製備r-棉酚l-苯丙氨醇二烯胺的方法

2023-05-02 20:05:41

專利名稱：製備r-棉酚l-苯丙氨醇二烯胺的方法
技術領域：
本發明涉及利用非色譜提純法製備R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的方法。特別地， 本發明涉及通過結晶法拆分R-和S-棉酚L-苯丙氨醇。R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺是有用 的中間體，用於製備R-㈠_棉酚和乙酸R-㈠_棉酚共晶。乙酸R-㈠_棉酚及其共晶可用 於誘導細胞凋亡，並用于敏化細胞，以誘導凋亡性細胞死亡。
背景技術：
US 2005/0234135A1披露了乙酸共晶形式的R-(_) _棉酚及其作為抗凋亡性Bcl_2 族蛋白質的抑制劑的應用。通過抑制抗凋亡性Bcl-2族蛋白質，R-(-)_棉酚使細胞對凋亡 誘導劑敏感；在一些情況下，它本身就誘導凋亡。由於R-(-)_棉酚及其乙酸共晶在治療癌 症及其他疾病上具有應用潛力，所以需要開發實用的合成路線，以生產大量此種藥用物質。

發明內容
本發明要解決的問題是提供高純R-(-)_棉酚及其乙酸共晶的獲取方法。本發明基於以下意外發現從包含乙腈和水的溶劑體系中，可以分離出高非對映 異構純的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。這就不需要色譜拆分了，而且更易於大規模生產 R-棉酚L-苯丙氨醇二亞胺，最終是更易於大規模生產R-(-)_棉酚及其乙酸共晶。
具體實施例方式本發明涉及利用非色譜提純法製備R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的方法。特別地， 本發明涉及通過結晶法在包含乙腈和水的溶劑體系中拆分R-和S-棉酚L-苯丙氨醇。申請人:發現，通過R-和S-棉酚席夫鹼及其互變異構體的混合物進行結晶來提供 基本上不含S-異構體的R-異構體非常困難，且結果無法預料。為此，對溶劑體系進行篩 選，以期找到一種可用於拆分R-和S-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺的溶劑。這些研究未能成功 地找到適合生產基本上不含S-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺的R-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺的 條件。諸如1 2 二氯甲烷異丙醇、1 1 二氯甲烷異丙醇、1 2 二氯甲烷甲醇、 1:5: 1. 5 二氯甲烷己烷庚烷、2 1甲醇己烷、2 1乙醇己烷、甲苯、1 1甲 苯庚烷、乙腈、10 1乙腈水、叔丁基甲基醚和叔丁基甲基醚庚烷等溶劑體系，可以 發生有利於R-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺的非對映體中度富集。在諸如1 2 二氯甲烷乙 醇和2 1甲醇水這樣的溶劑體系中，不發生非對映體富集。在2 1 二氯甲烷異丙 醇和2 1水四氫呋喃中，沒有觀察到晶體的形成。在1 2 二氯甲烷異丙醇中連續 進行三次結晶並沒有顯著提高非對映體的比例。這些數據參見實施例2。還做了一些以拆分R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺為目的的實驗。嘗試在諸如甲 醇、異丙醇、丙酮、甲苯、乙腈、1 1甲苯庚烷、2 1叔丁基甲基醚庚烷、2 1甲醇 己烷、1 1 二氯甲烷己烷、5 1四氫呋喃水和1 1甲醇水等溶劑體系中進行結晶 結果是，或者並未提高非對映異構純度，或者並未形成晶體。相反，在5 1乙腈水中進
4行結晶的結果，是驚人地提高了有利於R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的非對映異構純度。此 意外發現經深入研究後，得到了製備R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的新穎、可再現的方法。這 些數據參見實施例4-8。在一個實施方式中，R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺是用包括以下步驟的方法自R-和 S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的混合物製備的使所述混合物在包含乙腈和水的溶劑體系中 進行結晶，然後分離基本上不含所述S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的結晶體R-棉酚L-苯丙氨 醇二烯胺。在一個實施方式中，結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺是通過過濾分離的。在 另一個實施方式中，結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺是通過離心分離的。在一個實施方式中，用來結晶基本上不含S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的R-棉酚 L-苯丙氨醇二烯胺的溶劑體系包括比例為約10 1-約5 2的乙腈和水。在另一個實施 方式中，用來結晶基本上不含S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的溶 劑體系包括比例為約5 1的乙腈和水。在另一個實施方式中，用來結晶基本上不含S-棉 酚L-苯丙氨醇二烯胺的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的溶劑體系包括比例為約5 1.5的 乙腈和水。在另一個實施方式中，用來結晶基本上不含S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的R-棉 酚L-苯丙氨醇二烯胺的溶劑體系包括比例為約5 2的乙腈和水。在又一個實施方式中， 用來結晶基本上不含S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的溶劑體系 包括比例為51的乙腈和水。在一個實施方式中，對結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺重結晶一次或多次，直至 達到所需純度水平。在又一個實施方式中，在包含乙腈和水的溶劑體系中對結晶體R-棉酚 L-苯丙氨醇二烯胺進行重結晶。在一個實施方式中，用包含乙腈和水的溶劑體系對分離出來的結晶體R-棉酚 L-苯丙氨醇二烯胺洗滌一次或多次。在一個實施方式中，用包含比例為約10 1-約5 2 的乙腈和水的溶劑體系洗滌分離出來的結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。在又一個實施 方式中，用包含比例為約5 1的乙腈和水的溶劑體系洗滌分離出來的結晶體R-棉酚L-苯 丙氨醇二烯胺。在又一個實施方式中，用包含比例為5 1的乙腈和水的溶劑體系洗滌分離 出來的結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。在又一個實施方式中，對結晶體R-棉酚L-苯 丙氨醇二烯胺進行真空乾燥。在一個實施方式中，結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的純度約為89%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或 99. 5%。在一個實施方式中，結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺包含約11%、10%、9%、 8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或 0. 5%的 S-棉酚 L-苯丙氨醇二烯胺。在一個實施方式中，R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺通過以下步驟製備a)在乙腈中 使棉酚與L-苯丙氨醇縮合，得到R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的混合物；b)在棉酚與 L-苯丙氨醇之間的反應完成時，向反應混合物中加水，得到結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯 胺；以及c)分離出基本上不含S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二 烯胺。在又一個實施方式中，在加水之前將反應混合物加熱至約50°C。在又一個實施方式 中，在加水之後將反應混合物冷卻至約5°C。在又一個實施方式中，通過過濾或離心分離結 晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。本文所用術語「棉酚」是指包含以下結構的化合物或其互變異構體的組合物
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約50% R-棉酚和50% S-棉酚，但研究發現，也有一些棉屬植物包含較高水平的(S)-棉 酚[例如陸地棉(Gossypium hirsutum)、亞洲棉(G. arboreum)、黃褐棉(G. mustelinum)、 異常棉(G. anomalum)、擬似棉(G. gossypioides)、綠頂棉(G. capatis-viridis)(最 高含約97% (S)-棉酚)]或較高水平的(R)-棉酚[例如海島棉(G. barbadense)、達 爾文棉(G. darwinii)、斯特提棉(G. sturtianjm)、亞雷西棉(G. areysianum)、長萼棉 (G. Iongicalyx)、哈克尼西棉(G. harknessii)、皺殼棉(G. costulatum)(最高含約 65% (S)-棉酚)]。參見例如 Hua 等，Contraception 37 :239 頁(1998 年)；Cass 等，J. Agric. Food Chem. 52 5822 頁(2004 年)；Stipanovic 等，J. Agric. Food Chem. 53 6266 頁(2005 年)；Stipanovic等，2005Beltwide Cotton Conferences，美國路易斯安娜州紐奧良市 2005年1月4-7日，p. 900。棉酚的對映體比例在棉屬植物的不同部分也有變化。例如，在 海島棉中，種子通常含有更多的(R)-棉酚，而根和花可能包含更多的(S)-棉酚[Cass等， J. Agric. Food Chem. 52 5822頁(2004年)]。因此，(R)-棉酚含量高的棉屬植株或其一部 分可有利地用作本發明的棉酚來源。 在一個實施方式中，棉酚大致是外消旋的，即其中包含約50% R-棉酚和約50% S-棉酚。在另一個實施方式中，棉酚富含R-棉酚。在另一個實施方式中，棉酚富含S-棉 酚。本文所用術語「R-棉酚」或「R-(-)-棉酚」是指包含以下結構所示化合物或其互
變異構體的組合物 本文所用術語「S-棉酚」或「S-(-)-棉酚」是指包含以下結構所示化合物或其互
變異構體的組合物 本文所用術語「乙酸棉酚」是指包含共晶形式的棉酚和乙酸的組合物。在一個實施方式中，R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺從R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯 胺的混合物中結晶出來是通過加入R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺晶種來誘發的。在又一個實 施方式中，將反應混合物冷卻至約5°C或以下，以促進結晶作用。在一個實施方式中，將結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺水解，得到粗R-棉酚或 乙酸R-棉酚共晶。在又一個實施方式中，R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的水解在約52°C進 行。在又一個實施方式中，R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的水解在不存在四氫呋喃的情況下 進行。在又一個實施方式中，R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的水解在存在乙酸、鹽酸和水的情 況下進行。在一個實施方式中，通過過濾或離心分離R-棉酚或乙酸R-棉酚共晶。在又一個實 施方式中，用包含乙酸和水的溶劑體系洗滌R-棉酚或乙酸R-棉酚共晶。在又一個實施方 式中，用水洗滌R-棉酚或乙酸R-棉酚共晶。在又一個實施方式中，對R-棉酚或乙酸R-棉 酚共晶進行真空乾燥。
在一個實施方式中，通過在一個或多個溶劑體系中結晶來提純乙酸R-棉酚共晶， 直至達到所需純度水平。在又一個實施方式中，通過過濾或離心分離乙酸R-棉酚共晶。在 又一個實施方式中，用混合溶劑洗滌乙酸R-棉酚共晶。在又一個實施方式中，對乙酸R-棉 酚共晶進行真空乾燥。在一個實施方式中，乙酸R-棉酚共晶的結晶在包含乙酸乙酯、乙醇、乙酸和水的 溶劑體系中進行。在又一個實施方式中，用包含乙酸乙酯、乙醇、乙酸和水的溶劑體系洗滌 乙酸R-棉酚共晶。在又一個實施方式中，對乙酸R-棉酚共晶進行真空乾燥。在一個實施方式中，乙酸R-棉酚共晶的結晶在包含丙酮、乙酸和水的溶劑體系中 進行。在一個實施方式中，乙酸R-棉酚共晶的結晶在包含乙酸和水的溶劑體系中進行。 在又一個實施方式中，用包含乙酸和水的溶劑體系洗滌乙酸R-棉酚共晶。在又一個實施方 式中，對乙酸R-棉酚共晶進行真空乾燥。在一個實施方式中，乙酸R-棉酚共晶在一個或多個溶劑體系中重結晶一次或多 次，直至達到所需純度水平。在一個實施方式中，提供一種製備乙酸R-(-)_棉酚共晶的方法，其改進之處包 括在包含乙腈和水的溶劑體系中使R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺結晶，分離出基本上 不含所述S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺；然後製備乙酸 R-(-)_棉酚共晶。在一個實施方式中，提供一種製備乙酸R-(-)_棉酚共晶的方法，其改進之處包 括a)在乙腈中使棉酚與L-苯丙氨醇縮合，得到R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的混合 物；b)在a)完成時，向反應混合物中加水，得到結晶的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺；以及c) 分離出基本上不含所述S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯 胺；然後製備乙酸R-(-)_棉酚共晶。本文所用術語「約」包括所引數值的士 10%。因此，「約10」意指9-11。本文所用術語「純度」是指化學純和/或立體異構(即非對映異構或對映異構) 純，除非另有相反指示。本文所用術語「對映異構純」是手性物質對映體過量(即ee)的量 度。術語「對映體過量(即ee)」是一個對映體相對於另一個對映體存在多少的量度。對於 R和S對映體的混合物，對映體過量百分數定義為IR-SI *100，其中R和S是混合物中兩種 對映體各自的摩爾或重量分數，R+S= 1。根據手性物質的旋光度，可將對映體過量百分數 定義為([a ]。bs/[a ]_)*100，其中[a ]。bs是對映體混合物的旋光度，[α ]_是純對映體的 旋光度。本文所用術語「非對映異構純」的定義類似於對映異構純。利用包括NMR譜、手性 柱色譜或光學旋光測定法在內的各種分析技術，可以測量非對映體過量或對映體過量。在一個實施方式中，乙酸R-(-)_棉酚共晶的純度約為95%、96%、97%、98%、 99%或99. 5%或更高。本文所用術語「基本上不含」是指組合物包含至少約89重量％的一個立體異構體 (即對映體或非對映體)，超過相應的那一個立體異構體。在另一個實施方式中，組合物包 含至少約95重量％、96重量％、97重量％、98重量％、99重量％或99. 5重量％的優選立體 異構體。因此，本文所用術語「基本上不含S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的R-棉酚L-苯丙氨 醇二烯胺」是指至少包含約89重量％ R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺而至多包含約11重量％
8S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺組合物。在一個實施方式中，乙酸R-(-)_棉酚共晶包含約5%、4%、3%、2%、1%或0. 5% 或更少的S-(+)_棉酚。本文所用術語「加晶種」是指在溶液中加入少量純化合物，以幫助引發該化合物從 溶液中結晶。例如，向R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺在包含乙 腈和水的溶劑體系中的溶液裡加入結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺，就是在該溶液中加 晶種，引發結晶作用，從而得到結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。本文所用術語「R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺」或「R-棉酚L-苯丙氨醇烯胺_烯胺」 是指包含由R-棉酚衍生而來的具有以下結構的化合物或其二烯胺互變異構體的組合物 本文所用術語「S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺」或「S-棉酚L-苯丙氨醇烯胺_烯胺」 是指包含由S-棉酚衍生而來的具有以下結構的化合物或其二烯胺互變異構體的組合物 本文所用術語「二烯胺互變異構體」是指L-苯丙氨醇和棉酚之間縮合產物的所有 互變異構形式，包括但不限於雙噁唑烷互變異構體1、二亞胺(即亞胺_亞胺)互變異構體 2和亞胺-烯胺互變異構體3。 在一個實施方式中，本發明提供一種主要由R-(-)_棉酚與乙酸的摩爾比約為 1 1的共晶組成的組合物，其純度約為95%或以上。在另一個實施方式中，所述組合物包 含約96重量％、97重量％、98重量％、99重量％或99. 5重量％或更多的乙酸R_(_)_棉酚 共晶。以下實施例用於說明而非限制本發明的工藝和方法。對合成有機和工藝化學中常見的各種反應條件和參數的其他適當改進和調整，以及對本領域技術人員來說顯而易見的 改進和調整，都包括在本發明的精神和範圍之內。實施例1R-和S-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺的製備方案1 在IOOmL圓底燒瓶中，將L-苯丙氨酸甲酯HCl (4. 9g)溶解在水(25mL)裡，於室溫 下攪拌。在3分鐘內加入溶解在水(12.5mL)中的碳酸鈉(3. Ig)。在室溫下攪拌反應混合 物5分鐘。加入二氯甲烷(25mL)，攪拌反應混合物5分鐘。將水溶液轉移到125mL分離漏 鬥中。收集有機層。用12. 5mL 二氯甲烷萃取水層兩次。合併三次提取操作得到的有機液， 用硫酸鎂(6g)乾燥，濾去硫酸鎂，濃縮，得到L-苯丙氨酸甲酯游離鹼。步驟2在裝有溫度計並處於氮氣保護下的250mL燒瓶中，使外消旋乙酸棉酚(5g)在二 氯甲烷(50mL)中形成懸浮體。在5分鐘內向外消旋乙酸棉酚懸浮體中加入步驟1得到的 L-苯丙氨酸甲酯游離鹼在二氯甲烷中的溶液。在室溫下攪拌反應混合物15分鐘，加入硫酸 鎂(8. 2g)。再繼續攪拌17小時。從反應混合物中濾去硫酸鎂，濃縮、乾燥，得到R-和S-棉 酚L-苯丙氨酸二亞胺的非對映異構體混合物。實施例2R-和S-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺的結晶研究一般過程在25mL(單頸)圓底燒瓶中，在氮氣氣氛保護下加入0. 2_0. 6gR-和 S-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺的非對映異構體混合物。然後，加入ImL溶劑，在50°C加熱反應 混合物。加入適量溶劑，得到澄清溶液。室溫下過2小時後，濾出形成的黃色沉澱，用HPLC 分析結晶產物。結果列於表1。為簡潔計，表中縮寫「R」表示R-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺， 「S」表示S-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺，DCM = 二氯甲烷，iPrOH =異丙醇，MeOH =甲醇，THF
11=四氫呋喃，TBME =叔丁基甲基醚，MeCN =乙腈。表 1 因此，最好的結果是用1 1 DCM iPrOH得到約65 35的R S。在 1 2DCM iPrOH中使R-和S-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺的混合物連續結晶三次，對R S 比沒有明顯改善(表2)。表2 實施例3 R-和S-綿酚-1-苯丙胺醇二烯胺的製備 方案2 用
R-棉酚L-笨丙氨醇二烯胺 S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺
二氯甲烷(1.05mL)處理外消旋乙酸棉酚(0.276g)，然後用L-苯丙氨
(0. 1515g)處理，再在25°C攪拌17小時。用硫酸鎂乾燥反應混合物，過濾，濃縮至幹，得到 0. 352g的R-和S-棉酚-L-苯丙氨醇二烯胺黃色固體。實施例4R-和S-棉酚-L-苯丙氨醇二烯胺的結晶研究一般過程在25mL(單頸)圓底燒瓶中，在氮氣氣氛保護下加入0. 2-1. IgR-和 S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的非對映異構體混合物。然後，加入ImL溶劑，在50°C加熱反應 混合物。加入適量溶劑，得到澄清溶液。室溫下過2小時後，濾出形成的黃色沉澱，用HPLC 分析結晶產物。結果列於表3。表中縮寫「R」表示R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺，「S」表示 S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺，DCM = 二氯甲烷，iPrOH =異丙醇，MeOH =甲醇，THF =四氫呋 喃，TBME =叔丁基甲基醚，MeCN =乙腈。表3 (a)此實驗嘗試加R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺晶種。(b)用5 1的乙腈水洗滌沉澱兩次。此試驗進行兩次，得到相同結果。因此，利用包含乙腈和水的溶劑體系，得到了基本上不含S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺，其R S比約為89 11。其他溶劑體系未能提高非對映 異構純度，或者沒有形成晶體。實施例5乙腈水混合物的結晶研究一般過程參見表4，在21°C -25°C下，將R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的混合 物(棉酚二烯胺；量)溶解在乙腈中，在a)所示時間內滴加水，以得到所需的乙腈水比。 使R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺結晶，在b)所示時間之後，在指定溫度下通過燒結漏鬥過濾。 用如c)所示用於結晶過程的比例相同的溶劑洗滌分離出來的結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇 二烯胺，然後真空乾燥。表 4 在25-26°C下，R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺在5:1-5:2乙腈水中結晶， 得到純度為97. 4% -98. 8%的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。在這些條件下，利用更高比例 的水，可將產率提高至61 %。在5°C得到純度良好且產率更高的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯 胺。將該工藝有效放大到4. 55g的R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺，得到產率為71%、純 度為98. 4%的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。這些實驗證實，利用包含乙腈和水的混合溶劑 可分離出基本上不含S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。實施例6開發在乙腈中的單釜合成/結晶過程方案3 表5中編號為3的實驗細節所示過程在充滿氮氣的2L玻璃反應器中加入外消旋 乙酸棉酚(79. 7g, 137. 7mmol)和 L-苯丙氨醇(43. 7g，289. 3mmol,2. leq.)。將乙腈(1. 08L) 傾倒在粉末上，在30°C加熱混合物2. 6小時。將溶液冷卻至25°C，滴加水(217mL)。在加水 過程中出現黃棕色晶體。將懸浮體冷卻至5°C，攪拌1小時。通過燒結漏鬥過濾懸浮體，在 5°C用1 1乙腈水(160mL)洗滌兩次。在25°C真空乾燥所得固體24小時，得到45. Og 的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺黃棕色粉末。HPLC純度為99. 2%。表 5 因此，單釜合成/結晶過程提供了一種分離出基本上不含S-棉酚L-苯丙氨醇二 烯胺的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的有效方法。從約80g乙酸棉酚開始，得到了產率為 83%、純度為99. 2%的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。實施例7R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺結晶過程的再現性一般過程參見表6，在30°C在乙腈中混合外消旋乙酸棉酚(量)和L-苯丙氨醇 (2.1當量)，攪拌指示的時間。在每個實驗中，乙腈水之比約為5 1，在指示的溫度下加 結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺晶種。用約5 1乙腈水洗滌分離出來的結晶體R-棉 酚L-苯丙氨醇二烯胺。用HPLC測量純度。表6 (a)在有光的空氣中不加保護，在室溫下貯存幾天之後。因此，當加R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺晶種時，R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺在包含 約5 1乙腈水的溶劑體系中的結晶作用是可再現的。在每種情況下都得到良好的非對 映異構純度和化學純度。實施例8R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的大規模製備將外消旋乙酸棉酚(152. 8g,1.0eq.)和L-苯丙氨醇(83. 9g,2. Ieq.)溶解在乙 腈(1039mL)中，在氮氣保護下，在30°C加熱2. 5小時。然後將混合物加熱至50°C，加水 (208mL，1. 4eq. w/w)。將溶液冷卻至37°C，加純R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺晶種(0. 518g， 0. 5% w/w)0將混合物冷卻至5°C。在5°C過濾懸浮體，用乙腈水(5 l，208mL)洗滌， 在30°C真空乾燥，得到棕橙色R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺固體(90.5g，87%)。HPLC分析 表明非對映異構體R S比為98. 5 1. 5。若需要進一步提純，可將根據實施例8的方法(如上)得到R-棉酚L-苯丙氨醇二 烯胺(59. Og)溶解在60°C的5 1乙腈水(563mL)中。將溶液冷卻至47°C，加純R-棉 酚L-苯丙氨醇二烯胺晶種(0. 087g)，冷卻至5°C。過濾所得懸浮體，用5°C的5 1乙腈
19水(94mL)洗滌兩次，在30°C真空乾燥，得到棕橙色R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺固體(34. Ig, 73%)。HPLC分析表明純度為99. 2%。若還需要提純，可再進行結晶。實施例9乙酸R-棉酚的製備方案4 步驟1-水解將R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺(100g, 1. Oeq.)溶解在52°C的冰醋酸(850mL)中。 加水(212. 5mL，2. leq. w/w)，隨後加濃HCl (41. OmL, 8eq.)。在52°C將混合物攪拌3. 5小時之 後，立即向混合物中緩慢加水(425mL, 4. 2eq. w/w)。將懸浮體冷卻至20°C，過濾，用醋酸 水(1 1，IOOmL)洗滌，再用水洗滌(IOOmL)，在20°C真空乾燥，得到黃色乙酸R-棉酚共晶固體(104. 7g)。HPLC純度 為 97. 23%。步驟2-提純將乙酸R-棉酚共晶(73. 71g，1. Oeq)溶解在20°C乙酸乙酯(287mL)和乙醇(59mL) 中。過濾溶液，用乙酸乙酯(96mL)、乙酸(260mL)和水(64mL)洗滌。在低於30°C的溫度下真 空濃縮溶液，除去至少佔其總體積80%的乙酸乙酯和乙醇。加入乙酸水(1 l，147mL)， 在20°C攪拌懸浮體30分鐘，過濾，用乙酸水(1 l，74mL)洗滌三次。得到黃色乙酸R-棉 酚共晶固體(179. 4g)，直接用於下一步。若需要進一步提純，可將根據實施例9的方法第2步(如上)得到的乙酸R-棉酚 共晶(73. 71g)與乙酸乙酯(383mL)、乙醇(59mL)和乙酸(260mL) 一起在20°C攪拌。加水 (64mL)，在低於30°C的溫度下真空濃縮懸浮體，除去至少佔其總體積80%的乙酸乙酯和乙 醇。加入乙酸水(1 l，147mL)，在20°C攪拌懸浮體30分鐘，過濾，用乙酸水(1 1， 74mL)洗滌。得到黃色乙酸R-棉酚共晶固體(119. Ig)。若還需要提純，可再進行結晶。
R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺
乙酸R-棉酚
20
步驟3-溶劑交換使乙酸R-(-)_棉酚共晶(73. 71g，1.0eq.)懸浮在丙酮(590mL)中，用乙酸 (295mL)處理，在20°C攪拌。加水(295mL)，在 80體積％丙 酮。在20°C攪拌懸浮體，過濾，用乙酸水(1 l，100mL)洗滌。得到黃色乙酸R-棉酚共 晶固體(80. Og)，直接用於下一步。實施例10乙酸R-棉酚共晶的製備方案5 將乙酸R-(-)_棉酚共晶(73. 71g，1.0eq.)部分地溶解在乙酸(295mL)中，在20°C 攪拌3小時，同時加水(295mL)。過濾所得懸浮體，用乙酸水(1 1，IOOmL)洗滌。在 20°C真空乾燥分離出來的物質，得到黃色乙酸R-棉酚共晶固體(54. 2g，產率為73%，純度 為 98. 82% )。若還需要提純，可再進行結晶。前面的各個實施例顯示了在開發一種獲取R-(-)_棉酚及其乙酸共晶的方法時所 遇到的困難。製備了兩種不同的非對映異構棉酚衍生物，以期通過這兩種非對映異構體的 結晶作用來進行分離。如實施例2所示，通過結晶來拆分R-和S-棉酚L-苯丙氨酸二亞胺 混合物的嘗試未獲成功。在此項研究中，測試了多種的溶劑體系。在一些情況下觀察到非 對映異構體的中度富集。如實施例4所示，意外發現通過在包含乙腈和水的溶劑體系中進行結晶作用，可 將R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺從R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺混合物中分離出來，且非 對映異構純度高。所有其他溶劑體系均未得到滿意的結果。大多數溶劑系統中沒有形成晶 體。基於此發現，開發了一種可再現的單釜式工藝，用於分離結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二 烯胺(實施例5-7)。這有利於大規模製備乙酸R-(-)_棉酚共晶，如實施例8-10所示。上面充分描述了本發明，本領域技術人員應理解，本發明可在廣泛的等效條件範 圍和其他反應參數範圍內實現，只要不影響本發明的範圍或其任意實施方式。本文所引全 部專利、專利申請和出版物都通過參考完整地併入本文。
乙酸R-棉酚
乙酸R-(-)-棉酚共晶
2權利要求
一種從R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的混合物製備R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的方法，所述方法包括使所述混合物在包含乙腈和水的溶劑體系中結晶，以及分離出基本上不含所述S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺通過 過濾分離。
3.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，乙腈水之比約為5 1。
4.如權利要求3所述的方法，其特徵在於，乙腈水之比為5 1。
5.如權利要求1所述的方法，還包括a)用包含乙腈和水的溶劑體系洗滌所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺；以及b)真空乾燥所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。
6.一種製備R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的方法，它包括a)使棉酚與L-苯丙氨醇二烯胺在乙腈中縮合，得到R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺 的混合物；b)在a)完成時，向反應混合物中加水，得到結晶的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺；以及c)分離出基本上不含所述S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。
7.如權利要求6所述的方法，其特徵在於，所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺通過 過濾分離。
8.如權利要求6所述的方法，其特徵在於，b)中乙腈水之比約為5 1。
9.如權利要求8所述的方法，其特徵在於，乙腈水之比為5 1。
10.如權利要求6所述的方法，還包括a)用包含乙腈和水的溶劑體系洗滌所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺；以及b)真空乾燥所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。
11.如權利要求1或6所述的方法，其特徵在於，所述結晶作用通過加R-棉酚L-苯丙 氨醇二烯胺晶種引發。
12.如權利要求1或6所述的方法，其特徵在於，所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯 胺的純度約為90%或更高。
13.如權利要求12所述方法，其特徵在於，所述純度約為95%或更高。
14.如權利要求13所述的方法，其特徵在於，所述純度約為98%或更高。
15.如權利要求12所述的方法，其特徵在於，所述純度約為99%或更高。
16.一種製備乙酸R-(-)_棉酚共晶的方法，其改進之處包括在包含乙腈和水的溶劑 體系中使R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的混合物進行結晶作用，以及分離出基本上不 含所述S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺；以及製備乙酸 R-(-)_棉酚共晶。
17.如權利要求16所述的方法，還包括通過過濾分離所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。
18.如權利要求16所述的方法，其特徵在於，乙腈水之比約為5 1。
19.如權利要求18所述的方法，其特徵在於，乙腈水之比為5 1。
20.如權利要求16所述的方法，它還包括a)用包含乙腈和水的溶劑體系洗滌所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺；以及b)真空乾燥所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。
21.一種製備乙酸R-(-)_棉酚共晶的方法，其改進之處包括a)在乙腈中使棉酚與L-苯丙氨醇縮合，得到R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的混合物；b)在a)完成時，向反應混合物中加水，得到結晶的R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺；以及c)分離出基本上不含所述S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨 醇二烯胺；以及製備乙酸R-(-)_棉酚共晶。
22.如權利要求21所述的方法，還包括通過過濾分離所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。
23.如權利要求21所述的方法，其特徵在於，乙腈水之比約為5 1。
24.如權利要求23所述的方法，其特徵在於，乙腈水之比為5 1。
25.如權利要求21所述的方法，它還包括a)用包含乙腈和水的溶劑體系洗滌所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺；以及b)真空乾燥所述結晶體R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。
全文摘要
本發明涉及利用非色譜提純法製備R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺的方法。特別地，本發明涉及通過結晶法拆分R-和S-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺。R-棉酚L-苯丙氨醇二烯胺是有用的中間體，用於製備R-(-)-棉酚和乙酸R-(-)-棉酚共晶。乙酸R-(-)-棉酚及其共晶可用於誘導細胞凋亡，並可用于敏化細胞，以誘導凋亡性細胞死亡。
文檔編號A01N35/00GK101883486SQ200880110379
公開日2010年11月10日 申請日期2008年10月1日 優先權日2007年10月1日
發明者L·那瓦熱, M·郭, R·佩利翁, Z·曙光 申請人:阿森達治療學股份有限公司