一種自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法
2023-07-24 01:45:26 1
專利名稱：一種自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法
技術領域：
本發明屬中藥技術領域，涉及一種中藥化學成分的提取分離 純化方法，特別是涉 及自中藥決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法。
背景技術：
決明子為豆科植物決明Cassia obtuse folia L.或小決明Cassia tora L.的幹 燥成熟種子，為常用中藥。具有清肝明目、潤腸通便的功效。用於目赤澀痛、羞明多淚、頭痛 眩暈、目暗不明，大便秘結。現代醫學研究表明決明子不僅具保肝明目、降血壓、降血脂等作 用，還具有增強機體免疫力、抗衰老等多方面作用。決明子無論在藥用、保健等方面都具有 廣泛的研究、利用和開發前景。紅鐮黴素龍膽二糖苷為決明子中主要的萘駢吡喃酮類成分， 具有降血脂、保肝、抗突變、抗雌激素、抑制高級糖基化終末化產物(AGEs)生成等作用，為 決明子主要藥效成分之一，目前未見有關自中藥決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷方 法的報導和專利申請。技術方案本發明的目的在於提供一種從決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法。本發明的目的是通過如下技術方案實現的1.決明子提取物的製備取決明子藥材，加入按藥材質量計6 14倍體積份的20 50%乙醇，加熱回流提 取0. 5 2. 5小時，靜置，過濾；藥渣用同樣方法再提取1 3次，合併提取液，60 70°C水 浴減壓回收溶劑，得決明子提取物浸膏。2.紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品的分離紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品的分離採用矽膠幹柱層析方法。取決明子提取物浸膏，加入按浸膏質量計60 120倍體積份的甲醇，回流提 取6 10次，每次提取30 100分鐘，過濾，取上清液，回收溶劑得甲醇提取物；殘渣採 用矽膠薄層色譜法進行檢識，薄層色譜條件吸附劑為矽膠G薄層板，展開劑為體積比為 7. 5 2. 5 0.3的氯仿-甲醇-水混合溶液，10%硫酸乙醇溶液顯色，提取至殘渣中無紅 鐮黴素龍膽二糖苷(相應Rf值處無黃色斑點)。取甲醇提取物，加入按甲醇提取物質量計5 10倍體積份的甲醇溶解，按甲醇提 取物與矽膠質量比1 1 3拌入200 300目的矽膠，自然乾燥，得到拌樣矽膠，另按甲 醇提取物與矽膠質量比1 60 150取200 300目的矽膠，幹法裝柱，色譜柱徑高比 1 5 10;將拌樣矽膠裝於柱頂，以體積比為9 1 0. 1 7 3 0. 5的氯仿-甲 醇_水混合溶劑洗脫，下行法進行幹柱層析，洗脫1 3倍柱體積，置陰涼避光處揮幹展開 齊U，自柱頭而底部平均切割為15 25份，各份用甲醇洗脫，甲醇洗脫液用矽膠薄層色譜檢 識，合併含有紅鐮黴素龍膽二糖苷的6 10至11 15份甲醇洗脫液，回收溶劑，得紅鐮黴 素龍膽二糖苷粗品。3.紅鐮黴素龍膽二糖苷的純化
取紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品用少量甲醇溶解，按紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品與矽膠 的質量比1 1 3拌入200 300目的矽膠，自然乾燥，得到拌樣矽膠，另按紅鐮黴素龍 膽二糖苷粗品與矽膠質量比1 50 120取200 300目的矽膠，幹法裝柱，色譜柱徑高 比1 5 10 ；將拌樣矽膠加於柱頂，以體積比為9 1 0. 1 7 3 0. 5的氯仿-甲 醇_水混合溶劑洗脫，下行法進行幹柱層析，分份收集，洗脫液用矽膠薄層色譜檢識，合併 含有紅鐮黴素龍膽二糖苷的流份，回收溶劑，得紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品。用按紅鐮黴素龍 膽二糖苷粗品質量計為2 4體積份的20 40%甲醇溶解，採用C18反相色譜柱純化，徑 高比1 8 15，以10% 40%甲醇洗脫，採用矽膠薄層色譜檢識，合併含有紅鐮黴素龍膽 二糖苷的流份，回收溶劑得黃色粉末，即為紅鐮黴素龍膽二糖苷。4.純度檢查高效液相色譜法(HPLC)檢查純度。儀器美國Waters公司Waters 1525高效 液相色譜儀，Waters2996 二極體陣列檢測器，Empower色譜工作站，Waters公司25 μ L可 調進樣器。色譜柱SunFire C18色譜柱，規格為150mmX4. 6mm,填料粒徑5 μ m ；流動相 乙腈-0. 磷酸水溶液，比例為15 85 25 75，流速0. 8 1. 2mL/min ；檢測波長 278nm ；柱溫30 40°C， 運行時間12min，進樣量為0. 5 5 μ g。峰面積歸一化法測定紅鐮 黴素龍膽二糖苷純度均大於98. 00%。5.結構測定紅鐮黴素龍膽二糖苷為黃色粉末(甲醇)，分子式=C27H32O15,分子量596，熔點 259 261 O。UV λ max (nm) :278nmESI-MS :m/z 597 [M+l]+，619 [M+Na]+，273 [M+l_2glc] +。1H-WR(DMSOdOOMHz) δ 7. 18 (1H, s, H-10)，6· 92 (1H, s, H_9)，6· 79 (1H, s, H_7)，
6.18 (1H, s, H-3)，5· 43 (1H, br, s，5_0H)，5· 01 (1H, d, J = 7. 6Hz, H-I' )，4. 18 (1H, d, J =
7.6Hz, H-I 「 )，5. 16-2. 98 為糖鐮上的 21 個質子信號，3. 87 (3H, s，8_0CH3)，2. 40 (3H, s, 2-CH3)。13C-NMR (DMSO, 400MHz) δ 183. 8 (C4)，168. 8 (C2)，161. 9 (C5)，161. 1 (C6)， 157. 6 (C8) ,152.4 (C10a)，140. 3 (C9a)，107. 7 (C5a)，106. 7 (C10)，103. 6 (C7 或 Cj ,101. 1 (C3 或 C1, )，100. 7 (C1 「 ) ,99. 7 (C9)，76. 9 (C3 - )，76. 6 (C3 「 )，75. 5 (C5, )，76. 4 (C5 「 )，73. 5 (C2,或 C2,, ) ,70. 1 (C4, ) ,69. 6 (C4,, ) ,68. 7 (C6, ) ,61. 0 (C6,, )，55. 4 (8_0CH3)，20. 2 (2_CH3)。紅鐮黴素龍膽二糖苷結構式如下
權利要求
1.一種自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法，其特徵在於決明子用乙醇加 熱回流提取得決明子提取物浸膏；提取物浸膏用甲醇回流提取得甲醇提取物；甲醇提取物 採用矽膠幹柱色譜法分離得到紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品；粗品採用矽膠幹柱色譜法、C18反 相色譜柱純化得到紅鐮黴素龍膽二糖苷黃色粉末。
2.如權利要求1所述的自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法，其特徵在於 取決明子藥材，加入按藥材質量計6 14倍體積份的20 50%乙醇，加熱回流提取0. 5 2. 5小時，靜置，過濾；藥渣用同樣方法再提取1 3次，合併提取液，60 70°C水浴減壓回 收溶劑，得決明子提取物浸膏。
3.如權利要求1所述的自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法，其特徵在於 取決明子提取物浸膏，加入按浸膏質量計60 120倍體積份的甲醇，回流提取6 10次， 每次提取30 100分鐘，過濾，取上清液，回收溶劑得甲醇提取物；殘渣採用矽膠薄層色譜 法進行檢識，薄層色譜條件吸附劑為矽膠G薄層板，展開劑為體積比為7. 5 2.5 0.3 的氯仿-甲醇-水混合溶液，10%硫酸乙醇溶液顯色，提取至殘渣中無紅鐮黴素龍膽二糖苷 (相應Rf值處無黃色斑點)。
4.如權利要求1所述的自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法，其特徵在於 取甲醇提取物，加入按甲醇提取物質量計5 10倍體積份的甲醇溶解，按甲醇提取物與矽 膠質量比1 1 3拌入200 300目的矽膠，自然乾燥，得到拌樣矽膠，另按甲醇提取物 與矽膠質量比1 60 150取200 300目的矽膠，幹法裝柱，色譜柱徑高比1 5 10 ； 將拌樣矽膠裝於柱頂，以體積比為9 1 0. 1 7 3 0.5的氯仿-甲醇-水混合溶 劑洗脫，下行法進行幹柱層析，洗脫1 3倍柱體積，置陰涼避光處揮幹展開劑，自柱頭而底 部平均切割為15 25份，各份用甲醇洗脫，甲醇洗脫液用矽膠薄層色譜檢識，合併含有紅 鐮黴素龍膽二糖苷的6 10至11 15份甲醇洗脫液，回收溶劑，得紅鐮黴素龍膽二糖苷 粗品。
5.如權利要求1所述的自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法，其特徵在於 取紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品用少量甲醇溶解，按紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品與矽膠的質量比 1 1 3拌入200 300目的矽膠，自然乾燥，得到拌樣矽膠，另按紅鐮黴素龍膽二糖苷粗 品與矽膠質量比1 50 120取200 300目的矽膠，幹法裝柱，色譜柱徑高比1 5 10;將拌樣矽膠加於柱頂，以體積比為9 1 0. 1 7 3 0.5的氯仿-甲醇-水混合 溶劑洗脫，下行法進行幹柱層析，分份收集，洗脫液用矽膠薄層色譜檢識，合併含有紅鐮黴 素龍膽二糖苷的流份，回收溶劑，得紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品。
6.如權利要求1所述的自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法，其特徵在於 取「權利要求5」中所述的紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品，用按紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品質量計 為2 4體積份的20 40%甲醇溶解，採用C18反相色譜柱純化，徑高比1 8 15，以 10% 40%甲醇洗脫，採用矽膠薄層色譜檢識，合併含有紅鐮黴素龍膽二糖苷的流份，回收 溶劑得黃色粉末，即為紅鐮黴素龍膽二糖苷。
7.如權利要求1所述的自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法，其特徵在於 分離製備的紅鐮黴素龍膽二糖苷黃色粉末經高效液相色譜法測定其純度大於98%。
8.如權利要求7所述的自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法，其特徵在於 所述測定紅鐮黴素龍膽二糖苷純度的高效液相色譜法是色譜柱=SimFire C18色譜柱，規格為150mmX4.6mm，填料粒徑5μπι;流動相乙腈-0. 磷酸水溶液，比例為15 85 25 75，流速0. 8 1. 2mL/min ；檢測波長:278nm ；柱溫30 40°C，運行時間12min，進 樣量為0. 5 5μ g。
全文摘要
本發明公開了一種自決明子中分離製備紅鐮黴素龍膽二糖苷的方法。其特徵在於決明子用乙醇加熱回流提取得決明子提取物浸膏；浸膏用甲醇回流提取得甲醇提取物；甲醇提取物採用矽膠幹柱色譜法分離得到紅鐮黴素龍膽二糖苷粗品；粗品採用矽膠幹柱色譜法、C18反相色譜柱純化得到紅鐮黴素龍膽二糖苷黃色粉末。經高效液相色譜法測定其純度大於98％。
文檔編號C07H1/08GK102093449SQ20111000131
公開日2011年6月15日 申請日期2011年1月6日 優先權日2011年1月6日
發明者劉斌, 姜豔豔, 徐冬豔, 王偉 申請人:劉斌