作為抗病毒劑的四環吲哚衍生物的製作方法

2023-07-16 00:09:11

專利名稱：作為抗病毒劑的四環吲哚衍生物的製作方法
作為抗病毒劑的四環吲咮衍生物本發明涉及四環吲咮化合物、含有其的藥物組合物，其用於治療或 預防C型肝炎病毒感染的應用，以及這種化合物和組合物的製備方法。C型肝炎(HCV)由病毒感染引起。至今仍沒有治療HCV感染的 合適的方法，不過人們相信在哺乳動物特別是人中抑制RNA聚合酶將 會產生好處。7>開的國際專利申請WO2003/010140和WO2004/065367 (均為 Boehringer Ingelheim )提出吲哚衍生物作為HCV聚合酶可能的抑制劑。 然而沒有公開四環吲咮衍生物。因此本發明提供式(I)化合物(i)其中Ar為含有至少一個芳環並且具有任選含有1、 2或3個獨立地選自 N、 0或S的雜原子的5-、 6-、 9-或10-環原子的部分，所述環任選祐^ 團(^和(52取代；Qi為囟素、羥基、d-6烷基、d-6烷氧基、芳基、雜芳基、CONRaRb、 (CH2)0-3NRaRb、 0(CH2)!—3NRaRb、 O(CH2)0-3CONRaRb、 O(CH2)0—3芳基、 0(012)。.3雜芳基、OCHReRd;Ra和Rb每個獨立地選自氫、Cw烷基和C(0)Cw烷基；或Ra 、 Rb和其所連接的氮原子 一起形成4-7個環原子的雜脂肪族環， 其中所述環任選被卣素、羥基、d-4烷基或d-4烷氧基取代；Re和Rd每個獨立地選自氫和C!-4烷氧基；或Re、 Rd和通過選自N、 O和S的雜原子連接以形成4-7個環原子的雜脂肪族環，其中所述環任選被面素、羥基、Cw烷基或d-4烷氧基取代；並且其中所述d-4烷基、d-4烷氧基和芳基任選被卣素或羥基取代；(52為卣素、羥基、d-4烷基或CM烷氧基，其中所述CM烷基和d-4烷氧基任選被卣素或羥基取代；或Qi和(^可通過鍵或選自N、 O和S的雜原子連接以形成4-7個 原子的環，其中所述環任選被滷素、羥基、CM烷基或Ci-4烷氧基取代；A為(33-6烷基或C2-6烯基；或者A為3-8個環原子的非芳環，其中所述環可含有雙鍵和/或可含 有O、 S、 SO、 S02或NH部分；或A為4-8個環原子的非芳香二環部分； 並且A任選被卣素、羥基、d—4烷基或d—4烷氧基取代； W為氫、Cw烷基或。2_6烯基； R2為氫或Cw烷基； L為其中113和114每個獨立地選自氫、滷素、Cw烷基、C:4烯基或d-4烷氧基；或R3和R4連接以形成C3-8環烷基；B為芳基、雜芳基、CONR5R6,任選被滷素、Cw烷基、C2-4烯基 或d-4烷氧基取代；R5為氫或Cw烷基；或115連接到W和/或W以形成5-10元環，其中所述環可以是飽和 的、部分飽和的或不飽和的，並且其中所述環任選^皮卣素、Cw烷基、 C2-4烯基、C2-4炔基或d-4烷氧基取代；Rs為芳基或雜芳基；或R5、 RS與其所連接的氮原子形成5-10元單或二環環系，其中所 述環可以是飽和的、部分飽和的或不飽和的，並且其中所述環任選被卣素、C"烷基、C2-4烯基、C24炔基或CM烷氧基取代；D為鍵、d—6亞烷基、。2-6亞烯基、C2-6亞炔基、芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基任選被卣素、Q-4烷基或C2_4烯基取代；W和Z獨立地選自鍵、C=0、 O、 S(0)。-2、 (CR1QRU)—(CR121113)^X和Y獨立地選自鍵、OO、 O、 -01141115-和NR14; 並且W、 X、 Y和Z中都不是鍵，或者W、 X、 Y和Z中一個或兩 個為鍵；R10、 R11、 R12、 R13、 R"和R"每個獨立地選自氫、羥基、d-6烷基、 C2—6烯基、Cw烷氧基、C(0)d-6烷基、Het、 (CH2)。.3NR16R17 、 C(O)(CH2)0.3NR16R17 、 NHC(O)(CH2)0.3NR16R17 、 OCCH^wNR^R17 、 S(0)o-2(CH2)0—3R16R17和C(O)(CH2)0.3OR16;Het為4-7個環原子的雜脂肪族環，該環可含有1、 2或3個選自N、 O或S的雜原子或基團S(O)、 S(0)2、 NH或NCw烷基；R16和R17獨立地選自氫、d-6烷基和(CH2)o-4NR18111^或R16、 R"與其所連接的氮原子一起形成4-7個環原子的雜脂肪族 環，所述環可任選還含有1或2個選自O或S的雜原子或基團S(O)、 S(0)2、 NH或NCL4烷基，並且所述環任選被卣素、羥基、CM烷基或 d-4烷氧基取代；R"和R"獨立地選自氫和Cw烷基；或R18、 R19與其所連接的氮原子一起形成4-7個環原子的雜脂肪族環，所述環可任選還含有1或2個選自O或S的雜原子或基團S(O)、S(0)2、 NH或Nd—4烷基，並且所述環任選被滷素、羥基、d-4烷基或d-4烷氧基取代；以及其藥學上可接受的鹽。在本發明一個實施方案中，Ar為任選含有l、 2或3個獨立地選自 N、 O和S的雜原子的五元或六元芳環，並且該環任選^L上文所定義的 基團Q4口(^取代。Ar優選為任選含有l或2個獨立地選自N、0或S的雜原子的五元 或六元芳環，例如苯基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、呋喃基、 吡唑基、咪唑基和p塞吩基，該環任選被上文所定義的基團Q4口(^取代。 Ar更優選為苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-呋喃基或3-呋喃 基，特別優選苯基，任選被上文所定義的基團(^和Q"取代。QM尤選為滷素、羥基、d-4烷基、d-4烷氧基或(CH2)0-3N(d-6烷基)2。(^更優選為氟、氯、甲基、甲氧基或CH2NMe2。 (^最優選為甲氧基。 QM尤選不存在。在另一實施方案中，A為C3-6烷基、C2，6烯基或C3-8環烷基，其中 A任選被卣素、羥基、CM烷基或CM烷氧基取代。A優選為C3-8環烷 基，更優選為環戊基或環己基，最優選環己基，任選被滷素、羥基、d-4 烷基或Ci-4烷氧基取代。A優選未取代，或者被氟、氯、甲基或曱氧基，特別是被氟取代。 更優選A未取代。在另一實施方案中，Ri為氫或d,4烷基。優選R^為氫或甲基。更 優選R/為氫。在另一實施方案中，f為氫或CM烷基。優選f為氫或甲基。更優選f為氫。在另一實施方案中，113和114連接以形成環丁基、環戊基或環己基。優選R3和R4連接以形成環戊基。在另一實施方案中，B為CONRS芳基，任選^皮卣素、d-4烷氧基取 代，其中RS如以上所定義。B優選為CONH苯基。在另一實施方案中，D為鍵或亞乙烯基。優選D為亞乙烯基。合適的L基團的例子包括在另 一實施方案中，W為鍵、C=0、誦(CR^rH)畫(CRUR")cm-或NR10, 其中R10、R11 、R12和R13如以上所定義。優選W為-(CR^R1 i)國(CRUR13)01, 例如曙CH2-、 -CH2CH2-、 -CH(CH3)-、 -CH(CH3)-CH(CH3)-、畫C(CH3)2-或 -C(CH3)2-C(CH3)2-。更優選W為-CH2-或-CH2CH2-。最優選W為-CH2-。在另一實施方案中，Z為鍵、C=0, 0, -(011°1111)-(01121113)0-1-或 NR1G,其中R1G、 R11、 1112和R"如以上所定義。優選Z為鍵、O或 -(CR^rUHCRUR13)^更優選Z為鍵、o、 -CH24-CH2CH2-。最優選 Z為鍵、O或-CHr。在另一實施方案中，X為C二O、 -01141115-或NR14,其中R"和R15 如以上所定義。優選X為C二O、 -CH2-、 -0^((:1-6烷基)-、-0麗1 116或 -CHN(CH3)R16 ， 其中 R16如以上所定義。更優選X為c=o、 -ch2-、 -0^11國012國(:112^11181119或畫(:1^(0 3)-012-012誦"11181119，其中 R18 和 R19 如以上所定義。最優選 X 為-CHr或國C麗(CH3)-CH2-CH2-N(CH3)2。在另一實施方案中，Y為CK)、 O、 -CR14R15-或NR14,其中R"和 R"如以上所定義。優選Y為O、 -01141115-或NR14。更優選Y為-CH2-、 NH、 N(d—6烷基)、NCH2CH2N(d-6烷基)2或麗C(0)(CH2)l2n(C!-6烷基)2 。 更優選Y為-CH2-、 NH、 N(d-4烷基)、N(CH2)2N(Cm烷基)2或 NHC(0)CH2N(d-4烷基)2。 Y尤其為-CH2-、 NCH3或N(CH2)2N(CH3)2。本發明一個實施方案提供式(Ia)化合物(la)或其藥學上可接受的鹽，其中W、 X、 Y和Z如式(I)所述。 優選W為-CH2-4-CH2CH2-。更優選W為-CH2-。 優選Z為4建、O、 -012-或-012012-。更優選Z為4建、O或-CHr。 優選X為C二O、 -CH2-、 -012(^12-或《麗((^1-4烷基)-(012)2-:^。烷基)2。更優選X為-CH2-或-CHN(CH3)-(CH2)2-N(CH3)2。優選Y為-CR"R"-或NR14,其中R"和R"如以上所定義。更優選 Y為-CHr或NRM,其中R"為氫、d-6烷基或(CH2V3NR161117,其中R16 和R"如以上所定義。最優選Y為-CHr、 NH、 N(d-4烷基)或 N(CH2)2N(d-4烷基)2。 Y尤其為-CH2-、 NCH3或N(CH2)2N(CH3)2。當任何可變基團在式(I)或任何取代基中出現一次以上時，其在每 次出現時的定義獨立於其在其它每次出現時的定義。此處使用的作為基團或基團一部分的術語"烷基"或"烷氧基"指 該基團為直鏈或支鏈的。合適的烷基的實例包括甲基、乙基、正丙基、 異丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。合適的烷氧基的實例包括甲氧基、 乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。此處提及的環烷基例如可表示環丙基、環丁基、環戊基或環己基。此處使用的作為基團和基團一部分的術語"烯基"和"炔基"指該 基團為直鏈或支鏈的。合適的烯基的實例包括乙烯基和烯丙基。合適的 炔基為炔丙基。此處使用的術語"亞烷基"指的是連接兩個獨立基團的烷基並且可 為直鏈或支鏈的。合適的亞烷基的實例包括亞乙基[-CH2-CHH和亞丙基 [■CH2-CH2-CH2-、畫CH(CH3)畫CH2誦或-CH2國CH(CH3)國]。術i吾"亞歸基"和 "亞炔基"將以類似方式解釋。此處使用的術語"卣素"表示氟、氯、溴和碘。此處使用的作為基團和基團一部分的術語"芳基"指的是碳環芳環。 合適的芳基的實例包括苯基和萘基。此處使用的作為基團和基團 一部分的術語"雜芳基"指的是含有1 -4 個選自N、 O和S的雜原子的5-10元雜芳香環系。這種基團的具體實例 包括吡咯基、吹喃基、p塞吩基、吡啶基、吡唑基、咪唑基、哺唑基、異 夢惡唑基、噻唑基、異噻唑基、吡溱基、嘧咬基、噠嗪基、三唑基、哺二 唑基、噻二唑基、三溱基、四唑基、口引咮基、苯並噻吩基、苯並咪唑基、 苯並呔喃基、喹啉基和異喹啉基。當化合物或基團描述為"任選取代"時，可以存在一個或多個取代 基。而且，任選的取代基可以連接到化合物或基團，其可以多種方式取 代，或者直接取代或者通過例如以下連接基團取代胺、醯胺、酯、醚、 硫醚、氨磺醯、磺醯胺、亞碸、脲、硫脲和尿烷。視情況而定，任選的 取代基可以本身被另 一取代基取代，後一取代基直接連接到前者或者通過例如以上所述的連接基團連接。本發明範圍內的特定化合物包括(2E)-3-(4-{[(l-{[(14-環己基-3-曱氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚 [2,l-a][2,習苯並二吖辛因-ll-基)羰基]氨基p不戊基)羰基]氨基)苯基)丙烯酸，(2E)-3-(4-([(l-([(14-環己基-6-甲基-5,6,7,8-四氬吲哚[2,l-a][2，5]苯並 二吖辛因_ 11 -基)羰基]氨基}環戊基)羰基]氨基)苯基)丙烯酸，(2E)-3-(4-[((l-[((13-環己基-5-[2-(二曱氨基)乙基]-6,7-二氫-5H-吲哚 [1,2-(1][1,4]苯並二氮雜革-10-基}羰基)氨基]環戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸，(2￡)-3-{4-[({1-[({14-環己基-6-[2-(二甲氨基)乙基]-5,6,7,8-四氫吲哚 [2,l-a][2,5]苯並二吖辛因-ll-基〉羰基)氨基]環戊基)羰基)氨基]苯基〉丙烯酸，(2E)-3-(4-[((l-[(((m)-14-環己基-7-[[2-(二曱氨基)乙基](曱基)氨基]-7,8-二氫-6H-吲哚[l,2-e][l,5]苯並噹唑辛(benzoxazocin) -11-基}羰基)氨基]環戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸， 以及其藥學上可接受的鹽。對於醫學應用，式(I)化合物的鹽將為無毒的藥學上可接受的鹽。 然而，其它鹽也可用於製備根據本發明化合物或其無毒的藥學上可接受 的鹽。本發明化合物的合適的藥學上可接受的鹽包括酸加成鹽，其可通 過例如將根據本發明化合物的溶液與藥學上可接受的酸的溶液混合形 成，藥學上可接受的酸例如為鹽酸、富馬酸、對曱苯磺酸、馬來酸、琥 珀酸、乙酸、檸檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸或硫酸。胺基的鹽還可包含 季銨鹽，其中氨基氮原子帶有合適的有機基團，例如烷基、烯基、炔基 或芳烷基部分。此外，在本發明化合物帶有酸性部分的情形，其合適的 藥學上可接受的鹽可包括金屬鹽，例如鹼金屬鹽，如鈣鹽或鎂鹽和鹼土 金屬鹽，例如鉤鹽和鎂鹽。這些鹽可通過常規方法形成，例如通過該產品的游離鹼形式與 一當 量或多當量合適的酸在該鹽不溶解的溶劑或介質中反應得到，或者在例 如水的溶劑中反應，然後真空除去水，或者通過冷凍乾燥除去水，或者 在合適的離子交換樹脂上通過交換現有鹽的陰離子為另 一 陰離子得到。本發明在其範圍內包括上式(I)化合物的前藥。這種前藥通常為式(I)化合物的功能衍生物，其可容易地在體內轉化為所需的式(I)化合物。選擇和製備合適的前藥衍生物的常規方法例如公開在"Design of Prodrugs" , H. Bundgaard編輯，Elsevier, 1985中。前藥可為生物體活性物質("母體化合物"或"母體分子")的藥 理學惰性的衍生物，其需要在體內轉化以釋放活性藥物，並且具有比母 體藥物分子改善的釋放性質。體內轉化例如可以是某些代謝過程的結 果，例如羧酸、磷酸或硫酸酯的化學或酶水解，或者敏感官能團的還原 或氧化。本發明在其範圍內包括式(I)化合物以及其鹽的溶劑化物，例如水合物。本發明在其範圍內還包括式(I)化合物的任何對映體、非對映體、 幾何異構體和互變異構體。應理解的是，全部這些異構體以及其混合物將包括在本發明範圍內。本發明此外提供用於治療的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。 另一方面，本發明提供如上所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽用於製造在人或動物中治療或預防C型肝炎病毒感染的藥物中的應用。本發明另 一方面提供含有如上所述式(I)化合物或其藥學上可接受 的鹽與藥學上可接受的載體的藥物組合物。根據指定給藥方法，該組合 物可為任何合適的形式。例如對於口服給藥，其可為片劑、膠嚢或液態 形式，或者對於腸胃外給藥，其可為溶液或懸浮液的形式。該藥物組合物任選還包括一種或多種用於治療病毒感染的其它藥 物，例如抗病毒藥，或免疫調節劑，例如a-、 P-或y-幹擾素。本發明另 一 方面提供一種抑制C型肝炎病毒聚合酶和/或治療或預 防C型肝炎病毒引起的疾病的方法，所述方法包括向患有所述疾病的人 或動物(優選哺乳動物)主體給藥治療或預防有效量的如上所述的藥物 組合物或如上所述的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。"有效量" 指的是足以對主體產生效果的量或者至少引起主體病況改變的量。化合物給藥的給藥速率將取決於各種因素，包括所應用的特定化 合物的活性、該化合物的代謝穩定性和作用的長短、患者的年齡、體重、 一般健康、性別、飲食、給藥的方式和時間、排洩速率、藥物聯合、具 體病症的嚴重程度以及接受治療的宿主。合適的劑量水平大約可為每天0.02至5或10克，口服劑量高二至五倍。例如，以1至50毫克化合物 每千克體重每天給藥l-3次是適宜的。合適的給藥劑量可通過常規試驗 選擇。該化合物可以單獨給藥，或者與其它治療一起同時或續貫給藥。 例如，可以與本領域熟練技術人員已知的有效量的抗病毒藥、免疫調節 劑、抗感染藥或疫苗一起給藥。可以通過任何合適的途徑給藥，包括口 服、靜脈內、經皮和皮下途徑。可以直接給藥到合適的位置，或者以靶 向特定位置例如特定類型的細胞的方式給藥。合適的靶向方法已經公 知。本發明的其它方面提供一種製備藥物組合物的方法，包括將至少一 種如上所定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽與一種或多種藥學 上可接受的助劑、稀釋劑或載體和/或 一種或多種其它治療或預防性活性劑混合。本發明還提供製備式(I)化合物的方法。根據通用方法(a),式(i)化合物可通過式(n)化合物與式(m)化合物的反應製備其中R1、 R2、 L、 A、 Ar、 W、 X、 Y和Z如式(I)中所定義。該反應 通常在例如HATU的偶聯劑和例如二異丙基乙胺的鹼的存在下在例如 DMF的溶劑中進行。式(II)和式(III)化合物為本領域已知或者可通過本領域熟練技 術人員已知的常規方法製備，例如說明書和實施例中所述的方法，或者 通過顯而易見的替代方法製備。例如，式(III)化合物可通過式(IV)化合物的內環閉合製備formula see original document page 16(IV)
其中A、 Ar、 W和Z如式(I)中所定義，P為合適的保護基，例如曱基， 並且X'和Y'具有成為如式(I)中所定義的X和Y中一種或兩種的合適 的前體官能團。例如當X是-CH2-並且Y是N(CH3)時，X'和Y'可分別為 -CHO^p-NC(CH3),其中反應在例如氰基硼氬化鈉的弱還原劑的存在下 在輕度酸性條件下在例如甲醇的合適的溶劑中進行。或者，當X是CK) 並且Y是NH時，X'和Y'可分別為C(O)OtBu和NHC(O)OtBu，其中反 應在酸性條件下在例如二氯曱烷/水混合物的合適的溶劑體系中進行。式(I)化合物可以使用本領域公知的合成方法轉化為其它式(I) 化合物。例如，通過在例如二氧六環、THF和/或曱醇的合適的溶劑中在 水的存在下使用LiOH處理將酯轉化為羧酸，R1為C02CH2CH3的式(I) 化合物可以轉化為R1為C02H的式(I)化合物。此外，通過在例如THF的合適的溶劑中〗吏用例如BH3 . Me2S的硼 烷反應物還原含氧基，X為C = O的式(I)化合物可以轉化為其中X 為CH2的式(I)化合物。任一上述合成序列期間，可能需要和/或希望保護任何涉及分子上敏 感或活性的基團。這可通過常規保護基實現，例如Protective Groups in Organic Chemistry, J.F.W. McOmie編輯，Plenum Press, 1973和T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons,第3版，1999中所述的那些。這些保護基可使用本領域 已知的方法在隨後方便的步驟除去。本發明通過以下非限制性實施例進一步說明。在酶抑制試驗(實施例(i))和基於細胞的次基因組複製試驗(實 施例(ii))中測試了本發明化合物對抗HCVRNA依賴的RNA聚合酶 (NS5B)的抑制活性。該化合物在酶活性測定中通常具有低於1 jLiM 的IC50，，並且幾個實施例在基於細胞的測試中具有4氐於0.5 |LiM的 EC50'。實施例中的化合物名稱使用ACDLabs ( 6.0版)軟體產生。(i) 體外HCV NS5B酶抑制測定WO 96/37619 7>開了/人感染重組杆狀病毒的昆蟲細月包產生重組 HCVRdRp,該杆狀病毒編碼酶。使用RNA作為才莫板，純化的酶顯示具 有體外RNA聚合酶活性。該參考文獻描述了使用聚腺普酸(Poly(A)) 和低聚尿苷酸(01igo(U))作為引物或者雜聚模板的聚合測定。氚化UTP 或NTPs的加入通過測量酸-不溶性放射性確定。本發明人已經使用該測 定以篩選如上所述各種化合物作為HCVRdRp抑制劑。放射性UMP的加入如下測定。標準反應(50毫升)在含有20 mM Ph為7.5的tris/HCl、 5 mM MgCl2、 1 mM DTT、 50 mM NaCl、 0.03 % N-辛基葡糖苷、1 jLiCi [3H]-UTP ( 40 Ci/毫摩爾，NEN)、 10 ju M UTP和 10微克/毫升聚腺苷酸或5 pM NTPs和5微克/毫升雜聚模板的緩衝液 中進行。01igo(U)12 ( 1微克/毫升，Genset)作為引物加入到工作在聚腺 香酸才莫板上的測定中。最終NS5B酶濃度為5 nM。混合順序為l)化 合物、2)酶，3)模板/引物，4)NTP。在22。C培養1小時後，反應通 過加入50《鼓升20% TCA停止並且將樣品加入到DE81過濾器中。過濾 器用pH為7.0的含有1M Na2HP04/NaH2P04的5 % TCA充分地洗滌， 用水洗滌然後用乙醇洗滌，隨後空氣乾燥，並且在閃爍計數器中測量過 濾器結合放射性。在如上設定的不同濃度的每種化合物的存在下進行該 反應，根據下式測量IC5o值%剩餘活性=100/(1+[I]/IC50)S其中[I]為抑制劑濃度並且"S"為抑制曲線斜率。(ii) 基於細胞的HCV複製測定通過使用與Lohmann等人(1999) (EMBL-genbank No. AJ242652)所 述D77neo/NS3-3，/相同的RNA複製子轉染Huh-7細胞,然後使用新黴素 硫酸鹽(G418)選擇，得到細胞克隆，其穩定保持了次基因組的HCV復 制子。使用抗NS3單克隆抗體10E5/24在生長於96孔微孔滴定板 (Cell-ELISA)中的細胞上直接進行ELISA測定，通過測量NS3蛋白表 達監測病毒複製(如國際申請WO 02/5932所述)。細胞以0.1毫升 DMEM/10%FCS的最終體積以104細胞/孔的密度播種在96孔板中。2 小時後，加入含有3倍濃度抑制劑的50微升DMEM/10 % FCS,細胞培 養96小時然後使用水冷的異丙醇固定IO分鐘。每個條件測試一式兩份並且平均吸光度值用於計算。細胞用PBS洗滌兩次，使用PBS + 0.1% Triton X100 + 0.02% SDS ( PBSTS)中5 %脫脂奶粉阻斷，然後在4。C使 用在奶/PBSTS中稀釋的10E5/24 mab培養。用PBSTS洗滌5次後，細 胞使用在奶/PBSTS中稀釋的結合到鹼性磷酸酶(Sigma)的Fc特異性 的抗小鼠IgG在室溫下培養3小時。再次如上洗滌後，反應使用對硝基 苯磷酸二鈉底物(Sigma)繼續並且每隔一段時間在405/620納米讀數測 量吸光率。對於計算，我們使用其中沒有使用抑制劑培養的樣品具有 1-1.5的吸光度值的數據集。減少50% NS3表達的抵製劑濃度(IC50)通 過按照Hill方程式擬合數據計算，《且分承卩制=l-(Ai-b)/(A0國b) = [I]n / ([I]n + IC50)其中-Ai =添加有指定抵製劑濃度的HBI10細胞的吸光度值。 -AO =沒有抑制劑的HBI10細胞的吸光度值。 -b =在相同微孔滴定板中並且不使用抑制劑在相同濃度分布的 Huh-7細胞的吸光度值。 -n-Hill係數。 (iii) 一般方法全部溶劑得自商業來源(Fluka, puriss.)並且無須另外純化使用。 除常規脫保護和偶合步驟之外，反應在氮氣氣氛下在烘乾(ll(TC)玻 璃器皿中進行。有機萃取液使用硫酸鈉乾燥，並且使用在減壓下操作的 旋轉蒸發器上濃縮(濾出乾燥劑後)。按照公開方法(W.C. Still等人， J. Org. Chem. 1978, 43, 2923 )在矽膠上或者使用預填充塔在商用快速色 "i普體系(Biotage corporation和Jones Flashmaster II)上進4亍快速色i普。反應物通常直接得自商業供應商(並且用作供應品)，然而使用得 自公司內部收集的有限數量的化合物。在後一種情形下，反應物使用科 學文獻中公開的或者本領域熟練技術人員所公知的常規合成步驟容易 得到。& NMR光譜記錄在操作在300至600MHz的Bmker AM系列光譜 儀上。相應於非可交換質子(並且可交換質子可見)信號的化學位移(5 ) 相對於四甲基矽烷以百萬分之幾(ppm)記錄，並且使用剩餘溶劑峰值 作為定位測量。信號概括如下多重性(s，單峰；d，雙重峰；t,三重 峰；q，四重峰；m,多重峰；br,寬峰，以及其組合)；以赫茲(Hz)表示的偶合常數(s);質子數。質譜(MS)數據在陰性(ES-)或陽性 (ES+ )離子化模式操作的Perkin Elmer API100或Waters MicroMass ZQ 上得到，並且所得結果僅以母體離子物質與電荷的比例(m/z)記錄。 製備級HPLC分離在裝有Waters 486吸收檢測器的Waters Delta Prep 4000分離模塊上進行，或者在Gilson製備體系中進行。在全部情況下， 化合物使用流速為15-40毫升/分鐘的含有0.1%TFA的線性梯度的水和 乙腈洗脫。在實施例、方案和表格中使用以下縮寫Ar:芳基；cat:催化的； DCM: 二氯甲烷；dioxan(e): 1,4-二氧六環；DIPEA: 二異丙基乙胺； DMAP: N,N-二曱基吡啶-4-胺；DME: 二曱氧基乙烷；DMF: 二甲基曱 醯胺；DMSO.' 二甲亞碸；EDAC.HC1: l-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亞 胺鹽酸鹽；叫.當量；Et:乙基；EtOAc:乙酸乙酯；Et20:乙醚；EtOH: 乙醇；h:小時；HATU: 0-(7-氮雜苯並三唑-l-基)-N,N,N，,N，-四曱基脲鑥 六氟磷酸鹽；Me:甲基；MeCN:乙腈；MeOH:曱醇；min:分鐘； MS:質譜；NBS: N-溴代琥珀醯亞胺；PE:石油醚；Ph:苯基；Prep.: 製備性；iPr2Net: 二異丙基乙胺；quant:定量；RP-HPLC:反相高壓 液相色鐠；RT/rt:室溫；sol.:溶液；TFA..三氟乙酸；THF:四氫呋喃； TMS:三曱基曱矽烷基。說明k 14-環己基-3-曱氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯 並二吖辛因-ll-羧酸歩驟1: 2-溴-3-環己基-l-n,3-二氧戊環-2-基甲基VlH-吲哚-6-羧酸甲NaH (1.5叫.，礦物油中60%分散體)加入到2-溴-3-環己基-lH-吲哚-6-羧酸曱酯(如公開的國際專利申請WO 2004/065367中製備)在 DMF (0.1 M)的溶液中，並且一次冒泡已經平息後將溶液在室溫下另外 攪拌30分鐘。然後加入2-溴曱基-1,3-二氧戊環(4 eq.)和催化量(0.025 eq) 硤化鉀並將混合物在50。C加熱36小時。反應混合物冷卻至室溫，用HC1 水溶液(1N)淬滅並用EtOAc萃取。有機物用HC1水溶液(1N) (3 x )、水和鹽水洗滌，然後使用Na2S04乾燥，過濾並真空蒸發溶劑。 通過快速色譜法(10。/。EtOAc/PE)純化得到淺黃色固體，將其與Et20/PE 一起研磨，以白色固體得到標題化合物(69% ) 。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5 1,35-1.45 (m, 3H), 1.68-1.80 (m, 3H), 1.8-2.0 (m,4H), 2.83-2.89 (m, 1H), 3.78 (s, 4H), 3.88 (s, 3H), 4.45-4.46 (m, 2H), 5.13-5,18 (m, 1H) 7.65 (d, J 8.5, 1H), 7.81 (d, J 8.5, 1H)， 8.14 (s, IH); MS (ES+) m/z 422 (M+H)+, m/z 424 (M+H)+。步驟2: 3-環己基-l-n,3-二氣戊環-2-基甲基)-2-〖2-甲醯基-4-曱氧基 苯基VlH-吲哚-6-羧酸曱酯向2-溴-3-環己基-l-(l,3-二氧戊環-2-基曱基)-lH-吲哚-6-羧酸甲酯 (得自步驟1)在二氧六環(0.1M)的溶液中加入Na2C03 (6eq., 2M 水溶液)、4-甲氧基-2-曱醯基苯基硼酸(2 eq)和二(三苯基膦)鈀(II)二 氯化物(0.2叫)。將混合物脫氣，然後回流加熱30分鐘。反應混合物 的RP-HPLC分析表明存在起始物料。反應混合物冷卻，並且加入另外1 當量4-甲氧基-2-甲醯基苯基硼酸和0.1當量二(三苯基膦)鈀(II)二氯化 物。然後重新開始回流加熱30分鐘。將反應冷卻至室溫並在水和EtOAc 之間分配。水相組分用EtOAc萃取，並將合併的有機物用鹽酸(1 N)、 水和鹽水洗滌，並且使用Na2S04乾燥，過濾並在真空中進行濃縮。原 材料通過快速色譜法(10-20%梯度的EtOAc/PE)純化，以黃色泡沫得 到標題化合物(72% ) 。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6， 300 K) 5 1.10-1.24 (m, 3H), 1.60-1.80 (m, 7H)， 2.30-2.39 (m, 1H), 3.41-3.48 (m, 1H), 3.56-3.65 (m, 3H), 3.89 (s, 3H)， 3.94 (s, 3H), 3.98 (dd, J 15.3, 4.4, 1H), 4.25 (dd, J 15.3, 2.6, 1H), 4.92-4.93 (m, 1H), 7.40-7.46 (m, 2H), 7.49 (d, J 2.2, 1H), 7.70 (d, J 8.8, 1H), 7.85 (d, J 8,8, 1H), 8,21 (s, 1H), 9.61 (s, IH); MS (ES+) m/z 478 (M+H)+。歩驟3: 3-環己基-l-n,3-二氧戊環-2-基甲基V244-甲氧基-2-「(曱基 氨基)甲基l苯基VlH-吲哚-6-羧酸曱酯向3-環己基-l-(l,3-二氧戊環-2-基甲基)-2-(2-曱醯基-4-曱氧基苯 基)-lH-吲哚-6-羧酸曱酯(得自步驟2)在THF (0.05M)的溶液中加入 曱胺(10eq., THF中2M溶液)並使用乙酸將pH調節為6。溶液在真 空濃縮之前在室溫下攪拌45分鐘。殘餘物在MeOH中吸收以得到0.025 M溶液。加入NaBH3CN (2.4eq)並將混合物在室溫下攪拌2小時。反 應混合物的RP-HPLC分析表明完全轉化為所需的胺。反應用飽和 NaHC03水溶液淬滅並使用EtOAc萃取(2x )。合併的有機物用水和 鹽水洗滌然後使用Na2S04乾燥，過濾並且真空濃縮，以粘性油狀物得 到標題化合物(89% ) 。 ！H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 51.10-1.27 (m, 3H), 1.60-1.75 (m, 6H), 1.79-1.90 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.29-2.35 (m, 1H), 3.34 (br s, 2H, partially obscured by water peak), 3.63-3.72 (m, 3H), 3.73-3.78 (m, IH), 3.79-3.84 (m， IH), 3.85 0, 3H), 3.87 (s, 3H), 4.15 (dd, J 15.0, 4.7, IH), 4.84-4.87 (m, IH), 6.96 (dd, J 8.5, 2.6, IH), 7.18 (d, J 8.5, IH), 7.23 (d, J 2.6, IH), 7,65 (dd， J 8.4, 1.3, IH), 7.80 (d, J 8.4, IH)， 8.16 (d, J 1.3, IH); MS (ES+) m/z 493 (M+H)+。歩驟4: 3-環己基-244-曱氧基-2-「〖曱氨基)甲基l苯基卜l-(2-氧代甲 基VlH-吲哚-6-羧酸甲酯將鹽酸(25 eq.， 3 M)加入到3-環己基-l-(l,3-二氧戊環-2-基曱 基)—2-(4-甲氧基-2-[(曱基氨基)甲基]苯基卜lH-吲哚-6-羧酸曱酯(得自步 驟3)在THF (0.02M)的溶液中，並將混合物回流加熱24小時。反應 混合物等分試樣的iHNMR分析證實起始物料的完全轉化。揮發物在真 空中除掉，並且殘餘物在EtOAc和飽和NaHC03水溶液(保證水相為鹼 性)之間分配。水相用EtOAc萃取，並將合併的有機物用水和鹽水洗滌， 然後使用Na2S04乾燥，過濾並在真空中進行濃縮，以基本上定量收率 得到標題化合物。^NMR(400MHz,DMSO-d6, 300 K) 5 1.05-1.35 (m, 3H), 1.60-1.95 (m, 7H), 2.25-2.33 (m, 1H)， 2.86 (s, 3H), 3.74-3.78 (m, 1H, obscured by water peak), 3.88 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.29 (d, J 14.2, IH), 5.31 (d, J 7.3, IH), 5.70 (d, J 7.3, IH), 7.06-7.10 (m, 2H), 7.32 (d, J 8.3, IH), 7.63 (dd, J 8.4, 1.4, IH), 7.84 (d, J 8.4, IH), 7.96 (d, J 1.4, IH), 9.02 (br s, IH); MS (ES+) m/z 449 (M+H)+。歩驟5: 14-環己基-3-甲氣基-6-甲基-5.6,7,8-四氫吲哚r2,l-al「2,51苯 並二吖辛因-ll-羧酸將乙酸在室溫下滴加到3-環己基-2-{4-甲氧基-2-[(曱氨基)甲基]苯 基卜l-(2-氧代乙基)-lH-吲哚-6-羧酸甲酯(得自步驟4)在MeOH (0.005 M)的溶液中，並且將pH調節為pH6。混合物攪拌10分鐘，然後加入 NaCNBH3 (3.2eq) 。 1小時後反應混合物的RP-HPLC分析證實氨基醛 完全轉化為所需的環胺。反應用等體積的THF稀釋並且加入NaOH( 100 eq., 2M水溶液)。反應混合物然後在60。C加熱3小時，然後冷卻至室 溫。THF/MeOH體積真空減少，並且殘餘物在用EtOAc萃取之前(4 x ) 用HC1水溶液(1N)酸化。合併的有機物用鹽水洗滌，使用Na2S04幹 燥，過濾並且在真空中進行濃縮，以黃色固體得到產品的鹽酸鹽。通過自動RP-MS-HPLC (固定相柱Waters XTERRA製備C18, 5微米， 19xl00毫米。流動相用0.1。/。TFA緩衝的MeCN/H20)。含有純化合 物的組分合併並且凍幹，以白色粉末得到標題化合物(21% )。HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5 1.09-1.21 (m, 1H), 1.28-1.37 (m, 2H), 1.50-1.56 (m, 1H), 1,65-1,75 (m, 2H)， 1.82-2.0 (m， 4H), 2.58-2.67 (m, IH), 3.04 (br s, 3H), 3.3-3.5 (m, IH,浮皮水峰掩蓋)，3.63-3.75 (m, 3H), 3,91 (s, 3H), 4.32 (d, J 13.4, IH), 4.79 (dd, J 16.0, 3.5, IH), 7.25 (dd, J 8.5, 2.3, IH乂 7.40 (d, J 8.5, IH), 7.61 (d, J 2.3, IH), 7.73 (d, J 8.3, IH), 7.91 (d, J 8.3, IH), 8.19 (s, IH), 9.86 (br s, IH), 12.68 (br s, IH); MS (ES+) m/z 419 (M+H)+。說明2:14-環己基-6-[2-(二甲氨基)乙基]-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5] 苯並二吖辛因-ll-羧酸步驟1: 2-澳-3-環己基-l-a2-二曱氧基乙基VlH-吲哚-6-羧酸曱酯在室溫下向2-溴-3-環己基-lH-吲咮-6-羧酸曱酯(如公開的國際專利 申請WO 2004/087714所述製備)(0.2 M， 1叫)在DMF的攪拌溶液中 加入NaH (礦物油中60%分散體，1.75eq)。 1小時後加入KI(8摩爾 % )和溴代乙醛二甲基縮醛(2.5叫)並將反應在SO。C加熱17小時。冷 卻至室溫後，反應通過加入HC1水溶液(1N)淬滅並萃取進入EtOAc (3x )。合併的有機物用HCl( 1N)、H20和鹽水洗滌，然後使用Na2S04 乾燥，過濾並且在真空中進行濃縮。通過快速色譜(Biotage, 5-10% EtOAc/PE梯度)純化，以白色固體得到標題化合物(79% ) 。 ^NMR (300 MHz, d6-DMSO, 300 K) 5 1.51-1.68 (m, 3H), 1,67-1,72 (m, 3H), 1.82-1.99 (m, 4H), 2.81-2.89 (m, 1H), 3.25 (s, 6H), 3.87 (s, 3H), 4.35-4.37 (m, 2H), 4.46-4.59 (m, 1H), 7.64 (d, J 8.4, 1H), 7.80 (d， J 8,4, 1H), 8,10 (s, IH); MS (ES+) m/z 446 (M+H)+, 448 (M+H)+。步驟2: 3-環己基-l-(2.2-二甲氧基乙基V2-(2-甲醯基苯基VlH-吲哚 -6-羧酸曱酯2-溴-3-環己基-l-(2,2-二曱氧基乙基)-lH-吲哚-6-羧酸曱酯(0.16M, 1 eq,得自步驟1)在二氧六環和Na2C03 (6當量2M溶液)中的溶液 通過超聲處理脫氣10分鐘。加入2-曱醯基苯基硼酸(1.5 eq)和二(三苯 基膦)鈀(II)二氯化物(20摩爾％ )並將反應置於在108。C加熱的預加熱 油浴中20分鐘直到變黑。冷卻至室溫後，反應在H20和EtOAc之間分酉己(3x )。合併的有機物用HC1 (1N) 、 H20和鹽水洗滌，然後使用 Na2S04乾燥，過濾並且在真空中進行濃縮。通過快速色鐠(Biotage, 10 % EtOAc/PE)純化，以淺黃色固體得到標題化合物(85 % )。〗H NMR (300 MHz, d6-DMSO, 300 K) 5 1.08-1.23 (m, 3H), 1.60-1.81 (m, 7H), 2.30-2.34 (m, 1H), 3.01 (s, 3H), 3.07 (s, 3H), 3.89 (s， 3H), 3.95-3.97 (m, 1H), 4.12-4.18 (m, 1H), 4.36-4.37 (m, 1H), 7.53 (d, J 7.5, 1H), 7.70-7.78 (m, 2H): 7.84-7.88 (m, 2H), 8.04 (d, J 7.5, 1H), 8.17 (s, 1H), 9.66 (s, IH); MS (ES+) m/z 472 (M+Na)+, 450 (M+H)+。歩驟3: 3-環己基-l-a2-二曱氧基乙基)-2-「2-m2-(二甲氨基)乙基l 氨基l甲基〗苯基l-lH-吲哚-6-羧酸曱酯向3-環己基-l-(2,2-二甲氧基乙基)-2-(2-曱醯基苯基)-lH-吲哚-6-羧 酸曱酯(0.16M, l叫，得自步驟2)和2-二曱氨基乙胺(2eq)在THF 的攪拌溶液中加入水醋酸以將反應的pH調節為大約pH 4。反應攪拌1 小時，然後在減壓下除去THF並將殘餘物再溶解於MeOH中。分批加 入NaBH4 (8eq)直到通過LC-MS分析觀察到完全轉化。反應通過加入 NaHC03飽和水溶液淬滅並且萃取進入EtOAc (3 x )。合併的有機物用H20和鹽水洗滌，然後使用Na2S04乾燥，過濾並且在真空中進行濃縮。 以淺黃色油狀物得到標題化合物並且無須進一步純化就可使用(定量)。 !H N匿(300 MHz, d6-DMSO, 300 K) 5 1.15-1.23 (m, 3H), 1.67-1.72 (m, 7H), 2.16 (s, 6H), 2.33-2.50 (m, 5H被DMSO峰掩蓋)，3.00 (s, 3H), 3.08 (s: 3H), 3.40-3.50 (m， 2H被水峰掩蓋)，3.78 (dd, J 14.8, 4.6, 1H), 3.88 (s, 3H): 4.07-4.14 (m, 1H), 4.26-4.28 (m, 1H), 7.29 (d, J 7.5, 1H), 7.40-7.44 (m, 1H): 7.52-7.56 (m, 1H), 7.65-7.70 (m, 2H), 7.83 (d, J 8.4, 1H), 8.1 (s, IH); MS (ES+) m/z 522 (M+H)+。歩驟4: 14-環己基-6-「2-(二曱氨基)乙基l-5五7,8-四氫吲哚「2,l-a1「2，51 苯並二吖辛因-ll-羧酸甲酯向3-環己基-l-(2,2-二曱氧基乙基)-2-[2-({[2-(二甲氨基)乙基]氨基) 甲基)苯基]-lH-吲哚-6-羧酸曱酯(0.16 M, 1 eq，得自步驟3 )在THF 的攪拌溶液中加入等體積的1 N HC1。反應在60。C加熱2.5小時並且在 冷卻到室溫後通過加入NaOH (2N)淬滅並萃取進入EtOAc (3 x )。 合併的有機萃取物用鹽水洗滌，然後使用Na2S04乾燥，過濾並在真空 中進行濃縮。殘餘物再溶於MeOH並使用水醋酸酸化至pH 4。攪拌45分鐘後，分批加入NaBH4 ( 8 eq)直到通過LC-MS分衝斤證實環化作用完 成。反應通過加入NaHC03飽和水溶液淬滅並且萃取進入EtOAc( 3 x )。 合併的有機萃取物用鹽水洗滌，然後使用Na2S04乾燥，過濾並在真空 中進行濃縮。以淺黃色油狀物得到標題化合物，並且無須另外純化使用 (定量)。&畫R (400固z, d6-DMSO, 300 K) S 1.12-1.35 (m, 3H), 1.50-1.53 Cm, 1H), 1.66-1.72 (m, 2H), 1.79-1.86 (m, 1H), 1.94-1.92 (m, 3H), 2.53-2.57 (m, 1H被DMSO峰掩蓋)，2.61-2.65 (m, 2H), 2.82 (s, 6H), 2.85-2.92 (m, 3H), 3.25-3.36 (m, 2H被水峰掩蓋)，3.51-3.57 (m， 1H), 3.79 (d, J 13.8, 1H), 3.88 (s, 3H), 4.47-4.52 (m, 1H), 7.38 (d, J 7.5, 1H), 7.47-7.50 (m, 1H), 7.53-7.57 (m， 1H), 7.64 (d, J 7.5, 1H), 7.70 (d, J 8.4, 1H), 7.91 (d, J 8.4, 1H), 8.10 (s, IH); MS (ES+) m/z 460 (M+H)+。步驟5: 14-環己基-6-「2-(二曱氨基)乙基l-5，6,7,8-四氬吲哚r2,l-a1「2,51 苯並二吖辛因-ll-羧酸14-環己基-6-[2-(二曱氨基)乙基]-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯並二 吖辛因-ll-羧酸曱酯(0.16M, leq,得自步驟4 )在MeOH和1N NaOH (4叫)的溶液加熱到80。C6小時。冷卻至室溫後，在減壓下除去MeOH 並將所得水溶液使用3N HC1水溶液酸化直到pH 1-2,導致淺黃色沉澱 的形成。濾出沉澱並且在過濾器上乾燥整夜，以黃色固體得到產物的粗 鹽酸鹽。通過RP-MS-HPLC(固定相柱Waters XTERRA製備MS C18, 5微米，30xl00毫米。流動相用0.1% TFA緩衝的MeCN/H20)純 化。合併含有純化合物的組分並且在3N HC1水溶液的存在下凍幹(2 x )， 以白色粉末得到標題化合物的二鹽酸鹽(在步驟3、 4和5中65% )。 丄H麗R(400固z, d6-DMSO+TFA, 300 K) 5 1.12-1.15 (m, 1H), 1.31-1.36 (m, 2H), 1.53-1.56 (m, 1H), 1.67-1.72 (m, 2H), 1.82-1,84 (m, 1H), 1.90-1.99 (m, 3H), 2.62-2.69 (m， 1H), 2.87 (s, 6H), 3.45-3.50 (m， 1H), 3.62-3.82 (m, 7H)， 4.52 (d, J 13,6, 1H), 4.84 (dd, J 16.6, 4.6, 1H), 7.47-7.49 (m, 1H), 7.63-7.68 (m, 2H), 7.74 (d, J 8.4, 1H), 7.93-7.95 (m, 2H), 8.2 (s, IH); MS (ES+) m/z 446 (M+H)+。實施例1: (2E)-3-(4-([(l-U(14-環己基-3-甲氧基-6-曱基-5,6,7,8-四氫 吲咮[2,l-a][2,5]苯並二吖辛因-ll-基)羰基]氨基)環戊基)羰基]氨基)苯基) 丙烯酸歩驟1: (2EV3-(44「n-氨基環戊基)羰基l氨基l苯基)丙烯酸乙酯將1-{[(苄氧基)羰基]氨基}環戊羧酸溶於DMF( 0.2 M)。加入HATU (1 eq)和三乙胺(3 eq),然後加入(2E)-3-(4-氨基苯基)丙烯酸乙酯(0,95 eq)。所得混合物在40。C攪拌48小時。蒸發DMF,所得油狀物在EtOAc 中吸收，並且溶液使用鹽酸(3x, 1M)、水、飽和NaHC03水溶液(2 x )和鹽水洗滌。使用硫酸鈉乾燥並蒸發以得到橙色固體，其使用 PE/EtOAc ( 2.5:1，含有1 %EtOH)作為洗脫液通過快速色譜在矽膠上純 化。所得固體立即溶於DCM (0.1 M)並且在室溫下滴加三氟甲石黃酸(5 叫)。在室溫下5分鐘後，紅色混合物倒入到NaHC03的水溶液中。分 離有機相，水相用DCM(4x )萃取並且合併的有機相使用硫酸鈉乾燥。蒸發，以灰白色固體得到標題化合物，其無須進一步純化直接使用。& NMR (400固z, DMSO-d6, 300 K) S 1.26 (t, J 7.1, 3H), 1.48-1.61 (m, 2H), 1.63-1.87 (m, 4H), 1.96-2.10 (m, 2H), 4.188 (q， J 7.1 Hz, 2H), 6.53 (d, J 16.0, 1H), 6.60-7.30 (bs, 3H), 7.59 (d, J 16.0, 1H), 7.67 (d, J 8.5, 2H), 7.76 (d, J 8.5, 2H); MS (ES+) m/z 303 (M+H)+。作為其鹽酸鹽形式的(2E)-3-(4-([(l-氨基環戊基)羰基]氨基)苯基)丙 烯酸乙酯還可通過如上所述類似地方式將l-[(叔丁氧羰基)氨基]環戊酸 偶合到(2E)-3-(4-氨基苯基)丙烯酸酯上製備。然後使用在EtOAc中的鹽 酸脫保護以得到鹽酸鹽。作為游離鹼或鹽形式的(2E)-3-(4-{[(1 -氨基環戊 基)羰基]氨基)苯基)丙烯酸乙酯可互換地用於隨後的偶聯一一根據需要 簡單使用額外當量的鹼以中和鹽酸鹽。歩驟2: (2EV3-(4-W14rn4-環己基-3-甲氣基-6-甲基-5A7,8-四氫吲 哚r2,l-al「2,51苯並二吖辛因-ll-基)羰基l氨基l環戊基〗羰基l氨基)苯基) 丙烯酸乙酯將HATU (1.1 eq)加入到14-環己基-3-甲氧基-6-曱基-5,6,7,8-四氫 吲哚[2,l-a][2,5]苯並二吖辛因-ll-羧酸(得自說明1, 0.015 M)、(2E)-3-(4-([(l-氨基環戊基)羰基]氨基)苯基)丙烯酸乙酯鹽酸鹽(得自步 驟1， 1.1 eq)和iPi"2NEt (3.5 eq)在無水DMF的攪拌溶液中。然後將 反應在50。C加熱2小時。將反應冷卻至室溫並另外加入0.2 eqHATU、 0.2 eq (2E)-3-(4-([(l-氨基環戊基)羰基]氨基〉苯基)丙烯酸乙酯鹽酸鹽和 1 eqiPr2NEt,並且重新開始加熱1.5小時。反應冷卻至室溫，用NaHC03 飽和水溶液淬滅並萃取進入EtOAc。水相再次用EtOAc萃取並將合併的 有機物用飽和NaHC03水溶液、水、1NHC1 (3x )和鹽水洗滌，然後使用Na2S04乾燥，過濾並且在真空中進行濃縮，以淺黃色蠟狀固體得 到產物(91 % )。 NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5 1.10-1.38 (m, 6H), 1.47-1.56 (m, 1H), 1,64-1,99 (m, 10H), 2.05-2.14 (m, 2H), 2.31-2.49 (m, 5H 部分被DMSO峰掩蓋)，2.58-2.66 (m, 1H), 2.78-2.86 (m, 1H), 3.12-3.21 (m: 1H), 3.51-3.66 (m， 2H), 3.86 (s, 3H), 4.13-4.21 (m, 3H), 4.35-4.44 (m, 1H), 6.49 (d, J 16.2, 1H), 7.01-7.05 (m, 1H), 7.12 (br s, 1H), 7.26 (d, J 8,6, 1H), 7.56 (d, J 16.2, 1H), 7.60-7.68 (m， 5H), 7.80 (d, J 8.6, 1H)， 8,06 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 9.67 (s, IH); MS (ES+) m/z 703 (M+H)+。歩驟3:〖2EV3-(4-nn-Un4-環己基-3-曱氧基-6-甲基-5,6,7、8-四氫吲 咮「2丄al「2,51苯並二吖辛因-ll-基)羰基l氨基)環戊基)羰基l氨基l苯基) 丙烯酸將氫氧化鋰一水合物(2.5 eq)加入到(2E)-3-(4-{[(l-{[(14-環己基-3-曱氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯並二吖辛因-ll-基)羰基]氨 基}環戊基)羰基]氨基}苯基)丙烯酸乙酯(得自步驟2)在1:1的曱醇:水 混合物中(0.06M)。反應在40。C攪拌3小時，直到已經發生酯的完全 水解作用。反應冷卻至室溫，然後使用1NHC1淬滅，並且水相使用EtOAc 萃取(3次)。合併的有機物用鹽水洗滌，使用Na2S04乾燥，過濾並且 在真空中進行濃縮，以褐色固體得到粗產物。通過自動RP-MS-HPLC(固 定相柱Waters XTERRA製備C18, 5微米，19xl00毫米。流動相 用0.1。/。TFA緩衝的MeCN/H20)純化。含有純化合物的組分合併並且 在6N HC1的存在下凍幹，以白色粉末得到標題化合物的鹽酸鹽(33 % )。 & NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA, 300 K) S 1.10-1.20 (m, 1H)， 1.25-1.38 (m, 2H), 1.49-1.58 (m, 1H)， 1.64-1.99 (m, 10H), 2.04-2.15 (m, 2H), 2.31-2.40 (m, 2H), 2.58-2.65 (m, 1H), 3.04 (br s, 3H), 3.38-3.49 (m, 1H), 3.60-3.76 (m, 3H), 3.90 (s, 3H), 4.29-4.36 (m, 1H)， 4.69-4.77 (m, 1H), 6.38 (d, J 16.0, 1H), 7.20-7.25 (m, 1H), 7.39 (d, J 8.8, 1H), 7,50 (d, J 16.0, 1H), 7.56-7.61 (m, 3H), 7.65 (d, J 9.0, 2H), 7.74-7.78 (m, 1H), 7.85 (d, J 8.6 1H), 8.16 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 9.71 (s, IH),IO.O (br s, IH); MS (ES+) m/z 675 (M+H)+。實施例2: (2E)-3-(4-([(l-([(14-環己基-6-曱基-5,6,7,8-四氬吲哚 [2,l-a][2,5]苯並二吖辛因-ll-基)羰基]氨基)環戊基)羰基]氨基)苯基)丙烯酸步驟1: 3-環己基-1-(1,3-二氧戊環-2-基曱基)-2-(2-曱醯基苯基)-111-巧|咮-6-羧酸甲酯向2-溴-3-環己基-l-(l,3-二氧戊環-2-基曱基)-lH-吲哚-6-羧酸甲酯 (說明1,步驟1)在二氧六環(0.15M)的溶液中加入Na2C03 (4eq., 2M水溶液)、2-甲醯基苯基硼酸(1.5 eq)和二(三苯基膦)4巴(II)二氯化 物(0.2 eq)。將混合物脫氣，然後回流加熱45分鐘。反應混合物的 RP-HPLC分析表明存在起始物料。因此重新開始回流加熱30分鐘。將 反應冷卻至室溫並在水和EtOAc之間分配。水相組分用EtOAc萃取， 並且合併的有機物用鹽水洗滌，然後使用Na2S04乾燥，過濾並且在真 空中進行濃縮。原材料通過快速色鐠法(10-20%梯度的EtOAc/PE)純 化，以黃色泡沫得到標題化合物(85% ) 。 iHNMR(300MHz,DMSO-d6, 300 K) 5 1.02-1.23 (m, 3H), 1.59-1.81 (m, 7H), 2.30-2.37 (m, 1H), 3.37-3.45 (m, 1H), 3.52-3.64 (m, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.95-4.00 (m, 1H), 4.26 (dd, J 15.3, 2.5, 1H), 4.91-4.93 (m, 1H), 7.51 (d, J 7.1, 1H), 7.69-7,77 (m, 2H), 7.82-7.87 (m, 2H), 8.03 (d, J 7.7, 1H), 8.22 (s, 1H), 9.67 (s, IH); MS (ES+) m/z 448 (M+H)+。歩驟2: 3-環己基-l-n,3-二氧戊環-2-基曱基V242-r〖曱氨基〗甲基l苯 基hlH-吲哚-6-羧酸甲酯向3-環己基-l-(l,3-二氧戊環-l-基曱基)-2-(2-甲醯基苯基)-lH-吲哚 -6-羧酸甲酯(得自步驟1)在THF(0.15M)的溶液中加入曱胺(10eq., THF中2 M溶液)並使用乙酸將pH調節為6。溶液在真空濃縮之前在 室溫下攪拌lh。殘餘物在MeOH中吸收以得到0.075 M溶液。加入 NaBH3CN (1.5 eq)並將混合物在室溫下攪拌1小時。反應混合物的 RP-HPLC分析表明完全轉化為所需的胺。反應用飽和NaHC03水溶液淬 滅並使用EtOAc萃取(兩次)。合併的有機物用鹽水洗滌然後使用Na2S04 乾燥，過濾並且真空濃縮，以粘性油狀物得到標題化合物(定量)。^ NMR (300 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5 1.12-1.29 (m, 4H), 1.60-1.75 (m, 6H), 2.18 (s, 3H), 2.27-2.32 (m, 1H), 3.36 (br s, 2H,部分淨皮水峰掩蓋), 3.61-3.81 (m, 5H), 3.87 (s, 3H), 4.14-4.21 (m, 1H), 4.87 (t, J 4.2, 1H), 7.27 (d, J 7.3, 1H), 7.37-7.42 (m, 1H), 7.50-7,55 (m， 1H), 7.65-7.68 (m, 2H), 7.82 (d， J 8.4, 1H), 8.18 (s, IH); MS (ES+) m/z 463 (M+H)+。歩驟3: 14-環己基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚「2,l-al「2,51苯並二吖辛因誦ll國羧酸鹽酸(25 eq.， 3 M)加入到3-環己基-l-(l,3-二氧戊環-2-基曱 基)-2-(2-[(曱氨基)甲基]苯基卜lH-吲哚-6-羧酸曱酯(得自步驟2 )在THF (0.02M)的溶液中，並將混合物回流加熱21小時。反應混合物等分試 樣的^NMR分析證實起始物料的完全消耗。揮發物真空除去，並且殘 餘物在EtOAc和飽和NaOH水溶液(2M)(保證水相為鹼性)之間分 配。水相用EtOAc萃取，並且合併的有機物用鹽水洗滌，然後使用Na2S04 乾燥，過濾並且在真空中進行濃縮。殘餘物再次溶於MeOH (0.06M) 中並且在室溫下向攪拌溶液中滴加乙酸，以將pH調節至6。混合物攪 拌10分鐘，然後加入NaCNBH3 (1.5 eq) 。 18小時後反應混合物的 RP-HPLC分析證實氨基醛完全轉化為所需的環胺。反應用等體積的THF 稀釋並且加入NaOH (50 eq., 2 M水溶液)。反應混合物然後在90。C 加熱10小時，然後冷卻至室溫。THF/MeOH體積真空減少，並且殘餘 物在用EtOAc萃取之前(4 x )用HC1水溶液(1M)酸化。合併的有機 物用鹽水洗滌，使用Na2S04乾燥，過濾並且在真空中進行濃縮，以黃 色固體得到產品的鹽酸鹽。通過自動RP-MS-HPLC (固定相柱Waters XTERRA製備C18, 5微米，19xl00毫米。流動相用0.1。/qTFA緩 衝的MeCN/H20)純化。含有純化合物的組分合併並且凍幹，以白色粉 末得到標題化合物(40 % ) 。 & NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA, 300 K) S 1.12-1.15 (m， 1H), 1.31-1.37 (m, 2H), 1.53-1.56 (m, 1H), 1.67-1.75 (m, 2H)， 1.82-1.85 (m， 1H), 1.93-1.98 (m, 3H), 2.63-2.67 (m, 1H), 3.04 (br s, 3H), 3.65-3.78 (m, 4H), 4.38-4.41 (m, 1H), 4.79-4.83 (m, 1H), 7.47-7.49 (m, 1H), 7.66-7.68 (m, 2H), 7.74 (dd， J 8.3, 1H), 7.92-7.95 (m, 2H), 8.21 (s, 1H); MS (ES+) m/z 389 (M+H)+。歩驟4:〖2EV3-(4-Un-n04-環己基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚 [2丄al[2,51苯並二吖辛因-1 l-基)羰基l氨基l環戊基)羰基1氨基1苯基)丙 烯酸(得自步驟3的14-環己基-6-甲基-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯並 二吖辛因-ll-羧酸和實施例1步驟1的(2E)-3-(4-([(l-氨基環戊基)羰基] 氨基)苯基)丙烯酸乙酯)以類似於實施例1、步驟2和步驟3的方式直 接進行。iHNMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA, 300 K) 5 1.05-1.17 (m, 2H), 1.25-1.33 (m, 2H), 1.52-1.54 (m, 1H), 1.68-1.74 (m, 6H), 1.87-1.96 (m, 3H),2.09-2.11 (m, 2H), 2.34-2.36 (m, 2H), 2.63-2.67 (m, 1H), 3.02 (br s, 3H), 3.40-3.51 (m, 1H), 3.62-3.74 (m, 3H), 4.35-4.38 (m, 1H), 4.71-4.75 (m, 1H)， 6.33-6.37 (d, J 16.0, 1H), 7.45-7.47 (m, 2H), 7.51-7.56 (m, 3H), 7.63-7.65 (m, 4H), 7.75-7.77 (m, 1H), 7.85-7.88 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 9.69 (s, 1H), 9.98 ( br s, IH); MS (ES+) m/z 645 (M+H)+。實施例3: (2E)-3-(4-[((l-[((13-環己基-5-[2-(二甲氨基)乙基]-6,7-二 氫-5H-吲哚[l,2-d][l,4]苯並二氮雜萆-10-基)羰基)氨基]環戊基)羰基)氨 基]苯基)丙烯酸歩驟1: 2-溴-l-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基V3-環己基-lH-吲哚-6-羧酸曱酯NaH ( 1.4eq.,礦物油中60%分散體)加入到2-溴-3-環己基-lH-吲 咮-6-羧酸曱酯在DMF ( 0.2 M)的溶液中並將溶液在室溫下攪拌1小時。 然後加入溴乙酸叔丁酯(1.1 eq)並將混合物在室溫下攪拌40分鐘。 RP-HPLC分析表明，不存在起始物料，形成單一的主要產物。DMF在 真空中進行濃縮並且殘餘物吸收在EtOAc中。有機相用H20 (兩次)洗 滌然後用鹽水洗滌，然後使用Na2S04乾燥，過濾並且在真空中蒸發溶 劑。以呈褐色固體得到標題化合物(90 % )。 & NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5 1.3-1.50 (m, 12H), 1.65-1.80 (m, 3H), 1.80-2.00 (m, 4H), 2.85-2.95 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 5.1 (s, 2H)， 7.67 (d, J 8.4, 1H), 7.83 (d, J 8.4, 1H), 8.13 (s, IH); MS (ES+) m/z 450 (M+H)+, m/z 452 (M+H)+。歩驟2: 2-{2-「(叔丁氧羰基)氨基1苯基卜1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙 基V3-環己基-lH-巧l咮-6-羧酸曱酯向2-溴-l-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-3-環己基-lH-吲哚-6-羧酸甲酯 (得自步驟1 )在二氧六環(0,15M)的溶液中加入Na2C03 (4 eq., 2M 水溶液)，[2-(4,4,5,5-四曱基-l,3,2-二氧雜戊硼烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔 丁酯(1.5eq)和二(三苯基膦)釔(II)二氯化物(0.2 eq.)。混合物回流加熱 1小時，此時RP-HPLC分析表明起始物料完全消耗。反應混合物過濾並 將濾液用EtOAc稀釋。有機相用H20、鹽水洗滌，然後使用Na2S04幹 燥，過濾並在真空中進行濃縮。粗產物通過快速色譜法(Biotagecatridge Si40M, 0.8:9.2 EtOAc/PE)純化，以白色固體得到標題化合物(65% )。 丄H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) S 1.10-1.40 (m, 20H), 1.50-1.90 (m， 8H), 2.20-2.40 (m, 1H), 3.87(s, 3H), 4.51-4.73 (m, 2H), 7.10-7.22 (m, 2H),7.45-7.52 (m, 1H), 7.65-7.71 (m， 2H), 7.78-7.82 (m, 1H), 7.86 (d, J 8.4, 1H) 8.10 (s, IH); MS (ES+) m/z 563 (M+H)+。步驟3: 13-環己基-6-氧代-6,7-二氫-5H-吲哚「l,2-din,41苯並二氮雜 蕈-10-羧酸甲酯向2-{2-[(叔丁氧羰基)氨基]苯基}-1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-3-環 己基-lH-吲哚-6-羧酸曱酯(得自步驟2 )在DCM/H2〇1:1的混合物的溶 液中加入大大過量(> 200 eq)的TFA並將溶液在40。C攪拌10小時。 RP-HPLC分析表明起始物料完全消耗。真空除去溶劑。粗殘餘物通過快 速色譜(Biotage catridge Si40M， 4:6 EtOAc/PE)純化，以白色固體得到 標題化合物(74 % )。 & NMR (400固z, DMSO-d6, 300 K) 5 1.10-1.20 (m, 1H), 1.30-1.55 (m, 3H), 1.65-1.80 (m， 2H), 1.81-1.9 (m, 1H)， 1.98-2.11 (m, 3H) 2.80-2.92 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 4.54 (d, J 14.7, 1H), 5.08 (d, J 14.7, 1H), 7.29 (d, J 7.8, 1H), 7.38-7.42 (m, 1H), 7.51-7.55 (m, 2H), 7.69 (d, J 8.5: 1H)， 7,97 (m, J 8.5 1H), 8.28 (s, 1H), 10.3 (s, IH); MS (ES+) m/z 389 (M+H)+。歩驟4: 13-環己基-5-「2-(二甲氨基V2-氧代乙基l-6-氧代-6,7-二氪-5H-吲哚「l,2-diri,41苯並二氮雜簟-10-羧酸甲酯NaH ( 1.4 eq.，礦物油中60 %分散體)加入到13-環己基-6-氧代-6,7-二氫-5H-吲哚[l,2-d][l,4]苯並二氮雜萆-10-羧酸甲酯(得自步驟3)在 DMF ( 0.15 M)的溶液中，並且溶液在室溫下攪拌45分鐘。然後加入2-氯-N,N-二曱基乙醯胺(1.1叫)並將混合物在室溫下攪拌20分鐘。 RP-HPLC分析表明不存在起始物料，所需產物作為主峰。溶液用EtOAc 稀釋並且用1NHC1洗滌。水相用EtOAc (3x )萃取，並且合併的有機 物用鹽水洗滌，然後使用Na2S04乾燥，過濾並且真空蒸發溶劑。粗產 物通過快速色^普(Biotage catridge Sil2M, 9:1 EtOAc/PE)純化以得到標 題化合物(73% ) 。 ^NMR(400 MHz,DMSO-d6, 300 K)S 1.15-1.23 (m, 1H), 1.35-1.48 (m, 2H), 1.55-1.61 (m, 1H) 1.70-1.77 (m, 2H), 1.85-2,11, (m, 4H), 2.46-2.51 (m, 1H部分被DMSO峰掩蓋)，2.82 (s, 3H), 2.90 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 4.42 (d, J 16.8, 1H), 4.49 (d, J 14.6, 1H), 4.66 (d, J 16.8, 1H), 5.20 (d, J 14.6, 1H), 7.42-7.49 (m, 2H), 7.52-7.68 (m， 2H), 7.69 (d, J 8.8, 1H), 7.96 (d, J 8.8, 1H), 8.29 (s, IH); MS (ES+) m/z 474(M+H)+。歩驟5: 13-環己基-5-『2-〖二甲氨基)乙基l-6,7-二氫-5H-吲哚n,2-din,4i苯並二氮雜簟-io-羧酸甲酯13-環己基-5-[2-(二曱氨基)-2-氧代乙基]-6-氧代-6,7-二氫-5H-吲哚 [1,2-d][l,4]苯並二氮雜萆-10-羧酸曱酯(得自步驟4)在THF (0.15 M)的 溶液中加入BH3.Me2S (20eq., THF中2M溶液)並將混合物在室溫下 攪拌3小時。RP-HPLC分析表明不存在起始物料，形成新的單一主要產 物。通過加入MeOH中1.25N的HC1小心地淬滅溶液，直到停止冒泡。 然後通過將混合物煮沸至無水以分離揮發物。粗殘餘物直接用於下一 步。MS (ES+) m/z 446 (M+H)+。歩驟6: 13-環己基-5-「2-(二曱氨基)乙基l-6,7-二氫-5H-吲哚 ri，2-dl「l，41苯並二氮雜蕈-10-羧酸向13-環己基-5-[2-(二曱氨基)乙基]-6,7-二氫-5H-吲哚[l,2-d][l,4]苯 並二氮雜萆-10-羧酸曱酯(得自步驟5)在MeOH (0.06M)的溶液中加 入5eqlNNaOH。溶液在60。C攪拌5小時，此時RP-HPLC分析表明不 存在起始物料，並且產物的形成作為主峰。真空蒸發溶劑。粗產物然後 通過RP-HPLC (固定相柱Waters XTERRA製備C18, 5微米，19 x 150毫米。流動相用0.1 % TFA緩沖的MeCN/H20)純化。含有純化 合物的組分合併並且凍幹，以35%收率(兩個步驟中)以黃色粉末得到 標題化合物。& NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) S 1.15-1.55 (m, 4H), 1.70-2.10 (m, 6H), 2.46 (s, 6H), 2.70-2.82 (m, 1H), 3.00-3.20 (m, 3H), 3.50-4.00 (m, 4H), 4.70-4.85 (br s, 1H), 7.25-7.38 (m, 3H), 7.50 (t, J 7.2, 1H), 7.61 (d, J 8.4, 1H), 7.86 (d, J 8.4, 1H), 8.12 (s, 1H), 9.14 (br s, 1H), 12.6 (br s, 1H); MS (ES+) m/z 432 (M+H)+。歩驟7: (2EV344-r(U-「(n3-環己基-5-「2-r二曱氨基)乙基l-6,7-二氫 -511-卩引咮「1,2-(11「1,41苯並二氮雜簟-10-基}羰基〗氨基1環戊基}羰基)氨基1 苯基l丙烯酸(由得自步驟6的13-環己基-5-[2-(二曱氨基)乙基]-6,7-二氫-5H-吲 哚[l,2-d][l,4]苯並二氮雜萆-10-羧酸和實施例1步驟1的(2E"-(4-U(l-氨基環戊基)羰基]氨基}苯基)丙烯酸乙酯開始)以類似於實施例1、步驟 2和步驟3的方式直接進行——在全部兩個水處理中省略酸洗。& NMR (400固z, DMSO-d6, 300 K) S 1.15-1.46 (m, 4H), 1.60-1.90 (m, 8H), 1.95-2.20 (m, 4H), 2.30-2.40 (m, 2H)， 2.46 (s, 6H), 2.75-2.85 (m, 1H), 3.00-4.00 (m, 3H), 3.50-4.00 (m， 5H部分被水峰掩蓋)，6.38 (d, J 16.0, 1H)7.27-7.40 (m, 3H), 7.50 (d， J 16, 1H), 7.48-7.52 (m， 1H), 7.54-7.70 (m, 6H)， 7.81 (d, J 8.5,1H), 8.18 (s， 1H), 8.29 (s, 1H), 9.14 (br s, 1H), 9.67 (s, 1H), 12.20 (br s, 1H); MS (ES+) m/z 688 (M+H)+。實施例4: (2E)-3-(4-[((l-[((14-環己基-6-[2-(二曱氨基)乙基]-5,6,7,8畫 四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯並二吖辛因-ll-基)羰基)氨基]環戊基)羰基)氨基] 苯基)丙烯酸(由得自說明2的14-環己基-6-[2-(二曱氨基)乙基]-5,6,7,8-四氫吲 哚[2,l-a][2,5]苯並二吖辛因-ll-羧酸和實施例1步驟1的(2E)-3-(4-([(" 氨基環戊基)羰基]氨基}苯基)丙烯酸乙酯開始)以類似於實施例1、步驟 2和步驟3的方式直接進行——在全部兩個水處理中省略酸洗。^NMR (400固z, DMSO-d6 + TFA, 300 K) 5 1.10-1.20 (m, 1H), 1.25-1.40 (m, 2H): 1.50-1.60 (m, 1H), 1.65-1.85 (m, 7H), 1.90-2.00 (m, 3H), 2.11-2.16 (m, 2H), 2.29-2.43 (m, 2H), 2.50-2.70 (m, 1H), 2.85 (s, 6H), 3.38-3.50 (m, 1H), 3.50-3.77 (m, 7H), 4.40 (d， J 13.6, 1H), 4,77 (m, 1H), 6.56 (d, J 16.0, 1H), 7.46-7.52 (m, 2H), 7.55-7.60 (m, 2H), 7.62-7.69 (m, 4H), 7.80-7.91 (m, 3H), 8.11 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 9.71(s, 1H); MS (ES+) m/z 702 (M+H)+。實施例5: (2E)-3-(4-[((l-[(((7R)-14-環己基-7-[[2-(二曱氨基)乙 基](甲基)氨基]-7,8-二氫-6H-吲哚[l,2-e][l,5]苯並嚙唑辛-ll-基)羰基)氨 基]環戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸向(7R)-N-(ll-羧基-14-環己基-7,8-二氫-6H-吲哚[l,2-e][l,5]苯並噹 唑辛-7-基)-N,N',N'-三曱基乙烷-l,2-二銨雙(三氟乙酸鹽)(如公開的國際 專利申請WO 2006/04603，實施例9和12所述製備)和(2E)-3畫(4國([(1國 氨環戊基)羰基]-氨基)苯基)丙烯酸曱酯的鹽酸鹽(l丄eq,實施例1步驟 1乙酯部分製備)在無水DMF (0.14 M)的溶液中加入DIPEA (6 eq.) 和HATU ( 1.5 eq.),並將所得混合物在室溫下攪拌60小時。然後混合 物用EtOAc稀釋，並用飽和NaHC03水溶液和鹽水萃取。使用Na2S04 乾燥後全部揮發物真空蒸發，並將殘餘物溶於THF/MeOH/水(4:1:1 )， 並加入氫氧化鋰一水合物(1.5 eq)。混合物在40。C攪拌3小時。然後 在真空中蒸發全部揮發物，並將殘餘物通過質量-指導的製備性 RP-HPLC (固定相柱Waters XTERRA製備C18, 5微米，19 x 150亳 米。流動相用0.1 % TFA緩衝的MeCN/H20)純化。產品組分冷凍 乾燥後，以無色粉末得到產物。& NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) 5formula see original document page 33
權利要求
1.式(I)化合物其中Ar為含有至少一個芳環並且5-、6-、9-或10-環原子任選含有1、2或3個獨立地選自N、O和S的雜原子的部分，所述環任選被基團Q1和Q2取代；Q1為滷素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基、雜芳基、CONRaRb、(CH2)0-3NRaRb、O(CH2)1-3NRaRb、O(CH2)0-3CONRaRb、O(CH2)0-3芳基、O(CH2)0-3雜芳基、OCHRcRd；Ra和Rb每個獨立地選自氫、C1-4烷基和C(O)C1-4烷基；或Ra、Rb和其所連接的氮原子一起形成4-7個環原子的雜脂肪族環，其中所述環任選被滷素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；Rc和Rd每個獨立地選自氫和C1-4烷氧基；或Rc、Rd和通過選自N、O和S的雜原子連接以形成4-7個環原子的雜脂肪族環，其中所述環任選被滷素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；並且其中所述C1-4烷基、C1-4烷氧基和芳基任選被滷素或羥基取代；Q2為滷素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，其中所述C1-4烷基和C1-4烷氧基任選被滷素或羥基取代；或Q1和Q2可通過鍵或選自N、O和S的雜原子連接以形成4-7個原子的環，並且所述環任選被滷素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；A為C3-6烷基或C2-6烯基；或者A為3-8個環原子的非芳環，其中所述環可含有雙鍵和/或可含有O、S、SO、SO2或NH部分；或A為4-8個環原子的非芳香雙環部分；並且A任選被滷素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；R1為氫、C1-6烷基或C2-6烯基；R2為氫或C1-6烷基；L為其中R3和R4每個獨立地選自氫、滷素、C1-4烷基、C2-4烯基或C1-4烷氧基；或R3和R4連接以形成C3-8環烷基；B為芳基、雜芳基、CONR5R6，任選被滷素、C1-4烷基、C2-4烯基或C1-4烷氧基取代；R5為氫或C1-6烷基；或R5連接到R3和/或R4以形成5-10元環，其中所述環可以是飽和的、部分飽和的或不飽和的，並且其中所述環任選被滷素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基或C1-4烷氧基取代；R6為芳基或雜芳基；或R5、R6與其所連接的氮原子形成5-10元單或二環環系，其中所述環可以是飽和的、部分飽和的或不飽和的，並且其中所述環任選被滷素、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基或C1-4烷氧基取代；D為鍵、C1-6亞烷基、C2-6亞烯基、C2-6亞炔基、芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基任選被滷素、C1-4烷基或C2-4烯基取代；W和Z獨立地選自鍵、C＝O、O、S(O)0-2、(CR10R11)-(CR12R13)0-1和NR10；X和Y獨立地選自鍵、C＝O、O、CR14R15和NR14；並且W、X、Y和Z中都不是鍵，或者W、X、Y和Z中一個或兩個為鍵；R10、R11、R12、R13、R14和R15每個獨立地選自氫、羥基、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、C(O)C1-6烷基、Het、(CH2)0-3NR16R17、C(O)(CH2)0-3NR16R17、NHC(O)(CH2)0-3NR16R17、O(CH2)1-3NR16R17、S(O)0-2(CH2)0-3R16R17和C(O)(CH2)0-3OR16；Het為4-7個環原子的雜脂肪族環，該環可含有1、2或3個選自N、O或S的雜原子或S(O)、S(O)2、NH或NC1-4烷基的基團；R16和R17獨立地選自氫、C1-6烷基和(CH2)0-4NR18R19；或R16、R17與其所連接的氮原子一起形成4-7個環原子的雜脂肪族環，所述環可任選還含有1或2個選自O或S的雜原子或基團S(O)、S(O)2、NH或NC1-4烷基，並且所述環任選被滷素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；R18和R19獨立地選自氫和C1-6烷基；或R18、R19與其所連接的氮原子一起形成4-7個環原子的雜脂肪族環，所述環可任選還含有1或2個選自O或S的雜原子或基團S(O)、S(O)2、NH或NC1-4烷基，並且所述環任選被滷素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；以及其藥學上可接受的鹽。
2. 根據權利要求1所述的化合物，其中Ar為任選含有1、 2或3 個獨立地選自N、 O和S的雜原子的五元或六元芳環，並且該環4壬選祐_ 如上所定義的基團(^和(^2取代。
3. 根據權利要求1或權利要求2所述的化合物，其中A為C3-6坑基、C2-6烯基或C3-8環烷基，其中A任選被滷素、羥基、d-4烷基或d-4烷氧基取代。
4. 根據權利要求1-3中任意一項所述的化合物，其中W為氫或d.4烷基。
5. 根據權利要求1-4中任意一項所述的化合物，其中R"為氫或Cm烷基。
6. 根據權利要求1-5中任意一項所述的化合物，其中113和114連接 以形成環丁基、環戊基或環己基。
7. 根據權利要求1-6中任意一項所述的化合物，其中B為CONR5 芳基，任選被卣素、Cw烷氧基取代，其中115如權利要求1所定義。
8. 根據權利要求1-7中任意一項所述的化合物，其中D為鍵或亞 乙烯基。
9. 根據權利要求1-8中任意一項所述的化合物，其中W為鍵、C二0、 -(CRWRUHCRUR13)^^ NR1。，其中R1。、 R11、 R12和R13如權利要求1 所定義。
10. 根據權利要求1-9中任意一項所述的化合物，其中Z為鍵、C=0, 0, -(01101111)畫(。11121113)0-1-或NR10,其中R10、 R11、 RU和R"如權利要 求1所定義。
11. 根據權利要求1-10中任意一項所述的化合物，其中X為C二O、 -CR"R"-或NR14，其中R14和R15如權利要求1所定義。
12. 根據權利要求1-11中任意一項所述的化合物，其中Y為C=0、 O、 -CR14R15^^NR14,其中R"和R"如權利要求1所定義。
13. 權利要求1所述式(Ia)的化合物(ia)或其藥學上可接受的鹽，其中W、 X、 Y和Z如權利要求1所定義。
14.如權利要求1所述的化合物，選自(2E)-3-(4-{[(l-{[(14-環己基-3-曱氧基-6-甲基-5,6,7,8-四氬吲哚 [2,l-a][2,5]苯並二吖辛因-ll-基)羰基]氨基)環戊基)羰基]氨基〉苯基)丙烯酸，(2E)-3-(4-([(l-U(14-環己基-6-曱基-5,6,7,8-四氫吲哚[2,l-a][2,5]苯並 二吖辛因_ 11 -基)羰基]氨基)環戊基)羰基]氨基}苯基)丙烯酸，(2E)-3-(4-[((l-[((13-環己基-5-[2-(二曱氨基)乙基]-6,7-二氫-5H-吲哚 [1,2-(1][1,4]苯並二氮雜萆-10-基}羰基)氨基]環戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸，(2E)-3-{4-[({l-[(( 14-環己基-6-[2-(二甲氨基)乙基]-5,6,7,8-四氫吲哚 [2,"][2,5]苯並二吖辛因-11-基}羰基)氨基]環戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸，(2E)-3-(4-[((l-[(((7R)-14-環己基-7-[[2-(二曱氨基)乙基](曱基)氨 基]-7,8-二氫-611-吲哚[1，2《][1,5]苯並哺唑辛-11-基}羰基)氨基]環戊基}羰基)氨基]苯基}丙烯酸，以及其藥學上可接受的鹽。
15. 用於治療學中的權利要求1-14中任意一項所述化合物或其藥學 上可接受的鹽。
16. 權利要求1-14中任意一項所述化合物或其藥學上可接受的鹽用 於製造在人或動物中治療或預防C型肝炎病毒感染的藥物中的應用。
17. 含有權利要求1-14中任意一項所述化合物或其藥學上可接受的 鹽與藥學上可接受的載體的藥物組合物。
18. 如權利要求17所述的藥物組合物，另外含有一種或多種用於 治療病毒感染的其它藥物，例如抗病毒藥，或免疫調節劑，例如ot-、 P -或y -幹擾素。
19. 一種抑制C型肝炎病毒聚合酶和/或治療或預防C型肝炎病毒引 起的疾病的方法，所述方法包^^向患有所述疾病的人或動物(優選哺乳 動物)患者給藥治療或預防有效量的權利要求17或權利要求18所述的 藥物組合物或權利要求1-14中任意一項所述的化合物或其藥學上可接 受的鹽。
20. 在偶聯劑和鹼的存在下在合適的有機溶劑中通過式(II)化合 物與式(III)化合物的反應製備權利要求1-14中任意一項所述化合物的 方法其中R1、 R2、 L、 A、 Ar、 W、 X、 Y和Z如權利要求1中所定義，偶聯 劑例如HATU,鹼例如二異丙基乙胺，合適的溶劑例如DMF。
全文摘要
本發明涉及式(I)的四環吲哚衍生物其中Ar、A、R1、R2、L、W、X、Y和Z如此處所定義，以及其藥學上可接受的鹽、含有其的藥物組合物，以及其用於治療或預防C型肝炎病毒感染的應用。
文檔編號A61K31/5517GK101258155SQ200680032904
公開日2008年9月3日 申請日期2006年9月1日 優先權日2005年9月9日
發明者F·納耶斯, I·斯坦斯費爾德 申請人:P.安傑萊蒂分子生物學研究所