酶輔助的水性脂類提取物的脫乳化作用的製作方法

2023-07-13 03:34:31

專利名稱：酶輔助的水性脂類提取物的脫乳化作用的製作方法
技術領域：
本發明涉及酶輔助從植物或植物組織提取脂類的用途。更特別的，涉 及包含酶的組合物，用於從來自植物的脂類水性提取物中獲得脫乳化的乳 劑，以及針對其用途的改進的方法。
背景技術：
植物來源的脂類，特別是油類，是用於食品加工和工業原料的主要脂 類來源。近來，它受到關注並作為石油化工產品燃料的替代品使用。植物 脂類可以源自植物、灌木或喬木植物的一個或多個部分。在不同的植物中， 根、莖、樹皮、葉、花、種子、果實或其他部分可以作為油的來源。此類 脂類可以機械提取(例如通過施加外壓)，或者化學提取(例如通過有機 或水性溶劑提取方法)，或者通過組合方法提取。
植物油類通常分為精油或固定油。精油類是揮髮油類， 一般源自除植 物種子以外的組織。固定油類，也稱為"脂肪油類"，包括從植物來源衍
生的油類，例如大豆、玉米、菜籽(油菜籽)、向日葵、紅花、花生、 椰子、幹椰子肉、棕櫚、棉籽、Wt、 M、亞麻籽及其它。
已知自油料種子植物獲得的油類可用於食品、食品製品，以^J巴皂、 去垢劑、乳液、潤滑劑、殺蟲劑、油漆、^fr、墨水，和其它工業或消費 產品。雖然大部分油料種子油類是用有機溶劑提取方法提取的，但是，現 在一部分也通過水性提取方法來提取。
使用有機溶劑可以提取更快，更有效，提供更高的油產量。到目前為 止，這是佔主導地位的用於提取的商業方法，例如提取大豆油，用己烷或 其他有機溶劑可提取超過總大豆油的90。/。。然而，此類溶劑會產生重要的 安全問題，包括溶劑的火災或爆炸風險，以及工作人員的暴露風險。溶劑提取方法需要成本高昂的配置有用於處理溶劑的裝置的工廠，並需要安全
性測量。此外，大^L^莫使用有機溶劑也產生了廢液管理的問題。此外，對 於食品加工應用，經過溶劑提取可導致在油料種子剩餘的、被提取過的部
分(例如"粉")中變性的、改性的，或功能減少的蛋白質，降低了該 油料種子此潛在更有價值部分的價值或用途。
近年，發展了從油料種子中提取油類的水性加工方法。參見Freitas 等人，/^//Z^/V/ 99: 333-337， 1997;和Caetano等人，丄"/ /v/s似Z)e//e 5V"似"ze ( msw 79: 165-169,2002。 Freitas等人和Caetano等人都提供了 在水性加工方法中將擠壓和蛋白酶處理相組合以提取油類。水性加工步驟 本質上比有機溶劑提取步驟更安全，因此，在水性提取方法中，資本配置 的初始起步投資顯著減少。然而，與有機溶劑提取相比，水性提取方法一 般導致較低的效率和降低的油產量。
因此，本領域需要改善從植物來源，特別是從油料種子中獲得油類的 水性提取方法的加工步驟。還需要增加此類方法的效率或產量。
發明概述
在本發明的一些方面，提供了用於將水包油乳劑脫乳化的方法，所述 乳劑是從植物組織，特別是油料種子的水性提取中獲得的，例如通過多種 酶的使用。本發明還提供從油料種子中獲得油的方法，其中，所述方法包 括水性提取和所獲得的水包油乳劑的SW脫乳化。本發明還提供源自所述 過程和方法的油，以及包含所述油的組合物，例如食品、消費品和工業原 料。本文還提供了組合物，其包含能夠將水包油乳劑脫乳化的酶，還進一 步包含水包油乳劑。
在一個方面，本發明提供了用於使包含油相和水相的乳劑去穩定化的 方法，其中，所述乳劑是在水性溶劑從油料種子中提取脂類時產生的。方 法包括將乳劑與至少一種酶活性在下述條件下接觸足以使乳劑去穩定化的 一段時間的步驟，所述酶活性至少包括磷脂酶活性或蛋白酶活性或其組合，所述M是允許至少該磷脂酶或蛋白酶或其組合的活性起作用的條件。在 一些優選的實施方案中，水相是乳劑的連續相，油相是乳劑的不連續相。
在另一個方面，本發明提供了用於從油料種子中獲得油的方法。方法
一般包括步驟
(a) 提供含油的油料種子級分；
(b) 將含油的油料種子級分與水性提取劑接觸，形成經提取的油料種 子級分；
(c) 將經提取的油料種子級分分離成水相、水包油乳劑和不可溶相；
(d )在允許酶活性起作用的條件下，將水包油乳劑與至少一種酶活性 接觸足以使乳劑去穩定化的時間；和
(e)將去穩定化的乳劑分離成水相、油相和不可溶相。 方法導致從油料種子中獲得油。在一個實施方案中，含油的油料種子 級分包括細胞，且方法進一步包括在使油料種子級分和水性提取劑接觸前， 破裂細胞的步驟。
本文中還提供了通過上述方法製備的植物來源的油類，以及包含上述 獲得的油的多種食品。
在發明的另一個方面提供了組合物，包括能夠使水包油乳劑去穩定化 的至少一種酶活性；和從含油的油料種子級分的水性溶劑提取中獲得的水 包油乳劑。在一個實施方案中，酶活性至少包括磷脂酶活性或蛋白酶活性， 或一種或多種此類活性的任意組合。本文中還提供了從本文教導的組合物 中分離的源自植物的油類。
另一方面，提供了用於從油料種子級分中獲得植物油的方法，方法包 括步驟
(a )提供組合物，其包括能夠使水包油乳劑去穩定化的至少一種酶活 性，以及水包油乳劑，所述乳劑獲得自對含油的油料種子級分的水性溶劑
提取；
(b) 提供允許酶活性使水包油乳劑去穩定化的條件；和
(c) 將組合物至少分離成水相和脂類相，其中脂類相含有植物油。本文還提供了植物來源的油，所述油包含通過本文公開的方法製備的 植物油，以及提供了包含所製備或獲得的植物油的食品、消費品和工業原 料。還提供根據本文提供的方法製備的蛋白質組合物一一其用作具有改善 功能的蛋白質來源。還提供了包含通過本文教導的方法製備的蛋白質的食 品、消費品和工業原料。
本文還提供了生物燃料或生態燃料，所述燃料包含通過所公開的任何 方法製備的植物油類或蛋白質。
通過下列詳細的說明書、附圖和實施例，將進一步闡述上述和其它方 面，其意在闡述多個實施方案。
附圖簡介
本文中的附圖是用於進一步解釋或闡述此處詳細描述和下文示例的組 合物或方法的不同方面。


圖1:作為酶濃度的函數的回收的油產率。實心圏真菌蛋白酶濃度； 空心方塊LysoMax⑧酶。反應在50X:孵育90分鐘。
圖2:作為pH的函數的回收的油產率。在調整前，油脂的pH是8,0。 圖3:是顯示了從油料種子中獲得油的示例性水性提取過程的流程圖。 圖4:經過酶輔助的水性提取，水性提取後o/w乳劑崩解，以及如上 述酶輔助的脫乳化處理後，特定級分中的油分布。圖例如下具有間斷橫 槓的方塊=對照；具有對角線條紋的方塊=磷脂酶C;具有方片的方塊 -Genencor酶混合劑；具有水平條紋的方塊=凍融處理；實心方塊=95°。熱 處理。
具體實施方式
^專和^孕母裙略河；
EC (或E.C):酶學委員會編號(EC編號)；
Fpa:真菌蛋白酶500,000 ( Genencor- A Danisco Division );
FPb (或FPC ):真菌蛋白酶濃縮物(Genencor- A Danisco Division );HC1:鹽酸； IP3:肌醇三碼酸；
oAv:水包油乳劑(本文中有時也稱為"油脂(cream)");
PIP2: 二磷酸-磷脂醯肌醇；
PLl:溶血磷脂酶(G-ZYME G999 );
PL2:磷月旨酶A (LysoMax );
P6L' Protex61u;
pi:等電點；
w/w:重量比(一^JJi為百分比，如"％w/w"或Vo(w/w))。
定義'
如本文中使用的，"乳劑"包含至少暫時穩定的系統，所述系統包含 至少兩種彼此不是完全混合的、或可溶的材料的物理混合物。本文中使用 的優選乳劑，當使其不受幹擾的靜置時，不會輕易的分離，可以保持相當 長時間的混合狀態。優選的，其在持續的時間段維持穩定，例如大於約l、 2、 4、 8、 12或24小時，甚至更久。
乳劑系統可以包含固體、液體和氣體，優選的，本文中使用的乳劑包 含至少一種脂類相和一種水相，兩者都為液體狀態。乳劑中一種相是連續 的，而其它相*其中從而其它相是不連續。例如，"水包油"乳劑具有 分散在連續水相中的不連續油相，而"油包水"乳劑則具有^t在連續脂 類相或油相中的不連續7]C相。在實踐意義中，不連續相由^t在和包含在 其它相中的小滴組成。因此，不連續相有時也稱為"內"相，類似的，連 續性有時也稱為"外，，相。在一些情況下，乳劑可以轉換，即，連續相和 不連續相可以互換角色，例如水包油乳劑成為油包水乳劑，反之亦然。
應該理解，在本文中術語"水包油，，和"油包水"的使用僅用於描述 性的幫助讀者理解在給定的乳劑系統中，哪種相是連續的，哪種是M的； 而不是在字面上將乳劑限定為油和水。"水"或水相可以包含一種或多種溶質，例如鹽，以及任意數量的其它可溶的或部分可溶的化合物。類似的， "油，，或脂類相可以包含多種脂類或脂溶性化合物。
一些化合物具有穩定乳劑的能力，例如，通過改變連續相和不連續相
之間的表面張力和/或界面張力，通過防止^:的不連續相"滴"聚集或結 合，或者甚至通過增加連續相的粘度。同時具有帶電荷(例如離子)和 不帶電荷(非離子)部分的分子，通常作為乳劑穩定劑。因為它們是兩性 分子，同時具有親脂性和親水性的性質，它們傾向於聚集在兩相之間的界 面上，並控制表面張力。穩定劑的實例包括多種蛋白質、表面活性劑、甘 油、單醯甘油、二醯甘油和磷脂。卵磷脂類是一類已知的磷脂。廣泛的作 為天然乳化劑使用，卵磷脂類包括若干組分，包括磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙 醇胺、磷脂醯肌醇和/或磷脂酸。許多此類穩定劑是天然存在於植物中的， 更特別地位於含有脂類或儲存脂類的植物組織中，例如油料種子和其部分。 在本文的特別優選實施方案中，油料種子是大豆。已知大豆含有大量能夠 穩定乳劑的磷脂類(例如卵磷脂類)和蛋白質。
如本文中使用的，"油"指在室溫下維持液態的一類脂肪(或脂類)。 本文中使用的"植物油"指從植物的任何組織中獲得的任何此類油。本文 中，植物油類還可替換的稱為"植物來源的油類"。在一些實施方案中， 植物油是可食用的，而在其它實施方案中，其不一定是可食用的。 一些油 類向動物例如人外用是合適且安全的，同時其它油類可以是完全不可食用 的，向動物外用也不是安全的。但是，此類油類用於工業方法可以是有價 值的，例如潤滑劑、清潔或拋光產品，或者簡單的作為原料，用於製造需 要脂類作為原材料的其他組合物或產品。例如， 一些脂類可用作燃料或燃 料添加物。目前，燃料的生物學或可再生來源吸引了強烈關注，例如可燃 性燃料，例如生物柴油中使用的脂類。
本文中使用的"油料種子"指任何含油的種子、堅果、核果，或植物 生產的類似產物。所有此類植物，及其種子、堅果或核果都可在本文中使 用。例如，國家可持續農業信息月良務(National Sustainable Agriculture Information Service )列舉了下列用於食物、專業或工業用途的油的來源
ii扁桃、杏仁(apricot kernels)、鱘梨、山毛櫸堅果、越橘、黑醋慄、琉璃 苣、巴西胡桃、金盞花、葛縷子種子、腰果仁、蓖麻籽、柑桔種子、丁香、 可可、咖啡、幹椰子肉(乾燥的椰子)、芫荽、玉米種子、棉籽、接骨木 果、月見草、葡萄籽、落花生、榛子、大麻籽、西蒙德木、亞麻籽、昆士 蘭果、肉豆蔻、瓜子、芥菜籽、楝樹籽、nigerseed、肉豆蔻籽、棕櫚仁、 西番蓮果、美洲山核桃、阿月渾子實、罌粟籽、南瓜子、油菜籽、覆盆子 種子、紅辣椒、野玫瑰果、橡膠籽、紅花籽、沙棘、^#、大豆、大戟、 大蕁麻、向日葵籽、tr叩hoplant、番茄籽或胡桃。本文中還使用多種油料 種子和相關植物，其油含量可作為燃料，例如"生態燃料，，、生物柴油等 而受到關注。此類植物包括但不限於麻瘋樹屬(例如麻瘋樹(/"/ra/ /m (、M"肌)、丄wflAf(/ii/em7s及其栽培品系)；油棕(￡7w、 gw/weerts/s)(例 如油棕(OHpalm)); 油桐(iwto/bn///)(油桐(tung oil tree) 或木油桐(wood oil tree ))、蕘麻(/ /"Viws co柳附wi/s)(蓖麻樹)、力口蓬
香月旨蘇木(CV /7fl〖/^YJT 柴油樹),和7jC黃皮(7V,rtg"AM附/"/7/rtrt^")
(Hongeoiltree，或水黃皮樹，及其栽培品系)。
本文中使用的"含油級分"或"含脂級分"指不論如何獲得的油料種 子或其一部分。在優選的實施方案中，含油級分將包含油料種子的全部或 至少大部分的油(或脂肪或脂類含量)。在其它實施方案中，前處理步驟 可以在獲得級分前從油料種子中去除至少一些，或者甚至大部分的油。因 此，例如，在一些利用大豆作為油料種子原料的實施方案中，"級分"包 含大豆粉或大豆片。優選的，正如本領域所理解的術語，獲得的粉或片是
"全脂"的。但是並不排除將本文提供的方法用於例如部分脫脂的級分， 例如大豆粉或大豆片。經濟因素會提供商業動機，來使用含有至少大部分 脂肪的級分，但是使用公開的方法處理包含少於全油料種子大部分脂肪的 級分，並不存在已知的技術障礙。
對於一些實施方案，含油級分是食物油或工業油的主要來源。目前， 大豆、玉米籽、棉籽和油菜籽，以及向日葵籽、紅花、亞麻籽和花生是食 物油的優選來源。如本文中使用的，"水性溶劑"至少包含水。水性溶劑一般包含其他 組分，例如鹽、緩衝化合物、小分子及其它。只要水性溶劑基本上是均質 水溶液或水懸浮液，就可以存在任何數量和濃度的其他組分。該具有為基 本均質溶液或懸浮液的其他組分的水性溶劑，出於方便以及與本身的溶劑
(例如水)區分，在本文中有時稱為"水性提取劑"。兩個術語在本文 中的定義是同義的。優選的，在水性提取劑或水性溶劑中存在的所有組分 都是在真溶液中。水性溶劑和有機溶劑的區別在於有機溶劑不使用7jc作為 溶劑，術語"有機溶劑"指是有機化合物且含有碳原子的其它大部分溶劑。 與水性溶劑相比，有機溶劑是更易揮發的，且潛在的是易爆的。通常，油 類的有機溶劑提取指使用通過與有機溶劑(例如正己烷或其它己烷類) 直接接觸從油料種子中去除油的任何方法。
本文中使用的"微生物，，指酶活性的來源，例如包括所有的單細胞的 和簡單多細胞的生命形態，包括但不限於細菌、真菌、藻類(微藻和巨藻)、 酵母、原生動物等。優選的來源通常是細菌或真菌，特別是那些歷史上或 經常的作為用於食品加工的酶源，並一般認為是安全的那些生物等。
本文中使用的"酶活性"指由一種或多種催化性蛋白質(酶)催化的 化學反應。特定的酶或酶製劑可以提供一種或多種酶活性。例如，純的酶 能夠催化一種以上的酶促反應(即底物向產物的轉換)，從而可以認為具 有多於一種的"酶活性，，。根據本文的目的，將特定底物轉化為相應一種 或多種產物的能力就是"酶活性，，而不考慮蛋白質的數量或其純度。在許 多情況下，商業酶製品不是生物化學"純"的酶。此類製品可以在一種或 多種物理酶中提供多種酶活性。 一些商業酶製品設計為提供一種以上的酶 活性，為酶製品提供更寬的應用範圍。在加工條件下或在複雜系統(例如 食物基質)中，具有單一酶活性的純酶可能不能提供足夠有用的功能。因 此，出於本文中的目的，"酶活性"與酶不一定是同義的。每種酶活性可 以由一種或多種酶催化，給定的酶或酶製品可以具有一種或多種此類活性。
本文中使用的"柴油填充劑，，包括任何組合物，所述組合物可以作為 柴油或任何石油化工來源的燃料的代替物或代用品使用，或者可以擴寬、稀釋或改善此類柴油或其他石油化工來源燃料的使用效率。如本文中使用 的，"柴油填充劑"可以是部分的或完全的燃料代用品、燃料添加劑，或 替代性燃料來源。"生物柴油"和"生態柴油"是本領域使用的術語，表 示具有以下優勢的此類燃料的實例，包括源自可再生的資源，甚至源自廢 棄的植物油。如本文中使用的，"柴油填充劑"可以適合在標準的燃料燃 燒系統中使用，例如標準的柴油引擎(如柴油卡車、巴士或機動車)，或 可以僅適合在經過特殊改造用於燃燒此類燃料的燃料燃燒系統中使用。此
類燃料可以用於通常使用石油化工燃料的任何目的，例如發電、產熱、 馬達燃料等。根據本文提供的方法或過程所獲得或製備的植物油，可以在 例如食品工業中提供最初用途，並根據上文提供作為燃料的次級用途。因 此認為，通過利用上述公開內容製備和回收的一些植物油，在最終作為燃 料^f吏用前，可用於一種、兩種甚至多種目的。
在多個方面的第 一個方面，提供用於使包括油相和水相的乳劑去穩定 的方法或過程。乳劑衍生自或產自對來自油料種子的脂類的水性溶劑抽提。 乳劑在允許酶活性的條件下，與至少一種酶活性接觸一段時間，所述酶活 性至少包括磷脂酶活性或蛋白酶活性，所述時間足以使乳劑去穩定。
在優選的實施方案中，水相是連續相，油相是不連續相，即，乳劑是 水包油的乳劑。
在一些實施方案中，方法還包括分離步驟，將油相與水相分離。分離 油相與水相的方法是本領域已知的。通常，方法涉及重力或者更優選的超 過重力的力，例如通過物理方式(如離心)施加的力。在一個實施方案中， 乳劑以分批程序離心。在多個實施方案中，用於分離的條件可以包括在酶 處理後調節乳劑至優選的溫度，例如通過加熱。在另一個實施方案中，從 水相中分離油時，連續離心是優選的。連續處理對於大^#作是優選的， 並適合通過滿載(vessel-full)處理材料，例如在貯窖(silos )、槽(tanks )、 大桶等中，或者甚至在連通的連續的此類容器中處理。
優選的，本文中提供的方法改善了乳劑的油產量。熟練的技術人員可 以理解如何監控不同基準的產量。 一般，通過以下比較來獲得產量的比較,例如通過比較使用本文公開的方法的油產量(例如基於未處理的乳劑的 油含量計算的理論最大產量a%)和未使用乳劑接觸酶活性的步驟的水性 提取所獲產量。還可以使用其他的產量基準，例如，與"對照"方法相比， 利用本文7>開方法對油回收的改善。
在優選的實施方案中，乳劑與至少一種酶活性接觸，所述酶活性至少 包括磷脂酶活性或蛋白酶活性。酶的組合或混合物也是合適的，所述組合 或混合物包括上述活性類型的一類或兩類中的一種或多種。而且，來自任 何來源(例如動物、植物或微生物)的此類酶活性都可以考慮用於本文中 的用途，酶活性優選地包括來自哺乳動物胰腺、紫紅鏈黴菌(5&印to/^"s v/》/《"'ww6w)、米麴黴(^4，rg/〃ws ，w)或黑麴黴(」5/7w'〃ma、 w/ger)
的磷脂酶活性。在一個實施方案中，磷脂酶活性來自豬胰腺。
已經驗證了才艮據本文公開的方法，不同的磷脂酶活性對於使乳劑去穩
定是有效的。用於本文目的的磷脂酶包括但不限於磷脂酶A(包括Al 和A2) 、 B (有時也稱為溶血磷脂酶)、C和D。磷脂酶是一類水解磷脂 類(例如磷脂醯膽鹼或磷脂醯乙醇胺)的酶。屬於磷脂酶類的酶分為五大 亞類Al、 A2、 B、 C和D型磷脂酶類。
Al型磷脂酶(E.C. 3丄1.32)優選地水解磷脂類(例如磷脂醯膽鹼或 磷脂醯乙醇胺)的snl酯鍵，產生1-溶血磷脂和羧酸。通常，Al型磷脂酶 需要鈣作為輔助因子。Al型磷脂酶一般比A2型磷脂酶表現出更寬的特異 性。
A2型磷脂酶(E.C. 3.1.1.4 )優選地水解磷脂類(例如磷脂醯膽鹼或磷 脂醯乙醇胺)的sn2酯鍵，產生2-溶血磷脂和羧酸。除了磷脂，A2型磷脂 酶對水解膽鹼衍生物和磷脂表現出一些特異性。通常，AZ型磷脂酶需要鈣 作為輔助因子。
B型磷脂酶(E.C. 3.1.1.5)也已知是溶血磷脂酶。優選地水解2-溶血 磷脂的snl酯鍵，產生甘油磷脂和羧酸。B型磷脂酶還水解1-溶血磷脂的 sn2酯鍵。
15C型磷脂酶(E.C. 3.1.4.3)優選地水解磷脂(例如磷脂醯膽鹼或磷脂 醯乙醇胺)的磷酸鍵，產生相應的二醯甘油和磷酸膽鹼。除了水解磷脂夕卜， C型磷脂酶也作用於溶血磷脂。
D型磷脂酶(E.C. 3丄4.4)優選地水解磷脂(例如磷脂醯膽鹼或磷脂 醯乙醇胺)的磷酸鍵，產生相應的磷脂酸和膽鹼。除了水解磷脂外，D型 磷脂酶也作用於溶血磷脂。
磷脂酶的使用可以是單獨的，或者是使用在相同或不同E.C.類別中的， 並可以來自相同或不同的來源的一種或多種活性的組合或混合物。含有一 種或多種磷脂酶活性的粗酶製品或部分純化的酶製品也適合在本文中的一 些實施方案中使用。商業來源的磷脂酶也適合本文中的用途。例如， Genencor-A Danisco Division (Rochester, NY)提供了分別來自細菌和真菌 來源的LysoMax⑧和G-ZYME G999的磷脂酶。磷脂酶C可以從例如 Sigma ( St. Louis, MO )購買。
在其它實施方案中，酶活性包括蛋白酶活性，例如來自解澱粉芽胞杆 菌(B""〃WS "附>^/~1 7^&附)的蛋白酶活性。在其它實施方案中，酶活 性包括來自植物、動物或微生物來源的一種或多種蛋白酶活性。目前，優 選的蛋白酶活性源自微生物來源，除了上述的解澱粉芽胞桿菌之外，還包 括枯草芽孢桿菌、地衣型芽胞桿菌(及//c/^"/o/w/s)、黑麴黴或米麴黴。 正如磷脂酶，不論是純化的、部分純化的或粗品，包含一種或多種任何E.C. 類別的蛋白酶活性且來自任何來源的組合物或混合物都適合在本文中使 用。在一個實施方案中，蛋白酶活性包括內肽酶。金屬蛋白酶，不論是外 切蛋白酶還是內切蛋白酶，都適合在所公開的方法和組合物中使用。在一 些實施方案中，金屬內切蛋白酶是優選的。在一些實施方案中，真菌蛋白 酶也是適合使用的。許多商業來源的蛋白酶是合適的。Genencor- A Danisco Division (Rochester, NY)提供真菌蛋白酶500,000和真菌蛋白酶濃 縮蛋白酶，均包含中性至酸性穩定的蛋白酶活性，每種都例舉在本文中。 公司還提供Protex6L蛋白酶，也例舉在本文中，其包含細菌蛋白酶活性， 偏愛中性至微鹼性條件。在另一個方面，提供了用於從油料種子中獲得油的方法，包括步驟 (a )提供含油的油料種子級分；
(b )將含油的油料種子級分與水性提取劑接觸，形成經提取的油料種 子級分；
(c)將經提取的油料種子級分分離成7JC相、水包油乳劑和不可溶相； (d )在允許酶活性起作用的條件下，將水包油乳劑與至少一種能去穩 定化乳劑的酶活性接觸足以使乳劑去穩定化的時間；和
(e)將去穩定化的乳劑分離成水相、油相和不可溶相； 從而從油料種子獲得油。
在一個實施方案中，含油的油料種子級分包括細胞，且方法進一步包 括在使油料種子級分和水性提取劑接觸前，破裂細胞的步驟。目前，破裂 細胞的優選方法包括使用機械力。外壓是破裂含油種子細胞的常規方法。 擠壓機的此類用途是本領域已知的，例如單螺杆擠壓機或雙螺杆擠出機都 是有效的。通過測量油回收率或產量，同時變動擠壓參數，例如速度、通 過時間、壓力、溫度、pH等，熟練的技術人員可以方便的確定用於破裂油 料種子中細胞的參數。除了其它的機械方法外，例如，擠壓、滾軋、研磨、 超聲等，破裂細胞的其他方法還包括化學處理或酶處理。
在一些目前優選的實施方案中，水包油乳劑與酶活性接觸，所述酶活 性包含至少來自例如動物、植物或微生物來源的磷脂酶活性或蛋白酶活性。 一種或多種此類酶活性的組合或混合物也明確地包括在本文的使用中。在 一個實施方案中，酶活性包含來自哺乳動物(例如豬、牛、馬、綿羊等) 胰腺的磷脂酶活性，或來自微生物來源的磷脂酶活性，不論是細菌、真菌、 藻類等，例如來自紫紅鏈黴菌、米麴黴或黑麴黴。在優選的實施方案中， 酶可以自這樣的生物體獲得，所述生物體通常認為用於消費品是安全的或 有效的，例如人類食品和動物飼料，以及其他消耗產品例如化妝品和皮膚 護理產品。
在另一個實施方案中，酶活性包含蛋白酶活性，例如來自細菌、真菌 或藻類來源。目前一個優選的蛋白酶活性的細菌來源是解澱粉芽胞桿菌。目前本文中使用的其他優選來源包括例如枯草芽孢桿菌、地衣型芽孢杆 菌、黑麴黴和米麴黴的微生物來源。在一些實施方案中，蛋白酶活性包括 內肽酶，在不同的實施方案中，其可以是金屬蛋白酶。
方法的分離步驟的其中之一或者兩者都可以包括離心步驟。熟練的技 術人員將理解使用離心用於分離不同密度的相，例如所提供方法的乳劑中
存在的油沖目和7K才目。
在一些實施方案中，在分離步驟前，將pH調節至大約3.5至大約5。 此類調節將以多種方式幫助使乳劑去穩定化。所述過程不限於任何一種操 作理論，pH調節可以幫助沉澱一種或多種蛋白質，所述蛋白質可能涉及乳 劑的穩定。可選的，可以使減慢或防止不連續相聚結或聚集的組間的電荷 差異最小化。pH調節還可以通過以下方式發揮作用，所述方式包括^f吏酶在 去穩定化過程中更好的發揮作用一一例如使酶和底物更快的結合，提高 實際的催化作用，或通過幫助產品更快的擴散或脫離活性位點，從而驅動 底物向產品的轉換。
在一個實施方案中，水性提取劑本身包括一種或多種酶。優選的酶包 括一種或多種蛋白酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、葡聚糖酶、磷脂 酶、脂酶、卵磷脂酶或澱粉酶。此類活性可以幫助油的回收，崩解持留所 述油的細胞材料。
在一些情況下，在第一分離步驟時，水性提取劑中的至少一種磷脂酶 活性或一種蛋白酶活性是與水包油乳劑分離的。在本文中，殘存的或共分 離的酶(磷脂酶或蛋白酶)有時稱為遺留活性。遺留活性存在於水包油乳 劑，並且當適合活性的條件提供足夠長時間時，其使乳劑去穩定。首先提 供足夠的酶然後利用合適的處理條件在後續步驟中提供遺留活性的此類方 法，通過一步添加來滿足全部加工過程可以有利於油回收。熟練的技術人 員可以方便地確定水包油乳劑中是否遺留了足夠的酶活性。
在該方面的特定實施方案中，油料種子級分來自大豆、玉米種子、油 菜籽、棕櫚仁、向日葵籽、紅花籽、椰子、花生、棉籽、芝麻籽、亞麻籽、 罌粟籽、扁桃、榛子、胡桃、月見草籽、葡萄籽、大##、黑醋慄種子、覆盆子種子、胡蘿蔔種子、小茴香種子、藍莓種子、越桔(cranberry)種 子、歐芹種子、洋蔥種子、南瓜子、杏仁、芥菜籽、亞麻籽或蓖麻籽。如 上述，認為多個物種可用於或潛在可用於生物柴油和類似的燃料相關用途， 包括例如麻瘋樹屬、油棕、油桐或木油桐、茺麻樹、柴油樹和水黃皮， 以及任何上述的任何栽培品系都認為可在本文中使用。
在一些優選的實施方案中，油料種子級分包括蛋白質級分，其用作食 品、食品成分、食品添加劑或食品填充劑。有時或者經常的情況是，油料 種子的蛋白質級分比油級分價值更高。水性提取方法的一個預期優勢就在 於所留下的經提取殘留是天然的狀態或是更具有功能的狀態，例如通過與 水性溶劑接觸，蛋白質沒有變性或保持了更高的功能性；這對於食品加工 商是更有價值的。不論是作為食物或祠料還是其他用途使用，本文提供的 方法能夠回收沒有暴露於潛在危險的或有害的有機溶劑下的蛋白質級分。 因此，蛋白質更不易變性，且在一些消費者群體中甚至具有更高的消費接 受度。
在一個實施方案中，油料種子級分包括大豆片或大豆粉。優選的，油 料種子級分是"全脂"片或"全脂，，粉。熟練的技術人員將理解"全脂" 是關於例如來自大豆和玉米的油料種子級分這一領域的術語。在某種意義 上，全脂是脫脂的反義詞，所述脫脂是指從例如大豆片、大豆粉或玉米胚 中去除了基本上所有的脂類。熟練的技術人員將理解，本文中提供的方法 不僅適合全脂級分，也適合油料種子的部分脫脂的級分，一一不論是片、 粗粉、胚、粉或其它。
在一些實施方案中，條件包括調節水包油乳劑的pH至約3.5和約5 之間。存在大量方法用於影響pH調節——包括但不限於添加HC1或其他 酸，包括有機酸或其鹽。對於食品用途，此類酸優選是食品成分，或者是 適當的管理部門通常認為在食品中使用是安全的酸。
在優選的實施方案中，與不使用將乳劑接觸酶活性的步驟的水性溶劑 提取相比，本文提供的方法改善了來自油料種子的油產量。在更優選的實 施方案中，油回收接近使用有機溶劑提取所獲得的量。
19在另一個方面，提供了植物來源的油類，所述油類是通過本文中描述 的任何方法製備的。在一個實施方案中，油基本上不含蛋白質、磷脂類或 水性雜質。還提供了含有油的食物產品。
在本文中的另一個方面，提供的組合物包含至少一種能夠使水包油乳
劑去穩定化的酶活性；還包括通過水性溶劑提取含油的油料種子級分所獲 得的水包油乳劑。該組合物是提供的方法中的中間產物。其可用作從水包 油乳劑中提取油的起始材料，所述乳劑是從油料種子的水性溶劑提取中獲 得的。其還可以用作功能性添加劑，直接向食品添加。這些組合物可以幫 助提供高質量的脂類組分，且同時提供高質量的功能性蛋白質和磷脂含量。 由於酶的添加傾向於使乳劑去穩定化，加工者可以發現該組合物具有直接 向處理過程添加的用途。在其它實施方案中，優選的在乳劑去穩定化後， 將組合物分離成至少脂相和7K相，其中酶活性與7jc相分離。如此分離的脂 相和水相，在食品加工中各自作為組分或成分都是有益的。
在優選的實施方案中，酶活性至少包含磷脂酶活性或蛋白酶活性。本 文和上文中提供的酶活性可以包括來自動物、植物或微生物來源的磷脂酶 活性，例如哺乳動物胰腺、紫紅鏈黴菌、米麴黴或黑麴黴。來自豬、馬、 牛或綿羊胰腺的磷脂酶活性是目前優選的動物來源。酶活性還可以，或可 選的包括來自動物、植物或微生物來源的蛋白酶活性。例如，來自細菌來 源或真菌來源的一種蛋白酶，所述細菌例如是解澱粉芽胞桿菌、枯草芽孢 桿菌或地衣型芽胞桿菌，所述真菌例如是黑麴黴或米麴黴。在一些實施方 案中，蛋白酶是內肽酶，例如金屬蛋白酶。
本文中還提供了從上述組合物中分離的植物來源的油類。 在另一個方面，提供了從油料種子級分中獲得植物油的方法。方法包 括步驟
(a )提供組合物，其包括能夠使水包油乳劑去穩定化的至少一種酶活 性，以及水包油乳劑，所述乳劑獲得自對含油的油料種子級分的水性溶劑
提取；
(b)提供允許酶活性起作用使水包油乳劑去穩定化的條件；和(C)將組合物至少分離成水相和脂相，所述脂相含有植物油。
在一些實施方案中，步驟(b)中的條件包括pH，所述pH約是存在 於水包油乳劑中的蛋白質的等電點。目前優選的pH是在約3.5和約5之間。
在不同的實施方案中，分離步驟還產生了不可溶的部分，優選地其包 括蛋白質。如上述，與通過有機溶劑提取油料種子植物產生的結果相比， 水性溶劑提取方法可以提供保留有更高功能性的蛋白質。這些具有更高功 能性的蛋白質具有更大的價值，通常比源自油料種子中的油更有價值。
本文還提供了植物來源的油類，其包括通過上述方法，或本文中^Hf 的任何其它方法製備的植物油。還提供了包含通過這些方法製備的植物油 的食品，以及包含如此製備的植物油的工業原料和消費產品。
還提供了通過本文中討論的方法製備的蛋白質組合物，以及包含通過 本文公開的方法或過程製備的蛋白質的食品、消費品，以及工業原料。
實施例 實施例1
從經擠壓和酶處理的全脂大豆片中獲得的水包油乳劑的脫乳化作用 錄的謬逸蛋冷躇;^礴腐舉
表1-1概括了以500mg濃度對水包油乳劑(2% w/w水包油乳劑)測 試過的酶。使用約1.2kg擠壓過的全脂大豆片作為起始材料。使用裝備了 Lab-Stirrer LR 400C (Fisher Scientific)的控溫水浴，在速度150rpm，將溫 度調整至50。C後，用2NNaOH將pH調節至7.0，添加0.5% (w/w)(基於 大豆片重量)的Multifect Neutral (Genencor陽A Danisco Division),反應 的溫度和pH在上述值維持lhr。孵育l小時後，將pH升高至8.0, 15分 鍾。通過在SLA-3000固定角轉頭(Sorvall RC5BPlus， Newtown， CT )中 3，000g離心15分鐘，去除不可溶性殘留物。離心後，將水包油乳劑(包括 任何分離的油)和水性級分收集到漏鬥中，在4。C儲存過夜。在分層後， 收集水包油乳劑和游離的(分離的)油級分，並用於酶促脫乳化作用。用 於使水包油乳劑脫乳化的^反應，在對於每種酶優化的溫度和pH下孵育90分鐘。根據實驗i殳計(參見表l-2腳註中的描述)，單獨地、組合地 或順序地加入酶。
表l-l:測試的酶的總結和鑑別。
酶活性活性來源使用的縮寫孵育溫度(匸)PH
磷脂酶.LysoMax⑧酵PL2408
G-ZYME G999PL1504.5
溶血彿脂酶
蛋白酶:Protex 6'LP6L508
真菌蛋白酶500,000FPa504.5
真菌蛋白酶濃縮物FPb508
結果
表l-2中顯示了結果。在該第一組實驗中的酶濃度相對較高(500mg, 即2%重量重量比)。選擇兩種酶用於確定酶濃度對水包油乳劑去穩定化 作用的影響。選擇了真菌蛋白酶濃縮物(FPC )和LysoMax⑧酶，都在pH8 下發揮作用。
當酶獨立地添加時，不論酶的本質，基本上所有的油都釋放了 (回收 油的產率等於 100% )。由於用單種蛋白酶或磷脂酶處理獲得了接近100% 的油釋放，無法獲得關於酶組合的優勢的結論。然而，令人驚訝的是，溶 血磷脂酶(PL1)的作用效果與磷脂酶A2 (PL2)相同。該結果是預料之 外的，因為認為PL1將PL1的底物轉化為相應產物的活性對乳劑的去穩定 化不及PL2將底物向產物相應轉化的活性。從另一方面來看，認為PL1 的潛在底物對乳劑穩定性的影響不及PL2的底物。
表1-2:酶對水包油乳劑脫乳化作用的影響。_
酶(s) 回收油的產率(％)在油回收後，剩餘乳劑中油
的百分比(％)PL2 100.7 3.0
PL1 97.7 4.8
P6L 104.2 7.7
FPa 87.7 4.8
FPb 95.6 7.2
酶的組合 *在一趟的礙
PL2+PL1*亂5 3.1
PL2+PFb* 105.0 2.5
PL2+P6L* 96.5 6.2
順序添加的酶
PL2-PL1 106.
3.7
注意每次測試使用約20g水包油乳劑。加入五百(500) mg的酶。* 反應溫度是40X:。關於縮寫，參見表l-l。
結果注意(A)回收油的產率(％)計算為齊冗孵育後回收的油(g) 與初始水包油乳劑中的油(g)的比例，表示為百分比；(B)在油回收後， 殘留乳劑中的油(％)計算為剩餘乳劑中殘留的油與初始水包油乳劑中的 油的比例，表示為百分比。
躇^^^"遊庠/(產,銀參詢 將酶(各自為0.5， 5， 50或500mg)加入到20g水包油乳劑的樣品中。 酶量分別相當於0.002、 0.02、 0.2和2(w/w)。/o的百分比。圖1圖示了結果。 圖1顯示，產率曲線分別是每種酶，真菌蛋白酶濃縮物和LysoMax⑧的濃 度的函數。所提供的每個數據點都是兩次獨立實驗的平均值。對照(即不添加酶活性的水包油乳劑)獲得了 44%的回收油產率。當 添加0.2。/。FPC時，回收了 88%的油。相反，使用相同濃度的LysoMax 酶，只回收了48%的油。因此，雖然隨著酶濃度的升高，單種蛋白酶或者 磷脂酶活性就能夠改善產率，在低濃度時，真菌蛋白酶濃縮物比LysoMax 酶能更有效的使油回收最大化。
實施例3: pH對來自大豆的水包油乳劑脫乳化作用的影響 用鹽酸將乳劑的pH調節至理想的點。在離心前，在50。C攪拌乳劑10 分鐘，分離並回收油。從圖2提供的圖可見，在pH值和回收的油產率之 間具有直接的關係。在pH為約4和約4.5之間獲得了最高產率，該pH範 圍與大豆蛋白質的pl相對應。約4.2-4.3的pH表現為從乳劑中回收油的 最優化條件。在高於約6的pH回收的油(約40%或更低)基本低於pH 小於約5.5時獲得的結果(約50%或更高)。觀察到，反應曲線令人聯想 到作為pH的函數的獲得的那些大豆蛋白質的溶解度。
實施例4:用擠壓和水性提取對全脂大豆片的提取
使用雙螺杆擠出機(American Leistritz)優化了全脂大豆片的擠壓條 件。確定在100。C擠壓，螺杆轉速為100rpm,溼度為約14-15%提供了優 化的結果。
將全脂大豆片直接擠壓到水中。通過添加基於幹固體重的0.5% w/w 的酶(Multifect Neutral, Genencor- A Danisco Division )，用Sl^步驟處 理水性大豆片混合物。在50。C攪拌孵育混合物lhr。在孵育後，通過約3000 xg的離心分離混合物，產生不可溶的級分和水性上清液。水性上清液包 含油("游離油")、水包油乳劑和水性級分。因此，全部油或者是游離
的或者位於乳劑中。在低溫下(低於約iox:)放置過夜，通過重力分離遊
離油和水性級分。首先去除較重的水性級分，然後將油和乳劑收集至一起。 圖3是顯示所用過程的流程圖。熟練的技術人員將理解，在保留所提供的 方法和組合物的本意的情況下，方法中的一些步驟是可以改變的。然後，將乳劑進行酶促脫乳化處理。選擇用於該步驟的酶是磷脂酶。
在下列條件下，用兩種磷脂酶活性中的任一種處理乳劑樣品
酶處理1:磷脂酶C:酶獲得自Sigma(產品編號P-7633-500UN, 10-50 單位/mg， Sigma， St. Louis， MO )。在約18-20g上述油和乳劑混合物中添 加約15mg酶。在37。C和pH7下孵育90分鐘，孵育過程中提供攪拌。
酶處理2:磷脂酶使用按1:1比例組合的LysoMax⑧和G-ZYME G999 酶(Genencor- A Danisco Division )。在約18-20g油和乳劑混合物中添加 約500mg的每種酶。在50。C和約pH5下孵育90分鐘，孵育過程中進行攪 拌。
在孵育後，通過在約1000xg離心，分離去穩定化的油和水包油乳劑 混合物。收集油。結果表示為佔擠壓後大豆片中總油的百分比的回收油。 基於Mojonnier酸水解方法(AOAC Method 922.06;其全文通過引用整合 到本文中)測量擠壓後大豆片中的總油量。參見AOAC， Official Methods of Analysis,第15版，Association of Official Analytical Chemists, Washington, DC。
結果在擠壓和水性提取後，進行脫乳化作用，平均的油回收率在酶 處理1中是73%，在酶處理2中是68%。在p<0.05水平時，沒有統計學 顯著的差異。利用標準線性才莫型，PROCGLM， SAS統計學軟體(8.2版， SAS Institute, Inc., Cary， N.C.)確定統計學計算。當4吏用有機提取方法時， 例如使用己烷， 一般的油回收接近總油量的約97%。水性提取方法一般提 取乳化形態的油。當在水性提取前使用擠壓或其它前處理時，約10-15%的 總油量作為不是乳化形態的游離油回收。
還對i^脫乳化步驟和已知的其它破壞乳化的物理或機械方法(例如 加熱和重複的凍融循環)進行了比較。熟練的技術人員將理解，這些處理 不僅比,步驟更難以實施，而且還是高能耗的。實際測試的處理如下
25對照處理將擠壓後大豆片的水性提^取物離心，用分液漏鬥將離心上 清液進一步分級，產生剩餘的o/w乳劑("油脂，，餾分)、可溶性餾分("脫 脂"餾分)和游離的油。
磷脂酶C處理將大豆片的水性提取物離心。然後用0.075% (w/w) 磷脂酶C在37。C和pH7處理上清液級分卯分鐘。用分液漏鬥將磷脂酶C 處理的上清液進一步分級，產生剩餘的油脂、脫脂和游離油級分(如上述)。
Genencor酶混合劑處理將大豆片的水性提取物離心。然後用2.5% (w/w) LysoMax⑧和2.5% (w/w) G陽ZYME G999在50。C和pH5處理上清液 90分鐘。用分液漏鬥將酶處理的上清液進一步分級，產生剩餘的油脂、脫 脂和游離油級分。
凍融處理將擠壓後大豆片的水性提取物離心，使離心的上清液經過 3輪凍融循環。然後，用分液漏鬥將處理過的上清液進一步分級，產生剩 餘的油脂、脫脂和游離油級分。
95。C熱處理將擠壓後大豆片的水性提取物離心。將離心的上清液加 熱至95。C,並在該溫度下保持30分鐘，然後冷卻至25t:。然後，用分液 漏鬥將處理過的上清液進一步分級，產生剩餘的油脂、脫脂和游離油級分。
上述比較試驗的結果顯示在圖4中。
說明書全文引用了多種出版物，包括專利、公開的申請、技術文獻和 學術文章。出於任何目的，這些被引用的出版物都通過引用全文整合到本 文中。
權利要求
1、使包含油相和水相的乳劑去穩定化的方法，所述乳劑在從油料種子中水性溶劑提取脂類中產生，方法包括將乳劑與至少一種酶活性在至少允許磷脂酶活性或蛋白酶活性的條件下接觸足以使所述乳劑去穩定化的一段時間的步驟，所述酶活性至少包括磷脂酶活性或蛋白酶活性。
2、 權利要求l的方法，其中水相是連續相，油相是不連續相。
3、 權利要求l的方法，還包括將油相與水相分離。
4、 權利要求3的方法，其中分離步驟包括離心。
5、 權利要求l的方法，與不使用乳劑接觸酶活性的步驟的水性提擬目 比，所述方法改善了來自油料種子的油產量。
6、 權利要求l的方法，其中乳劑與至少一種酶活性接觸，所述酶活性 至少包括磷脂酶活性或蛋白酶活性，或其組合。
7、 權利要求6的方法，其中酶活性包括來自哺乳動物胰腺、紫紅鏈黴 菌、米麴黴或黑麴黴的磷脂酶活性。
8、 權利要求7的方法，其中酶活性包括來自豬胰腺的磷脂酶活性。
9、 權利要求6的方法，其中酶活性包括來自解澱粉芽胞桿菌、枯草芽 孢桿菌、地衣型芽胞桿菌、黑麴黴或米麴黴的蛋白酶活性。
10、 權利要求6的方法，其中蛋白酶活性包括內肽酶。
11、 權利要求10的方法，其中內肽酶是金屬蛋白酶。
12、 權利要求3的方法，其中在分離步驟前，將pH調節至約3.5和約 5之間。
13、 從油料種子中獲得油的方法，包括步驟 (a )提供含油的油料種子級分；(b) 將舍油的油料種子級分與水性提取劑接觸，形成經提取的油料種 子級分；(c) 將經提取的油料種子級分分離成水相、水包油乳劑和不可溶相；(d )在允許酶活性作用的條件下，將水包油乳劑與至少一種酶活性接觸足以使乳劑去穩定化的時間；和(e)將去穩定化的乳劑分離成水相、油相和不可溶相； 從而從油料種子中獲得油。
14、 權利要求13的方法，其中含油的油料種子級分包括細胞，方法進 一步包括在油料種子級分和水性提取劑接觸前，破裂細胞的步驟。
15、 權利要求14的方法，其中破裂步驟包括使用機械力。
16、 權利要求14的方法，其中破裂步驟包括擠壓。
17、 權利要求13的方法，其中水包油乳劑與酶活性接觸，所述酶活性 至少包括磷脂酶活性或蛋白酶活性，或其組合。
18、 權利要求17的方法，其中酶活性包括來自哺乳動物胰腺、紫紅鏈 黴菌、米麴黴或黑麴黴的磷脂酶活性。
19、 權利要求18的方法，其中酶活性包括來自豬胰腺的磷脂酶活性。
20、 權利要求17的方法，其中酶活性包括來自解澱粉芽胞桿菌、枯草 芽孢桿菌、地衣型芽胞桿菌、黑麴黴或米麴黴的蛋白酶活性。
21、 權利要求20的方法，其中蛋白酶活性包括內肽酶。
22、 權利要求21的方法，其中內肽酶是金屬蛋白酶。
23 、權利要求13的方法，其中分離步驟的任何一步或全部都包括離心。
24、 權利要求23的方法，其中在分離步驟前，將pH調節至約3.5和 約5之間。
25、 權利要求13的方法，其中水性提取劑包括一種或多種酶。
26、 權利要求25的方法，其中酶包括一種或多種蛋白酶、纖維素酶、 半纖維素酶、果膠酶、葡聚糖酶、磷脂酶、脂酶、卵磷脂酶或澱粉酶。
27、 權利要求26的方法，其中酶至少包括磷脂酶活性或蛋白酶活性， 且水性提取劑中至少一部分所述酶活性分離到水包油乳劑中並使水包油乳 劑去穩定化。
28、 權利要求13的方法，其中油料種子級分來自大豆、玉米種子、油 菜籽、棕櫚仁、向日葵籽、紅花籽、椰子、花生、棉籽、芝麻籽、亞麻籽、罌粟籽、扁桃、榛子、胡桃、月見草籽、葡萄籽、大麻籽、黑醋慄種子、 覆盆子種子、胡蘿蔔種子、小茴香種子、藍莓種子、越桔種子、歐齊種子、 洋蔥種子、南瓜子、杏仁、芥菜籽、亞麻籽、蓖麻籽或麻瘋樹屬。
29、 權利要求28的方法，其中油料種子級分包括可用作食品、食品成 分、食品添加劑或食品補充劑的蛋白質級分。
30、 權利要求28的方法，其中油料種子級分包括大豆片或大豆粉。
31、 權利要求30的方法，其中油料種子級分是全脂片或全脂粉。
32、 權利要求13的方法，其中條件包括將乳劑的pH調節至約3.5和 約5之間。
33、 權利要求13的方法，其與不使用乳劑接觸酶活性的步驟的水性溶 劑提取相比，增加了得自油料種子的油產量。
34、 通過權利要求1的方法製備的植物來源的油。
35、 包含權利要求34的油的食品。
36、 權利要求34的油，其基本上不含蛋白質、磷脂或水性雜質。
37、 糹且合物，包含至少一種能夠使水包油乳劑去穩定化的酶活性；和從水性溶劑提取含 油的油料種子級分所獲得的水包油乳劑。
38、 權利要求37的組合物，其中酶活性至少包括磷脂酶活性或蛋白酶 活性，或其組合。
39、 權利要求38的組合物，其中酶活性包括來自哺乳動物胰腺、紫紅 鏈黴菌、米麴黴或黑麴黴的磷脂酶活性。
40、 權利要求39的組合物，其中酶活性包括來自豬胰腺的磷脂酶活性。
41、 權利要求38的組合物，其中酶活性包括來自解澱粉芽胞桿菌、枯 草芽孢軒菌、地衣型芽胞桿菌、黑麴黴或米麴黴的蛋白酶活性。
42、 權利要求41的組合物，其中蛋白酶活性包括內肽酶。
43、 權利要求42的組合物，其中內肽酶是金屬蛋白酶。
44、 從權利要求37的組合物分離的植物來源的油。
45、 從油料種子級分中獲得植物油的方法，包括步驟(a )提供組合物，其包括能夠使水包油乳劑去穩定化的至少一種酶活 性，以及水包油乳劑，所述乳劑獲得自對含油的油料種子級分的水性溶劑 提取；(b) 提供允許酶活性起作用而使水包油乳劑去穩定化的條件；和(c) 將組合物至少分離成水相和脂相，所述脂相含有植物油。
46、 權利要求45的方法，其中步驟(b)中的條件包括pH，所述pH 約是存在於水包油乳劑中的蛋白質的等電點。
47、 權利要求46的方法，其中pH是在約3.5和約5之間。
48、 權利要求46的方法，其中分離步驟還產生了不可溶的部分。
49、 權利要求48的方法，其中不可溶的部分包括蛋白質。
50、 植物來源的油，其包含通過權利要求45的方法製備的植物油。
51、 食品，包含通過權利要求45的方法製備的植物油。
52、 工業原料，包含通過權利要求45的方法製備的植物油。
53、 消費品，包含通過權利要求45的方法製備的植物油。
54、 通過衝又利要求49的方法製備的蛋白質組合物。
55、 食品，包含通過權利要求49的方法製備的蛋白質。
56、 消費品，包含通過權利要求49的方法製備的蛋白質。
57、 工業原料，包含通過權利要求49的方法製備的蛋白質。
58、 柴油填充劑，包含通過權利要求1或權利要求45的方法製備的植 物油。
全文摘要
本申請公開了用於使水包油乳劑去穩定化的組合物和方法，所述乳劑獲得自植物油的水性溶劑提取。方法包括使用一種或多種酶活性，所述酶活性包括磷脂酶和蛋白酶活性。方法可用於改善從油料種子中提取油，以及從這類油料種子中獲得更理想的蛋白質。
文檔編號B01D11/02GK101610824SQ200780047776
公開日2009年12月23日 申請日期2007年12月4日 優先權日2006年12月22日
發明者B·P·拉穆索爾, C·E·格萊茨, C·張, C·派內, J·吳, L·A·詹森, P·伯施巴赫, S·容 申請人:丹尼斯科美國公司;愛荷華州研究基金會公司