一種檢測四羧基苯基卟啉的方法
2023-07-13 06:48:16 2
一種檢測四羧基苯基卟啉的方法
【專利摘要】本發明公開一種檢測四羧基苯基卟啉的方法，該方法包括如下步驟：向待檢測液中加入作為共反應劑的K2S2O8，然後對待檢測液進行電化學發光掃描。四羧基苯基卟啉在共反應劑K2S2O8的作用下，可產生穩定的且強的電化學發光信號，在四羧基苯基卟啉濃度為2.0×10-7mol·L-1～1.0×10-5mol·L-1範圍內具有良好的線性關係，檢出限為7.0×10-8mol·L-1。
【專利說明】一種檢測四羧基苯基卟啉的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於化合物檢測領域，具體涉及一種檢測四羧基苯基卟啉的方法。
【背景技術】
[0002]卟啉及其金屬配合物廣泛存在於自然界中，如肌紅蛋白、血紅蛋白中的鐵卟啉、葉綠素中的鎂卟啉、維生素B12中的鈷卟啉等，它們與生命活動密切相關，被稱為「生命的顏料」。因此，對生物體內卟啉化合物的檢測對於卟啉症以及其它卟啉相關病症的診斷、環境汙染的監測等具有重要的意義，也是化學研究者一直以來高度關注的一個問題。四羧基苯基卟啉是重要的水溶性卟啉化合物之一，在分析化學、分子識別、探索光合作用機理、提高光合作用效率等方面有重要應用，已引起人們的關注。目前文獻報導的卟啉化合物的檢測方法主要有:分光光度法、螢光法、高效液相色譜法、質譜法、色譜-質譜聯用法，毛細管電泳分離-螢光檢測法、薄層色譜法、螢光狹線法和磁圓二色法等方法，但這些方法都不夠快速簡便，而且儀器系統的操作和維護比較複雜，測試的費用也比較高，得不到普及推廣。因此，發展快速簡便、費用較低，而且靈敏的卟啉檢測方法非常重要。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是克服現有檢測四羧基苯基卟啉存在的問題，提供一種快速、便宜的檢測四羧基苯基卟啉的方法。
[0004]本發明實現上述目的所採用的技術方案如下:
一種檢測四羧基苯基卟啉的方法，包括如下步驟:向待檢測液中加入作為共反應劑的K2S2O8，然後對待檢測液進行電化學發光掃描。
[0005]進一步，待檢測液中K2S2O8的濃度為l-50mmol/L，優選為20-30mmol/L。
[0006]本發明發現四羧基苯基卟啉(TCPP)在共反應劑K2S2O8的作用下，可產生穩定的且強的電化學發光信號，利用TCPP的該電化學發光性質可以檢測TCPP本身，或者將TCPP作為電化學發光試劑用來檢測一些對TCPP的發光強度有影響的物質，如胺類物質。
[0007]如四羧基苯基卟啉定量檢測:電化學發光掃描得到發光強度，再通過發光強度與四羧基苯基卟啉濃度的標準曲線，即可得出相應的待檢測液中四羧基苯基卟啉的濃度。在四羧基苯基卟啉濃度為2.0Xl(T7mol.171?1.0Xl(T5mol.L—1範圍內具有良好的線性關係，檢出限為7.0Xl(T8mol.L'
【專利附圖】
【附圖說明】
[0008]圖1為不同工作電極下的電化學發光圖。
[0009]圖2為不同共反應劑下的電化學發光圖。
[0010]圖3為不同K2S2O8濃度下的電化學發光圖。
[0011]圖4為不同pH值下的電化學發光圖。
[0012]圖5為不同TCPP濃度下的電化學發光圖。【具體實施方式】
[0013]為了更清楚地說明本發明的內容，下面結合附圖和具體的實施例對本發明再作進一步的說明。
[0014]本發明在樣品液中加入共反應劑K2S2O8,從而使四羧基苯基卟啉(全稱:5，10，15，20-四(4-羧基苯基)卟啉，縮寫:TCPP, CAS號=14609-54-2)產生強的電化學發光信號，且該發光信號具有良好的穩定性和重現性。
[0015]本發明的電化學發光測試是在MP1-A型毛細管電泳-電化學發光分析儀(西安瑞邁電子高科技有限公司)上進行。
[0016]電化學發光掃描檢測時米用傳統的三電極系統，即以玻碳電極或金電極作為工作電極,鉬絲和Ag/AgCl (飽和KCl)電極分別作為對電極和參比電極。電位均以Ag/AgCl (飽和KCl)電極為參比值。
[0017]採用賽多利斯Sartorius basic pH meter PB-10酸度計(上海人和科學儀器有限公司)測定樣品液的pH。
[0018]石英管加熱式自動雙重純水蒸餾器(1810B，上海亞太技術玻璃公司)用於製備二次蒸餾水。
[0019]檢測步驟如下:
I)用三氧化二鋁打磨粉(0.30 μ m，0.05 μ m,上海辰華儀器試劑公司)依次對玻碳電極、金電極進行拋光，再用95v%的乙醇、二次蒸餾水超聲清洗，氮氣吹乾，備用。
[0020]2)用移液槍移取100 μ L含TCPP的溶液，加入到1.5 mL的離心管中，再移入700 μ LpH為7的0.1 mo 1.L—1 PBS緩衝溶液，搖勻，再向溶液中移入200 μ L K2S2O8溶液，混勻，得到樣品液。
[0021]3)移取400 μ L上述樣品液於樣品池中，用MP1-A型毛細管電泳_電化學發光分析儀，在-0.2V到-1.5V之間以循環伏安法進行電化學發光掃描。
[0022]4)進行定量檢測時，可用系列標準濃度的TCPP溶液重複步驟2)和3)，先繪製濃度-發光強度諏峰值)的標準曲線，再測定待檢測液的電化學發光強度諏峰值)，由標準曲線得出待檢測液中TCPP的濃度。
[0023]在樣品液中TCPP 濃度為 4Χ 10_5 mol.IAK2S2O8 濃度為 0.02 mo I.L'pH=7 時，工作電極分別為金電極(a)、玻碳電極(b)的電化學發光圖，如圖1所示，可見，採用玻碳電極作為工作電極效果更好。
[0024]當樣品液中的K2S2O8用H2O2或水(即不加共反應劑)替代時，以玻碳電極為工作電極，電化學發光掃描結果如圖2所示，樣品液的TCPP濃度為4X 10_5 mol.L' pH為7，其中，a為含有0.02 mol.L-1 K2S2O8, b為含有0.02 mol.L-1 H2O2, c為不含有共反應劑。可以看出，不加K2S2O8,或者加入的是H2O2，均沒有電化學發光信號，只有加入K2S2O8才產生了強的、穩定的發光信號。
[0025]在樣品液中TCPP濃度為4X10_5 mol.L' pH為7時，以玻碳電極為工作電極，K2S2O8濃度由lX10~3mol噸―1調節到5X IO^2 mol.L—1的電化學發光圖，如圖3所示，其中，圖中的點由左向右分別對應K2S2O8的濃度為IXlO-3 mol.L-1，5X10~3 mol.L-1，1X10—2mol.L \ 2X 10 2 mol.L \ 3X 10 2 mol.L \ 4X 10 2 mol.L \ 5X 10 2 mol ^L10 可以看出，K2S2O8濃度升至3X 10_2 mol.L—1後，電化學發光強度趨於穩定。
[0026]在樣品液TCPP濃度為4X 10_5 mol.IAK2S2O8濃度為0.02 mol.l-1時，以玻碳電極為工作電極，將樣品PH由6調節至11時的電化學發光圖如圖4所示，其中，a為pH=6.0,b 為 pH=7.4, c 為 ρΗ=8.1, d 為 ρΗ=9.4，e 為 ρΗ=10.7，f 為 ρΗ=11.0。可以看出，在 ρΗ=6_11時均能獲得到穩定的、強的電化學發光強度，表明，在共反應劑K2S2O8的作用下，TCPP的電化學發光可能與質子無關。
[0027]圖5是TCPP標準濃度由2.0 X 10 —7 mol.L—1變化至1.0 X 10 —5 mol.L—1的電化學發光圖，其中，K2S2O8濃度為0.02 mol.?ΛρΗ為7，工作電極為玻碳電極，插圖為相應的發光強度與TCPP濃度的標準曲線，1=371.88c-49.24，R2=0.996，可見在TCPP濃度為2.0XlO-7mol -T1~1.0Xl(T5mOl.ΙΛ發光強度與濃度具有良好的線性關係，檢出限為7.0Χ10-8mo I .L 1 。
【權利要求】
1.一種檢測四羧基苯基卟啉的方法，包括如下步驟:向待檢測液中加入作為共反應劑的K2S2O8，然後對待檢測液進行電化學發光掃描。
2.根據權利要求1所述檢測四羧基苯基卟啉的方法，其特徵在於，待檢測液中K2S2O8的濃度為 l-50mmol/L。
3.根據權利要求2所述檢測四羧基苯基卟啉的方法，其特徵在於，待檢測液中K2S2O8的濃度為 20_30mmol/L。
4.四羧基苯基卟啉作為電化學發光試劑在電化學發光檢測中的應用。
【文檔編號】G01N21/76GK104020159SQ201410188007
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年5月6日 優先權日:2014年5月6日
【發明者】盧小泉, 羅荻, 胡一平, 王雪槐, 蔣媛, 杜嬌, 劉靜, 王世霞 申請人:西北師範大學