作為凝血酶受體拮抗劑的喜巴辛類似物的製作方法

2023-07-08 00:44:01

專利名稱：作為凝血酶受體拮抗劑的喜巴辛類似物的製作方法
背景技術：
已知凝血酶在不同細胞類型中有多種活性，並且已知凝血酶受體存在於細胞類型如人血小板、血管平滑肌細胞、內皮細胞和成纖維細胞。因此預期凝血酶受體拮抗劑將在治療血栓形成、炎症、動脈粥樣硬化和纖維增生紊亂，以及凝血酶及其受體起病理作用的其它紊亂中有用。
基於凝血酶受體上包括胺基酸取代的結構活性研究已經鑑定了凝血酶受體拮抗劑肽。在Bernatowicz等，J.Med.Chem.，39(1996)，p.4879-4887中公開了四肽和五肽作為有效的凝血酶受體拮抗劑，例如N-反-肉桂醯-p-氟Phe-p-胍基Phe-Leu-Arg-Arg-NH2。WO 94/03479(1994年2月17日公開)中也公開了凝血酶受體拮抗劑肽。
大麻酯受體屬於G蛋白偶聯受體總科。它們分為以神經元為主的CB1受體和以外周為主的CB2受體。這些受體通過調節腺苷酸環化酶和Ca+2和K+流來發揮它們的生物學作用。雖然CB1受體的作用主要與中樞神經系統有關，但認為CB2受體具有與支氣管狹窄，免疫調節和發炎相關的外周作用。據此，預期選擇性CB2受體結合劑對與類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、多發性硬化、糖尿病、骨質疏鬆症、腎缺血、腦中風、腦缺血、腎炎、肺部和胃腸道炎性紊亂和呼吸道紊亂如反向氣道梗阻、慢性哮喘和支氣管炎相關疾病的控制具有治療功用。(R.G.Pertwee，Curr.Med.Chem.6(8)，(1999)，635)下式的哌啶生物鹼-喜巴辛 已經鑑定為蕈毒鹼受體拮抗劑。Chackalamannil等在J.Am.ChemSoc.，118(1996)，p 9812-9813中公開了(+)-喜巴辛的總合成。
發明概述本發明涉及通式I表示的凝血酶受體拮抗劑 或其藥物可接受鹽，其中R是分別選自H，C1-C6烷基，滷素，羥基，氨基，(C1-C6)烷基-氨基，(C1-C6)-二烷基氨基，(C1-C6)烷氧基，-COR16，-COOR17，-SOR16，-SO2R16，-SO2NR17R18，-NR17SO2R18，-NR16COR16a，-NR16COOR16a，-NR16CONR4R5，氟-(C1-C6)烷基，二氟(C1-C6)烷基，三氟(C1-C6)烷基，C3-C6環烷基，芳香基(C1-C6)烷基，羥基(C1-C6)烷基，氨基-(C1-C6)-烷基，芳香基和(C1-C6)烷硫基的1至3個取代基；R1和R2分別選自H，C1-C6烷基，氟-(C1-C6)烷基，二氟(C1-C6)烷基，三氟(C1-C6)烷基，C3-C6環烷基，C2-C6烯基，芳香基(C1-C6)烷基，羥基-(C1-C6)烷基，氨基-(C1-C6)-烷基，芳香基和硫代(C1-C6)烷基；或R1和R2共同形成一個＝O基；R3是H，羥基，(C1-C6)烷氧基，芳氧基，芳香基(C1-C6)烷氧基，雜芳氧基，雜芳香基(C1-C6)烷氧基，(C3-C6)環烷氧基，-SOR16，-SO2R17，-SO2NR18R19，-SR18，-SO3H，-C(O)OR17，-C(O)NR18R19，-OC(O)R32，-OC(O)NR33R34，-(CR33R34)nOR32，-NR4R5，-NR33COOR32，-NR33COR32，-NR33S(O)2R32，-NR33CONR33R34，-NR33S(O)2NR33R34，-(CR33R34)nNR4R5，-(CR33R34)nNR33COOR32，-(CR33R34)nNR33COR32，-(CR33R34)nNR33S(O)2R32，-(CR33R34)nNR33CONR33R34，-(CR33R34)nNR33S(O)2NR33R34，(C1-C6)烷基，滷素，C3-C6環烷基，C2-C6烯基，-CN，芳香基，雜芳香基，雜環烷基，-P(O)(OR7)2或被選自滷素，-OH，-NH2，芳香基，-COOH，-SO3H，硫代和(C1-C6)烷硫基的1-3個取代基取代的(C1-C6)烷基；n是1，2，3或4；n1和n2分別是0-3，條件是二者不都是0；
Het是包括1至13個碳原子和1至4個分別選自N，O和S的雜原子的5-14個原子的單、雙或三環雜芳族基團，其中環氮可形成N-氧化物或與C1-C4烷基形成四元基團，其中Het通過碳原子環成員與B連接，其中Het基團被1至4個取代基W取代，W分別選自C1-C6烷基，-NR4R5，-NHCOR26，-NHSO2R16；R21-芳香基；芳香基，其中相鄰碳原子與亞甲基二氧基基團形成環；和R21-雜芳香基；R4和R5分別選自H，C1-C6烷基，苯基，苄基和C3-C6環烷基，或R4和R5一起是-(CH2)3-，-(CH2)4-，-(CH2)5-或-(CH2)2NR7-(CH2)2-並與它們連接的氮形成環；R7是H或(C1-C6)烷基；R8，R10和R11分別選自R1和-OR1；R9是H，OH，-NR4R5，C1-C6烷氧基，滷素或滷代(C1-C6)烷基；B是-(CH2)n3-或順或反-(CH2)n4CR12＝CR12a(CH2)n5，其中n3是0-5，n4和n5分別是0-2，和R12和R12a分別選自H，C1-C6烷基和滷素；R16和R16a分別選自C1-C6烷基，苯基和苄基；R17，R18和R19分別選自H，C1-C6烷基，苯基和苄基；R21是分別選自H，-CF3，-OCF3，滷素，-NO2，-CN，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-NH2，(C1-C6)-烷基-氨基，二-((C1-C6)烷基)氨基，氨基(C1-C6)烷基，(C1-C6)-烷基氨基(C1-C6)烷基，二-((C1-C6)烷基)-氨基(C1-C6)烷基，羥基-(C1-C6)烷基，-COOR17，-COR17，-CONR24R25，-NHCOR16，-NHSO2R16，-NHSO2CH2CF3，-SO2NR24R25，-NR29C(O)NR24R25，-SO2R30，-P(O)(OR29)2，芳香基，芳香基(C1-C6)烷基，雜芳香基，雜環烷基和-CR29(＝NOR28)的1至3個取代基；R22是-COR23，-S(O)R31，-S(O)2R31，-SO2NR24R25或-COOR27；R23是滷代(C1-C6)烷基；C2-C6烯基；滷代(C2-C6)烯基；C2-C6炔基；C3-C7-環烷基；(C3-C7)環烷基(C1-C6)烷基；被選自滷素，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，羥基和C1-C6烷氧基的1至3個取代基取代的(C3-C7)環烷基；芳香基；芳香基(C2-C6)烷基；雜芳香基；雜環烷基；被分別選自-COOH和-SO3H的1-3個取代基取代的(C1-C6)烷基；或
其中R35和R36分別選自H，烷基或R37取代的C1-C6烷基，其中R37選自HO-，HS-，CH2S-，-NH2，苯基，p-羥基苯基和吲哚基；R24和R25分別選自H，C1-C6烷基，滷代(C1-C6)烷基，C2-C6烯基，滷代(C2-C6)烷基，C2-C6炔基，芳香基，芳香基-(C1-C6)烷基，C3-C7-環烷基，滷代(C3-C7)環烷基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)-烷基，羥基和C1-C6烷氧基；R26是C3-C7-環烷基，芳香基，芳香基-(C1-C6)烷基，雜芳香基，雜芳香基-(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基氨基；R27是C1-C6烷基，苯基，苄基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)-烷基，(C3-C7)-環烷基，羧基(C1-C6)烷基，磺基(C1-C6)烷基，或被NR18R19和羧基取代的(C1-C6)烷基；R28是H，C1-C6烷基，苯基，苄基或(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基；R29和R30分別選自H和C1-C6烷基；R31是(C1-C6)烷基；滷代(C1-C6)烷基；C2-C6鏈烯基；滷代(C2-C6)烷基；C2-C6炔基；C3-C7-環烷基；被選自滷素，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，羥基和C1-C6烷氧基的1至3個取代基取代的(C3-C7)環烷基；芳香基；芳香基(C1-C6)烷基；雜芳香基；雜環烷基；被分別選自-COOH和-SO3H的1-3個取代基取代的(C1-C6)烷基；或(C1-C6)烷氧基；R32是R35-(C1-C6)烷基，R35-(C3-C7)環烷基，R35-(C2-C6)烯基，R35-(C2-C6)炔基或R35-芳香基，其中R35是分別選自H，-COOH，-NH2，-SO3H，＝O和＝NOR28的1或2個取代基；和R33和R34分別選自H，(C1-C6)烷基和C3-C7-環烷基。
本發明也涉及使用通式I的化合物治療血栓形成、動脈粥樣硬化、再狹窄、血小板聚集、凝血、癌症、炎症性疾病或呼吸道疾病的方法，包括給需要這種治療的哺乳動物施與通式I的化合物。尤其是，本發明涉及使用通式I的化合物治療血栓形成、動脈粥樣硬化、再狹窄、高血壓、心絞痛、心律失常、心衰、心肌梗塞、腎小球性腎炎、血栓形成性中風、血栓栓塞性中風、外周血管疾病、腦缺血、癌症、類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、多發性硬化、糖尿病、骨質疏鬆症、腎缺血、腦中風、腎炎、肺部和胃腸道炎性紊亂、反向氣道梗阻、慢性哮喘或支氣管炎的方法。預期本發明的化合物可以有效地同時治療一種以上所列疾病。
在另一個方面，本發明涉及包含至少一種通式I的化合物和藥物可接受載體的藥物組合物。
在另一個方面，本發明涉及以下結構通式表示的新化合物 其中W和Z如下表中的定義

詳細說明本發明涉及具有一種或多種抗血栓形成、抗血小板聚集、抗動脈粥樣硬化、抗再狹窄和抗凝血活性的取代的三環喜巴辛衍生物。
本發明化合物治療的血栓形成相關疾病包括血栓形成、動脈粥樣硬化、再狹窄、高血壓、心絞痛、心律失常、心衰、心肌梗塞、腎小球性腎炎、血栓形成性和血栓栓塞性中風、外周血管疾病、其它心血管疾病、腦缺血、炎症性紊亂、神經變性性疾病和癌症，以及凝血酶及其受體起病理作用的其它紊亂。凝血酶受體拮抗劑也被稱為蛋白酶活化受體(PAR)拮抗劑。
本發明的化合物也結合大麻酯(CB2)受體並在炎症性疾病或呼吸道疾病的治療中有用，如類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、多發性硬化、糖尿病、骨質疏鬆症、腎缺血、腦中風、腦缺血、腎炎、肺部和胃腸道炎症性紊亂和呼吸道紊亂如反向氣道梗阻、慢性哮喘和支氣管炎中的一種或多種。
通式I結構中的變量所優選的定義如下n1和n2總和優選是2-3，更優選3。特別優選的是n1是1和n2是1或n1是0和n2是3的通式I的化合物。
R優選是選自H，C1-C6烷基，滷素，羥基，氨基和(C1-C6)烷氧基組成的組的1個取代基。
R1和R2優選分別選自H和C1-C6烷基；更優選，R1是C1-C6烷基和R2是H。
R3優選是H，羥基，C1-C6烷氧基，滷素，C3-C6環烷基，-CN，C1-C6烷基，-COOR17或-NR4R5，更優選H，羥基或C1-C6烷基。
Het優選是通過碳原子環成員與B連接的吡啶基或喹啉基，和被選自W的1至4個取代基取代。
W優選選自-NR4R5，-NHCOR26，-NHSO2R16，R21-芳香基和雜芳香基。
R4和R5優選分別選自H，C1-C6烷基和C3-C6環烷基，或R4和R5共同是-(CH2)3-，-(CH2)4-或-(CH2)5-和與它們連接的氮形成環。
R8，R10和R11優選是H或(C1-C6)烷基。
R9優選是H，OH或C1-C6烷氧基。
B優選是反-CH＝CH-。
R16優選是C1-C6烷基。
R21優選是分別選自H，-CF3，-OCF3，滷素，-CN，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-NH2和-CR29(＝NOR28)組成的組的1至3個取代基。
R22優選是-COR23，-S(O)2R31或-COOR27。
R23優選是C3-C7-環烷基；被選自滷素，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，羥基和C1-C6烷氧基組成的組的1至3個取代基取代的(C3-C7)-環烷基；(C3-C7)-環烷基(C1-C6)烷基；芳香基和芳香基-(C2-C6)烷基。更優選，R23是C3-C7-環烷基；(C3-C7)環烷基(C1-C6)烷基或芳香基-(C2-C6)烷基，特別是環丙基，環丙基甲基和苄基。
R27優選是C1-C6烷基，苯基，苄基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)-烷基或(C3-C7)-環烷基。
R28優選是H或C1-C6烷基。
R31優選是C1-C6烷基，C3-C7-環烷基，芳香基或芳香基(C1-C6)烷基，更優選(C1-C6)烷基或芳香基(C1-C6)烷基，特別是(C1-C6)烷基或苄基。
除非特別限定，術語「烷基」或「低級烷基」是指1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，「烷氧基」類似地是指具有1至6個碳原子的烷氧基。
氟烷基，二氟烷基和三氟烷基是指末端碳被1，2或3個氟原子取代的烷基鏈，如-CF3，-CH2CF3，-CH2CHF2或-CH2CH2F。滷代烷基是指被1至3個滷原子取代的烷基鏈。
「烯基」是指1至6個碳原子的直鏈或支鏈碳鏈，鏈中具有一個或多個雙鍵，雙鍵可以是共軛或非共軛的。
類似地，「炔基」是指1至6個碳原子的直鏈或支鏈碳鏈，鏈中具有一個或多個三鍵。當烷基、烯基、炔基鏈連接兩個其它基團並因此成為二價時，使用術語亞烷基或亞烯基和亞炔基。滷代烯基是指被1至3個滷原子取代的烯鏈。
「環烷基」是指3至6個碳原子的飽和碳環，而「亞環烷基」是指相應的二價環，其中與其它基團連接點包括所有位置異構體和立體異構體。滷代環烷基是指被1至3個滷原子取代的環烷基環。
「雜環烷基」作為Het上的取代基是指4至7個原子的飽和環，包括3至4個碳原子和1至3個選自-O-，-S-和-NR7-的通過碳原子與分子的其餘部分連接的雜原子。雜環烷基的實例是2-氮雜環丁烷基(2-azetidinyl)，2-吡咯烷基，四氫噻吩-2-yl，四氫-2-呋喃基，4-哌啶基，2-哌嗪基，四氫-4-吡喃基，2-嗎啉基和2-硫代嗎啉基。
「滷素」是指氟、氯、溴或碘。
當R4和R5連接與它們所連接的氮原子形成環時，形成的環是1-吡咯烷基，1-哌啶基和1-哌嗪基，其中哌嗪環也可以在4-位氮被基團R7取代。
「二羥基(C1-C6)烷基」是指在兩個不同碳原子上被兩個羥基取代的烷基鏈。
「芳香基」是指苯基、萘基、茚基、四氫萘基或2，3-二氫化茚基。
「雜芳香基」是指5至10個原子的單環、雙環或苯並稠合的雜芳香基，包括2至9個碳原子和分別選自N，O和S的1至4個雜原子，只要該環不包括相鄰的氧和/或硫原子。也包括環氮的N-氧化物，以及其中環氮被C1-C4烷基取代而形成季銨的化合物。單環雜芳香基的實例是吡啶基，噁唑基，異噁唑基，噁二唑基，呋喃基，吡咯基，噻吩基，咪唑基，吡唑基，四唑基，噻唑基，異噻唑基，噻二唑基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基和三唑基。雙環雜芳香基的實例是萘啶基(如1，5或1，7)，咪唑並吡啶基，吡啶並[2，3]咪唑基，吡啶並嘧啶基和7-吖吲哚基。苯並稠合的雜芳香基是吲哚基，喹啉基，異喹啉基，2，3-二氮雜萘基，苯並噻吩基(即硫茚基)，苯並咪唑基，苯並呋喃基，苯並噁唑基和苯並呋咱基。包括所有位置異構體，如1-吡啶基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基。W取代的雜芳香基是指其中可取代環碳原子具有如上限定的取代基的這種基團，或其中相鄰碳原子與亞烷基或亞甲基二氧基形成環。
術語「Het」例如是單環、雙環和苯並稠合的雜芳香基，如以上剛剛限定的以及三環基如苯並喹啉基(如1，4或7，8)或菲咯啉基(如1，7；1，10；或4，7)。Het基團通過碳環成員與基團B連接，如Het是2-吡啶基，3-吡啶基或2-喹啉基。
相鄰碳原子與亞烷基形成環的雜芳香基的實例是2，3-環戊烯吡啶，2，3-環己烯吡啶和2，3-環庚烯吡啶。
當R22是-COR23和R23是 時，這個基團是胺基酸的醯根。 是選自丙氨酸，甘氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，甲硫氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，半胱氨酸，胱氨酸或酪氨酸的天然存在的胺基酸。
上面的陳述，其中例如R4和R5分別選自一組取代基，是指R4和R5分別選擇，但也指分子中R4或R5變量出現一次以上的情況，那些出現的變量分別選擇。本領域技術人員會認識到取代基的大小和性質將影響取代基可存在的數量。
本發明的化合物具有至少一個不對稱碳原子，因此所有異構體，包括非對映異構體和轉動異構體預期是本發明的一部分。發明包括純化形式和混合形式(+)-和(-)-異構體，包括外消旋混合物。可以使用常規技術製備異構體，通過光學上純的或光學上富含的起始材料進行反應或通過分離通式I化合物的異構體。
本發明典型的優選化合物具有下列立體化學 首選具有該絕對立體化學的化合物。
本領域技術人員將領會到對於通式I的一些化合物，一種異構體將比其它異構體顯示更大的藥理活性。
含鹼基的本發明化合物可與有機和無機酸形成藥物可接受鹽。可形成鹽的合適酸的實例是鹽酸，硫酸，磷酸，醋酸，檸檬酸，草酸，丙二酸，水楊酸，蘋果酸，延胡索酸，琥珀酸，抗壞血酸，馬來酸，甲磺酸和本領域熟知的其它無機酸和羧酸。將游離鹼形式與足量所需要酸接觸產生鹽而製備該鹽。用合適的稀釋含水鹼溶液如稀釋含水碳酸氫鈉處理該鹽可以重新生成游離鹼形式。游離鹼形式在某些物理性質上與其鹽形式多少有些不同，如在極性溶劑中的溶解度，但是對於本發明的目的，該鹽卻與其游離鹼形式等同。
本發明的某些化合物是酸性的(如具有羧基的那些化合物)。這些化合物與無機和有機鹼形成藥物可接受鹽。這些鹽的實例是鈉、鉀、鈣、鋁、鋰、金和銀鹽。也包括的是與藥物可接受胺如氨、烷胺、羥烷胺、N-甲葡糖胺等等形成的鹽。
本發明的化合物通常由本領域已知的方法製備，例如下述的方法。在下面提供的一般步驟和實施例中，使用下列縮寫Et是乙基，Me是甲基，Bn是苄基，Ac是乙醯基，AcOH是醋酸，THF是四氫呋喃，DMF是N，N-二甲基甲醯胺，rt是室溫，Davis試劑是(1S)-(+)-(10-樟腦磺醯基)-oxaziridine，LHMDS是雙(三甲矽基)鋰胺，4-二甲胺吡啶是DMAP，1，8-二吖二環[5.4.0]十一-7-烯是DBU，1，3-二環己基碳二亞胺是DCC，和碘化三甲基矽是TMSI。
通式I-A的化合物，其中B是-CH＝CH-，Het是W取代的吡啶基，R，R1，R3，R8，R9，R10和R11每一個是氫，R2是甲基，和R22是-CO2Et，可如方案1所示製備方案1 乙醛1通過兩步轉化轉變成二烯酸2。使用草醯氯使該酸轉變成其醯氯，接著它與醇3結合提供酯4。炔選擇性還原為順-烯烴5，它進行熱環化得到產物6。脫苄基，後是雙鍵還原，得到三環酸7。該酸通過其醯氯轉變成醛IIB，它與磷酸酯III結合得到I-A。
在通式I-A的化合物中，乙基氨基甲酸酯基可被斷裂得到胺IA-1，它可用廣泛的親電子試劑如醯氯、磺醯氯、異氰酸酯，氯甲酸酯等處理得到醯胺、磺醯胺、脲和氨基甲酸酯等，如方案2所示。
方案2 通式IIB的醛也可以與磷酸酯8結合提供I-A3，它可轉變為氨基甲酸酯I-A4，如方案3所示。I-A3和I-A4都可轉變成多種類似物，使用方法如Suzuki偶聯，Stille偶聯，Buchwald胺化等(方案4)。
方案3 方案4
芳香基溴I-A3也可轉變成苯胺I-A5，它可用很多容易使用的親電子試劑如醯氯、磺醯胺，異氰酸酯等處理得到相應衍生物I-A6，如方案5所示。
方案5 內酯部分的α位置可以官能化，例如R3是氫的通式I-A的化合物用Davis試劑((1S)-(+)-(10-樟腦磺醯基)-oxaziridine)和LHMDS處理後可以轉變成R3是OH的相應化合物。
本領域技術人員已知的類似方法可用於製備包括其它任選取代的Het基團和其它「R」變量的化合物。本領域技術人員也將認識到這些方法等同適用於製備光學上活性或外消旋化合物。
R9是氫的通式I的化合物經與氧化劑如SeO2加熱可轉變成R9是羥基的相應化合物。
W是芳香基或R21-芳香基的通式III的磷酸酯可通過類似於下面馬上要描述的製備三氟甲基-苯基取代化合物-IIIa的方法製備。
使用triflic酸酐，商業可獲得的羥基吡啶衍生物可轉變成相應的triflate，它接著在Pd(0)存在下在Suzuki條件下與商業可獲得的硼酸結合。用n-丁基鋰處理，隨後用二乙基磷醯氯淬火，將所得產物轉變成磷酸酯。
上述方法的起始材料是商業上可獲得的，本領域已知的，或可由本領域熟知的步驟製備。
不參與上述方法的反應性基團可以用常規保護性基團在反應過程中進行保護，在反應後可用標準程序去除保護性基團。下表A顯示了一些典型的保護性基團。
表A 下面是製備起始材料和通式I的化合物的實施例。
製備1
步驟1 在-78℃，向含5，6-二氫-2H-吡啶-1，3-二羧酸1-乙酯3-甲酯(35.4g，166mmol)的CH2Cl2(600ml)溶液中緩慢加入含1M DIBAL(365ml，365mmol，2.2eq.)的CH2Cl2溶液，混合物攪拌1.5小時。添加1升飽和水淬滅反應。分離Rochelle鹽和有機層。用2×250mlCH2Cl2萃取水層，用500ml鹽水洗滌合併的有機層，在MgSO4上乾燥，過濾，濃縮，用40％EtOAc-hex層析所得粗產品得到17g(55％)油狀醇。
在室溫，向上述醇(17.0g，92mmol)的150ml CH2Cl2溶液中添加NaHCO3(15.4g，183mmol，2eq.)和Dess-Martin試劑(46.7g，110mmol，1.2eq.)，將懸浮液攪拌45分鐘。向其中添加300mlEt2O和Na2S2O3.5H2O(70g，282mmol，2eq.)溶液和NaHCO3(15.4g，183mmol，2eq.)在600ml H2O中的溶液。劇烈攪拌混合物直到兩層變得清晰。分離有機層並用2×150ml Et2O萃取水層。用Na2S2O3/NaHCO3水溶液和鹽水每種各300ml洗滌合併的有機層，在MgSO4上乾燥，過濾，並蒸發得到15.3g(91％)油。HRMS184.0966(MH+)。
步驟2 在0℃，向60％NaH(4.35g，109mmol，1.3eq.)的THF(300ml)懸浮液中滴加三乙基磷醯醋酸酯(20ml，109mmol，1.3eq)，將混合物在0℃攪拌30分鐘。向其中加入步驟1的產物溶液(15.3g，83.5mmol)，將混合物在0℃攪拌30分鐘。添加600ml NH4Cl水溶液淬滅反應，蒸發THF，用3×200ml Et2O萃取含水漿液。用200ml鹽水洗滌合併的有機層，在MgSO4上乾燥，過濾，濃縮，用15％EtOAc-hex層析得到19.9g(94％)油。MS254(MH+)
步驟3 向含步驟2的產物(19.9g，79mmol)的CH3OH，THF和H2O每種100ml的溶液中添加KOH(13.3g，237mmol，3eq.)，混合物在室溫攪拌2小時。用200ml水稀釋混合物，用1N HCl酸化至約pH 2，並用3×200ml EtOAc萃取。用各200ml的水和鹽水洗滌合併的有機層，在MgSO4上乾燥，過濾，蒸發得到17.0g(96％)淺黃色固體。HRMS226.1083(MH+)步驟4 在室溫，向含二烯酸(17.0g，76mmol)的400ml CH2Cl2溶液中添加草醯氯(13.2ml，151mmol，2eq.)和DMF(120μl，1.6mmol，2mol％)。混合物攪拌1小時，濃縮，用100ml無水甲苯蒸發得到醯氯。
向含上述醯氯的200ml CH2Cl2溶液中添加DMAP(925mg，7.6mmol，0.1eq.)，步驟3產物(15.4g，75mmol，1.0eq.)的15ml CH2Cl2溶液，，隨後是Et3N(12.7ml，91mmol，1.2eq.)。在0℃下攪拌混合物1.5小時，然後用600ml Et2O稀釋。用200ml水，2×200ml 1NHCl，200ml NaHCO3水溶液和200ml鹽水連續洗滌溶液。在無水MgSO4上乾燥，過濾，濃縮並用20％EtOAc-hex層析得到20g(78％)樹脂。HRMS412.1764(MH+)步驟5
在1大氣壓H2下，攪拌含步驟4的產物(10g，29mmol)，喹啉(700μl，5.9mmol，0.2eq.)和Lindlar催化劑(1.0g，10wt％)的150mlTHF懸浮液2.5小時。類似地用Lindlar催化劑還原另一批10g步驟4的產物。將兩批混合，通過C鹽過濾，蒸發，殘餘物再次溶於600mlEtOAc中。用3×200ml 1N HCl和200ml鹽水洗滌，在MgSO4上乾燥，過濾，蒸發得到20g樹脂，其立即用於步驟6的Diels-Alder反應。HRMS414.1919(MH+)。
步驟6 將含步驟5產物(20.0g)的500ml甲苯溶液在壓力容器中在185℃下加熱6小時。冷卻至室溫，用DBU(1.8ml，12mmol，0.2eq.)處理1小時，濃縮並用25％EtOAc-hex層析得到11.3g(56％)環化的外型(exo)產物。HRMS414.1923(MH+)。
步驟7 在1大氣壓H2下攪拌含步驟6產物(11.2g，27mmol)，10％Pd-C(1.2g，10wt％)的200ml EtOAc懸浮液直到反應完全。通過C鹽過濾，濃縮並重新溶於200mlCH3OH。向其中添加900mg PtO2，懸浮液在50大氣壓H2下在帕爾容器中搖動。混合物通過C鹽過濾，濃縮得到8.5g樹脂。HRMS326.100(MH+)。
步驟8在室溫下，向含步驟7產物(415mg，1.28mmol)的10ml CH2Cl2溶液中添加草醯氯(225μl，2.58mmol，2eq.)，隨後是1滴DMF。將溶液在室溫下攪拌1小時，此時沒有氣體放出。用無水甲苯濃縮和共沸得到醯氯。將醯氯溶於6ml無水甲苯，冷卻至0℃，加入Pd(PPh3)4(74mg，0.064mmol，5mol％)，隨後是Bu3SnH(520μl，1.93mmol，1.5eq.)。混合物在0℃攪拌3小時，濃縮並用50％EtOAc-hex層析得到360mg(91％)樹脂狀標題化合物。MS310.1(MH+)。
製備2 使用用於上述相應胺類似物的類似步驟使3-甲醯基-5，6-二氫-2H-吡喃轉變成三環醛。
製備3 反應方案
製備1 製備3在0℃，向含磷酸酯(3.49g，11.3mmol，2eq.)的THF(50ml)溶液中添加含1M LHMDS(11.3ml，11.3mmol，2eq.)的THF溶液。攪拌10分鐘後，加入Ti(OPr)4(3.4ml，11.3mmol，2eq.)，隨後是含製備1(1.75g，5.7mmol，1eq.)的THF(10ml)溶液，混合物在N2下攪拌1小時。將反應混合物倒入5％酒石酸水溶液(100ml)並用EtOAc(3×100ml)萃取。用鹽水(150ml)洗滌合併的有機層，用MgSO4乾燥，過濾和蒸發至乾燥。進行矽膠層析純化，用5％CH3OH-CH2Cl2洗脫得到1.80g(70％)淺黃色泡沫狀標題化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)8.59(d，J＝4.8Hz，1H)，7.76(dd，J＝3Hz，8.4Hz，1H)，7.06(d，J＝8.4Hz，1H)，6.56(dd，J＝9.6Hz，15.2Hz，1H)，6.45(d，J＝15.2Hz，1H)，4.73(m，1H)，4.35-4.05(m，2H)，4.12(q，J＝6.8Hz，2H)，2.73-2.69(m，2H)，2.47-2.35(m，3H)，1.96(q，6.0Hz，1H)，1.74(d，J＝12.8Hz，1H)，1.41(d，J＝6.0Hz，3H)，1.35-1.18(m，7H)，1.10-0.98(m，1H)。
製備4 向製備3(0.270g，0.58mmol)的CH2Cl2(15ml)溶液中添加TMSI(624μl，4.4mmol，7.5eq.)，將混合物加熱至回流。6小時後，將混合物倒入含水NaHCO3(30ml)並用CH2Cl2(3×15ml)萃取。用鹽水洗滌合併的有機層，用MgSO4乾燥，過濾並蒸發至乾燥，得到209mg胺(92％)。
在0℃，向含上述產物的CH2Cl2(15ml)中添加Et3N(97μl，0.69mmol，1.3eq.)和氯甲酸2-甲氧基乙酯(68μl，5.9mmol，1.1eq.)；允許混合物緩慢升溫至室溫，同時在N2下攪拌。1小時後，將混合物倒入水中(30ml)，用CH2Cl2(3×15ml)萃取。合併的有機層用鹽水(30ml)洗滌，用MgSO4乾燥，過濾並蒸發至乾燥。通過矽膠層析純化，用3％CH3OH-CH2Cl2洗脫得到183mg白色固體的標題化合物(69％)。1H NMR(400MHz，CDCI3)8.59(d，J＝2.4Hz，1H)，7.76(dd，J＝2.4，8.2Hz，1H)，7.06(d，J＝8.3Hz，1H)6.56(dd，J＝9.6，15.4Hz，1H)，6.45(d，J＝15.4Hz，1H)，4.72(m，1H)，4.1-4.28(m，4H)，3.59(t，J＝4.49Hz，2H)，3.38(s，3H)，2.75-2.68(m，2H)，2.32-2.51(m，3H)，1.96(dd，J＝6.3，12.8Hz，1H)，1.73(d，J＝12.5Hz，1H)，1.41(d，J＝5.95Hz，3H)，1.37-1.00(m，4H)。
製備5 步驟1 根據McGinnis和Robinson，J.Chem.Soc.，404(1941)，407中的步驟製備噻喃enal。
步驟2
在0℃，向含60％NaH(6.3g，158mmol，1.3eq.)的THF(200ml)懸浮液中添加甲基二乙基磷醯醋酸酯(29ml，158mmol，1.3eq.)，混合物在0℃攪拌30分鐘。然後將溶液轉移到含步驟1產物(15.6g，122mmol)的THF(100ml)溶液中並在0℃攪拌1小時。添加NH4Cl水溶液(500ml)淬滅反應，蒸發THF。用Et2O(3×200ml)萃取水相，用H2O和鹽水(每種200ml)洗滌合併的有機層。溶液在MgSO4上乾燥，濃縮，用5％EtOAc-己烷層析所得殘液得到13.0g(58％)油。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.26(d，J＝15.9Hz，1H)，6.26(t，J＝4.4Hz，1H)，5.78(dd，J＝15.9，0.6Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.25-3.23(m，2H)，2.71(t，J＝5.8Hz，2H)，2.57-2.53(m，2H)。
步驟3 向含步驟2產物(13.0g，70.6mmol)的THF和MeOH(每種50ml)溶液中添加含KOH(11.9g，212mmol，3.0eq.)的H2O(50ml)溶液。混合物在室溫攪拌1小時，用H2O(100ml)稀釋並用1N HCl酸化。用EtOAc(3×200ml)萃取水相，用H2O和鹽水(每種300ml)洗滌合併的有機層。溶液在MgSO4上乾燥，過濾並蒸發得到11.66g(97％)淺黃色固體。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.34(d，J＝15.6Hz，1H)，6.32(t，J＝4.4Hz，1H)，5.78(d，J＝15.6Hz，1H)，3.26(d，J＝1.6Hz，2H)，2.72(t，J＝5.8Hz，2H)，2.59-2.55(m，2H)。
步驟4
向含4(5.2g)的EtOAc(120ml)溶液中添加Lindlar催化劑(520mg)，在1大氣壓H2下攪拌懸浮液。45分鐘後添加另一部分催化劑(500mg)。將混合物再攪拌30分鐘。使混合物過濾通過C鹽並蒸發得到5.2g(99％)的所要的烯烴。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.38-7.26(m，5H)，6.32(dd，J＝11.9，6.6Hz，1H)，5.86(d，J＝12.0Hz，1H)，5.18(s，2H)，5.12-5.07(m，1H)，3.20(br s，1H)，1.34(d，J＝6.6Hz，3H)。
步驟5 在0℃下，向含步驟3產物(2.45g，14.39mmol)的CH2Cl2(60ml)溶液中添加DCC(3.27g，15.85mmol，1.1eq.)，隨後加DMAP(352mg，2.88mmol，0.2eq.)，將混合物在0℃攪拌30分鐘。向其中添加含3.27g(15.85mmol，1.1eq.)步驟4的醇的10ml CH2Cl2溶液，將混合物在0℃攪拌5小時，在室溫1小時。用350ml Et2O稀釋溶液並用2×200ml檸檬酸水溶液，200ml NaHCO3水溶液和200ml鹽水洗滌。溶液在MgSO4上乾燥，過濾，濃縮，所得殘液用6％EtOAc-hex層析得到2.1g(41％)樹脂。1H NMR(400MHz，CDCl3)，7.38-7.32(m，5H)，7.45(d，J＝16.0Hz，1H)，6.38-6.34(m，1H)，6.26(t，J＝4.6Hz，1H)，6.21(d，J＝11.6Hz，1H)，6.19(d，J＝11.2Hz，1H)，5.85(dd J＝11.6，1.2Hz，1H)，5.76(d，J＝16.0Hz，1H)，5.18(d，J＝1.2Hz，2H)，3.24(d，J＝2.0Hz，2H)，2.71(t，2H，J＝5.6Hz，2H)，2.56-2.52(m，2H)，1.41(d，J＝6.4Hz，3H)。
步驟6 將含步驟5產物(2.1g，5.85mmol)的m-二甲苯(50ml)溶液在密閉管中在200℃加熱6小時。將溶液冷卻至室溫並與DBU(1781，1.19mmol，0.2eq.)一起攪拌1小時，濃縮，用15％EtOAc-己烷層析得到1.44g(69％)所要的外型產物。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.39-7.35(m，5H)，5.46(br s，1H)，5.16(ABq，J＝21.6，12.0Hz，2H)，4.42(dq，J＝9.2，6.0Hz，1H)，3.36-3.33(m 2H)，3.08(dd，J＝14.4，2.4Hz，1H)，2.85(ddd，J＝13.9，12.4，2.5Hz，1H)，2.72-2.57(m，4H)，2.27-2.21(m，1H)，1.47-1.25(m，1H)，1.12(d，J＝6.4Hz，3H)。
步驟7 在-78℃，向含步驟6產物(750mg，2.09mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中添加含BBr3的CH2Cl2(1M溶液4.2ml)。溶液在-78℃攪拌30分鐘和在0℃攪拌30分鐘，然後倒入K2CO3(100ml)水溶液中。用Et2O(2×50ml)洗滌水相，用K2CO3水溶液(50ml)反萃取有機層。用1NHCl酸化合併的水相併用EtOAc(3×50ml)萃取。用鹽水(50ml)洗滌EtOAc層，在MgSO4上乾燥，過濾並蒸發得到500mg(89％)酸。1H NMR(400MHz，CDCl3)5.50(br s，1H)，4.47(dq，J＝9.6，6.0Hz，1H)，3.43-3.39(m，1H)，3.36(d，J＝15.6Hz，1H)，3.10(dd，J＝14.0，2.4Hz，1H)，2.91-2.84(m，1H)，2.82-2.77(m，1H)，2.70(dd，J＝10.6，4.2Hz，1H)，2.69-2.63(m，1H)，2.57-2.52(m，1H)，2.34-2.29(m，1H)，1.53-1.42(m，1H)，1.34(d，J＝6.0Hz，3H)。
步驟8 向含步驟7產物(500mg，1.86mmol)的MeOH(30ml)溶液中添加AcOH(3ml)和PtO2(250mg)，在40psi H2下在帕爾容器中振蕩懸浮液1.5天。催化劑用C鹽墊過濾，將溶液濃縮，將所得殘液溶於AcOH-MeOH-CH2Cl2混合物(0.5∶2∶97.5 v/v/v/)並過濾通過短SiO2柱，得到400mg(79％)靜止時固化的樹脂狀還原產物。1H NMR(400MHz，CDCl3)4.68(dq，J＝9.4，5.9Hz，1H)，2.76-2.69(m，2H)，2.60-2.55(m，3H)，2.49(d，J＝11.6Hz，1H)，2.10(br s，1H)，1.93(ddd，J＝13.5，6.0，2.7Hz，1H)，1.60-1.48(m，2H)，1.45-1.19(m，3H)，1.33(d，J＝5.6Hz，3H)。
步驟9向含步驟8產物(97mg，0.36mmol)的CH2Cl2(4ml)中添加草醯氯(94μl)，隨後是1滴DMF。溶液在室溫攪拌1小時並濃縮得到粗醯氯，將其溶於甲苯(3ml)並冷卻至0℃。添加Pd(PPh3)4(42mg，0.04mmol，0.1eq.)，隨後是Bu3SnH(94μl)。混合物在0℃攪拌3小時，濃縮並用25％EtOAc-己烷層析得到73mg(80％)白色固體的醛。1H NMR(400MHz，CDCl3)9.75(d，J＝2.8Hz，1H)，4.62(dq，J＝9.7，6.0Hz，1H)，2.8-2.70(m，2H)，2.65-2.55(m，3H)，2.50(d，J＝7.2Hz)，2.10(ddd，J＝13.2，6.4，3.0Hz，1H)，1.94(ddd，J＝13.6，6.0，3.0，1H)，1.69(dq，J＝10.9Hz，3.00Hz，1H)，1.58-1.48(m，1H)，1.42-1.20(m，3H)，1.33(d，J＝6.4Hz，3H)。
製備6 步驟1 將δ-戊內醯胺溶於THF(250ml)並冷卻至-78℃。滴加n-BuLi(28.44ml，1.1eq，2.5M的己烷溶液)。將混合物攪拌30分鐘，然後添加乙基氯甲酸酯(6.49ml，1.05eq)並使混合物加溫至室溫。添加水，用EtOAc萃取有機層。乾燥合併的有機層並濃縮得到11.57g油。1H NMR(400MHz，CDCl3)4.29(2H，q，J＝7.2Hz)，3.71(2H，br t，J＝5.6Hz)，2.50(2H，br t，J＝6.8Hz)，1.83(4H，br s)，1.33(3H，t，J＝7.2Hz)。
步驟2 步驟1的產物溶於THF(250ml)中，溶液冷卻至-78℃。滴加LHMDS(65ml，1eq，1M的THF溶液)，所得混合物攪拌30分鐘。滴加含2-[N，N-雙(三氟甲磺醯基)-氨基]-5-氯吡啶的THF(73ml)。所得混合物攪拌10分鐘並允許加溫至室溫。添加水並用EtOAc萃取有機層。乾燥合併的有機層並濃縮。層析(含5-10％EtOAc的己烷)得到12.0g油。1H NMR(400MHz，CDCl3)5.32(1H，t，J＝3.6Hz)，4.24(2H，q，J＝7.2Hz)，3.66(2H，m)，2.27(2H，m)，1.78(2H，m)，1.30(3H，J＝7.2Hz)。
步驟3 將甲硼烷二甲基硫化物配合物(5.82ml，1.05eq)溶於THF並冷卻至0℃。滴加(1R)-(+)-α-蒎烯(22.56ml，2.32eq)，混合物在0℃攪拌1小時和在室溫攪拌2小時。混合物冷卻至-35℃，滴加乙基丙炔酸酯(6.2ml，1eq)；混合物在-35℃攪拌45分鐘和在室溫攪拌3小時。添加乙醛(48ml)，混合物在40-41℃加熱過夜。在降低的壓力下小心去除揮發性的有機成分得到29g產物和α-蒎烯的混合物(NMR測定是1∶2.3)。產物的1H NMR(400MHz，CDCl3)特徵峰包括6.95(1H，d，J＝18.0Hz)，6.48(1H，d，J＝18.0Hz)，4.12(2H，q，J＝7.2Hz)，3.60(4H，q，J＝7.2Hz)。
步驟4 Pd(OAc)2(592mg，10％)和2-(二-t-丁基膦基)聯苯(1.57g，20％)溶於THF(100ml)。混合物在N2下攪拌10分鐘，然後添加含步驟2產物(8g)和步驟3產物(20g，1.5eq)的混合物的THF(32ml)。接著添加KF(4.6g)，混合物在55℃加熱過夜。允許混合物冷卻至室溫並用EtOAc稀釋。用NaHCO3(飽和)，NH4Cl(飽和)，水洗滌混合物，最後用MgSO4乾燥。在降低的壓力下去除溶劑，隨後柱層析(含10％EtOAc的己烷)得到6g(89％)無色油。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.21(1H，d，J＝15.6Hz)，5.88(1H，d，J＝15.6Hz)，5.69(1H，t，J＝4.0Hz)，4.15(4H，m)，3.59(2H，m)，2.26(2H，m)，1.82(2H，m)，1.25(6H，m)。
步驟5步驟4產物溶於MeOH和THF的1∶1的混合物(66ml)中。添加1N NaOH(52ml)溶液，混合物攪拌2.5小時直到無起始原料剩餘。
用2N HCl使混合物酸化至pH1並用EtOAc萃取。用NH4Cl(飽和)洗滌萃取物，乾燥並在降低壓力下濃縮得到5g固體。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.30(1H，d，J＝15.2Hz)，5.87(1H，d，J＝15.2Hz)，5.73(1H，m)，4.14(2H，m)，3.60(2H，m)，2.70(2H，m)，1.82(2H，m)，1.23(3H，m)。
實施例1 製備5 實施例1在0℃，向含磷酸酯溶液的(156mg，0.42mmol，2.0eq.)THF(1ml)中添加含2.5M BuLi的己烷溶液(170μl，0.42mmol，2.0eq.)混合物攪拌30分鐘。向其中添加含製備5(53m，0.21mmol)的THF(1.5ml)溶液，混合物在0℃攪拌1小時。添加NH4Cl水溶液(20ml)淬滅反應，蒸發THF，用CH2Cl2(3×10ml)萃取水相。用NaHCO3水溶液(15ml)和鹽水(15ml)洗滌混合有機層，用MgSO4乾燥，過濾，濃縮並用40％EtOAc-hex層析得到90mg(91％)樹脂。HRMS474.1721。
通過下列步驟，實施例1的噻喃化合物可轉變成相應亞碸(1A)和碸(1B) 向含實施例1A(70mg，0.15mmol)的AcOH(2ml)溶液中添加CH3SO3H(50μl，5eq.)和NaBO3.4H2O(30mg，0.19mmol，1.3eq.)，混合物在室溫攪拌過夜。蒸發醋酸，所得殘液加入NaHCO3-Na2SO3混合物水溶液(25ml)並用CH2Cl2(3×15ml)萃取。用鹽水(20ml)洗滌合併的有機層，用MgSO4乾燥，過濾，濃縮並用製備型薄層層析純化得到11mg亞碸異構體1，4mg亞碸異構體2和36mg碸。
亞碸異構體1HRMS490.1661(MH+)；亞碸異構體21H NMR(400MHz，CDCl3)8.80(d，J＝2.4Hz，1H)，7.87(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，7.81(s，1H)，7.76(d，J＝7.6Hz，1H)，7.67(d，J＝7.6Hz，1H)，7.61(t，J＝7.8Hz，1H)，7.27(d，J＝9.6Hz，1H)，6.67-6.55(m，2H)，4.78-4.71(m，1H)，3.44-3.40(m，1H)，3.35(dt，J＝12.1，2.8Hz，1H)，2.78-2.71(m，1H)，2.64-2.57(m，1H)，2.52-2.36(m，3H)，2.26-2.21(m，1H)，2.04(ddd，J＝13.5，6.5，2.7Hz，1H)，1.45(d，J＝6.0Hz，3H)，1.60-1.25(m，6H)亞碸HRMS506.1612(MH+)。
實施例2一般步驟
在0℃，向含磷酸酯(2eq)的THF溶液中添加含2.5M BuLi的己烷(2.0eq.)。攪拌大約2小時後，添加Ti(OiPr)4(2.0eq)，隨後添加含醛的THF(1.0eq.)溶液。混合物在室溫攪拌30分鐘，用酒石酸鉀鈉水溶液稀釋並用EtOAc萃取。用鹽水洗滌合併的有機層，用MgSO4乾燥，過濾，濃縮和用柱層析純化得到產物。
用這個一般步驟製備下列通式的化合物 其中W和Z如下表中的定義
實施例3 在-78℃，向含實施例2D(380mg，0.79mmol)的THF(7ml)溶液中添加含1M LHMDS的THF(0.95ml，0.95mmol，1.2eq.)；混合物在-78℃攪拌30分鐘，在0℃攪拌30分鐘，然後冷卻回-78℃。向其中添加含(1S)-(+)-(10-樟腦磺醯基)oxaziridine(275mg，1.1mmol，1.5eq.)的THF(2ml)溶液。溶液攪拌過夜，同上允許加溫至室溫。用NH4Cl水溶液(100ml)稀釋，蒸發THF，用EtOAc(3×30ml)萃取水相。用鹽水(30ml)洗滌合併的有機層，用MgSO4乾燥，過濾，濃縮並用2％CH3OH-CH2Cl2層析，得到94mg樹脂。HRMS495.2291(MH+)實施例4一般步驟 氨基甲酸酯和三甲矽碘(5eq.)溶液回流大約5小時，然後用NaHCO3水溶液稀釋。用CH2Cl2萃取水層，鹽水洗滌合併的有機層，MgSO4乾燥，過濾，濃縮得到胺。
用Et3N(5eq.)和醯氯(3eq)處理含上面的胺的CH2Cl2溶液，反應用薄層層析跟蹤。反應完成後，進行標準水處理，用製備型薄層層析或柱層析純化粗產物得到醯胺。
胺可以用很多親電子試劑如磺醯氯、異氰酸酯、氯甲酸酯和醛等處理，得到適當的衍生物。用這個路線製備下列通式的化合物 其中W和R22如下表中的定義



實施例5 一般步驟含製備3或4的產物和W-B(OH)2，其中W任選被苯基或雜芳香基取代，K2CO3(4eq.)和Pd(PPh3)4(5至10mol％)的PhMe-EtOH-H2O(4∶2∶1v/v/v)溶液在100℃加熱，直到反應完全。用水稀釋反應混合物，用EtOAc萃取，用鹽水洗滌有機層，MgSO4乾燥，過濾，濃縮並層析純化得到期望的化合物。該化合物可進一步衍變。
使用這個方法，可製備下列通式的化合物 其中R23和W如下表中的定義
實施例6 向含製備3(100mg，0.22mmol)的甲苯(5ml)溶液中添加Pd(OAc)2(5mg，0.022mmol，0.1eq.)，(S)-(-)-2，2′-雙(二苯膦基)-1，1′-聯萘(13mg，0.022mmol，0.1eq.)和2-三丁基甲錫烷基吡啶(119mg，0.32mmol，1.5eq.)。混合物用N2鼓泡5分鐘，然後在壓力管中加熱至100℃。16小時後，混合物倒入含水NH4Cl(15ml)，並用EtOAc(3×15ml)萃取。用鹽水洗滌合併的有機層，用MgSO4乾燥，過濾並蒸發乾燥。進行矽膠層析純化，用2％CH3OH-CH2Cl2洗脫，隨後進行矽膠層析，用60％EtOAc-hex洗脫，產生30mg(30％)產物。HRMS462.2401(MH+)使用類似步驟，製備下列化合物6A 實施例6AMS468(MH+)實施例7 向含製備3(100mg，0.22mmol)的幹甲苯(5ml)溶液中添加吡咯烷(36μl，0.43mmol，2eq.)，磷酸鉀(137mg，0.65mmol，5eq.)，Pd(OAc)2(3mg，0.014mmol，0.065eq.)和2-(二環己基-膦基)聯苯(10mg，0.028mmol，0.13eq.)。混合物用N2鼓泡5分鐘，然後在壓力管中加熱至100℃。16小時後，混合物倒入水(15ml)中並用EtOAc(3×15ml)萃取。用鹽水(15ml)洗滌合併的有機層，用MgSO4乾燥，過濾並蒸發乾燥。用製備型薄層層析純化，用5％CH3OH-CH2Cl2洗脫，產生10mg固體。HRMS454.2696(MH+)使用類似步驟，製備下列化合物
實施例7AHRMS440.2558(MH+)實施例8 向含製備3(1.0g，2.18mmol)的乙二醇二甲基醚(25ml)的溶液中添加二苯酮亞胺(550μl，3.27mmol，1.5eq.)，磷酸鉀(1.51g，6.6mmol，3eq.)，三(二苄基亞基丙酮)二鈀(0)(200mg，0.22mmol，0.1eq.)和2-(二環己基膦基)聯苯(153mg，0.44mmol，0.2eq.)。混合物用N2鼓泡5分鐘，然後在壓力管中加熱至100℃，4小時。混合物接著通過C鹽過濾並蒸發乾燥。向含該殘液的CH2Cl2(25ml)中添加濃HCl水溶液(545μL，6.6mmol，3eq.)，混合物在室溫攪拌。16小時後，用CH2Cl2(25ml)稀釋混合物，倒入1N NaOH水溶液(50ml)並用CH2Cl2(3×50ml)萃取。用鹽水洗滌合併的有機層，用MgSO4乾燥，過濾並蒸發乾燥。用矽膠層析純化，用2％CH3OH-CH2Cl2洗脫，產生550mg(63％)標題化合物。MS400(MH+)用親電子試劑如醯氯、磺醯氯、異氰酸酯等處理實施例8的化合物，得到下列化合物。
其中-NHC(O)R26如下表中的定義 實施例9
使用製備6的產物和製備1，製備3和實施例5的一般步驟製備下列結構的化合物。
其中W如下表中的定義 本發明也涉及藥物組合物，包括至少一種本發明通式1的化合物和藥物可接受載體。優選，組合物中存在一種或兩種通式1的化合物，更優選一種通式1的化合物。通式的化合物可以以任何常規口服劑量形式給予，如膠囊、片劑、粉末、扁囊劑、懸浮液或溶液。可以使用常規藥物可接受賦形劑和添加劑和常規技術製備該製劑和藥物組合物。這種藥物可接受賦形劑和添加劑包括無毒相容充填劑、粘結劑、粉碎劑、緩衝劑、防腐劑、抗氧化劑、潤滑劑、調味劑、增稠劑、著色劑、乳化劑等等。
用於疾病或上面引用情況治療的通式的化合物的每日劑量是每天大約0.001至大約100mg/kg體重，優選大約0.001至大約10mg/kg。對於70kg的一般體重，劑量水平因此是每天大約0.1至大約700mg藥物，給予單次劑量或2-4次分開劑量。然而，精確劑量由照料的臨床醫師確定並依賴於所給予化合物的效力、患者的年齡、體重、情況和反應。
下列製劑示例了本發明的一些劑量形式。每一個中，術語「活性化合物」指通式1的化合物。
實例A-片劑編號成分mg/片mg/片1 活性化合物 1005002 乳糖USP 1221133 米澱粉，食品級，純淨水中含10％糊劑 30 404 玉米澱粉，食品級45 405 硬脂酸鎂3 7總計300700製備方法在適當的混合器中混合第1和2項10-15分鐘。用第3項將混合物變成粒狀。如果需要，通過粗篩(如1/4″，0.63cm)研磨潮溼顆粒。乾燥潮溼顆粒。如果需要過篩乾燥顆粒並與第4項混合10-15分鐘。添加第5項並混合1-3分鐘。在合適的片劑機器上壓縮混合物至適當大小和重量。
實例B-膠囊編號成分mg/片mg/片1 活性化合物100 5002 乳糖USP 106 1233 玉米澱粉，食品級 40 705 硬脂酸鎂NF47總計 250 700製備方法在適當的混合器中混合第1、2和3項10-15分鐘。添加第4項並混合1-3分鐘。在合適的膠囊化機器上將混合物填入合適的兩段硬明膠膠囊中。
通式1化合物的活性可由下列步驟確定。
凝血酶受體拮抗劑的體外測試步驟[3H]haTRAP的製備A(pF-F)R(ChA)(hR)(12-Y)-NH2(1.03mg)和10％Pd/C(5.07mg)懸浮於DMF(250μl)和二異丙乙胺(10μl)中。容器與氚線連接，在液氮中冷凍並抽空。接著向瓶中添加氚氣(342mCi)，在室溫攪拌2小時。反應完成後，去除多餘的氚，用DMF(0.5ml)稀釋反應的肽溶液並過濾去除催化劑。用水稀釋收集到的粗肽的DMF溶液並凍幹去除不穩定的氚。固體肽再次溶於水中並重複凍幹過程。含氚肽([3H]haTRAP)溶於0.5ml的0.1％含水TFA並用下列條件通過HPLC純化柱，Vydac C18，25cm×9.4mm I.D.；移動相，(A)含0.1％TFA的水溶液，(B)含0.1％TFA的CH3CN；梯度，(A/B)從100/0至40/60進行30分鐘；流速，5ml/分；檢測，UV在215nm。[3H]haTRAP的放射化學純度是99％，由HPLC分析。得到一批14.9mCi產品，特異活性是18.4Ci/mmol。
血小板膜的製備用Natarajan等(Natarajan等，Int.J.Peptide Protein Res.45145-151(1995))方法的改進方法從新澤西血液中心(East Orange，NJ)得到的48小時內收集的20單位血小板濃縮物製備血小板膜。所有步驟在4℃，許可生物冒險安全條件下實施。血小板在4℃以100×g離心20分鐘去除紅細胞。倒出上清並以3000×g離心15分鐘以沉澱血小板。血小板重新懸浮於10mM Tris-HCl，pH 7.5，150mM NaCl，5mM EDTA，至終體積大約200ml，在4400×g下離心10分鐘。再重複該步驟兩次。將血小板重新懸浮於5mM Tris-HCl，pH 7.5，5mMEDTA，至終體積大約30ml，在Dounce勻漿器中打擊20次成為勻漿。膜在41,000×g下沉澱，重新懸浮於40-50ml 20mM Tris-HCI，pH 7.5，1mM EDTA，0.1mM二硫蘇糖醇，10ml的部分冷凍於液氮中並儲存在-80℃。為了完成膜的製備，融化這部分，混合，用Dounce勻漿器打擊5次成為勻漿。將膜沉澱並在10mM三乙醇胺-HCl，pH 7.4，5mM EDTA中洗滌3次，並重新懸浮於20-25ml 50mM Tris-HCl，pH7.5，10mM MgCl2，1mM EGTA和1％DMSO。膜部分冷凍於液氮中並儲存在-80℃。將膜穩定至少3個月。20單位血小板濃縮物典型產生250mg膜蛋白。用Lowry試驗(Lowry等，J.Biol.Chem.193265-275(1951))確定蛋白濃度。
高產量凝血酶受體放射配體結合實驗使用Ahn等(Ahn等，Mol.Pharmacol.，51350-356(1997))的凝血酶受體放射配體結合實驗的改進方法篩選凝血酶受體拮抗劑。實驗在96孔Nunc板(類別號269620)上進行，實驗終體積200μl。血小板膜和[3H]haTRAP在結合緩衝液(5mM Tris-HCl，pH 7.5，10mMMgCl2，1mM EGTA，0.1％BSA)中分別稀釋至0.4mg/ml和22.2nM。測試化合物的原液(含10mM的100％DMSO)進一步稀釋於100％DMSO中。除非特別指出，每孔中添加10μl稀釋化合物溶液和90μl放射配體(在5％DMSO中終濃度是10nM)，添加100μl膜開始反應(40μg蛋白/孔)。5％DMSO不明顯抑制結合。以三個濃度(0.1，1和10μM)檢測化合物。覆蓋板並在Lab-Line滴定平板搖動器中，在室溫下輕柔旋渦混合1小時。Packard UniFilter GF/C過濾平板在0.1％聚乙烯亞胺中浸透至少1小時。用Packard FilterMate通用收穫器收穫孵化膜，用300μl冰冷50mM Tris-HCI，pH 7.5，10mMMgCl2，1mM EGTA快速洗滌四次。每孔中加入MicroScint 20閃爍混合物(25μl)，Packard TopCount微平板閃爍計數器計數該板。特異性結合定義為總結合量減去過量(50μM)未標記haTRAP存在下觀察的非特異性結合的量。從下列關係計算[3H]haTRAP的化合物與凝血酶受體結合的抑制百分比。
材料由AnaSpec Inc.(San Jose，CA)常規合成A(pF-F)R(ChA)(hR)Y-NH2和A(pF-F)R(ChA)(hR)(I2-Y)-NH2。這些肽的純度＞95％。氚氣(97％)購自EGG Mound，Miamisburg Ohio。該氣體隨後填充並保存在IN/US Systems Inc.Trisorber。MicroScint 20閃爍混合物得自Packard Instrument Co.。
在獼猴全血中體外-體內血小板聚集的方案給藥和收集血液允許清醒的坐著的獼猴平衡30分鐘。針導管插入肱靜脈注射測試藥物。另一個針導管插入其它肱靜脈或隱靜脈用於取血液樣品。在某些實驗中，化合物僅口服給藥的情況下使用一個導管。基線血樣品(1-2ml)收集在含凝血酶抑制劑CVS 2139(100μg/0.1ml鹽水)作為抗凝劑的vacutainer管中。接著藥物靜脈內注射30分鐘以上的一段時間。在藥物注射5，10，20，30分鐘和藥物注射停止後30，60和90分鐘收集血液樣品(1ml)。在P0實驗中，使用管飼套管將藥物給予動物。在給藥後0，30，60，90，120，180，240，300，360分鐘後收集血液樣品。0.5ml血液用於全血聚集，另0.5ml用於確定藥物或其代謝物的血漿濃度。在收集血液樣品之後立即如下所述進行聚集。
全血聚集向0.5ml血液樣品中添加0.5ml鹽水，並在Chronolog全血聚集器中加溫至37℃。同時，阻抗電極在鹽水中加溫至37℃。帶有攪拌棒的血液樣品置於加熱區塊孔中，阻抗電極置於血液樣品中，啟動收集軟體。允許軟體運行直到基線穩定，接著進行20Ω校準檢查。20Ω等於計算機軟體產生圖中4個區塊。用可調節體積吸管(5-25μl)添加激動劑(haTRAP)，記錄聚集曲線10分鐘。激動劑後6分鐘的最大聚集是記錄的值。
體外血小板聚集步驟根據Bednar等(Bednar，B.，Condra，C.，Gould，R.J.，和Connolly，T.M.，Throm.Res.，77453-463(1995))的方法實施血小板聚集研究。血液是通過靜脈穿刺至少7天未服用阿司匹林的健康人受試者得到的，使用ACD作為抗凝劑。在15℃，100×g離心15分鐘製備富含血小板的血漿。血小板在3000×g下沉澱並用含1mM EGTA和20μg/ml腺苷三磷酸雙磷酸酶的緩衝鹽水洗滌兩次以抑制聚集。在室溫下，添加0.2mg/ml人纖維蛋白原的緩衝鹽水中進行聚集。測試化合物和血小板在96孔平底板中預孵育60分鐘。添加0.3μM haTRAP或0.1U/ml凝血酶啟動聚集，使用Lab Line滴定平板搖動器(速度7)快速攪拌混合物。以Spectromax平板閱讀器在405nm下的透光度增加來監測聚集百分率。
體內抗腫瘤步驟根據S.Even-Ram等，Nature Medicine，4，8(1988)，p.909-914報導的步驟進行人乳癌模型在裸鼠中的測試。
使用上述測試步驟，在體外凝血酶受體拮抗劑實驗中，發現本發明化合物的IC50(即，觀察到凝血酶受體50％抑制時的濃度)值在約1至約2000nM的範圍，優選化合物的IC50值在約1至約100nM的範圍。
儘管已經結合上面列舉的具體實施方案對本發明進行了描述，但是很多選擇、修改及其變更對本領域普通技術人員來說顯而易見。所有這些選擇、修改和變更意欲落在本發明的精神和範圍中。
權利要求
1.以下結構式所代表的化合物或其藥物可接受鹽， 其中R是分別選自H，C1-C6烷基，滷素，羥基，氨基，(C1-C6)烷基-氨基，(C1-C6)-二烷基氨基，(C1-C6)烷氧基，-COR16，-COOR17，-SOR16，-SO2R16，-SO2NR17R18，-NR17SO2R18，-NR16COR16a，-NR16COOR16a，-NR16CONR4R5，氟-(C1-C6)烷基，二氟(C1-C6)烷基，三氟(C1-C6)烷基，C3-C6環烷基，芳香基(C1-C6)烷基，羥基(C1-C6)烷基，氨基-(C1-C6)-烷基，芳香基和(C1-C6)烷硫基的1至3個取代基；R1和R2分別選自H，C1-C6烷基，氟-(C1-C6)烷基，二氟(C1-C6)烷基，三氟(C1-C6)烷基，C3-C6環烷基，C2-C6烯基，芳香基(C1-C6)烷基，羥基(C1-C6)烷基，氨基-(C1-C6)-烷基，芳香基和硫代(C1-C6)烷基；或R1和R2共同形成一個＝O基；R3是H，羥基，(C1-C6)烷氧基，芳氧基，芳香基(C1-C6)烷氧基，雜芳氧基，雜芳香基(C1-C6)烷氧基，(C3-C6)環烷氧基，-SOR16，-SO2R17，-SO2NR18R19，-SR18，-SO3H，-C(O)OR17，-C(O)NR18R19，-OC(O)R32，-OC(O)NR33R34，-(CR33R34)nOR32，-NR4R5，-NR33COOR32，-NR33COR32，-NR33S(O)2R32，-NR33CONR33R34，-NR33S(O)2NR33R34，-(CR33R34)nNR4R5，-(CR33R34)nNR33COOR32，-(CR33R34)nNR33COR32，-(CR33R34)nNR33S(O)2R32，-(CR33R34)nNR33CONR33R34，-(CR33R34)nNR33S(O)2NR33R34，(C1-C6)烷基，滷素，C3-C6環烷基，C2-C6烯基，-CN，芳香基，雜芳香基，雜環烷基，-P(O)(OR7)2或被獨立地選自滷素，-OH，-NH2，芳香基，-COOH，-SO3H，硫代和(C1-C6)烷硫基的1-3個取代基取代的(C1-C6)烷基；n是1，2，3或4；n1和n2分別是0-3，條件是二者不都是0；Het是包括1至13個碳原子和1至4個分別選自N，O和S的雜原子的5-14個原子的單、雙或三環雜芳族基團，其中環氮可形成N-氧化物或與C1-C4烷基形成季銨基團，其中Het通過碳原子環成員與B連接，其中Het基團被1至4個取代基W取代，W分別選自C1-C6烷基，-NR4R5，-NHCOR26，-NHSO2R16；R21-芳香基；芳香基，其中相鄰碳原子與亞甲基二氧基基團形成環；和R21-雜芳香基；R4和R5分別選自H，C1-C6烷基，苯基，苄基和C3-C6環烷基，或R4和R5一起是-(CH2)3-，-(CH2)4-，-(CH2)5-或-(CH2)2NR7-(CH2)2-並與它們連接的氮形成環；R7是H或(C1-C6)烷基；R8，R10和R11分別選自R1和-OR1；R9是H，OH，-NR4R5，C1-C6烷氧基，滷素或滷代(C1-C6)烷基；B是-(CH2)n3-或順或反-(CH2)n4CR12＝CR12a(CH2)n5，其中n3是0-5，n4和n5分別是0-2，和R12和R12a分別選自H，C1-C6烷基和滷素；R16和R16a分別選自C1-C6烷基，苯基和苄基；R17，R18和R19分別選自H，C1-C6烷基，苯基和苄基；R21是分別選自H，-CF3，-OCF3，滷素，-NO2，-CN，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-NH2，(C1-C6)-烷基-氨基，二-((C1-C6)烷基)氨基，氨基(C1-C6)烷基，(C1-C6)-烷基氨基(C1-C6)烷基，二-((C1-C6)烷基)-氨基(C1-C6)烷基，羥基-(C1-C6)烷基，-COOR17，-COR17，-CONR24R25，-NHCOR16，-NHSO2R16，-NHSO2CH2CF3，-SO2NR24R25，-NR29C(O)NR24R25，-SO2R30，-P(O)(OR29)2，芳香基，芳香基(C1-C6)烷基，雜芳香基，雜環烷基和-CR29(＝NOR28)的1至3個取代基；R22是-COR23，-S(O)R31，-S(O)2R31，-SO2NR24R25或-COOR27；R23是滷代(C1-C6)烷基；C2-C6烯基；滷代(C2-C6)烯基；C2-C6炔基；C3-C7-環烷基；(C3-C7)環烷基(C1-C6)烷基；被選自滷素，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，羥基和C1-C6烷氧基的1至3個取代基取代的(C3-C7)環烷基；芳香基；芳香基(C2-C6)烷基；雜芳香基；雜環烷基；被分別選自-COOH和-SO3H的1-3個取代基取代的(C1-C6)烷基；或 其中R35和R36分別選自H，烷基或R37取代的C1-C6烷基，其中R37選自HO-，HS-，CH2S-，-NH2，苯基，p-羥基苯基和吲哚基；R24和R25分別選自H，C1-C6烷基，滷代(C1-C6)烷基，C2-C6烯基，滷代(C2-C6)烷基，C2-C6炔基，芳香基，芳香基-(C1-C6)烷基，C3-C7-環烷基，滷代(C3-C7)環烷基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)-烷基，羥基和C1-C6烷氧基；R26是C3-C7-環烷基，芳香基，芳香基-(C1-C6)烷基，雜芳香基，雜芳香基-(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基氨基；R27是C1-C6烷基，苯基，苄基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)-烷基，(C3-C7)-環烷基，羧基(C1-C6)烷基，磺基(C1-C6)烷基，或被NR18R19和羧基取代的(C1-C6)烷基；R28是H，C1-C6烷基，苯基，苄基或(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基；R29和R30分別選自H和C1-C6烷基；R31是(C1-C6)烷基；滷代(C1-C6)烷基；C2-C6烯基；滷代(C2-C6)烷基；C2-C6炔基；C3-C7-環烷基；被選自滷素，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，羥基和C1-C6烷氧基的1至3個取代基取代的(C3-C7)環烷基；芳香基；芳香基(C1-C6)烷基；雜芳香基；雜環烷基；被分別選自-COOH和-SO3H的1-3個取代基取代的(C1-C6)烷基；或(C1-C6)烷氧基；R22是R35-(C1-C6)烷基，R35-(C3-C7)環烷基，R35-(C2-C6)烯基，R35-(C2-C6)炔基或R35-芳香基，其中R35是分別選自H，-COOH，-NH2，-SO3H，＝O和＝NOR28的1或2個取代基；和R33和R34分別選自H，(C1-C6)烷基和C3-C7-環烷基。
2.權利要求1的化合物，其中n1和n2的總和是3。
3.權利要求1的化合物，其中R1，R10和R11分別選自H和C1-C6烷基；R2和R8每種是氫；R9是H，OH或C1-C6烷氧基；和R3是H，羥基，C1-C6烷氧基，滷素，C3-C6環烷基，-CN，(C1-C6)烷基，-COOR17或-NR4R5。
4.權利要求1的化合物，其中R是H，滷素，OH，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基或氨基。
5.權利要求1的化合物，其中B是-CH＝CH-；Het是吡啶基，W-取代的吡啶基，喹啉基或W-取代的喹啉基；W是-NR4R5，-NHCOR26，-NHSO2R16，R21-芳香基或雜芳香基；和R21是分別選自H，-CF3，-OCF3，滷素，-CN，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-NH2和-CR29(＝NOR28)的1至3個取代基。
6.權利要求1的化合物，其中R22是-COR23，-C(O)2R31或-COOR27；R23是C3-C7-環烷基；被選自滷素，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，羥基和C1-C6烷氧基的1至3個取代基取代的(C3-C7)環烷基；(C3-C7)環烷基(C1-C6)烷基；芳香基；或芳香基(C2-C6)烷基；R31是(C1-C6)烷基，C3-C7-環烷基，芳香基或芳香基(C1-C6)烷基；和R27是C1-C6烷基，苯基，苄基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基或(C3-C7)環烷基。
7.權利要求1的化合物，選自下式化合物 其中W和R22如下表中的定義 和下式化合物 其中W如下表中的定義
8.一種藥物組合物，包括至少一種有效量的權利要求1的化合物和藥物可接受載體。
9.權利要求1的化合物在製備抑制凝血酶受體的藥物中的應用。
10.權利要求1的化合物在製備治療血栓形成、動脈粥樣硬化、再狹窄、高血壓、心絞痛、心律失常、心衰、心肌梗塞、腎小球性腎炎、血栓形成性中風、血栓栓塞性中風、外周血管疾病、炎症性疾病、呼吸道疾病、腦缺血或癌症的藥物中的應用。
11.選自下式化合物的化合物， 其中W和Z如下表中的定義
全文摘要
公開了通式(I)的雜環取代三環或其藥物可接受鹽，其中n
文檔編號A61K31/444GK1571789SQ02820666
公開日2005年1月26日 申請日期2002年10月16日 優先權日2001年10月18日
發明者S·查卡拉曼尼爾, M·V·徹利亞, M·C·克拉斯比, 夏巖 申請人:先靈公司