Cys-OH的合成方法，獲得的Fmoc-Ser (tBu) -Cys-OH是非常重要的多肽合成的原料。

【背景技術】
[0002]多肽合成是一個重複添加胺基酸的過程，固相合成順序一般從C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。從1963年固相多肽合成以來，經過不斷的改進和完善，到今天固相法已成為多肽和蛋白質合成中的一個常用技術，表現出了經典液相合成法無法比擬的優點，從而大大的減輕了每步產品提純的難度。Fmoc-Ser (tBu)-Cys-OH就是固相合成中的一個基本的二肽模塊。
[0003]


【發明內容】

[0004]要解決的技術問題:提供了 Fmoc-Ser (tBu) -Cys-OH 二肽模塊的合成方法，為固相合成多肽序列奠定了模炔基礎。
[0005]本發明技術方案為:一種Fmoc-Ser (tBu) -Cys-OH的合成方法,包括以下步驟:
(1)在0°C條件下，把二氯亞碸滴入無水甲醇中，然後加入絲氨酸，室溫反應得到L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽；
(2)絲氨酸甲酯鹽酸鹽在二氯甲烷為溶劑直接在對價苯磺酸催化下通入異丁烯反應48-96小時得到O-叔丁基-L-絲氨酸甲酯對甲苯磺酸鹽；
(3)0-叔丁基-L-絲氨酸甲酯對甲苯磺酸鹽直接在10%的碳酸鈉溶液中皂化20-25小時，然後加入芴甲氧羰醯氯或者芴甲氧羰醯琥珀醯亞胺的I，4- 二氧六環溶液反應20-25小時得到N-荷甲氧擬基-O-叔丁基-L-絲氨酸；
(4)N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-絲氨酸在N-羥基琥珀醯亞胺和縮合劑1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳醯二亞胺鹽酸鹽的四氫呋喃溶液中和L-半胱氨酸反應得到
(5)-N-((S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基羰基)半胱氨酸白色固體。
[0006] 所述的合成方法的反應式如下:

【權利要求】
1.一種二肽Fmoc-Ser (tBu)-Cys-OH的合成方法,其特徵在於所述的合成方法,包括以下步驟: 步驟I)絲氨酸在無水甲醇溶劑中加入二氯亞碸，反應15-36小時後，旋蒸出溶劑，再用乙醚或甲基叔丁基醚打漿得到L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽白色固體； 步驟2) L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽在二氧六環或者二氯甲烷為溶劑直接在對價苯磺酸催化下通入異丁烯反應48-96小時得到O-叔丁基-L-絲氨酸甲酯白色固體； 步驟3)0-叔丁基-L-絲氨酸甲酯先在10%的碳酸鈉中皂化20-25小時，然後同芴甲氧羰醯氯或者芴甲氧羰醯琥珀醯亞胺反應20-25小時得到(S) -N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸白色固體； 步驟4) (S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸在N-羥基琥珀醯亞胺和縮合劑1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳醯二亞胺鹽酸鹽的四氫呋喃溶液中和L-半胱氨酸反應得到(S)-N-( (S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基羰基)半胱氨酸白色固體； 所述的合成方法的反應式如下: O
2.根據權利要求1所述的一種二肽Fmoc-Ser(tBu)-Cys-OH的合成方法,其特徵在於所述的合成方法，包括以下步驟: 步驟I)在5升的圓底燒瓶中，加入4升無水甲醇，將溶液冷卻至-5°C後在I小時內滴加310毫升氯化亞碸，滴完之後，(TC反應I小時，然後加入L-絲氨酸，加完之後升溫至室溫反應24h，TLC監控，茚三酮溶液顯色，36h後反應完成，旋蒸出溶劑，加入3升甲基叔丁基醚打漿，然後過濾，乾燥後得到577克L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽白色固體；步驟2)在20升的高壓釜中加入500克L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽、1.23Kg對價苯磺酸和15升的二氯甲烷，密閉冷卻至_7°C後，通入過量的異丁烯，然後升至室溫反應，TLC監控反應，茚三酮顯色，72小時後，反應完成，旋蒸出大量的二氯甲烷，然後加入10升的甲基叔丁基醚打漿，然後過濾，乾燥後得到800g (S)-O-叔丁基絲氨酸甲酯白色固體； 步驟3)在50升的玻璃反應釜中，加入800克(S)-O-叔丁基絲氨酸甲酯和16升的10%的碳酸鈉溶液，室溫皂化24小時，然後冷卻至_5°C，將813克9-芴甲基-N-琥珀醯亞胺基碳酸酯溶解在8升I，4- 二氧六環中，將溶液I小時內滴入反應釜中，升溫至室溫，TCL監控，反應24小時，反應完成後，用5升甲基叔丁基醚萃取，然後分液，水相冷卻至0°C，濃鹽酸調PH至2-3，再用10升甲基叔丁基醚萃取，無水硫酸鈉乾燥後，脫溶得到900克(S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸白色固體； 步驟4)在20升的玻璃反應釜中，加入800克(S) -N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸、240克N-羥基琥珀醯亞胺和3.8升四氫呋喃，控制反應液溫度為20 V，將520克1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳醯二亞胺鹽酸鹽加入1.5升N，N- 二甲基甲醯胺和1.5升四氫呋喃的混合液中，攪拌均勻，然後I小時內滴加至20升的玻璃反應釜中，滴加完成後升溫至室溫反應6小時，TLC監控，原料反應完成後，降溫至-5°C ;將176克一水氫氧化鋰、118克碳酸鋰和700克L-半胱氨酸溶解在4.75升的冰水中，I小時內滴入20升的反應釜中，滴加完成後，30min內升溫至室溫，然後室溫反應1.5小時，TLC監控，反應完成後，用20%的硫酸調節pH值為2，然後加入3 X 2L乙酸乙酯萃取，萃取液用無水硫酸鈉乾燥，然後脫溶，重結晶提純得到830克(S)-N-( (S)-N-荷甲氧擬基-O-叔丁基擬基)半胱氨酸白色固體。
3.根據權利要求1所述的一種二肽Fmoc-Ser(tBu)-Cys-OH的合成方法,其特徵在於所述的合成方法步驟I)中反應時間為36小時。
4.根據權利要求1所 述的一種二肽Fmoc-Ser(tBu)-Cys-OH的合成方法,其特徵在於所述的合成方法步驟2)中反應時間為72小時，步驟3)的皂化時間為24h，反應時間為24小時。
5.根據權利要求1所述的一種二肽Fmoc-Ser(tBu)-Cys-OH的合成方法,其特徵在於所述的合成方法步驟3)的皂化時間為24h，反應時間為24小時。
【文檔編號】C07K5/062GK104163848SQ201410398112
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年8月14日 優先權日:2014年8月14日
【發明者】張冬冬 申請人:蘇州維泰生物技術有限公司