胰島素澱粉樣多肽抑制劑及其製備方法、應用的製作方法
2023-05-10 19:32:36 1
胰島素澱粉樣多肽抑制劑及其製備方法、應用的製作方法
【專利摘要】胰島素澱粉樣多肽抑制劑及其製備方法、應用，本發明涉及藥物領域，具體涉及抑制劑2化合物，能治療糖尿病。所述的抑制劑2序列為VLSVAALNHLDKATPIESH。所述抑制劑2的製備方法，採用Fmoc保護的固相合成技術製備，Rink醯氨MBHA樹脂和Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體，6-氯-1-羥基苯並三氮唑和N,N-二異丙基碳二亞胺為縮合劑，三氟乙酸為切割試劑。所述抑制劑2在預防或治療糖尿病及糖尿病併發症中的應用。所述的糖尿病併發症是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經性病變。抑制劑2可通過多種給藥方式預防或治療糖尿病及糖尿病併發症，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。本發明中的胰島澱粉樣多肽抑制劑2，可以靶向抑制胰島澱粉樣多肽形成，達到預防或治療糖尿病的效果。
【專利說明】胰島素澱粉樣多肽抑制劑及其製備方法、應用
【技術領域】：
[0001] 本發明涉及藥物領域，具體涉及用於治療糖尿病的多肽化合物。
【背景技術】
[0002] 糖尿病是一組以高血糖為特徵的代謝性疾病，是由於胰島素不足或胰島素的細胞 代謝作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白質及脂質代謝紊亂的一種綜合症。近年來，糖尿病患者 的人數逐漸增多，分為I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人數佔糖尿病 總人數的85-90%，嚴重威脅著病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引 起很多併發症，例如：糖尿病腎病、視網膜病變、高血壓等。
[0003] 近期的研究表明在2型糖尿病的病發過程中，不斷增長的β-細胞凋亡是導致 β-細胞衰退和高血糖症發生的主要原因。目前，大多數患者通過口服降糖藥物來幫助控制 體內血糖，但是卻無法提高β-細胞的活性，促進胰島素的分泌，很多患者最終仍然要使用 胰島素治療。
[0004] 胰島澱粉樣變性與糖尿病之間存在聯繫。胰島澱粉樣多肽的纖維絲形成會通過細 胞凋亡導致β-細胞死亡，澱粉樣沉積可能直接會殺死細胞。抑制胰島澱粉樣多肽形成，可 以減少胰島澱粉樣多肽對β-細胞的細胞毒性，促進胰島素的分泌。因此，胰島澱粉樣多肽 抑制認為是治療糖尿病的靶點。儘管如此，並沒有成熟開發的胰島澱粉樣多肽抑制劑問世， 用於預防或治療糖尿病。
【發明內容】
：
[0005] 本發明目的是針對現有降血糖的藥物的特點，設計一種抑制劑2,能有效治療糖尿 病。
[0006] 技術方案
[0007] 一種胰島澱粉樣多肽抑制劑2,其序列為VLSVAALNHLDKATPIESH。所述抑制劑2的 製備方法，其特徵在於：採用Fmoc保護的固相合成技術製備，採用Fmoc保護的固相合成技 術製備，Rink醯氨MBHA樹脂和Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體，6-氯-1-羥基苯並三氮唑和 N，N-二異丙基碳二亞胺為縮合劑，三氟乙酸為切割試劑。所述抑制劑2在預防或治療糖尿 病及糖尿病併發症中的應用。所述的糖尿病併發症是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼 疾、糖尿病神經性病變。抑制劑2可通過多種給藥方式預防或治療糖尿病及糖尿病併發症， 包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。
[0008] 有益結果：
[0009] 本發明中的胰島澱粉樣多肽抑制劑2,可以靶向抑制胰島澱粉樣多肽形成，達到預 防或治療糖尿病的效果。更優選是治療糖尿病和/或糖尿病併發症藥物中的用途。所述的 糖尿病包括I型糖尿病和Π型糖尿病；所述的糖尿病併發症包括但不限於：糖尿病腎病、 糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經性病變等。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1
[0011] 多肽的化學合成方法
[0012] 抑制劑2用Fmoc保護的固相合成技術製備。合成反應按照抑制劑2序列從C端 向N端進行，Rink醜氨MBHA樹脂和Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體（可在AdvancedChem Tech公司購得）上有自由氨基。每一步連接過程中，胺基酸殘基都要活化，活化混合物中有 4倍於載體上自由氨基的HBTU，H0Bt，DIEA和Fmoc-胺基酸。用6-氯-1-羥基苯並三氮唑 和N，N-二異丙基碳二亞胺為縮合劑，進行連接反應，每次胺基酸的連接反應之後，用吡啶/ 醋酸/N-甲基咪唑（4:1:0.5)的混合物來封閉未連接的自由氨基，封閉反應10分鐘。下一 個胺基酸連接之前，都要把載體上的Fmoc-基團去掉，去Fmoc-基團使用含20%哌啶的二甲 基甲醯胺，需15分鐘。最後，當所有胺基酸殘基順序連接之後，抑制劑2用98%三氟乙酸從 載體上切割下來，切割在室溫下進行2小時。
[0013] 應用上述化學條件可合成並獲得抑制劑2,序列為VLSVAALNHLDKATPIESH，該序列 為全新序列。也可委託上海生工合成。
[0014] 實施例2
[0015] 胰島澱粉樣多肽抑制劑2的體外細胞凋亡的測定
[0016] 本實驗研究了胰島素澱粉樣多肽抑制劑2抑制胰島瘤細胞（INS-1細胞）凋亡的 作用。當細胞用10μmol/L胰島素樣澱粉多肽處理後，經TUNEL染色後發現與培養基對照組 相比出現了很多綠色亮點，說明體系中存在凋亡的細胞。當20ymol/L胰島素澱粉樣多肽 抑制劑2與胰島素澱粉樣多肽共孵育後，鏡檢看到比單純加胰島素樣澱粉多肽的對照組較 少的綠色亮點。對拍攝照片進行計數並統計後，發現用lOumol/L胰島素樣澱粉多肽處理 的細胞凋亡率約為65. 0 %，而20μmol/L抑制劑2與胰島素樣澱粉多肽共同處理的細胞凋 亡率減少到30. 2 % (p〈0. 05)。並且只用20μmol/L抑制劑2處理的細胞的凋亡情況與培 養基對照組並無明顯差別，說明抑制劑2顯著減少了胰島素樣澱粉多肽誘導的細胞凋亡， 但此濃度的抑制劑2自身對細胞沒有毒性作用。
[0017] 實施例3
[0018] 胰島澱粉樣多肽抑制劑2的體內降糖實驗
[0019] 昆明小鼠，高脂高糖餵養至體重18?22g，雌雄各半，實驗前禁食不禁水24h，腹腔 一次性注射鏈脲佐菌素（STZ) 50mg/kg(1 %的檸檬酸鹽緩衝液溶解配製）。1周後小鼠尾靜 脈採血測血糖（BS)，BS高於16mmol/L為造模成功。造模後將小鼠分為3組，每組10隻，糖 尿病模型組（DM組）：給予等量的PBS緩衝液皮下注射；對照組（胰島素）：20μg/kg皮下 注射給藥（溶於0.lmol/LPBS緩衝液），一天兩次，連續9d;樣品組（胰島澱粉樣多肽抑制 劑2):同對照組；另取10隻正常小鼠做為空白組。用藥後第9d於尾靜脈取血快速測量血 糖。9d之後，在停藥1周後，禁食不禁水16小時進行葡萄糖耐量試驗。用25%葡萄糖溶液 (2g/kg)灌胃，灌胃後0、30、120分鐘尾靜脈取血檢測血糖。
[0020] 結果：胰島澱粉樣多肽抑制劑2具有降低糖尿病模型小鼠血糖的作用（P〈0. 05,表 1);同時，可以緩解糖尿病模型小鼠的糖耐量（表2)。其抑制劑2的作用與對照組胰島素 作用相當。
[0021] 表1胰島澱粉樣多肽抑制劑2對小鼠降血糖作用
[0022]
【權利要求】
1. 一種胰島澱粉樣多肽抑制劑，其特徵在於：其序列為VLSVAALNHLDKATPIESH。
2. -種權利要求1所述抑制劑的製備方法，其特徵在於：採用Fmoc保護的固相合成 技術製備，Rink醯氨MBHA樹脂和Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體，6-氯-1-羥基苯並三氮 唑和N，N-二異丙基碳二亞胺為縮合劑，三氟乙酸為切割試劑。
3. 權利要求1所述的抑制劑在製備預防或治療糖尿病及糖尿病併發症藥物中的應用。
4. 根據權利要求3的用途，所述的糖尿病併發症是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病 眼疾、糖尿病神經性病變。
5. 根據權利要求4所述的抑制劑的用途，其特徵在於：可通過多種給藥方式預防或治 療糖尿病及糖尿病併發症，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥 丸、膠囊等，鼻噴劑。
【文檔編號】C07K7/08GK104327163SQ201410509099
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年9月28日 優先權日:2014年9月28日
【發明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達生物科技有限公司