殺滅土壤線蟲微生態菌製劑及其製備方法
2023-07-06 01:10:36 2
專利名稱：殺滅土壤線蟲微生態菌製劑及其製備方法
技術領域：
生物技術領域，本發明涉及一種殺滅土壤線蟲微生態菌製劑及其製備方法。
背景技術：
目前我國的土壤生態系統己經或正在受到嚴重破壞，土壤線蟲顯著增多，植物病害的種 類和範圍不斷增加，這都是土壤生態系統遭到破壞的明證。其中土壤線蟲是直接影響農作物 產量的土壤害蟲，尤其是種植花生、紅薯的土壤，線蟲可以把整塊整塊土地的花生、紅薯吃 光或破壞，幾乎絕收。以前只是尋求化學殺蟲劑，但其第一年有效，第二年則幾乎無效，而 且它所造成的土壤汙染幾十年都消除不掉。所以，研究開發微生物製劑殺滅線蟲勢在必行。 國內外己有一些研究，但是，還未見高密度、高活性，能大面積使用的微生態菌製劑的報導。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種高密度、高活性的殺滅土壤線蟲微生態菌製劑 及其製備方法。
本發明解決該技術問題所採用的技術方案是
以巨大芽孢桿菌(AS 1.217， Ba"'〃w megaten'wm)為主，輔以適量細黃鏈黴菌 (AS4.891， ^reptow少c^ wz'cn y^vM^，並吸附固定化於麥麩上製備成菌製劑。兩株菌種 均購於中國科學院微生物研究所菌種保藏中心。
殺滅土壤線蟲微生態菌製劑是上述巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌優化組合的複合微生物組 成，其中各組分的重量百分比為巨大芽孢桿菌60% 80%，細黃鏈黴菌20% 40%。
殺滅土壤線蟲微生態菌製劑的製備方法包括下述步驟
1. 將保存的各斜面菌種活化，分別搖瓶培養。巨大芽孢桿菌和細黃鏈黴菌都用可溶性澱 粉培養基培養，培養基pH7.0 7.5， 12rC高壓滅菌20-30分鐘；巨大芽孢桿菌，35 40 。C培養20 24小時；細黃鏈黴菌，28 3CTC培養36 50小時。
2. 用玉米澱粉培養基， 一級液體擴大培養巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌；接種量5% 10%。
3. 用玉米澱粉培養基，二級液體擴大培養巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌；接種量5% 10%。
4. 以麥麩為載體分別固體擴大培養並固定化於麥麩上。麥麩滅菌前加入10%玉米澱粉的 培養液，固體擴大培養條件30 37°C，不斷攪拌並通入淨化的空氣。
5. 將巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌經30 45'C溫熱風乾燥，然後粉碎。
6. 將吸附於麥麩上的巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌混合，各菌組分的重量百分比為巨大 芽孢桿菌60% 80%，細黃鏈黴菌20% 40%。
本發明的有益效果
1)複合菌固定化於麥麩上，使每克複合菌製劑的有效菌菌落數(CFU)可高達100個億， 幾乎達到了最大可能數，至今還未見如此高含菌量菌製劑的報導.麥麩不僅能為所培養菌提供
一些營養成分，還由於其網狀結構，具有較大的比表面積，所以能在單位體積內附著吸附固 定化較多的菌體。所以，有效菌一旦施入土壤可以很快形成優勢菌群，發揮殺滅線蟲的作用， 殺滅率接近100%。還有殺滅或驅除蠐螬(金龜子的幼蟲)的作用，殺滅率或驅除率達95% 以上。
2) 土壤線蟲的腸壁細胞含有較多的幾丁質，而巨大芽孢桿菌能分泌較多的幾丁質酶。所 以，土壤線蟲一旦遇到巨大芽孢桿菌，由於其腸壁遭到巨大芽孢桿菌幾丁質酶的破壞，最後 必死亡。巨大芽孢桿菌還具有把土壤固定化的磷轉化為可溶性磷的作用，可溶性磷是植物和 微生物可利用的磷。
細黃鏈黴菌，能產生抗生素抗病驅蟲，分泌刺激素，促進植物生長，轉化礦物質。 二者相互配合，不僅殺蟲驅蟲而且促進、修復土壤生態系統平衡。
具體實施方式
實施例1
按下列步驟進行-
1) 將4'C保存的各斜面菌種活化，分別搖瓶培養。巨大芽孢桿菌和細黃鏈黴菌都用可溶 性澱粉培養基培養，具體配方如下可溶性澱粉20g， KNO:, lg,NaCl 0. 5g, K, 0. 5g, MgS04. 7H20 0. 5g, FeS04 0, Olg,蒸餾水lOOOmL， pH7. 2， 12rC高壓滅菌20分鐘。巨大 芽孢桿菌，37匸培養24小時；細黃鏈黴菌，3(TC培養48小時。
2) —級液體擴大培養(巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌分別單獨擴大培養，培養基用玉米澱 粉，培養條件同上)；接種量5%。
3) 二級液體分別擴大培養，培養基和培養條件同上；接種量5%。
4) 以麥麩為載體分別固體擴大培養並固定化於麥麩上。麥麩滅菌前加入10%玉米澱粉培 養液，固體擴大培養條件30 37°C，不斷攪拌並通入淨化的空氣。
5) 將上述兩種菌35。C溫熱風乾燥，含水率20%以下，然後粉碎，將吸附於麥麩上的各 菌按重量百分比混合巨大芽孢桿菌600g，細黃鏈黴菌400g，充分混合，即可得到本發 明的菌製劑。
實施例2
按下列步驟進行-
1) 將4'C保存的各斜面菌種活化，分別搖瓶培養。巨大芽孢桿菌和細黃鏈黴菌都用可溶 性澱粉培養基培養，具體配方如下可溶性澱粉20g， K亂lg,NaCl 0.5g, K2,4 0. 5g, MgS04. 7H20 0. 5g， FeS04 0. Olg,蒸餾水lOOOml， pH7. 2， 121。C高壓滅菌20分鐘。巨大 芽孢桿菌，37t:培養24小時；細黃鏈黴菌，3(TC培養48小時。
2) —級液體擴大培養(巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌分別單獨擴大培養，培養基用玉米澱 粉，培養條件同上)；接種量10%。
3) 二級液體分別擴大培養，培養基和培養條件同上；接種量10%。
4) 以麥麩為載體分別固體擴大培養並固定化於麥麩上。麥麩滅菌前加入10%玉米澱粉培 養液，固體擴大培養條件30 37°C，不斷攪拌並通入淨化的空氣。
5) 將上述兩種菌45'C溫熱風乾燥，然後粉碎，將吸附於麥麩上的各菌按重量百分比混 合巨大芽孢桿菌80kg，細黃鏈黴菌20kg，充分混合，封裝於有聚乙烯內襯的包裝袋內，含 水率20°/。，有效期一年。
實施例3
按下列步驟進行
1) 將4'C保存的各斜面菌種活化，分別搖瓶培養。巨大芽孢桿菌和細黃鏈黴菌都用可溶 性澱粉培養基培養，具體配方如下可溶性澱粉20g， KNQ, lg，NaCl 0. 5g， K2HP04 0. 5g， MgS04. 7H20 0. 5g, FeS04 0. Olg，蒸餾水1000ml, pH7. 2， 121。C高壓滅菌20分鐘。巨大 芽孢桿菌，37'C培養24小時；細黃鏈黴菌，3(TC培養48小時。
2) —級液體擴大培養(巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌分別單獨擴大培養，培養基用玉米澱 粉，培養條件同上)；接種量10%。
3) 二級液體分別擴大培養，培養基和培養條件同上；接種量5%。
4) 以麥麩為載體分別固體擴大培養並固定化於麥麩上。麥麩滅菌前加入10%玉米澱粉培 養液，固體擴大培養條件30 37°C，不斷攪拌並通入淨化的空氣。
5) 將上述兩種菌45t:溫熱風乾燥，然後粉碎，將吸附於麥麩上的各菌按重量百分比混 合巨大芽孢桿菌750kg，細黃鏈黴菌250kg，充分混合，封裝於有聚乙烯內襯的包裝袋內， 含水率20%，有效期一年。
實施例4:測定分離土壤線蟲的方法
技術領域：
本發明用離心浮選法，這種方法能夠有效的分離土壤中包括線蟲卵及死體、非遊動性線
蟲在內的大部分線蟲。步驟如下
取過20目篩土壤樣品10g放在離心管內，加水10 15毫升充分震蕩，混合； 將比重為1.20的蔗糖水溶液(蔗糖800g溶於l升水中)IO毫升，用移液管或加樣器放 進離心管底部；
2500g,離心5min。溶液分成兩層，線蟲聚集在交界層，用滴管吸取交界層的線蟲至10 毫升表皿內。
將表皿置於解剖鏡下計數。
該方法的優點只需要一次離心，收集的線蟲水液清，容易辨別線蟲的形態。 注意事項1) 土壤樣品往往會混有植物碎屑，為了減少對線蟲的混攪，最好在取樣前將 土壤樣品過20目篩；
2)因加入的蔗糖液多少和離心速度的關係，有時交界層不十分清晰，遇到這種情況時，
可以適當多取些水溶液，以免丟失線蟲。
權利要求
1.一種殺滅土壤線蟲的微生態菌製劑，其特徵在於該菌製劑由巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)和細黃鏈黴菌(Staestomyces microflavus)優化組合的複合微生物組成，其中各菌組分的重量百分比為巨大芽孢桿菌60％～80％，細黃鏈黴菌20％～40％。
2. 如權利要求1所述的殺滅土壤線蟲的微生態菌製劑的製備方法，其特徵在於它 包括下述步驟1) 將保存的各斜面菌種活化，分別搖瓶培養；巨大芽孢桿菌和細黃鏈黴菌都用 可溶性澱粉培養基培養，培養基pH7.0 7.5, 115 121。C高壓滅菌20 30 分鐘；巨大芽孢桿菌，35 40'C培養20 24小時；細黃鏈黴菌，28 30'C培 養36 50小時；2) 巨大芽孢杆與細黃鏈黴菌的一級液體擴大培養(20 L罐)；接種量5% 10%;3) 巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌的二級液體擴大培養(200 1^罐)；接種量5% 10%;4) 以麥麩為載體分別進行固體擴大培養並固定化於麥麩上。固體擴大培養條件: 30 37°C，不斷攪拌並通入淨化的空氣；5) 將巨大芽孢桿菌和細黃鏈黴菌分別在30 45'C溫熱風乾燥，然後粉碎；6) 將巳乾燥的巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌混合，各菌組分的重量百分比為巨大芽孢桿菌60% 80%，細黃鏈黴菌20% 40%。
全文摘要
本發明涉及一種殺滅土壤線蟲微生態菌製劑及其製備方法。殺滅土壤線蟲的微生態菌製劑是巨大芽孢桿菌與細黃鏈黴菌優化組合的複合微生物，其中各組分的重量百分比為巨大芽孢桿菌60％～80％，細黃鏈黴菌20％～40％。本發明的積極效果在於菌製劑經活化，施入土壤中能很快形成微生態優勢菌群，殺滅土壤線蟲效率接近100％，驅除蠐螬率達95％以上。菌製劑的有效菌落數高，適應性強，對修復土壤生態環境具有明顯的作用。
文檔編號A01P5/00GK101099492SQ20071005842
公開日2008年1月9日 申請日期2007年7月30日 優先權日2007年7月30日
發明者曼 劉, 吉雪瑩, 崔合香, 崔小會, 張清敏 申請人:南開大學