一種培育自花結實櫻桃新種質的方法
2023-05-02 17:01:16
專利名稱：一種培育自花結實櫻桃新種質的方法
技術領域：
本發明涉及植物育種領域，具體地說，涉及一種高效培育自花結實櫻桃新種質的方法。
背景技術：
目前果樹栽培中使用的品種多為自花不結實，因此需要配置合適的授粉品種，如授粉樹搭配不合理則會嚴重影響坐果率和產量，在設施栽培中的表現尤為突出。即便栽培少數自花結實品種也均為國外引進，部分品種存在雨季裂果、適應性差等問題，因此培育適宜我國氣候、土壤等條件的自花結實品種應用於生產，尤其是對設施栽培的櫻桃而言更具有重要意義和實際應用價值。根據育種實踐，培育自花結實後代首先應選自花結實的品種做親本，再結合另一個具有優良特性的品種做親本設置雜交組合。加拿大從 『Lambert』 XJI2420後代中成功選育出了自交親和的品種『Stella』。然後，用Van (S1S3)做母本，『Stella』做父本雜交又選出了兩個自交親和的姊妹系『Lapins』(拉賓斯)和『Sunburst』(豔陽)。櫻桃早熟品種由於果實發育期短，胚發育不完全，常規播種後種子萌發率極低，已成為培育早熟櫻桃品種的瓶頸。試驗表明，自然授粉的『紅燈』和『紅燈』與『Stella』的雜交種子實生播種出苗率低於4%，嚴重阻礙著育種工作的進一步開展。
發明內容
本發明的目的是提供一種高效培育自花結實櫻桃新種質的方法。為了實現本發明目的，本發明的一種培育自花結實櫻桃新種質的方法，包括雜交親本配置、有性雜交和雜交後代胚培養的步驟，其中，雜交親本中至少其一為自花結實櫻桃品種。前述的方法，包括以下步驟1)選擇自花結實的櫻桃品種及另一具有優良特性(例如果實個大、色澤好、風味佳等)的早熟櫻桃品種作為親本進行雜交，人工授粉後的花朵進行套袋；2)取著色後的果實，去掉果肉及外種皮後將種子浸泡於70%酒精中，然後用無菌水衝洗並置於0. 1%升汞中進行消毒，消毒後用無菌水衝洗並浸泡於無菌水中，剝去內種皮，最後用84液消毒；3)將消毒後的種子接種於基礎培養基中進行培養；4)待胚萌發出新梢後剪下接種於誘導分化培養基中進行培養；5)待新梢高於2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉移至生根培養基上獲得生根植株；6)最後將培養成株的雜交苗定植田間，結果後進行綜合性狀評價，利用套袋結合自花結實分子標記技術篩選出具有早熟、優質、自花結實等特性的櫻桃新種質。前述的方法，步驟I)中所述親本優選為櫻桃品種『Stella』和『紅燈』。前述的方法，步驟I)具體為採集大氣球期的『Stella』花葯，於22_28°C放置24小時，待花粉散出後用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的『紅燈』花蕾，去雄，蘸取『Stella』花粉給其柱頭授粉，然後用硫酸紙套袋，培養雜交後代。
前述的方法，步驟2)具體為取著色後的果實，去掉果肉及外種皮後將種子浸泡於70%酒精中0. 5min，然後用無菌水衝洗2次,將種子置於0. 1%升汞中消毒8min，然後用無菌水衝洗2次並浸泡於無菌水中6h，剝去內種皮，最後用84液消毒。前述的方法，步驟3)中所述的基礎培養基，其配方為MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6. 7g/L，以蒸餾水配製。前述的方法，步驟4)中所述的誘導分化培養基，其配方為MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配製。
前述的方法，步驟5 )中所述的生根培養基，其配方為1/2MS+IAA0. 3mg/L+1BAO. 3mg/L鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配製。其中，步驟3) -5)的培養條件為22-28°C，2000-30001x光照培養。本發明針對當前櫻桃育種及生產中存在的問題，以優質、自花結實的櫻桃品種『Stella』與早熟、大果的『紅燈』做親本進行雜交，對獲得的胚進行培養，成株率71.19^83.7%。將培養成株的雜交苗定植田間，結合自花結實分子標記技術篩選出『紅燈』X 『Stella』組合的後代36株，自花結實比例高達70. 8%，對已結果的株系進行套袋，坐果率在28. 99%-85. 5%之間，結合果實性狀評價，最終獲得優質、自花結實的甜櫻桃新優系，從而建立一種高效的自花結實櫻桃新種質的育種方法，具有廣闊的推廣前景。與現有技術相比，本發明的優點在於(一)本發明選用綜合經濟性狀優良的櫻桃品種作為兩親本，雜交後代中綜合經濟性狀好的比例高。(二)本發明優選『Stella』與『紅燈』兩個櫻桃品種為親本，採用傳統雜交與胚培養相結合的方法，雜交後代成株率高達71. 19T83. 7%，自花結實後代的比例高達70. 8%。(三)本發明採用套袋結合自花結實分子標記技術篩選自花結實新種質結果準確可靠。(四)本發明育種方法簡單、效率高、成本低，對研究環境及條件設施要求不嚴格，適於基層推廣及應用。
具體實施例方式以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段，所用原料均為市售商品。以下實施例中涉及的櫻桃品種，其中『Stella』系1993年引自美國，『紅燈』、『紅豔』和『Van』系1993年引自大連，保存於河北省農林科學院昌黎果樹研究所的18年生樹；『lapins』系1999年引自山海關，保存於河北省農林科學院昌黎果樹研究所的12年生樹。以下實施例中涉及的符號釋義MS表示MS培養基；IAA為吲哚乙酸(Indole-3-acetic acid) ;6_BA 為 6_ 卞氛基腺嘿呤(6-Benzylaminopurine) ；NAA 為蔡乙酸(Naphthalene acetic Acid) ; IBA 為卩引哚丁酸(Indole-3-butyric acid)。實施例I自花結實櫻桃新種質的育種一『紅燈』 X 『Stella』I. I 步驟I)採集大氣球期的『Stella』花葯，於22_28°C放置24小時，待花粉散出後用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的『紅燈』花蕾，去雄，蘸取『Stella』花粉給其柱頭授粉，然後用硫酸紙套袋，培養雜交後代。2)取接近成熟的果實，去掉果肉及外種皮後將種子浸泡於70%酒精中0. 5min，然後用無菌水衝洗2次，將種子置於0. 1%升汞中消毒8min，然後用無菌水衝洗2次並浸泡於無菌水中6h，剝去內種皮，最後用84液消毒。3)將消毒後的種子接種於基礎培養基中進行培養。基礎培養基的配方MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配製。培養條件22-280C，2000-30001x 光照培養。4)待胚萌發出新梢後剪下接種於誘導分化培養基中進行培養。誘導分化培養基的配方MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配製。培養條件22-280C，2000-30001x 光照培養。5)待新梢高於2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉移 至生根培養基上獲得生根植株。生根培養基的配方1/2MS+IAA0. 3mg/L+IBA0. 3mg/L蔗糖30g/L+瓊脂6. 7g/L，以蒸餾水配製。培養條件22-28°C，2000-30001x光照培養。6)最後將培養成株的雜交苗定植田間，結果後進行綜合性狀評價，利用套袋結合自花結實分子標記技術篩選出具有早熟、優質、自花結實等特性的櫻桃新種質。7)自交親和性分子鑑定利用CTAB法提取總DNA，瓊脂糖凝膠電泳方法檢測DNA純度，紫外分光光度法檢測
DNA含量。引物BFP200/BFP201，內參對照引物IC-F/IC-R。PCR 反應體系(15ii L) :10mmol/L Tris-HCl (pH8. 3) , 50mmol/LKCl,0. 2mmol/LdNTPs,2mmol/L MgCl2,0. 2 u mol/L 引物 BFP200/BFP201,0. I u mol/L 引物 IC-F/IC-R, I. 5UTaq DNA聚合酶，約20ng DNA模板。PCR 反應條件94°C 3min ;94°C 45s，50°C lmin，72°C lmin，35 個循環；72 °C 延伸lOmin。PCR產物在2%瓊脂糖凝膠(含0. 5 y g/mLEB)上進行電泳分離，電泳緩衝液為
0.5 X TBE,在5V/cm電壓下電泳40min Ih,紫外燈下成像並拍照。上述引物組合BFP200/BFP201、引物組合IC-F/IC-R、dNTPs、Taq DNA聚合酶均購自北京賽百盛公司，PCR儀為PTC-100型。8)篩選結果(表I)表I自交親和性分子鑑定結果
品種/株系代I自交親和特異
P口稱各代萬標記(59Qbp)
StellaK
紅燈無
HS08-5, HS08-57、HS08-61 , HS08-68, HS08-71、HS08-75、^
HS08-96、HS08-i]、HS08-104, HS08-07、HS08-11K 2
HS08-243、HS08-306、HS08-52 ^ _A_
I. 2 結果已進行試驗示範的優系"2-59〃的特徵為樹勢開張，成枝力較強；以短果枝結果為主，4月下旬開花，花期5 7天，在昌黎地區6月中旬成熟；果實心形，顏色漂亮，紫紅，著色度100% ;果個大，平均單果重6. 0g，最大單果重8. 25g，果實甜酸可口，可溶性固形物含量17. 4%，汁液多，果肉細，半離核；果實整齊，成熟期一致；自花授粉坐果率60. 9%，抗寒性強，與山櫻砧木嫁接親和性好。實施例2自花結實櫻桃新種質的育種一『Stella』 X 『紅燈』I. I 步驟I)採集大氣球期的『紅燈』花葯，於22_28°C放置24小時，待花粉散出後用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的『Stella』花蕾，去雄，蘸取『紅燈』花粉給其柱頭授粉，然後用硫酸紙套袋，培養雜交後代。2)取接近成熟的果實，去掉果肉及外種皮後將種子浸泡於70%酒精中0. 5min，然後用無菌水衝洗2次，將種子置於0. 1%升汞中消毒8min，然後用無菌水衝洗2次並浸泡於無菌水中6h，剝去內種皮，最後用84液消毒。3)將消毒後的種子接種於基礎培養基中進行培養。基礎培養基的配方MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配製。培養條件22-280C，2000-30001x 光照培養。
4)待胚萌發出新梢後剪下接種於誘導分化培養基中進行培養。誘導分化培養基的配方MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配製。培養條件22-280C，2000-30001x 光照培養。5)待新梢高於2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉移至生根培養基上獲得生根植株。生根培養基的配方1/2MS+IAA0. 3mg/L+IBA0. 3mg/L蔗糖30g/L+瓊脂6. 7g/L，以蒸餾水配製。培養條件22-28°C，2000-30001x光照培養。6)最後將培養成株的雜交苗定植田間，結果後進行綜合性狀評價，利用套袋結合自花結實分子標記技術篩選出具有早熟、優質、自花結實等特性的櫻桃新種質。7)自交親和性分子鑑定 利用CTAB法提取總DNA，瓊脂糖凝膠電泳方法檢測DNA純度，紫外分光光度法檢測
DNA含量。引物BFP200/BFP201，內參對照引物IC-F/IC-R。PCR 反應體系(15ii L) :10mmol/L Tris-HCl (pH8. 3) , 50mmol/LKCl,0. 2mmol/LdNTPs, 2mmol/L MgCl2,0. 2 u mol/L 引物 BFP200/BFP201,0. I u mol/L 引物 IC-F/IC-R, I. 5UTaq DNA聚合酶，約20ng DNA模板。PCR 反應條件94°C 3min ;94°C 45s，50°C lmin, 72 °C lmin，35 個循環；72 °C 延伸lOmin。PCR產物在2%瓊脂糖凝膠(含0. 5 y g/mLEB)上進行電泳分離，電泳緩衝液為
0.5 X TBE,在5V/cm電壓下電泳40min Ih,紫外燈下成像並拍照。上述引物組合BFP200/BFP201、引物組合IC-F/IC-R、dNTPs、Taq DNA聚合酶均購自北京賽百盛公司，PCR儀為PTC-100型。8)篩選結果(表2)表2自交親和性分子鑑定結果
口鈾/她玄從P自交親和特異
品種/株系fW標記(590bp)
Stella;
紅燈無
HS08-I22、HS08-I23、HS08-127. HS08-130, HS08-135,,
HS08-143、HS08-147、HS08-153、HS08-16、HS08-I62、2-62"
_HS08-93、HS08-10、HS08-137_*_ I. 2 結果已進行試驗示範的優系"2-62〃的特徵為樹勢較開張，樹勢開張，成枝力較強；4月下旬開花，花期5 7天，成熟期較早，在昌黎地區5月低成熟；果實心形，顏色漂亮，紫紅，著色度100% ;平均單果重6. lg，最大單果重7. 4g，果實甜，可溶性固形物含量18%，汁液多，果肉硬脆，半離核；果實整齊，成熟期一致；自花授粉坐果率71. 7%，抗寒性強，與山櫻砧木嫁接親和性好。實施例3自花結實樓桃新種質的育種一 『lapins』 X 『Van』I. I 步驟I)採集大氣球期的『Van』花葯，於22_28°C放置24小時，待花粉散出後用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的『lapins』花蕾，去雄，蘸取『Van』花粉給其柱頭授粉，然後用硫酸紙套袋，培養雜交後代。2)取接近成熟的果實，去掉果肉及外種皮後將種子浸泡於70%酒精中0. 5min，然後用無菌水衝洗2次，將種子置於0. 1%升汞中消毒8min，然後用無菌水衝洗2次並浸泡於無菌水中6h，剝去內種皮，最後用84液消毒。3)將消毒後的種子接種於基礎培養基中進行培養。基礎培養基的配方MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配製。培養條件22-280C，2000-30001x 光照培養。4)待胚萌發出新梢後剪下接種於誘導分化培養基中進行培養。誘導分化培養基的配方MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配製。培養條件22-280C，2000-30001x 光照培養。5)待新梢高於2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉移至生根培養基上獲得生根植株。生根培養基的配方1/2MS+IAA0. 3mg/L+IBA0. 3mg/L蔗糖30g/L+瓊脂6. 7g/L，以蒸餾水配製。培養條件22-28°C，2000-30001x光照培養。6)最後將培養成株的雜交苗定植田間，結果後進行綜合性狀評價，利用套袋結合自花結實分子標記技術篩選出具有早熟、優質、自花結實等特性的櫻桃新種質。7)自交親和性分子鑑定利用CTAB法提取總DNA，瓊脂糖凝膠電泳方法檢測DNA純度，紫外分光光度法檢測
DNA含量。引物BFP200/BFP201，內參對照引物IC-F/IC-R。PCR 反應體系(15ii L) :10mmol/L Tris-HCl (pH8. 3) , 50mmol/LKCl,0. 2mmol/LdNTPs, 2mmol/L MgCl2,0. 2 u mol/L 引物 BFP200/BFP201,0. I u mol/L 引物 IC-F/IC-R, I. 5UTaq DNA聚合酶，約20ng DNA模板。PCR 反應條件94°C 3min ;94°C 45s，50°C lmin, 72 °C lmin，35 個循環；72 °C 延伸lOmin。PCR產物在2%瓊脂糖凝膠(含0. 5 y g/mLEB)上進行電泳分離，電泳緩衝液為
0.5 X TBE,在5V/cm電壓下電泳40min Ih,紫外燈下成像並拍照。上述引物組合BFP200/BFP201、引物組合IC-F/IC-R、dNTPs、Taq DNA聚合酶均購自北京賽百盛公司，PCR儀為PTC-100型。8)篩選結果(表3) 表3自交親和性分子鑑定結果
麵繼
Iapins有
Van無
HS08-I63、HS08-166. HS08-168、HS08-170、HS08-175、右
HS08-I77、HS08-i79、HS08-I87、HS08-192. HS08-200、^ 8
_HS08-148, HS08-188, HS08-223_*_I. 2 結果已進行試驗示範的優系"3-8〃的特徵為樹勢較開張，樹勢開張，成枝力較強；4月下旬開花，花期5 7天，在昌黎地區6月上旬成熟；果實腎形，顏色漂亮，鮮紅，著色度100% ;平均單果重5. lg，最大單果重6g，果實甜，可溶性固形物含量18. 72%，汁液多，半離核；果實整齊，成熟期一致；自花授粉坐果率85. 5%，抗寒性強，與山櫻砧木嫁接親和性較好。實施例4自花結實櫻桃新種質的育種一『lapins』 X 『紅豔』I. I 步驟I)採集大氣球期的『紅豔』花葯，於22_28°C放置24小時，待花粉散出後用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的『lapins』花蕾，去雄，蘸取『紅豔』花粉給其柱頭授粉，然後用硫酸紙套袋，培養雜交後代。2)取接近成熟的果實，去掉果肉及外種皮後將種子浸泡於70%酒精中0. 5min，然後用無菌水衝洗2次，將種子置於0. 1%升汞中消毒8min，然後用無菌水衝洗2次並浸泡於無菌水中6h，剝去內種皮，最後用84液消毒。3)將消毒後的種子接種於基礎培養基中進行培養。基礎培養基的配方MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配製。培養條件22-280C，2000-30001x 光照培養。4)待胚萌發出新梢後剪下接種於誘導分化培養基中進行培養。誘導分化培養基的配方MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6. 7g/L,以蒸懼水配製。培養條件22-280C，2000-30001x 光照培養。5)待新梢高於2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉移至生根培養基上獲得生根植株。生根培養基的配方1/2MS+IAA0. 3mg/L+IBA0. 3mg/L蔗糖30g/L+瓊脂6. 7g/L，以蒸餾水配製。培養條件22-28°C，2000-30001x光照培養。6)最後將培養成株的雜交苗定植田間，結果後進行綜合性狀評價，利用套袋結合自花結實分子標記技術篩選出具有早熟、優質、自花結實等特性的櫻桃新種質。7)自交親和性分子鑑定利用CTAB法提取總DNA，瓊脂糖凝膠電泳方法檢測DNA純度，紫外分光光度法檢測
DNA含量。引物BFP200/BFP201，內參對照引物IC-F/IC-R。PCR 反應體系(15ii L) :10mmol/L Tris-HCl (pH8. 3) , 50mmol/LKCl,0. 2mmol/LdNTPs, 2mmol/L MgCl2,0. 2 u mol/L 引物 BFP200/BFP201,0. I u mol/L 引物 IC-F/IC-R, I. 5 UTaq DNA聚合酶，約20ng DNA模板。PCR 反應條件94°C 3min ;94°C 45s，50°C lmin, 72 °C lmin，35 個循環；72 °C 延伸lOmin。PCR產物在2%瓊脂糖凝膠(含0. 5 y g/mLEB)上進行電泳分離，電泳緩衝液為
0.5 X TBE,在5V/cm電壓下電泳40min Ih,紫外燈下成像並拍照。上述引物組合BFP200/BFP201、引物組合IC-F/IC-R、dNTPs、Taq DNA聚合酶均購自北京賽百盛公司，PCR儀為PTC-100型。8)篩選結果(表4)表4自交親和性分子鑑定結果
P^自交親和特異
品種/株系代7標記(590bp)
lapins
紅豔無HS08-206、HS08-308、HS08-309、HS08-310、1-57 有StQ4-l-2 . St04-i-22, St04-2-6、St04-2-35、St04-2-28、St04-2-58_±_I. 2 結果已進行試驗示範的優系"1-57〃的特徵為樹勢較開張，樹勢開張，成枝力較強；4月下旬開花，花期5 7天，在昌黎地區6月中下旬成熟；果實寬心形，顏色黑紫，整齊度好，著色度100% ;平均單果重6g，最大單果重6. 8g，果實甜酸，可溶性固形物含量18. 5%，汁液多，半離核；果實整齊，成熟期一致；自花授粉坐果率67. 7%，抗寒性強，與山櫻砧木嫁接親和性較好。雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬於本發明要求保護的範圍。
權利要求
1.一種培育自花結實櫻桃新種質的方法，包括雜交親本配置、有性雜交和雜交後代胚培養的步驟，其特徵在於，雜交親本中至少其一為自花結實櫻桃品種。
2.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於，包括以下步驟 1)選擇自花結實的櫻桃品種及另一具有優良特性的早熟櫻桃品種作為親本進行雜交，對人工授粉後的花朵進行套袋； 2)取著色後的果實，去掉果肉及外種皮後將種子浸泡於70%酒精中，然後用無菌水衝洗並置於0. 1%升汞中進行消毒，消毒後用無菌水衝洗並浸泡於無菌水中，剝去內種皮，最後用84液消毒； 3)將消毒後的種子接種於基礎培養基中進行培養； 4)待胚萌發出新梢後剪下接種於誘導分化培養基中進行培養； 5)待新梢高於2cm時，選擇直立、有4片以上舒展葉片的健壯苗，從基部切下轉移至生根培養基上獲得生根植株； 6)最後將培養成株的雜交苗定植田間。
3.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於，I)中所述的親本為櫻桃品種『Stella』和『紅燈，。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於，I)中具體步驟為採集大氣球期的『Stella』花葯，於22-28°C放置24小時，待花粉散出後用研缽研磨，裝入瓶中備用；選大氣球期的『紅燈』花蕾，去雄，蘸取『Stella』花粉給其柱頭授粉，然後用硫酸紙套袋，培養雜交後代。
5.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於，2)中具體步驟為果實著色後，去掉果肉及外種皮後將種子浸泡於70%酒精中0. 5min，然後用無菌水衝洗2次，將種子置於0. 1%升汞中消毒8min，然後用無菌水衝洗2次並浸泡於無菌水中6h，剝去內種皮，最後用84液消毒。
6.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於，3)中所述的基礎培養基，其配方為MS+6-BA1. 0mg/L+IAA0. 4mg/L+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂 6. 7g/L,以蒸懼水配製。
7.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於，4)中所述的誘導分化培養基，其配方為MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂 6. 7g/L,以蒸懼水配製。
8.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於，5)中所述的生根培養基，其配方為1/2MS+IAA0. 3mg/L+IBA0. 3mg/L 鹿糖 30g/L+ 瓊脂 6. 7g/L,以蒸懼水配製。
9.根據權利要求6-8任一項所述的方法，其特徵在於，3)-5)中培養條件為22-28°C，2000-30001x光照培養。
全文摘要
本發明提供了一種高效培育自花結實櫻桃新種質的方法，包括雜交親本配置、有性雜交和雜交後代胚培養，其中，雜交親本中至少其一為自花結實櫻桃品種。本發明根據櫻桃自花結實的遺傳特性，結合傳統雜交與胚培養等方法，獲得大批量的自花結實後代，依據它們的綜合經濟性狀、果實套袋，結合自花結實分子標記技術選育出一批具有優質、自花結實等特性的櫻桃新品系，具有廣闊的推廣前景。
文檔編號A01H1/02GK102742504SQ201210248348
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月17日 優先權日2012年7月17日
發明者劉國儉, 吳永傑, 吳雅琴, 常瑞豐, 李玉生, 程和禾, 趙豔華, 陳龍 申請人:河北省農林科學院昌黎果樹研究所