馬齒莧提取物及其抗缺氧用途的製作方法

2023-07-07 15:07:11 2

專利名稱：馬齒莧提取物及其抗缺氧用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，是馬齒莧提取物及其抗缺氧用途。
背景技術：
氧是絕大多數生命形式存在所必需的。許多病理過程如心臟病、嚴重哮喘、一氧化碳中毒、窒息、麻醉和中毒等情況下都會引起機體缺氧或供氧不足，航空航天、潛水、高原作業都極易發生缺氧。即使是短暫的局部的氧供不足都可能產生細胞、組織、器官不可逆的損傷，引起一些重要的生理病理變化。如何提高人類對低氧耐受能力和有效的幹預低氧對人體損害的措施是我們必須面臨和解決的重大問題。
目前，常用的抗缺氧方法是通過習服鍛鍊，即預先在可耐受的低氧環境中暴露一段時間，在產生耐受性以後再進入更低氧濃度的低氧環境。雖然習服鍛鍊可在一定程度上增強機體對缺氧的適應能力，但受到身體素質、時間、地點等多方麵條件的限制，對許多人來說難以實施。而西藥主要是用於對缺氧造成的各種症狀的改善，如乙醯唑胺是通過利尿減少有效循環血量，減輕心臟負荷而緩解因高原缺氧所引起的肺水腫；鹽酸可樂定是通過降低平均動脈血壓，減輕大腦灌注壓，減少大腦血流量，從而避免大腦水腫等高原病症狀的發生；地塞米松主要用於急性危重高原病的治療等等，而且西藥都存在不同程度的副作用。我國有不少學者對中草藥抗缺氧作用進行了研究， 據報導具有抗缺氧效應的中藥或中藥有效成分有人參(人參皂苷)、銀杏內酯、紅景天、川芎嗪、黃芪、丹參等。但是這些中草藥有的分布局限、資源很少、價格比較昂貴，有的效果不明顯。

發明內容
本發明提供一種能提高機體抗缺氧能力的馬齒莧提取物。馬齒莧為馬齒莧科植物馬齒莧Portulaca oleracea L.的全草。別名有瓜子菜、耐旱菜、安樂菜、酸莧、長命菜、長命莧等。一年生肉質草本植物，是藥食兩用資源植物。莖葉可食用，民間常做蔬菜，也可作家畜飼料。馬齒莧具有分布廣泛、易於種植採集、價格低廉等優點。
中醫認為馬齒莧味酸，性寒，可清熱解毒，散盅消腫。體外試驗表明有效成分有廣譜抗菌作用，特別是對各型痢疾桿菌有抑制和殺滅作用。對百日咳、傷寒、肺結核也有較好的治療效果，並對某些致病真菌也有不同程度的抑制作用。近年又發現其有增強免疫、清除氧自由基、抗衰老、降低血脂血糖等功效。有關化學成分分析發現馬齒莧全草含有大量去甲腎上腺素(Noradrenaline，2.5mg/g鮮草)和多量鉀鹽，如硝酸鉀、氯化鉀、硫酸鉀等，以K20計算，鮮草含鉀鹽1％，乾草含鉀鹽17％、此外尚含二羥基苯乙胺(Dopamine)，二羥基苯丙氨酸(DOPA)、苯甲酸、檸檬酸、穀氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及蔗糖、葡萄糖、果糖等。國外資料[1.Ezekwe MO，Omara-Alwala TR，Membrahtu T，Nutritive characterizationof purslane accessions as influenced by planting date，Plant Foods Hum Nutr.1999；54(3)183-91. 2.Simopoulos AP，Norman HA，Gillaspy JE，Duke JA，Common purslanea source of omega-3 fatty acids and antioxidants，J Am Coll Nutr.1992 Aug；11(4)374-82.3.Palaniswamy UR，McAvoy RJ，Bible BB，Stage of harvest and polyunsaturated essential fattyacid concentrations in purslane(Portulaca oleraceae)leaves，J Agric Food Chem.2001Jul；49(7)3490-3.]報導，新鮮馬齒莧全草所含組分(％)為水分92.61、脂肪0.80、含氮可提取物2.24、不含氮可提取物2.16、粗纖準1.03、灰分1.56。近期研究報導100g新鮮馬齒莧葉含有300-400mg α-亞麻酸1.22mg、維生素E 26.6mg維生素C 1.9mg、1.48mg穀胱甘肽。每百克可食部分中含蛋白質2.3g、脂肪0.5g、粗纖維0.7g、鈣85mg、磷56mg、鐵1.5mg、胡蘿蔔素2.23mg、硫胺素0.03mg、核黃素0.11mg、尼克酸0.7mg、維生素C 23mg。還發現馬齒莧內含有ω-3不飽合脂肪酸，可用於防治心臟病發生。
本發明馬齒莧提取物的製備方法如下將馬齒莧地上部分或全草低溫烘乾，幹品以石油醚(60～90℃)回流2小時，以去除脂溶性物質，在常溫下揮幹溶劑後，按常規將馬齒莧用蒸餾水煎煮2次，第一次2小時，第二次1小時30分鐘，合併兩次煎煮液，以2500～3000轉/分鐘離心20～30分鐘，棄沉澱，將上清液置100℃水浴濃縮，再加乙醇至醇濃度為80％，攪勻，在5～10℃下靜置24～48小時，過濾後留取濾液，將濾液置旋轉蒸發儀中濃縮乾燥，得馬齒莧提取物。
經動物實驗證明(詳見實施例)，本發明馬齒莧提取物具有提高機體耐受缺氧能力的功能，主要的功效學或藥效學作用如下一、提高機體缺氧耐受能力1、明顯延長小鼠在窒息性缺氧條件下的存活時間；2、明顯延長小鼠在常壓缺氧條件下的存活時間；3、明顯延長小鼠在減壓缺氧條件下的存活時間4、明顯延長小鼠在氰化鉀缺氧條件下的存活時間；二、促進機體在缺氧條件下的能量代謝1、增強小鼠在缺氧條件下的線粒體增生和線粒體的呼吸功能；2、增強小鼠在低氧條件下的葡萄糖轉運體的功能；3、增強小鼠在低氧條件下的無氧酵解限速酶的活性；三、促進機體在低氧條件下對氧的利用率1、促進小鼠在低氧條件下紅細胞釋放、生成和血紅蛋白生成；
2、提高小鼠在低氧條件下紅細胞的攜氧能力；3、促進小鼠在低氧條件下心機和骨骼肌的毛細血管增生；四、促進機體在低氧條件下的抗氧化損傷能力1、促進小鼠在低氧條件下腦、肝、血清SOD酶、CAT酶的活性；2、減少小鼠在低氧條件下腦、肝等組織脂褐質和丙二醛的含量。
五、提高機體在缺氧條件下對感染的抵抗力1、可緩解低氧條件下對白細胞的抑制作用2、提高T細胞和白細胞的功能本發明馬齒莧提取物可用於製備抗缺氧保健食品和藥物製劑。所述的保健食品包括日常食品加工工藝可以製成的各種食物形式，如乾糧、飲料、衝劑等；藥物包括常規藥物製劑工藝可以製成能夠在臨床上使用的藥物劑型，如丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊、片劑、口服液、注射劑、氣霧劑、膜劑、微囊及各類長效製劑和複方製劑。
具體實施例方式
本發明的馬齒莧提取物製備方法為取馬齒莧地上部分或全草，低溫烘乾，石油醚(餾程60～90℃，下同)回流提取2小時，揮幹溶劑後，按常規加蒸餾水煎煮2次，第一次為2小時，第二次為1小時30分鐘，合併煎煮液，以2500～3000轉/分鐘離心20～30分鐘，棄沉澱，上清液置100℃水浴濃縮後，以醇沉法去除雜質，即加入乙醇至醇濃度為80％，攪勻，在5～10℃條件下靜置24～48小時，過濾後取濾液，將濾液濃縮乾燥後，即為馬齒莧提取物，分裝密封備用即可。
實施例一製備馬齒莧提取物採集新鮮馬齒莧全草，洗淨泥沙，以60℃低溫烘乾，稱取馬齒莧幹品1000g，以石油醚回流提取2小時，於常溫下揮幹溶劑後加蒸餾水2000ml煎煮2次，第一次為2小時，第二次為1小時30分鐘，合併兩次煎煮液，以3000轉/分鐘離心20分鐘，棄沉澱，上清液以100℃水浴濃縮至200ml，加入乙醇至醇濃度為80％，攪勻，在5℃條件下靜置48小時，以濾紙過濾去除沉澱物，濾液置旋轉蒸發儀濃縮乾燥後得乾粉75g，按1g/袋分裝密封，即為馬齒莧提取物成品。
實施例二製備馬齒莧提取物與人參皂苷複方製劑將馬齒莧提取物與人參皂苷以10∶1比例混勻，即為複方製劑。分裝密封即可。
動物實驗以實施例一製備的馬齒莧提取物及實施例二製備的複方製劑為例，以人參皂苷為對照品，進行如下實驗。
實施例三對小鼠常壓缺氧耐受實驗1、配製藥液
(1)複方製劑溶液製備取16.5g實施例二製備的複方製劑，溶於200ml蒸餾水，微熱溶解。
(2)馬齒莧提取物溶液製備取15g實施例一製備的馬齒莧提取物，溶於200ml蒸餾水，微熱溶解。
(3)人參皂苷溶液製備取3g人參皂苷溶於200ml蒸餾水，加熱溶解。
2.動物及分組昆明種小鼠60隻(購自第二軍醫大學動物實驗中心，下同)，隨機分為4組，每組15隻，分別為對照組、馬齒莧組、人參皂苷組和複方製劑組。
3、實驗方法取上述各組藥液，分別對各組小鼠施灌胃，每天一次，每隻小鼠每次1ml，連續5天，對照組小鼠以等體積蒸餾水灌胃。缺氧實驗使用150ml堆型瓶，密閉缺氧，觀察小鼠存活時間，結果見表1。
表1對小鼠常壓缺氧耐受時間的影響組別小鼠存活時間對照組 13.11±1.66馬齒莧組16.03±2.62*人參皂苷組 15.91±2.33*複方組 19.43±1.75***與對照組比P＜0.05；**與對照組比P＜0.01由表1可見，馬齒莧提取物與人參皂苷提高小鼠常壓對缺氧耐受力的作用相近，複方製劑具有顯著延長常壓下小鼠缺氧耐受時間的作用。
實施例四、不同劑量馬齒莧提取物的抗缺氧作用1、配製藥液將實施例一製備的馬齒莧提取物以蒸餾水分別配成濃度為37.5mg/ml、75mg/ml、150mg/ml的溶液，作為低劑量、中劑量、高劑量三種溶液。
2、動物及分組昆明種小鼠60隻，隨機分為高、中、低劑量組和對照組，每組15隻。
3、灌胃與實驗方法同實施例三，結果見表2。
表2不同劑量馬齒莧提取物對小鼠缺氧耐受時間的影響組別 小鼠存活時間對照組11.46±2.73低劑量組 14.15±3.24中劑量組 16.82±2.91*高劑量組 19.58±1.87***與對照組比P＜0.05，**與對照組比P＜0.01由表2可見，馬齒莧提取物在75mg/ml以上劑量時表現出明顯的抗缺氧作用，並隨劑量的增加而增大，呈明顯的量效關係。
實例五、對小鼠腹腔注射KCN急性缺氧耐受時間的影響1.藥液配製同實施例三。
2、昆明種小鼠60隻小鼠，隨機分成4組，各組小鼠分別灌胃給藥，方法同實施例三，對照組灌胃等體積蒸餾水，連續5天。末次給藥後1小時各組小鼠分別腹腔注射KCN 10mg/kg，記錄小鼠死亡時間，結果見表3。
表3對小鼠腹腔注射KCN急性缺氧耐受時間的影響組別 存活時間(m)對照組2.70±0.42馬齒莧組 3.51±0.56*人參皂苷組2.90±0.23複方組5.30±0.71**與對照組比較*p＜0.05，**與對照組比P＜0.01由表3可見，馬齒莧提取物和複方製劑組都能提高小鼠對腹腔注射KCN急性缺氧耐受時間，而複方製劑的作用更為明顯。
實施例六、對缺氧小鼠線粒體功能的影響1、藥液配製方法同實施例三，複方製劑的濃度為82.5mg/ml，馬齒莧提取物濃度為75mg/ml，人參皂苷濃度為15mg/ml。
2、B/C小鼠48隻，購自第二軍醫大學動物實驗中心，隨機分為4組，分別為正常對照組、缺氧對照組、馬齒莧組、人參皂苷組和複方組。
3、缺氧及灌胃將各組小鼠按實施例三方法灌胃5天，1ml/只/日。第6天，除正常對照組外，將其他4組小鼠置缺氧環境，缺氧採用500ml廣口瓶，內放10克鈉石灰，以吸收二氧化碳和水氣，密閉缺氧90分鐘，立即宰殺，速取大腦，冰凍生理鹽水洗淨，按文獻[湯依群，戴德哉，趙健等，氯苄四氫小檗鹼對小鼠大腦線粒體德保護作用(J)，中國藥理學與毒理學雜誌，1996，10(1)31～3]方法分離線粒體，用Clark氧電極法測定線粒體呼吸功能，結果見表4。
表4小鼠大腦線粒體呼吸功能測定(呼吸控制率，P/O比)組別呼吸控制率(N)呼吸控制率(F)正常對照組 5.07±0.58 4.01±0.32馬齒莧組3.85±0.26***## 3.34±0.39***##人參皂苷組 3.51±0.35***# 3.00±0.33***複方組 3.97±0.46***## 3.48±0.21***##缺氧對照組 3.00±0.43***2.74±0.40***
與空白組比*P＜0.05，**＜0.01，***P＜0.001；與對照組比#P＜0.05，##＜0.01，由表4可見，馬齒莧提取物和複方製劑都具有增強小鼠在缺氧條件下線粒體呼吸功能的作用。
實施例七、對慢性缺氧小鼠紅細胞、紅細胞壓積和血紅蛋白的影響1、藥液配製方法同實施例三，複方製劑的濃度為82.5mg/ml，馬齒莧提取物濃度為75mg/ml，人參皂苷濃度為15mg/ml。
2、動物及分組ICR小鼠60隻，購自第二軍醫大學動物實驗中心，隨機分為對照組、馬齒莧組、人參皂苷組和複方組。
3、缺氧及灌胃灌胃1ml/只/日，連續5天。缺氧採用上海701所楊園醫用氧倉廠生產的醫用氧倉，倉內氧濃度恆定在10％，並放入250克鈉石灰以吸收二氧化碳和水氣，小鼠在末次灌胃後放入氧倉，於12小時後摘除眼球取血，以血細胞自動分析儀分析各項指標，結果見表5。
表5馬齒莧對缺氧12小時小鼠紅細胞、紅細胞壓積和血紅蛋白的影響組別 紅細胞數 血紅蛋白 紅細胞壓積馬齒莧組 7.92±0.52*133.86±10.37* 0.413±0.031*人參皂苷組7.89±0.78*129.25±14.20 0.409±0.044複方組8.11±0.26*145.37±11.49* 0.472±0.037*對照組7.11±0.76 117.13±13.59 0.371±0.037與對照組比*P＜0.05由表5可見，馬齒莧提取物和複方製劑對小鼠紅細胞、紅細胞壓積和血紅蛋白皆具有明顯升高作用。
實施例八、對慢性缺氧小鼠白細胞的影響1、藥液配製方法同實施例三，複方製劑的濃度為82.5mg/ml，馬齒莧提取物濃度為75mg/ml，人參皂苷濃度為15mg/ml。
2、動物及分組ICR小鼠75隻，隨機分為5組，分別為正常對照組、缺氧對照組、馬齒莧組、人參皂苷組和複方組。
3、實驗方法灌胃5天，1ml/只/日。缺氧採用上海701所楊園醫用氧倉廠生產的醫用氧倉，倉內氧濃度恆定在10％，並放入250克鈉石灰以吸收二氧化碳和水氣，小鼠在末次灌胃後放入氧倉，分別於24小時後摘除眼球取血，以血細胞自動分析儀計數白細胞，結果見表6。
表6馬齒莧提取物對慢性缺氧24小時小鼠白細胞數的影響組別白細胞(109/L)馬齒莧組6.79±0.78**人參皂苷組 4.78±0.57複方組 6.88±0.59**缺氧對照組 3.38±0.34正常對照組 6.81±0.87**注**與缺氧對照組比P＜0.01由表6可見，馬齒莧提取物和複方製劑可顯著升高白細胞數，緩解低氧條件下對白細胞的抑制作用。
由上可見，本發明製備的馬齒莧提取物以及以馬齒莧提取物為主與人參皂苷組成的複方製劑均具有明顯的抗缺氧作用。本發明馬齒莧提取物製備方法簡單，成本低廉，抗缺氧效果顯著，因此可用於製備抗缺氧藥物或食品。
權利要求
1.一種馬齒莧提取物的製備方法，步驟如下將馬齒莧全草或莖葉幹品用石油醚回流2小時，揮幹溶劑，將馬齒莧用蒸餾水煎煮2次，第一次為2小時，第二次為1小時30分鐘，合併煎煮液，以2500～3000轉/分鐘離心20～30分鐘，棄沉澱，上清液置100℃水浴濃縮後，加乙醇至醇濃度為80％，攪勻，在5～10℃條件下靜置24～48小時，過濾，將濾液濃縮乾燥，得馬齒莧提取物。
2.權利要求1所述方法製得的馬齒莧提取物。
3.權利要求2所述馬齒莧提取物在製備抗缺氧藥物或食品中的應用。
全文摘要
本發明涉及醫藥技術領域，是馬齒莧提取物及其抗缺氧用途。用水提醇沉法製備馬齒莧提取物，經動物實驗，證明具有顯著的抗缺氧作用。本發明製備方法簡單，成本低廉，可用於製備抗缺氧藥物或食品。
文檔編號A61P39/06GK1557417SQ20041001612
公開日2004年12月29日 申請日期2004年2月4日 優先權日2004年2月4日
發明者凌晨, 凌 晨 申請人:凌晨, 凌 晨