暴馬丁香樹皮提取物組分的製備新工藝和新用途的製作方法

2023-08-04 19:53:46 1

專利名稱：暴馬丁香樹皮提取物組分的製備新工藝和新用途的製作方法
技術領域：
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及以暴馬丁香5>/7'/7卵aM/re/7s八Rupr. 樹皮提取物組分的製備新工藝和新用途。
背景技術：
暴馬丁香5>riA§a a歷"re/7sis R叩r.為長白山常見藥用植物之一，在我國主要分布在吉 林、遼寧、華北、西北和華中地區，資源豐富。樹皮、樹幹及枝條均可藥用，味苦，性微寒， 經現代藥理實驗證明具有清肺祛痰、止咳、平喘、消炎、利尿的功能。
目前，關於暴馬丁香樹皮化學成分及藥理作用研究鮮見報導，僅有幾篇報導從樹皮、樹 枝中分離得到數個化合物，未對暴馬丁香樹皮提取物組分做過抑菌研究。因此，本發明取暴 馬丁香樹皮，用乙醇室溫下浸提後超聲，得暴馬丁香粗提物。將粗提物上D,。,大孔樹脂柱，再 上JTY反相樹脂柱，得到乙醇各組分。
本發明的暴馬丁香樹皮提取物組分對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌具有抑制作用，這種 抑菌作用具有積極的實踐應用價值。比如對鏈球菌有良好的抑制作用，對治療化膿性炎症、
猩紅熱、風溼熱、急性腎小球腎炎等疾病有積極的實踐意義；對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、 沙門氏菌有良好的抑制作用，對預防與治療細菌性食物中毒有積極作用。這對於擴大暴馬丁 香藥源，並對其進行合理開發利用具有重要意義。

發明內容
本發明的目的是提供一種暴馬丁香樹皮提取物組分的製備新工藝並對暴馬丁香樹皮提取 物組分的抑菌作用進行試驗。
1. 本發明涉及以暴馬丁香5>t//^s ay^re/wA R叩r.樹皮提取物組分的製備新工藝和新 用途。本發明的暴馬丁香樹皮提取物組分對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、巴氏菌、鏈球菌、 沙門氏菌均有不同程度的抑制作用，可開發為天然抗菌劑應用於食品、藥品等行業，製備出 具有抑菌作用的各種形式的產品。
2. —種製備暴馬丁香樹皮提取物組分的新工藝，其特徵在於該工藝包括以下過程
(1) 取暴馬丁香樹皮，挑去雜物，水洗，烘乾或晾乾，粉碎，用8-10倍量10%的乙醇室 溫下浸提10-12h，再超聲lh，溫度為3(TC功率為80W，然後用綢布與濾紙分別過濾一次，得 到濾液；
(2) 暴馬丁香樹皮經(1)處理後的濾渣再分別用8倍量與6倍量10%的乙醇重複(1) 步驟各一次，分別得到濾液，合併三次濾液；
(3) 將上述(2)濾液回收乙醇，得暴馬丁香樹皮提取物；(4) 將上述(3)暴馬丁香樹皮提取物，上01。,大孔樹脂柱，用H20除雜後依次用10%、 30%、 50%、 70%乙醇洗脫，得大孔樹脂乙醇洗脫組分(A) 10%乙醇、(B) 30%乙醇、(C) 50%乙醇、
(D) 70%乙醇各組分；
(5) 將(4)所得大孔樹脂乙醇洗脫組分(A) 10%乙醇，上JTY反相樹脂柱，用H20除雜 後依次用2%、 5%、 10%乙醇進行洗脫，得JTY反相樹脂乙醇洗脫組分(A-1) 2%乙醇、(A-2) 5%乙醇、(A -3) 10%乙醇各組分。
3. 根據本發明1至2所述的製備暴馬丁香樹皮提取物組分的原料為暴馬丁香5ynV3ga 柳〃/msi51 R叩r. 的樹皮。
4. 根據本發明1至2所述的暴馬丁香樹皮提取物組分對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、巴 氏菌、鏈球菌、沙門氏菌均有不同程度的抑制作用。
5. 根據本發明1至2所述的暴馬丁香樹皮提取物組分，其特徵在於該樹皮提取物組分可 作為天然抗菌劑用於食品、藥品等行業，代替有毒副作用的合成抗菌劑。
根據本發明，本發明中的"％"是重量百分比。
具體實施例方式
本發明所述的暴馬丁香樹皮提取物組分製備新工藝包括以下實施例，下面的實施例可進 一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。
實施例1:
(1) 取暴馬丁香樹皮5kg，挑去雜物，水洗，烘乾或晾乾，粉碎，用8倍量10%的乙醇 室溫下浸提10h，再超聲lh，溫度為3(TC功率為80W，然後用綢布與濾紙分別過濾一次，得 到濾液；
(2) 暴馬丁香樹皮經(1)處理後的濾渣再分別用8倍量與6倍量10%的乙醇重複(1) 步驟各一次，分別得到濾液，合併三次濾液；
(3) 將上述(2)濾液回收乙醇，得到暴馬丁香樹皮提取物，收率為23%。
(4) 將上述(3)暴馬丁香樹皮提取物，上D,。,太孔樹脂柱，用H20除雜後依次用10%、 30%、 50%、 70%乙醇洗脫，得大孔樹脂乙醇洗脫組分(A) 10%乙醇、(B) 30°/。乙醇、(C) 50%乙醇、
(D) 70%乙醇各組分;
(5) 將(4)所得大孔樹脂乙醇洗脫組分(A) 10%乙醇，上JTY反相樹脂柱，用H20除雜 後依次用2%、 5%、 10%乙醇進行洗脫，得JTY反相樹脂乙醇洗脫組分(A-l) 2%乙醇、(A-2) 5%乙醇、(A -3) 10%乙醇各組分。實施例2:
(1) 取暴馬丁香樹皮10kg，挑去雜物，水洗，烘乾或晾乾，粉碎，用10倍量1(W的乙醇 室溫下浸提12h，再超聲lh，溫度為30'C功率為80W，然後用綢布與濾紙分別過濾一次，得 到濾液；
(2) 暴馬丁香樹皮經(1)處理後的濾渣再分別用8倍量與6倍量10%的乙醇重複(1) 步驟各一次，分別得到濾液，合併三次濾液；
(3) 將上述(2)濾液回收乙醇，得到暴馬丁香樹皮提取物，收率為26%。
(4) 將上述(3)暴馬丁香樹皮提取物，上D,。,大孔樹脂柱，用H20除雜後依次用10%、 30%、 50%、 70%乙醇洗脫，得大孔樹脂乙醇洗脫組分(A) 10%乙醇、(B) 30°/。乙醇、(C) 50%乙醇、
(D) 70%乙醇各組分;
(5) 將(4)所得大孔樹脂乙醇洗脫組分(A) 10%乙醇，上JTY反相樹脂柱，用H20除雜 後依次用2t 5%、 10%乙醇進行洗脫，得JTY反相樹脂乙醇洗脫組分(A-1) 2%乙醇、(A-2) 5%乙醇、(A -3) 10%乙醇各組分。
藥理試驗例暴馬丁香樹皮提取物組分的抑菌作用 1實驗材料
大腸桿菌、鏈球菌、沙門氏菌、巴氏菌和金黃色葡萄球菌均來自於吉林農業大學預防獸 醫學實驗室，37'C在蛋白腖牛肉湯中培養12h。
培養基為牛肉膏蛋白腖培養基。菌的活化與培養時用液體培養基，組成為牛肉膏蛋 白腖氯化鈉蒸餾水(3 : 10 : 5 : 1000)。菌的保存及抑菌實驗時用固體培養基，組成為 牛肉膏蛋白腖氯化鈉瓊脂蒸餾水(3 : 10 : 5 : 22 : 1000)。
2實驗方法
2. 1培養基的配製
取牛肉膏0.6g、蛋白腖2 g、氯化鈉l g、蒸餾水200 ml，混合併攪拌使其完全溶解， 配成液體培養基。用量筒量取液體培養基，將其平均分裝在10個50 ml的三角瓶內，每瓶 20 ml。取牛肉膏3 g、蛋白腖10 g、氯化鈉5 g、瓊脂22 g、蒸餾水1000 ml，混合後將其 置於電爐子上加熱，使瓊脂完全溶解，配成固體培養基。用量筒量取固體培養基，將其平均 分裝在5個150 ml的三角瓶內，每瓶IOO ml。三角瓶瓶口均用棉塞塞緊並用牛皮紙包紮。 2.2滅菌
將配好的固體培養基、液體培養基均放入高壓滅菌鍋中滅菌，溫度上升到121 'C時，開 始計時20 min。培養皿、量筒、鑷子、剪刀、6 mm濾紙片(放在小燒杯中)、滴管、安瓿瓶 等實驗器材均放入烘箱中170 'C滅菌2 h。實驗前用75%乙醇擦拭超淨工作檯並紫外滅菌20 rain。 37 'C恆溫培養箱在使用前需用75%乙醇擦拭滅菌。 2.3菌的培養與查菌
將5個菌種在超淨工作檯上、酒精燈環境下倒入裝有液體培養基的三角瓶中，每種菌培 養兩份。將這10個三角瓶放入搖床37 。C搖菌6 h。顯微鏡做鏡檢後開始査菌，記錄數據並 計算菌濃度，若5個中方格總菌數為A，菌液稀釋倍數為B ，則lml菌液中總菌數=八/5 X 25 X 10000 X 13 =50000AB 2.4樣品液及濾紙片的製備
將暴馬丁香樹皮揮髮油配製成5 mg/ml的溶液(可加0 4u L 二甲基亞碸助溶)，按1 :2"稀釋成2. 5 mg/ml、 1.25 mg/ml、 0.625 mg/ml、 0.3125 mg/ml的溶液。將濾紙片用打孔器 打成直徑為6 mra的圓片，在超淨工作檯將濾紙片放進各梯度樣品中浸泡2 h。 2.5有菌瓊脂平板的製備
將稀釋好的菌液與固體培養基混合併搖晃均勻，此時菌的濃度應達到3.6X108 CFU/ml。 將有菌培養基依次倒入各培養皿中，晃動培養皿使培養基均勻地鋪在培養皿底部，冷卻至凝 固。
2. 6抑菌實驗方法
用記號筆在有菌瓊脂平板上標號，將浸泡好的濾紙片用鑷子夾出，放入寫相應對照編號 的培養皿中，每個樣品做三個平行，放入37 。C恆溫培養箱培養。
3. 實驗結果
3. 1抑菌效果用抑菌圈直徑DD表示(單位mm)
在抑菌實驗結束後的第12h、 24h、 36h、 48h觀察菌的生長情況，測量抑菌圈直徑並記錄。
表1暴馬丁香樹皮(A) 10%乙醇、(B) 30%乙醇、(D) 70%乙醇組分抑菌活性
菌種(A) 10%乙醇(B) 30%乙醇(D) 70%乙醇鏈黴素
大腸桿菌27282232
鏈球菌24231530
沙門氏菌27231235
巴氏菌1921931
金黃色葡萄球菌2319830
備註(C) 50%乙醇組分無活性
表2暴馬丁香樹皮(A-1) 2%乙醇、"t -2) 5%乙醇、(A-3) 10%乙醇組分抑菌活性
菌種(A -1) 2%乙醇(A -2) 5%乙醇(A -3) 10%乙醇鏈黴素
大腸桿菌—24_32
鏈球菌15171630
沙門氏菌16201935
巴氏菌13161131
金黃色葡萄球菌15142230
結果表明暴馬丁香樹皮提取物組分對大腸桿菌、鏈球菌、沙門氏菌、巴氏菌、金黃色 葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。
通過具體實施實例說明暴馬丁香樹皮提取物組分可作為天然抗菌劑用於食品、藥品等行 業，代替有毒副作用的合成抗菌劑。
權利要求
1.本發明涉及以暴馬丁香Syringa amurensis Rupr.樹皮提取物組分的製備新工藝和新用途。本發明的暴馬丁香樹皮提取物組分對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、巴氏菌、鏈球菌、沙門氏菌均有不同程度的抑制作用，可開發為天然抗菌劑應用於食品、藥品等行業，製備出具有抑菌作用的各種形式的產品。
2. —種製備暴馬丁香樹皮提取物組分的新工藝，其特徵在於該工藝包括以下過程(1) 取暴馬丁香樹皮，挑去雜物，水洗，烘乾或晾乾，粉碎，用8-10倍量10%的乙醇室 溫T浸提10-12h,再超聲lh，溫度為3(TC功率為80W,然後用綢布與濾紙分別過濾-次，得 到濾液；(2) 暴馬丁香樹皮經(1)處理後的濾渣再分別用8倍量與6倍量10%的乙醇重複(1) 步驟各一次，分別得到濾液，合併三次濾液；(3) 將上述(2)濾液回收乙醇，得暴馬丁香樹皮提取物；(4) 將上述(3)暴馬丁香樹皮提取物，上D,。,大孔樹脂柱，用H刀除雜後依次用10%、 30%、 50%、 70%乙醇洗脫，得大孔樹脂乙醇洗脫組分(A) 10%乙醇、(B) 30%乙醇、(C) 50%乙醇、(D) 70%乙醇各組分:(5) 將(4)所得大孔樹脂乙醇洗脫組分(A) 10%乙醇，上JTY反相樹脂柱，用H20除雜 後依次用2%、 5%、 10%乙醇進行洗脫，得JTY反相樹脂乙醇洗脫組分(A-l) 2%乙醇、(A-2) 5%乙醇、(A -3) 10%乙醇各組分。
3. 根據本發明1至2所述的製備暴馬丁香樹皮提取物組分的原料為暴馬丁香6>r//7ga 柳ure"sj's R叩r. 的樹皮。
4. 根據本發明1至2所述的暴馬丁香樹皮提取物糹且分對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、巴 氏菌、鏈球菌、沙門氏菌均有不同程度的抑制作用。
5. 根據本發明1至2所述的暴馬T香樹皮提取物組分，其特徵在於該樹皮提取物組分可 作為天然抗菌劑用於食品、藥品等行業，代替有毒副作用的合成抗菌劑。
全文摘要
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及以暴馬丁香(Syringa amurensis Rupr)樹皮提取物組分的製備新工藝和新用途。取暴馬丁香樹皮，乾燥後剪碎，用8-10倍量10％的乙醇室溫下浸提10-12h後超聲1h，溫度為30℃功率為80W，然後用綢布與濾紙分別過濾一次，濾渣再分別用8倍量與6倍量10％的乙醇重複以上步驟各一次，合併三次濾液，回收乙醇，得暴馬丁香粗提物。將粗提物上D101大孔樹脂柱，用H2O除雜後依次用10％、30％、50％、70％乙醇洗脫，得大孔樹脂乙醇洗脫組分(A)10％乙醇、(B)30％乙醇、(C)50％乙醇、(D)70％乙醇各組分。所得大孔樹脂乙醇洗脫10％組分上JTY反相樹脂柱，用H2O除雜後依次用2％、5％、10％乙醇進行洗脫，得JTY反相樹脂乙醇洗脫組分(A-1)2％乙醇、(A-2)5％乙醇、(A-3)10％乙醇各組分。本發明暴馬丁香樹皮提取物組分對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、巴氏菌、鏈球菌、沙門氏菌均有不同程度的抑制作用，可開發為天然抗菌劑應用於食品、藥品等行業，製備出具有抑菌作用的各種形式的產品。
文檔編號A61P31/04GK101574094SQ200910067148
公開日2009年11月11日 申請日期2009年6月22日 優先權日2009年6月22日
發明者張連學, 蔡恩博, 鄭友蘭 申請人:吉林農業大學