檢測和/或調控FOSB基因的試劑在製備預測和/或治療腹主動脈瘤的產品中的應用

2023-07-27 05:46:52 4

檢測和/或調控fosb基因的試劑在製備預測和/或治療腹主動脈瘤的產品中的應用
技術領域
1.本發明屬於生物檢測技術領域，具體涉及檢測和/或調控fosb基因的試劑在製備預測和/或治療腹主動脈瘤的產品中的應用。


背景技術：

2.腹主動脈瘤(abdominal aortic aneurysm，aaa)是與年齡相關的以主動脈直徑擴大為特徵的常見病，是心血管發病率和死亡率的最重要原因之一，通常由吸菸、動脈粥樣硬化和遺傳變異引起。aaa的發生與很多流行病學因素有關，如年齡、性別、種族、家族史和吸菸等。高齡、男性、陽性家族史和長期吸菸者的aaa發生率相應增高。(jahangire，etal.smoking，sex，risk factors and abdominal aortic aneurysms:a prospective study of 18782 persons aged above 65 years in the southern community cohort study[j].jepidemiol community health，2015，69(5):481-488.)aaa在65歲以上的男性中的發病率高達9％，是55-74歲人群的10大主要死因之一。在歐洲北部地區，超聲篩查顯示直徑29～49mm的aaa在75～84歲男性中的患病率達12.5％，在75～84歲女性中患病率為5.2％。在65歲及以上男性的所有死亡中，有1-2％是由這種血管疾病造成的。(svensjos，etal.low prevalence of abdominal aortic aneurysm among 65-year-old swedishmen indicat esa change in the epidemiology of the disease[j].circulation，2011，124(10):1118-1123.)aaa是一種自身免疫性無症狀疾病，自然病程通常進展緩慢。通常情況下，aaa直徑《4cm時，年增長1～4mm；瘤體直徑在4～5cm時，年增長4～5mm；瘤體直徑》5cm時，年增長》5mm，瘤體破裂率達20％；瘤體直徑》6cm時，年增長7～8mm，瘤體破裂率也增大至40％。吸菸者aaa的擴張速度增快16％。但目前尚無法準確預測動脈瘤的增長速度和破裂風險，即使較小的瘤體也、隨時可能快速增長並急性擴張致使動脈壁破裂，導致致命後果。而瘤體一旦破裂，破裂性aaa病死率高達90％。aaa破裂的相關因素除瘤體直徑外，還包括高血壓、慢性阻塞性肺疾病、長期吸菸、女性及陽性家族史等。aaa瘤體較大時會壓迫十二指腸引起上消化道梗阻症狀。嚴重時，可侵犯十二指腸形成主動脈-十二指腸瘻，導致消化道大出血；還可壓迫下腔靜脈或腎靜脈，發生腹主動脈-下腔靜脈瘻或腹主動脈-腎靜脈瘻，導致急性心力衰竭。aaa瘤腔內附壁血栓如脫落則將引起遠端肢體栓塞。
[0003]
但是，在臨床上，大多數動脈瘤患者發病隱匿，缺乏明顯的體徵和症狀，瘤體破裂前診斷困難。目前的檢測和風險評估主要依靠包括都卜勒超聲/ct血管造影(cta)/磁共振血管造影以及腹部x線平片檢查等在內的影像學檢查，以及典型體徵形態學特徵和人群篩查等策略。這些現有的診斷手段和方式存在費用高、有創性以及有臨床風險等缺點，缺少一種此外儘管存在血管腔內或aaa切除和人造血管移植術的開放修復等手術幹預措施，但這往往會受限於aaa的直徑和生長速度，且獲益效果不明確，手術風險高，住院死亡率仍然很高。除了手術治療方法外，非手術治療aaa主要是降低合併的心血管疾病風險和減緩增長速度，如戒菸/鍛鍊/血壓控制和臨床用藥β受體拮抗劑/血管緊張素轉換酶抑制劑(acei)和他
汀類藥等。但是這些方法和手段均不能有效減緩aaa增長速度、降低破裂風險(wemmelund h，hogh a，hundborg hh，et al.statin use and rupture of abdominal aortic aneurysm[j].br j surg，2014，101(8):966-975.等)。目前，沒有一種有效的藥物療法在減緩aaa擴張速度方面取得令人滿意的效果。因此，研究一種能夠早期診斷、復發檢測關鍵的分子標誌物以及靶向治療的作用靶點具有重大意義。
[0004]
慢性炎症性是aaa的主要發病機制之一，血管壁中層和外膜血管炎症和免疫細胞浸潤是動脈瘤的典型特徵。作為主要的浸潤性免疫細胞亞群，cd4+/cd8+t細胞在aaa病變中佔主導地位，其數量不僅與動脈瘤的擴張呈正相關，在血管壁彈性蛋白結構破壞、平滑肌細胞層丟失和細胞外基質增多等方面也發揮重要作用。動脈瘤壁微環境刺激進一步促使t細胞分化發育成不同的浸潤狀態，這種表型的失衡極化加劇動脈瘤的不穩定性。調控t細胞命運多樣性和不平衡的關鍵分子可成為aaa的新型生物標誌物。
[0005]
fosb基因(fosb proto-oncogene,ap-1transcription factor subunit)定位於染色體19p13.32上，是激活蛋白-1(ap-1)二聚體的主要構成分子，可被炎性因子、應激誘導物或病原體等不同刺激所激活而引發先天和獲得性免疫；參與到多種細胞事件，包括分化、增殖、存活和凋亡。二者的轉錄活性和豐度取決於細胞類型和分化狀態，可被快速轉錄以響應細胞外刺激。研究表明ap-1在淋巴細胞的分化、轉化程序中有不同的參與，在t細胞激活階段也可檢測到顯著的ap-1信號包括fosb。然而，它們在腹主動脈瘤中的作用尚不清楚，且未見有文獻報導。


技術實現要素：

[0006]
本發明的目的在於提供檢測和/或調控fosb基因的試劑在製備預測和/或治療腹主動脈瘤的產品中的應用，所述fosb基因具有優良診斷預測性能，與動脈瘤促炎微環境密切相關，將fosb基因作為腹主動脈瘤t淋巴細胞分化命運系調控基因，可為aaa的免疫靶向治療和輔助預測診斷提供有效靶點和診斷標誌物。
[0007]
本發明提供了一種檢測和/或調控fosb基因的試劑在製備預測和/或治療腹主動脈瘤的產品中的應用，所述fosb基因的核苷酸序列包括seq id no.4所示的片段。
[0008]
優選的，所述fosb基因的mrna序列包括seq id no.1所示序列的全部或部分，cds序列包括seq id no.2所示序列的全部或部分，編碼的胺基酸序列包括seq id no.3所示序列的全部或部分。
[0009]
優選的，檢測fosb基因的試劑包括檢測fosb基因mrna表達量的引物對。
[0010]
優選的，所述引物對包括fosb-exon4-f和fosb-exon4-r，其中fosb-exon4-f的核苷酸序列如seq id no.5所示，fosb-exon4-r的核苷酸序列如seq id no.6所示。
[0011]
本發明還提供了一種檢測fosb基因表達量的試劑盒，包括針對fosb基因設計的引物對fosb-exon4-f和fosb-exon4-r，其中fosb-exon4-f的核苷酸序列如seq id no.5所示，fosb-exon4-r的核苷酸序列如seq id no.6所示。
[0012]
優選的，還包括針對內參基因設計的引物對。
[0013]
優選的，所述內參基因包括gapdh，針對gapdh設計的引物對包括gapdh-f和gapdh-r，其中gapdh-f的核苷酸序列如seq id no.7所示，gapdh-r的核苷酸序列如seq id no.8所示。
[0014]
本發明還提供了一種非診療目的的基於上述試劑盒檢測fosb基因表達量的方法，包括以下步驟：利用從外周血中提取的總rna進行定量聚合酶鏈式反應，將反應產物行qrt-pcr，計算fosb基因的相對表達量。
[0015]
有益效果：本發明提供了一種檢測和/或調控fosb基因的試劑在製備預測和/或治療腹主動脈瘤的產品中的應用。本發明實施例通過整合單細胞測序、組織晶片高通量測序數據分析進行篩選t細胞命運相關後備基因，採用多種機器學習算法等統計學手段和臨床樣本檢測進一步發現fosb具有優良診斷預測性能，與動脈瘤促炎微環境密切相關，具有調控aaa中t淋巴細胞浸潤狀態的功能，促進t細胞以及動脈瘤壁微環境炎性失衡極化。
[0016]
本發明實施例中，fosb在aaa患者多組織水平(動脈瘤壁組織、血管旁周圍脂肪組織、外周血液)表達顯著失控上調，並具有一定特異性。以fosb為中心的共表達信號軸可通過調節ifn反應和tnf信號傳導通路、nkκb通路在t細胞浸潤介導的aaa的發生發展中發揮關鍵作用。fosb可作為免疫治療aaa的靶點。
[0017]
本發明以fosb作為aaa的優良診斷標誌物和免疫治療靶點：fosb的auc值在隊列1中分別為0.911；在隊列2中為0.982；在隊列3中為0.956；在內部數據集1中為1.000；在內部數據集2中為0.989。fosb具有較高的診斷性和穩定性。不同數據集的決策曲線分析(dca)表明患者能夠受益於fosb的標誌物輔助診斷，高危閾值從0到1。臨床影響曲線(cic)再次進一步證明了fosb作為關鍵生物標誌物的臨床適用性。
附圖說明
[0018]
為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對於本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動性的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。
[0019]
圖1為基於單細胞測序數據和組織微陣列高通量數據採用機器學習算法鑑定關鍵生物標誌物的結果，其中a:基於umap的非監督聚類鑑定腹主動脈瘤細胞異質性，b:重建腹主動脈瘤t細胞的細胞命運分化軌跡並識別發育時序；c:基於lasso邏輯回歸和支持向量機的聯合機器學習算法從t細胞浸潤狀態關鍵調控基因鑑定最佳生物標誌物(fosb)，d:重建t細胞分化發育軌跡，fosb顯著定位於促炎t細胞亞群，並在t細胞促炎浸潤狀態發展的擬時序上具有顯著動力學模式；
[0020]
圖2為fosb與促進動脈瘤進展的經典免疫炎性功能和通路的相關性分析結果；a:免疫細胞豐度在aaa患者腹主動脈瘤壁、周圍脂肪組織與健康人腹主動脈瘤壁、周圍脂肪組織的差異；b:免疫功能活性在aaa患者腹主動脈瘤壁、周圍脂肪組織與健康人腹主動脈瘤壁、周圍脂肪組織的差異；c:fosb與促進動脈瘤進展的經典免疫炎性功能和通路顯著相關；
[0021]
圖3為所有調控成分(detf、t細胞浸潤狀態驅動基因、免疫細胞、標記信號和通路)之間共表達模式和相互作用係數的熱圖矩陣，其中展示了fosb與多組分的調控關係；
[0022]
圖4為基於多個驗證隊列與臨床樣本以及多組織水平，腹主動脈瘤疾病狀態下fosb表達量關係圖；
[0023]
圖5為基於多個驗證隊列與臨床樣本以及多組織水平，腹主動脈瘤疾病狀態下fosb受試者工作曲線(roc)證實fosb具有優秀的診斷預測價值和臨床淨效益；
[0024]
圖6為基於多個驗證隊列與臨床樣本以及多組織水平，腹主動脈瘤疾病狀態下fosb決策曲線分析(dca)證實fosb具有優秀的診斷預測價值和臨床淨效益；
[0025]
圖7為基於多個驗證隊列與臨床樣本以及多組織水平，腹主動脈瘤疾病狀態下fosb臨床影響曲線(cic)證實fosb具有優秀的診斷預測價值和臨床淨效益。
具體實施方式
[0026]
本發明提供了一種檢測和/或調控fosb基因的試劑在製備預測和/或治療腹主動脈瘤的產品中的應用，所述fosb基因的核苷酸序列包括seq id no.4所示的片段：gcttctct ctttacacac agtgaagttc aagtcctcgg cgaccccttc cccgttgtta acccttcgta cacttcttcg tttgtcctca。
[0027]
本發明所述fosb基因的mrna序列優選包括seq id no.1所示序列的全部或部分，cds序列優選包括seq id no.2所示序列的全部或部分，編碼的胺基酸序列優選包括seq id no.3所示序列的全部或部分。
[0028]
本發明所述fosb基因優選通過多手段篩選得到，具體包括：收集人類腹主動脈瘤壁組織的微陣列原始數據以及人類腹主動脈瘤壁組織的單細胞測序數據：來自基因表達總庫(geo，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/))的4個獨立的腹主動脈組織數據集，包括gse98278(31例腹主動脈瘤性腹主動脈壁組織)、gse57691(49例腹主動脈瘤性腹主動脈壁組織和10名對照組的非瘤性腹主動脈壁組織)、gse7084(9例腹主動脈瘤性腹主動脈壁組織和10名對照組的非瘤性腹主動脈壁組織)、gse119717(腹主動脈周圍30個血管周圍脂肪組織和30個未擴張的腹主動脈周圍的腹主動脈脂肪組織)。從geo資料庫中獲得腹主動脈瘤性(gse166676)患者腹主動脈組織的單細胞序列(scrna-seq)數據。本發明的所有實驗均由鄭州大學附屬第一醫院倫理委員會批准(2021-ky-1260-002)。共採集24例aaa住院患者和15例健康對照的外周靜脈血39份。所有受試者都籤署了知情同意書。冷凍的人腹主動脈病變和鄰近的正常腹主動脈來自布裡格姆婦女醫院(liu cl,liu x,zhang y,et al.eosinophils protect mice from angiotensin-ii perfusion-induced abdominal aortic aneurysm.circ res.2021jan22；128(2):188-202.)。根據由麻薩諸塞州波士頓布裡格姆婦女醫院的人類調查審查委員會預先證明的協議2010p001930，廢棄和解碼的人體主動脈被重新使用。
[0029]
本發明優選基於人類腹主動脈瘤壁組織的微陣列原始數據處理和人類腹主動脈瘤壁組織的單細胞測序數據處理，並通過單細胞測序數據和已知標誌基因完成細胞類型注釋。本發明首先將所有樣本中的t細胞進行亞群分析，重建t細胞分化軌跡，基於表達譜信息通過擬合各個t細胞表型出現假時間以確定aaa疾病狀態下各個t細胞亞型分化的先後順序；然後採用多種機器學習算法：lasso、logistic回歸和支持向量機-遞歸特徵消除(svm-rfe)進行特徵選擇，從t細胞浸潤狀態驅動基因中篩選出aaa關鍵生物標誌物(fosb)；而後採用斯皮爾曼相關性分析證實fosb與經典aaa促炎信號標誌ifn應答、tnf和nkκb通路顯著相關；與aaa免疫信號(體細胞受體鈣通路、抗原遞呈)顯著相關；再次採用beam分析證明fosb在t細胞浸潤的分化假時間上具有顯著動力學模式；進一步在多個高通量資料庫外部隊列以及臨床樣本中通過生物信息學分析和rt-pcr實驗方法驗證了fosb基因在腹主動脈壁組織、腹主動脈瘤血管旁脂肪組織、外周血液中表達量顯著失調；最後在多個驗證隊列中
與臨床樣本中，通過受試者工作特徵(roc)曲線和roc下面積(auc)證實了fosb在眾候選靶分子眾具有最高的診斷和預測價值。採用決策曲線分析(dca)和臨床影響曲線(cic)驗證了fosb具有優良的臨床淨效益。
[0030]
在本發明中，檢測fosb基因的試劑優選包括檢測fosb基因mrna表達量的引物對，所述引物對優選包括fosb-exon4-f和fosb-exon4-r，其中fosb-exon4-f的核苷酸序列優選如seq id no.5所示，fosb-exon4-r的核苷酸序列優選如seq id no.6所示。
[0031]
本發明對所述fosb基因的表達量的檢測方法並沒有特殊限定。
[0032]
本發明還提供了一種檢測fosb基因表達量的試劑盒，包括針對fosb基因設計的引物對fosb-exon4-f和fosb-exon4-r，其中fosb-exon4-f的核苷酸序列如seq id no.5所示，fosb-exon4-r的核苷酸序列如seq id no.6所示。
[0033]
本發明所述試劑盒中優選還包括針對內參基因設計的引物對，所述內參基因優選包括gapdh，針對gapdh設計的引物對優選包括gapdh-f和gapdh-r，其中gapdh-f的核苷酸序列優選如seq id no.7所示，gapdh-r的核苷酸序列優選如seq id no.8所示。
[0034]
本發明還提供了一種非診療目的的基於上述試劑盒檢測fosb基因表達量的方法，包括以下步驟：利用從外周血中提取的總rna進行定量聚合酶鏈式反應，將反應產物行qrt-pcr，計算fosb基因的相對表達量。
[0035]
在本發明中，所述總rna的提取方法並沒有特殊限定，提取總rna後經rna質量和rna完整性評估，符合要求即可。本發明對符合要求的總rna進行定量聚合酶鏈式反應，結束後立即-80℃下儲存；然後行qrt-pcr，基於2-δδct
法計算相對表達量。
[0036]
為了進一步說明本發明，下面結合附圖和實施例對本發明提供的檢測和/或調控fosb基因的試劑在製備預測和/或治療腹主動脈瘤的產品中的應用進行詳細地描述，但不能將它們理解為對本發明保護範圍的限定。
[0037]
實施例1
[0038]
(1)基於人類腹主動脈瘤壁組織的微陣列原始數據(基因表達總庫(geo，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/))的4個獨立的腹主動脈組織數據集：gse98278、gse57691、gse7084、gse119717)，使用r語言中的affy軟體包讀取所有微陣列上探針的螢光值數據，然後通過穩健多陣列平均(robust multi-arrayaverage，rma)算法進行背景校正，並取以2為底的對數進行數據標準化，得到探針表達矩陣。進而，通過平臺文件對探針序列進行注釋(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi：gpl10558 illumina human ht-12v4.0 expressionbeadchip，gpl570[hg-u133_plus_2]affymetrix human genome u133 plus 2.0 array)，得到包含所有樣本的基因表達矩。最後，使用r語言中的sva和limma軟體包對樣本進行校正。
[0039]
(2)基於人類腹主動脈瘤壁組織的單細胞測序數據(基因表達總庫(geo，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/))的1個獨立的腹主動脈組織單細胞數據隊列：gse166676)，使用cellranger軟體使每個樣品產生雙端配對末端讀取(paired end)的fastq文件，修剪以去除polya尾序列和模板開關寡核苷酸(tso)序列。最終，使用r語言中的seurat軟體包對cellranger軟體輸出的定量表達矩陣進行下遊分析。
[0040]
(3)超過100,000個轉錄本且線粒體基因比例低於10％的細胞被納入進一步分析；只有在至少3個細胞中表達的基因才被納入進一步分析。使用vst方法鑑定所有基因中前
2000個高變異變基因。執行主成分分析(pca)，並將前20個主成分(pcs)納入降維分析。採用umap算法(uniform manifold approximation and projection)降維。使用findallmarkers函數所有基因中前2000個高變異變基因中的degs，作為細胞類型注釋的潛在標誌基因。
[0041]
(4)aaa組織包含了已知的t細胞(cd3d，cd3e，cd8a)，b細胞(cd79a，cd79b，ms4a1)，單核細胞/巨噬細胞(lyz，cd68，cd14)，神經細胞/施萬細胞(ngfr)，平滑肌細胞(tagln，acta2，cald1)，肥大細胞(kit，hdc，tpsab1)，內皮細胞(vwf，cd34，fabp4)，nk細胞(fgfbp2，klrf1，nkg7)且已知上述細胞類型的標誌基因。識別每個umap無監督聚類所屬的細胞類型，通過判斷每個無監督聚類的degs是否為某種細胞類型的已知標誌基因來判斷該聚類所屬的細胞類型(圖1中a)。
[0042]
(5)進一步，將所有樣本中的t細胞單獨構建為seurat對象(butler a,hoffman p,smibert p,et al.integrating single-cell transcriptomic data across different conditions,technologies,and species.nat biotechnol.2018；36:411-420)，並進行亞群分析。使用monocle軟體包進行成t細胞分化軌跡分析，基於表達譜信息通過擬合各個t細胞表型出現假時間(pseudo-time)以確定aaa疾病狀態下各個t細胞亞型分化的先後順序。分化軌跡分析所有t細胞的獨特的分子標識符(unique molecular identifiers，umi)表達矩陣作為輸入數據，對所有細胞進行無監督排序。而後，利用ddrtress算法估計不同時間點的各個t細胞亞型的假時間(圖1中b)。
[0043]
(6)在鑑定腹主動脈瘤t淋巴細胞分化命運系調控基因(isrgs)之前，為了減少噪音，提高精確性，增強分子的實用性和可操作性，通過多種算法進行進一步篩選，通過venn圖取交集的方法，保留滿足如下5個條件的基因集定義為isrgs(圖1中c)：
[0044]
1.ddrtress算法所得q值《0.05且用於分化軌跡排序的基因
[0045]
2.不同分化階段(state)的t細胞亞型之間的差異基因(q《0.05)
[0046]
3.beam(branched expression analysis modeling)算法鑑定得出的細胞命運調控基因
[0047]
4.ebayes檢驗鑑定出的在動脈瘤壁組織中基因表達量在aaa患者和健康對照組之間存在顯著表達差異的基因(q《0.05)
[0048]
5.不同t細胞表型之間的top2000高變基因
[0049]
(7)利用最小絕對收縮和選擇算子(lasso)、logistic回歸和支持向量機-遞歸特徵消除(svm-rfe)進行特徵選擇，以組織微陣列晶片數據為基礎從isrg中篩選出aaa關鍵生物標誌物。lasso回歸對變量具有收縮懲罰函數，從而導致表達式中預測因子的稀疏性。基於支持向量機的機器學習方法
‑‑
支持向量機rfe通過刪除支持向量機生成的特徵向量來識別最佳變量。構建支持向量機模塊，通過r語言e1071程序包進一步篩選這些生物標誌物在aaa中的診斷價值。最終，將兩種機器學習算法的基因結合起來得到的最終生物標誌物(fosb)進行進一步分析(圖1中c)。
[0050]
(8)aaa中的免疫細胞浸潤模式分析作為一種基於基因表達譜表徵估算複雜組織細胞組成的方法，為確定已識別的生物標誌物與腹主動脈瘤組織中免疫功能之間的關聯，採用單樣本基因集富集分析(single sample geneset enrichment analysis，ssgsea)算法評估和量化了腹主動脈瘤組織中種免疫細胞和免疫功能(圖2中a和b)。
[0051]
(9)採用斯皮爾曼相關性證實生物標誌物與關鍵信號通路的統計學相關性(圖2中c和圖3)。
[0052]
(10)採用beam分析證明fosb在t細胞浸潤的分化假時間上具有顯著動力學模式(圖1中d)。
[0053]
(11)收集4例aaa患者的腹主動脈壁標本，並以5例非瘤性腹主動脈壁標本作為對照(腹主動脈壁，內部數據集1)。在手術過程中，所有組織樣本都被冷凍在液氮中。鄭州大學第一附屬醫院經驗豐富的病理學家證實了aaa。此外，另外採集24例aaa住院患者和15名健康對照的39份外周靜脈血樣本(血樣本，內部數據集2)。
[0054]
(12)定量逆轉錄聚合酶鏈式反應(qrt-pcr)檢測fosb在組織和血液中的表達水平。根據製造商的方案，使用rnaiso plus(中國大連塔卡拉)從人腹主動脈壁組織和外周血樣本中提取總rna。用nanodrop one c(thermo fisher science，waltham，usa)超微紫外分光光度計評估rna質量，並基於瓊脂糖凝膠電泳法評估rna完整性。用hiscrip iii rt supermix進行定量聚合酶鏈式反應(vazyme biotech，南京)。產品立即儲存在-80℃下，直到分析。用chamq universal sybr qpcr master mix(vazyme biotech，中國，南京)在quantstudio3實時聚合酶鏈式反應系統(美國福斯特市應用生物系統)上進行qrt-pcr。採用內參照基因gapdh。(1)95℃保溫30s，(2)95℃保溫10s，60℃保溫30s，(3)95℃保溫15s，60℃保溫60s，95℃保溫15s，採用δct(ctmrna-ct gapdh)方法計算基因相對表達。用2-δδct
法計算相對定量。
[0055]
(13)在多個高通量資料庫外部隊列(gse57691,gse98278,gse7084,gse119717)以及臨床樣本中證實fosb基因在腹主動脈壁組織、腹主動脈瘤血管旁脂肪組織、外周血液中表達量顯著失調(圖4)。
[0056]
(14)在多個驗證隊列中與臨床樣本中，使用r語言計算分析受試者工作特徵(roc)曲線和用於評估fosb的診斷和預測價值，roc下面積(auc)用於指定roc的效應值。決策曲線分析(dca)和臨床影響曲線(cic)驗證了fosb作為診斷標誌物具有優良的臨床淨效益(圖5，圖6和圖7)。
[0057]
儘管上述實施例對本發明做出了詳盡的描述，但它僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部實施例，人們還可以根據本實施例在不經創造性前提下獲得其他實施例，這些實施例都屬於本發明保護範圍。