一種納他黴素檢測方法及檢測卡與流程
2023-05-02 21:33:01 1
本發明涉及納他黴素檢測技術領域，具體為一種納他黴素檢測方法及檢測卡。
背景技術：
納他黴素為近白色或奶油黃色結晶粉末。是一種無臭、無味，低劑量且安全性高的食品防腐劑。納他黴素是由納他鏈黴菌受控發酵製得一種白色至乳白色的無臭無味的結晶粉末，通常以烯醇式結構存在。它的作用機理是與真菌的麥角甾醇以及其他甾醇基團結合，阻遏麥角甾醇生物合成，從而使細胞膜畸變，最終導致滲漏，引起細胞死亡。在焙烤食品用納他黴素對麵團進行表面處理，有明顯的延長保質期作用。
納他黴素依靠其內酯環結構與真菌細胞膜上的甾醇化合物作用，形成抗生素—甾醇化合物，從而破壞真菌的細胞質膜的結構。大環內脂的親水部分（多醇部分）在膜上形成水孔，損傷細胞膜通透性，進而引起菌內胺基酸，電解質等物質滲出，菌體死亡。當某些微生物細胞膜上不存在甾醇化合物時，納他黴素就對其無作用，因此納他黴素只對真菌產生抑制，對細菌和病毒不產生抗菌活性，納他黴素被用於治療真菌感染，包括假絲酵母、麴黴菌、鐮刀黴等，也被用作眼藥水或者口腔藥劑中，在這些應用中，人體對納他黴素的吸收較少。口服時，基本沒有從胃腸道被吸收，因此使它不適用為系統傳染的藥物。納他黴素在眼藥水中也有應用，其5%的納他黴素含量適用於治療微生物引起的真菌性瞼炎、結膜炎和角膜炎，包括腐皮鐮刀菌角膜炎。
納他黴素是一種天然、廣譜、高效安全的酵母菌及黴菌等絲狀真菌抑制劑，它不僅能夠抑制真菌，還能防止真菌毒素的產生。納他黴素對人體無害，很難被人體消化道吸收，而且微生物很難對其產生抗性，同時因為其溶解度很低等特點，通常用於食品的表面防腐。生物防腐劑。
1982年6月，美國FDA正式批准納他黴素可以用作食品防腐劑。1996年，中國食品添加劑標準化學技術委員會正式批准納他黴素可作為食品防腐劑。FAO/WHO聯合食品添加劑專家委員會規定了人體可無條件接受每天攝入每公斤體重0.3mg的納他黴素。JECFA/EC也授權通過批准。人體通常攝入量遠遠低於安全量以下，即使消費量很大的奶酪和香腸也如此。
納他黴素作為一種微生物防腐劑以它安全、天然和健康的特點而倍受人們的關注。納他黴素具有許多優點：延長食品的保質期，防止酵母和黴菌引起的變質；減少因為變質而引起的食品回收，降低生產成本；滿足消費者對天然食品的要求；不改變食品的風味；低劑量、高效率；抗菌作用時間長。
我國國標GB2760規定了納他黴素的適用範圍和用量：乳酪、肉製品、肉湯、西式火腿、廣式月餅、糕點表面等，用200-300mg/kg懸浮液噴霧或浸泡。殘留量應小於10mg/kg，然而由於納他黴素的性質，納他黴素的含量在檢測時操作複雜，且納他黴素的穩定性受PH值、溫度、氧化劑和金屬等影響，所以導致納他黴素的含量檢測受到影響，因此，亟需一種快捷的納他黴素檢測方法和檢測卡。
技術實現要素：
（一）解決的技術問題
針對現有技術的不足，本發明提供了一種納他黴素檢測方法及檢測卡，解決了納他黴素檢測操作複雜的問題。
（二）技術方案
為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：
一種納他黴素檢測方法，包括以下步驟：
S1、取2g的牛奶待測試樣A用濃度為25％的氨水2g調節待測試樣A的pH為7，得到待測試樣B，將待測試樣B4g和以9:1比例充分混合的甲醇和水溶液8ml，將其依次放置入固相萃取小柱。
S2、使所述待測試樣B4g和以9:1比例充分混合的甲醇和水溶液充分離心混合，稱重，使待測試樣和混合溶液的總重量在2g±0.001g，在4.0℃的條件下12000r/min高速冷凍離心10min沉澱蛋白，濾膜過濾後獲得試樣處理液。
S3、稱取1mg納他黴素，用甲醇定容在10ml棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存至檢測前；然後，用50％甲醇(含2％甲酸)稀釋，分別配製5-50μg/L的納他黴素標準溶液；分別注入高效液相色譜-串聯質譜HPLC-MS/MS測定。
S4、將所述試樣處理液通過過濾膜後供高效液相色譜-串聯質譜HPLC-MS/MS測定，所獲得的檢驗數據通過計算得到牛奶中的納他黴素的含量。
優選的，所述固相萃取小柱為SPE-MCX固相萃取小柱。
優選的，所述步驟S2中的混合時間為8分鐘。
優選的，所述色譜柱為反相色譜柱，流速為1.0ml/min，進樣系統為自動進樣器，溫度：30℃。
一種納他黴素檢測卡，包括殼體，所述殼體分為外殼體和內殼體，所述外殼體內壁的底部設置有卡環，所述內殼體的底部開設有環形槽，所述內殼體的頂部開設有凹槽，內殼體的表面開設有通槽，所述通槽的靠近凹槽內壁的一端粘附有檢測試紙，所述所述通槽的靠近外殼體外壁的一端固定連接有透鏡，所述外殼體的外壁粘貼有比色卡，所述比色卡位於透鏡的一側。
優選的，所述內殼體的底部固定連接有手持柄。
優選的，所述凹槽的深度為內殼體長度的0.8倍。
優選的，所述通槽的底端與凹槽的底端位於同一水平線。
優選的，所述內殼體和外殼體均為圓柱狀，且外殼體的大小與內殼體大小適配。
（三）有益效果
本發明提供了一種納他黴素檢測方法及檢測卡。具備以下有益效果：
（1）、該納他黴素檢測方法及檢測卡，只需要10分鐘即可完成納他黴素的檢測，同時降低了誤差，達到了簡單快速的效果，操作簡單，同時，通過內殼體表面的比色卡可快速的觀察到納他黴素的含量，操作簡單。
（2）、該納他黴素檢測方法及檢測卡，通過設置卡環和環形槽，扣合外殼體可以對內殼體進行保護，且閉合緊密，通過設置凹槽，充作加樣孔的作用，將待測液倒入凹槽內，浸染檢測試紙，通過設置透鏡，便於觀察檢測試紙的顏色，通過設置比色卡，可直接與檢測試紙的顏色進行對比，從而得出含量。
附圖說明
圖1為本發明納他黴素檢測卡的結構正剖圖；
圖2為本發明內殼體結構正視圖。
圖中：1殼體、101外殼體、102內殼體、2卡環、3環形槽、4凹槽、5通槽、6檢測試紙、7透鏡、8比色卡、9手持柄。
具體實施方式
下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。
本發明提供以下技術方案：
實施例一
一種納他黴素檢測方法，包括以下步驟：
S1、取2g的牛奶待測試樣A用濃度為25％的氨水2g調節待測試樣A的pH為7，得到待測試樣B，將待測試樣B4g和以9:1比例充分混合的甲醇和水溶液8ml，將其依次放置入固相萃取小柱，固相萃取小柱為SPE-MCX固相萃取小柱。
S2、使所述待測試樣B4g和以9:1比例充分混合的甲醇和水溶液充分離心混合，混合時間為8分鐘，稱重，使待測試樣和混合溶液的總重量在2g±0.001g，在4.0℃的條件下12000r/min高速冷凍離心10min沉澱蛋白，濾膜過濾後獲得試樣處理液。
S3、稱取1mg納他黴素，用甲醇定容在10ml棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存至檢測前；然後，用50％甲醇(含2％甲酸)稀釋，分別配製5μg/L的納他黴素標準溶液；分別注入高效液相色譜-串聯質譜HPLC-MS/MS測定，得出數據，色譜柱為反相色譜柱，流速為1.0ml/min，進樣系統為自動進樣器，溫度：30℃。
S4、將所述試樣處理液通過過濾膜後供高效液相色譜-串聯質譜HPLC-MS/MS測定，所獲得的檢驗數據通過計算得到牛奶中的納他黴素的含量，只需要10分鐘即可完成納他黴素的檢測，同時降低了誤差，達到了簡單快速的效果，操作簡單。
實施例二
一種納他黴素檢測方法，包括以下步驟：
S1、取2g的牛奶待測試樣A用濃度為25％的氨水2g調節待測試樣A的pH為7，得到待測試樣B，將待測試樣B4g和以9:1比例充分混合的甲醇和水溶液8ml，將其依次放置入固相萃取小柱，固相萃取小柱為SPE-MCX固相萃取小柱。
S2、使所述待測試樣B4g和以9:1比例充分混合的甲醇和水溶液充分離心混合，混合時間為8分鐘，稱重，使待測試樣和混合溶液的總重量在2g±0.001g，在4.0℃的條件下12000r/min高速冷凍離心10min沉澱蛋白，濾膜過濾後獲得試樣處理液。
S3、稱取1mg納他黴素，用甲醇定容在10ml棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存至檢測前；然後，用30％甲醇(含2％甲酸)稀釋，分別配製20μg/L的納他黴素標準溶液；分別注入高效液相色譜-串聯質譜HPLC-MS/MS測定，得出數據，色譜柱為反相色譜柱，流速為1.0ml/min，進樣系統為自動進樣器，溫度：30℃。
S4、將所述試樣處理液通過過濾膜後供高效液相色譜-串聯質譜HPLC-MS/MS測定，所獲得的檢驗數據通過計算得到牛奶中的納他黴素的含量，只需要10分鐘即可完成納他黴素的檢測，同時降低了誤差，達到了簡單快速的效果，操作簡單，同時通過計算納他黴素含量的變化，可以觀察納他黴素標準溶液濃度和稀釋溶液甲醇濃度的變化對檢測結果的影響，進行記錄。
實施例三
一種納他黴素檢測方法，包括以下步驟：
S1、取2g的牛奶待測試樣A用濃度為25％的氨水2g調節待測試樣A的pH為7，得到待測試樣B，將待測試樣B4g和以9:1比例充分混合的甲醇和水溶液8ml，將其依次放置入固相萃取小柱，固相萃取小柱為SPE-MCX固相萃取小柱。
S2、使所述待測試樣B4g和以9:1比例充分混合的甲醇和水溶液充分離心混合，混合時間為8分鐘，稱重，使待測試樣和混合溶液的總重量在2g±0.001g，在4.0℃的條件下12000r/min高速冷凍離心10min沉澱蛋白，濾膜過濾後獲得試樣處理液。
S3、稱取1mg納他黴素，用甲醇定容在10ml棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存至檢測前；然後，用20％甲醇(含2％甲酸)稀釋，分別配製20μg/L的納他黴素標準溶液；分別注入高效液相色譜-串聯質譜HPLC-MS/MS測定，得出數據，色譜柱為反相色譜柱，流速為1.0ml/min，進樣系統為自動進樣器，溫度：0℃。
S4、將所述試樣處理液通過過濾膜後供高效液相色譜-串聯質譜HPLC-MS/MS測定，所獲得的檢驗數據通過計算得到牛奶中的納他黴素的含量，只需要10分鐘即可完成納他黴素的檢測，同時降低了誤差，達到了簡單快速的效果，操作簡單，同時利用得出的納他黴素含量分別與實施例一和實施例二中的納他黴素含量進行對比，得出甲醇濃度和自動進樣器溫度的變化，對納他黴素濃度檢測的影響，從而統計得出甲醇濃度、納他黴素標準溶液濃度和自動進樣器溫度變化對納他黴素檢測含量的影響。
如圖1-2所示，一種納他黴素檢測卡，包括殼體1，殼體1分為外殼體101和內殼體102，內殼體102和外殼體101均為圓柱狀，且外殼體101的大小與內殼體102大小適配，通過對殼體1形狀的設定，在拿取攜帶的時候更加方便，外殼體101內壁的底部設置有卡環2，內殼體102的底部開設有環形槽3，通過設置卡環2和環形槽3，扣合外殼體101可以對內殼體102進行保護，且閉合緊密，內殼體102的頂部開設有凹槽4，通過設置凹槽4，充作加樣孔的作用，將待測液倒入凹槽4內，浸染檢測試紙6，凹槽4的深度為內殼體102長度的0.8倍，內殼體102的表面開設有通槽5，內殼體102的底部固定連接有手持柄9，通槽5的靠近凹槽4內壁的一端粘附有檢測試紙6，通槽5的底端與凹槽4的底端位於同一水平線，通槽5的靠近外殼體101外壁的一端固定連接有透鏡7，通過設置透鏡7，便於觀察檢測試紙6的顏色，外殼體101的外壁粘貼有比色卡8，比色卡8位於透鏡7的一側，通過內殼體102表面的比色卡8可快速的觀察到納他黴素的含量，操作簡單，將標準溶液倒入凹槽4內，標準溶液浸溼檢測試紙6，通過透鏡7觀察檢測試紙6的顏色，與透鏡7一側的比色卡8進行顏色對比，從而得出標準溶液中的納他黴素的含量。
儘管已經示出和描述了本發明的實施例，對於本領域的普通技術人員而言，可以理解在不脫離本發明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發明的範圍由所附權利要求及其等同物限定。