一種從杜仲葉快速純化桃葉珊瑚甙的方法
2023-04-25 23:26:31 1
專利名稱：一種從杜仲葉快速純化桃葉珊瑚甙的方法
技術領域：
本發明屬於天然產物加工領域，涉及了一種杜仲葉桃葉珊瑚甙的提取純化方法， 更具體地說是涉及了一種從杜仲葉中提取並純化高純度桃葉珊瑚甙的方法。
背景技術：
桃葉珊瑚甙是一種環烯醚萜甙類化合物，為白色粉末。由於C4去甲環烯醚萜甙結構不太穩定，桃葉珊瑚甙相對穩定性較差。桃葉珊瑚甙吸溼性不是很強，在潮溼的情況下很不穩定，容易變色，而乾燥品相對較穩定。光線對桃葉珊瑚甙的影響較小，而溫度、氧化劑的影響較大。鹼性物質對桃葉珊瑚甙的影響比酸性物質大得多。桃葉珊瑚甙的甙元及其多聚體具有抗菌作用，是一種抗菌素，其抗炎、抗菌性能與當藥苦甙相同。桃葉珊瑚甙本身不具抗病毒作用，但當它與葡萄糖甙酶一起預培養後會產生明顯的抗病毒作用。可刺激副交感神經中樞、加速尿酸轉移和排出，利尿作用明顯。能促進幹細胞再生，明顯抑制B型肝炎病毒D N A的複製。另外桃葉珊瑚甙具有鎮痛、清溼熱、 抗腫瘤等作用。桃葉珊瑚甙是杜仲中有效活性成分之一，杜仲皮、葉和種子中均含有此成分，種子中含量可高達19% 23%，是杜仲種子的苦味素物質之一。在杜仲皮和葉中桃葉珊瑚甙含量有較大區別，杜仲葉比杜仲皮含量高，由於環烯醚雙鍵性質活潑，甙易被酶和酸水解，故甙在鮮品和幹品中的含量差別也很大。溫度對桃葉珊瑚甙抗氧化活性的影響很大，桃葉珊瑚甙抗氧化活性保存率隨著加熱時間的延長而出現不同程度的下降趨勢，溫度愈高保存率下降愈快。在室溫條件下4h 內桃葉珊瑚甙是穩定的；在高溫條件下連續加熱處理8h，桃葉珊瑚甙抗氧化活性損失高達 70%。這可能因為桃葉珊瑚甙本身是熱敏性物質，高溫處理會使其發生氧化分解，產生黑色物質。100°C處理的桃葉珊瑚甙溶液在第I個小時內即已顏色變深。桃葉珊瑚甙在杜仲種子含量最高，由於杜仲種子產量少，另外杜仲種子目前主要用於熱榨提取杜仲油，雖有文獻報導從杜仲籽柏中提取桃葉珊瑚甙，必須採用冷榨或超臨界CO2提取杜仲油後得到的杜仲籽柏，才能用於提取桃葉珊瑚甙，但是會影響杜仲油原有風味。而且目前都是採用製備色譜法進行製備高純度桃葉珊瑚甙，嚴重影響了桃葉珊瑚甙的規模化生產。目前杜仲葉主要處理方法是採用陰乾或曬乾，對其桃葉珊瑚甙含量具有很大影響，在乾燥過程中桃葉珊瑚甙發生氧化分解，嚴重影響了桃葉珊瑚甙的收率。
發明內容
本發明的目的在於針對目前杜仲種子資源不足，嚴重影響了桃葉珊瑚甙的規模化生產，而採用乾燥過後杜仲葉桃葉珊瑚甙發生氧化分解造成收率低下，公開一種利用萃取、 結晶與重結晶方法從杜仲葉中規模化生產桃葉珊瑚甙，有效解決杜仲種子資源不足問題， 又能提高杜仲葉中桃葉珊瑚甙收率。因此，本發明提供一種從杜仲葉中快速純化桃葉珊瑚甙的方法，其具體步驟如下(I)將新鮮杜仲葉採用茶葉滾筒殺青機進行殺青2-3分鐘，立即進行絞碎；(2)將杜仲葉與80%乙醇溶液進行混合提取，加熱至40°C提取90min ；(3)過濾除渣後濾液中加入適量抗氧化劑在50°C進行真空濃縮至原有體積的 1/10-1/15 ；(4)將濃縮液用2倍體積的石油醚進行萃取，取水相；(5)將水相用KLFC-150大孔樹脂吸附，並用乙醇溶液進行洗脫，得到洗脫液；(6)將洗脫液再經濃縮至原有體積的1/3-1/8，室溫過夜結晶得到桃葉珊瑚甙粗品;(7)加入70%乙醇進行加熱溶解，然後加入水調節乙醇終濃度為30-40%，室溫過
夜再結晶，得桃葉珊瑚甙純品。在一個實施方案中，步驟2中所述加入80%乙醇溶液的量，按體積(V)/杜仲葉重量(kg)比為 2-4 I。在一個實施方案中，步驟3中所述過濾過程是紗布過濾、陶瓷膜過濾，其中，優選是三層紗布過濾2次、陶瓷膜過濾I次；加入適量抗氧化劑是抗壞血酸，濾液體積與加入抗壞血酸的重量比(V/g)為25-50 8。在一個實施方案中，步驟5中所述的乙醇溶液是用pH6. 5左右的水與乙醇進行配製，其濃度為50%的乙醇溶液。在一個實施方案中，步驟7的乙醇溶液的終濃度為35%。技術效果I、本發明方法中所用的原料、設備均為常見的普通原料、設備，避免了工業化生產過程中對於昂貴原材料、儀器的依賴，大大地降低了生產成本。2、杜仲葉產量高、價格低，來源方便，後續資源有保障。使用杜仲葉作為杜仲皮、杜仲籽的替代物，既大大提高了杜仲葉的利用效率，提高杜仲葉的附加值，又擺脫了對於杜仲籽的依賴，完全緩解了市場對杜仲籽的大量需求，同時又能對廢棄杜仲葉充分利用。3、本發明方法操作簡單，僅使用萃取、樹脂層析過濾、結晶再結晶技術，也不需要精密儀器或自動化設備，可在杜仲資源豐富的鄉鎮企業進行生產，這極大地降低了桃葉珊瑚甙的生產成本，簡化了生產過程，確保規模化生產桃葉珊瑚甙。4、本發明所用的試劑均為無毒、廉價、量產的化學試劑，整個過程中可利用成熟的試劑回收的常規技術，這極大地降低了向環境排放廢棄物的風險。
圖I :從杜仲葉中提取桃葉珊瑚甙的純度HPLC曲線圖，其中縱坐標表示峰面積，橫坐標表示分離時間。圖2 :桃葉珊瑚甙標準品的HPLC曲線圖，其中縱坐標表示峰面積，橫坐標表示分離時間。
具體實施例方式下面結合附圖，用本發明的實施實例來進一步說明本發明的實質性內容，但並不以此限制本發明。實施例I將鮮杜仲葉採用茶葉滾筒殺青機(嶽陽市農業機械化研究所生產茶葉滾筒殺青機6CST-80)進行殺青並絞碎，稱取IOOkg杜仲葉加入80%乙醇溶液400L，加熱至40°C提取 90min後；三層紗布過濾2次、陶瓷膜過濾I次得濾液，加入IOOg抗壞血酸在50°C進行真空濃縮至40L ;將濃縮液用80L石油醚進行萃取，取水相；上KLFC-150大孔樹脂柱子吸附，並用50%乙醇溶液進行洗脫，得到洗脫液80L ;將洗脫液再經濃縮至15L，室溫過夜結晶得到桃葉珊瑚甙粗品I. 76kg ;加入70%乙醇溶液2. 5L進行攪拌加熱溶解，然後加入水調節乙醇終濃度為35%，室溫過夜再結晶，得桃葉珊瑚甙純品O. 81kg。檢測設備為AgilentllOO高效液相色譜儀，色譜柱為Hypersil ODS(150mmX4. 6mm，5l·!)，檢測條件流動相為甲醇1%醋酸水溶液(88 12，￥八)、檢測波長為21011111、流速0.5111171^11、柱溫301、進樣量為2(^1^ 檢測結晶樣品的含量為98. 82%的桃葉珊瑚甙，檢測結果如圖I所示。實施例2將鮮杜仲葉採用茶葉滾筒殺青機(嶽陽市農業機械化研究所生產茶葉滾筒殺青機6CST-80)進行殺青並絞碎，稱取200kg杜仲葉加入80%乙醇溶液800L，加熱至40°C提取90min後；三層紗布過濾2次、陶瓷膜過濾I次得濾液，加入120g抗壞血酸在50°C進行真空濃縮至55L ;將濃縮液用IlOL石油醚進行萃取，取水相；iKLFC-150大孔樹脂吸附，並用50%乙醇溶液進行洗脫，得到洗脫液120L ;將洗脫液再經濃縮至25L，室溫過夜結晶得到桃葉珊瑚甙粗品3. 27kg ;加入70%乙醇溶液5L進行攪拌加熱溶解，然後加入水調節乙醇終濃度為35%，室溫過夜再結晶，得桃葉珊瑚甙純品I. 52kg，並按實例I進行檢測，樣品中桃葉珊瑚甙的含量為99. 04%。實施例3將鮮杜仲葉採用茶葉滾筒殺青機(嶽陽市農業機械化研究所生產茶葉滾筒殺青機6CST-80)進行殺青並絞碎，稱取300kg杜仲葉加入80%乙醇溶液1000L，加熱至40°C提取90min後；三層紗布過濾2次、陶瓷膜過濾I次得濾液，加入120g抗壞血酸在50°C進行真空濃縮至70L ;將濃縮液用140L石油醚進行萃取，取水相；iKLFC-150大孔樹脂吸附，並用50%乙醇溶液進行洗脫，得到洗脫液140L ;將洗脫液再經濃縮至30L，室溫過夜結晶得到桃葉珊瑚甙粗品5. 38kg ;加入70%乙醇溶液6L進行攪拌加熱溶解，然後加入水調節乙醇終濃度為35%，室溫過夜再結晶，得桃葉珊瑚甙純品2. 47kg，並按實例I進行檢測，樣品中桃葉珊瑚甙的含量為98. 79%。
權利要求
1.本發明提供一種從杜仲葉中快速純化桃葉珊瑚甙的方法，步驟包括(1)將新鮮杜仲葉採用茶葉滾筒殺青機進行殺青2—3分鐘，立即進行絞碎；(2)將杜仲葉與80%乙醇溶液進行混合提取，加熱至40°C提取90min；(3)過濾除渣後濾液中加入適量抗氧化劑在50°C進行真空濃縮至原有體積的 1/10-1/15 ；(4)將濃縮液用2倍體積的石油醚進行萃取，取水相；(5)將水相用KLFC- 150大孔樹脂吸附，並用乙醇溶液進行洗脫，得到洗脫液；(6)將洗脫液再經濃縮至原有體積的1/3-1/8，室溫過夜結晶得到桃葉珊瑚甙粗品；(7)加入70%乙醇進行加熱溶解，然後加入水調節乙醇終濃度為30-40%，室溫過夜再結晶，得桃葉珊瑚甙純品。
2.根據權利要求I的方法，其中步驟2中所述加入80%乙醇溶液的量，按體積(V)/杜仲葉重量(kg)比為2-4:1。
3.根據權利要求2的方法，其中步驟3中所述過濾過程是紗布過濾、陶瓷膜過濾，其中， 優選是三層紗布過濾2次、陶瓷膜過濾I次；加入適量抗氧化劑是抗壞血酸，濾液體積與加入抗壞血酸的重量比(V/g)為25— 50 :8。
4.根據權利要求3的方法，其中步驟5中乙醇溶液是用pH6.5左右的水與乙醇進行配製，其濃度為50%的乙醇溶液。
5.根據權利要求3的方法，其中步驟7中乙醇溶液的終濃度為35%。
全文摘要
本發明提供了一種從中提取高純度桃葉珊瑚甙的方法，大大地提高桃葉珊瑚甙得率和純度。提出了一整套從杜仲葉分離提取得到高純度的桃葉珊瑚甙，採用殺青處理新鮮杜仲葉，萃取，大孔吸附樹脂層析，濃縮，結晶，得到桃葉珊瑚甙純品。整個分離過程中對環境條件要求不高，分離時間較短，純度高。分離材料易得便宜，分離操作過程簡單，易控制，採用結晶和重結晶，純化效率高，降低對環境汙染的風險，同時又節約了資源。
文檔編號C07H1/08GK102603829SQ20121004103
公開日2012年7月25日 申請日期2012年2月22日 優先權日2012年2月22日
發明者向華, 唐忠海 申請人:向華