柚皮苷在製備抗抑鬱藥物中的應用的製作方法

2023-07-13 00:21:56

專利名稱：：柚皮苷在製備抗抑鬱藥物中的應用的製作方法
技術領域：
：:本發明涉及醫藥
技術領域：
，確切地說它是柚皮苷在製備抗抑鬱藥物中的應用。
背景技術：
：:柚皮苷(Naringin)為二氫黃酮苷類化合物，為芸香科柑橘屬植物次生代謝產物，廣泛分布於很多植物中。研究表明，柚皮苷在降血脂、鎮靜、抗氧化、抗腫瘤、抗真菌、抗動脈粥樣硬化等方面具有較強的生物活性。中國專利號03113605.2公丌了名稱為"柚皮苷用於製備治療急、慢性支氣管炎的藥物"的發明專利，專利號03126908.7公開了名稱為"柚皮苷在製備支持性治療非典型性肺炎藥物中的應用"的發明專利，專利號200510101404.0公開了名稱為"柚皮苷在製備防治流感藥物中的應用"的發明專利，專利號200810300599.5公開了名稱為"柚皮苷在製備口腔護理保健品中的應用"的發明專利，公開了柚皮苷在製備治療急、慢性支氣管炎、支持性治療非典型性肺炎、防治流感藥物和口腔護理保健品中的應用。未見柚皮苷在製備抗抑鬱方面藥物中的新用途。柚皮苷結構式本發明提供了柚皮苷抗抑鬱的新用途。柚皮苷及其藥學上可接受的經水解或酶解生成的苷元和次生苷等用於預防或治療焦慮狀態或抑鬱狀態。含柚皮苷及其藥學上可接受的經水解或酶解生成的苷元和次生苷等或以其作為活性成分組成的藥用組合物，包括與藥用載體組合，用於預防或治療抑鬱狀態。其中所述病體為哺乳動物。柚皮苷及其藥學上可接受的經水解或酶解生成的苷元和次生苷等，或以其作為活性成分組成的藥用組合物可通過口服、非腸道或局部途徑給藥，給藥劑型可以是片劑、膠囊、溶液、懸浮液、注射液、滴注液、凍乾粉等藥學上可接受的劑型。本發明的優點是本發明揭示了柚皮苷具有抗抑鬱的作用，為其應用提供了新的途徑。且毒性小，無常規抗抑鬱藥的興奮不安、便秘、尿閉、眩暈、嗜睡、震顫等缺點
發明內容:具體實施例方式下面的動物實驗是對本發明的進一歩詳細說明，但並不意味著對本發明的任何限制。實例l.自主活動興奮性實驗1.實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重200220g，SPF級標準，將動物稱重，編號，選擇健康的大鼠共30隻。按體重大小排序，用隨機分組法分成3組，每組10隻。設空白對照組、陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。2.樣品來源和處理(1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9M。(2)陽性對照組取鹽酸氟西汀用生理鹽水定容於容量瓶中，鹽酸氟西汀濃度為1.8mg/ml。給藥劑量為7.2mg/kg。G)柚皮苷樣品組:取柚皮苷適量，用生理鹽水定容於容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品純度為95%以上，給藥劑量為8mg/kg。3.實驗方法(開場實驗)採用底面為正方形的敞箱,長IOOcm，寬IOOcm，高50cm,底面用黑線分為100個面積相近的扇形。實驗時將大鼠放在敞箱正中心,以大鼠5min內水平運動越格數(至少3爪跨過邊界)評價其運動性;以垂直運動直立次數(兩前爪離開地面)評價其探究性。通過比較柚皮苷給藥組給藥前後自主運動變化情況來考察柚皮苷是否有自主興奮作用，同時以給予生理鹽水的空白組和給予陽性對照藥鹽酸氟西汀的陽性對照組來進行隨行對照。3.實驗過程給藥前通過觀察大鼠在敞箱內的活動，記錄5min內水平運動越格數以及垂直運動直立的次數；在給藥7天後，觀察大鼠在敞箱內的活動，記錄5min內水平運動越格數以及垂直運動直立的次數。將各組實驗數據用SPSS統計軟體進行處理，水平運動變化率和垂直運動變化率計算方法如下水平運動變化率=(給藥7天後水平運動越格數-給藥前水平運動越格數)/給藥前水平運動越格數><100%垂直運動變化率=(給藥7天後垂直運動越格數-給藥前垂直運動越格數)/給藥前垂直運動越格數x1000/。將各組實驗數據進行t檢驗，考察其是否存在顯著性差異。4.實驗結果經統計，各樣品組自主運動情況見表l。表l.給藥前與給藥7天後各樣品組開場實驗自主運動變化情況tableseeoriginaldocumentpage5運用SPSS軟體，進行t檢驗，分別比較空白組、柚皮苷組和鹽酸氟西汀組給藥前後自主運動情況，與空白組和陽性對照藥鹽酸氟西汀組一樣，柚皮苷組水平運動和垂直運動在給藥前後均無顯著性差異(P>0.05)，表明在給予柚皮苷後對中樞神經系統無自主興奮作用。實例2.慢性應激大鼠開場實驗1.實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重200220g，SPF級標準，將動物稱重，編號，選擇健康的大鼠共40隻。按體重大小排序，用隨機分組法分成5組，每組10隻。設空白對照組、病理模型組、陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。2.樣品來源和處理(1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9M。(2)病理模型組生理鹽水，NaCl含量0.9。Z。。(3)陽性對照組取鹽酸氟西汀用生理鹽水定容於容量瓶中，鹽酸氟西汀濃度為1.8mg/ml，給藥劑量為7.2mg/kg。(4)柚皮苷樣品組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容於容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品純度為95%以上，給藥劑量為8mg/kg。3.實驗方法(1)大鼠慢性應激模型的製備慢性應激作為一種非損傷性刺激，與人類心身性疾病的過程有相似性，慢性應激模型現實驗的模擬了人們日常生活中遇到的"應激狀態"，對於篩選特異性的臨床抗抑鬱藥有很好的適用性，本實驗正是以慢性應激模型為基礎，給予柚皮苷以及陽性對照藥，考察柚皮苷的抗抑鬱作用。在大鼠慢性應激模型的製備中，儘量使應激刺激符合不可預測性的特點，連續28d按每天l或2種刺激的強度，交替給予大鼠以下刺激:禁食24h、禁水24h、限制攝食2h、配對飼養12h、傾籠45。2h、通宵照明12h、潮溼飼養(200ml水加到100g墊料)12h、頻閃(100min/s)lh、白噪聲(110dB)lh、強迫遊泳(水溫4。C)5min、制動lh,製備慢性應激模型。各樣品組應激及給藥情況如卜'A.空白對照組不給予刺激，給予生理鹽水。B.病理模型組給予刺激冋時給予生理鹽水。C.陽性對照組給予刺激同時給予鹽酸氟西汀用生理鹽水溶解配製而成的藥液。D.柚皮苷樣品組給予刺激同時給予柚皮苷用生理鹽水溶解配製而成的藥液。(2)開場實驗採用底面為正方形的敞箱，長100cm，寬100cm,高50cm，底面用黑線分為100個面積相近的扇形。實驗時將大鼠放在敞箱正中心，以大鼠5min內水平運動越格數(至少3爪跨過邊界)評價其運動性；以垂直運動直立次數(兩前爪離開地面)評價其探究性。通過比較給藥前後柚皮苷給藥組與病理模型組自主運動變化率(包括水平運動變化率和垂直運動變化率)來考察柚皮苷是否具有抗抑鬱作用，同時以給予生理鹽水的空白組和給予陽性對照藥鹽酸氟西汀的陽性對照組進行隨行對照。4.實驗過程給藥前通過觀察大鼠在敞箱內的活動，記錄5min內水平運動越格數以及垂直運動直立的次數；在慢性應激28天後，觀察大鼠在敞箱內的活動，記錄5min內水平運動越格數以及垂直運動直立的次數。水平運動變化率和乖直運動變化率計算方法如下水T運動變化率=(應激28天後水平運動越格數-應激前水平運動越格數)/應激前水平運動越格數x100。/。垂直運動變化率=(應激28天後垂直運動越格數-應激前垂直運動越格數)/應激前垂直運動越格數x100。/。結果得到正數為增加，負數為下降，將各組實驗數據用SPSS統計軟體處理，進行t檢驗，考察柚皮苷組與病理模型組自主運動情況是否存在顯著性差異。5.實驗結果經統計，各樣品組自主運動情況見表2。表2慢性應激模型大鼠各樣品組開場實驗自主運動變化情況水平運動變化率垂直運動變化率樣品組(％)(%)空白組3.3-25.2病理模型組-36.2-77.7鹽酸氟西汀組-4.4-44.4柚皮苷組-5.2-16.4運用SPSS軟體，進行t檢驗，病理模型組與空白組在給藥前後自主運動情況(水平運動變化率和垂直運動變化率)比較存在極其顯著的差異(屍O.Ol)，表明在慢性應激的狀態下，大鼠在沒有藥物幹預下其自主運動動情況受到了影響，水平運動變化率和垂直運動變化率均明顯下降，提示慢性應激模型製備成功；柚皮苷組、陽性對照藥組與病理模型組在給藥前後自主運動情況比較(水平運動變化率和垂直運動變化率)均存在極其顯著的差異，表明柚皮苷和陽性對照藥鹽酸氟西汀均能對由於慢性應激導致的大鼠水平運動變化率和垂直運動變化率下降有顯著的抵抗作用，提示柚皮苷具有抵抗屮於抑鬱引起的自主活動減少的藥理活性。實例3.慢性應激大鼠體重增加率測定實驗1.實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重200220g，SPF級標準，將動物稱重，編號，選擇健康的大鼠共40隻。按體重大小排序，用隨機分組法分成5組，每組10隻。設空白對照組、病理模型組、陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。2.樣品來源和處理(1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9。/。。(2)病理模型組生理鹽水，NaCl含量0.9。/0。(3)陽性對照組取鹽酸氟西汀用生理鹽水定容於容量瓶屮，鹽酸氟西汀濃度為1.8mg/ml，給藥劑量為7.2mg/kg。(4)柚皮苷樣品組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容於容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品純度為95%以上，給藥劑量為8mg/kg。3.實驗方法(1)大鼠慢性應激模型的製備大鼠慢性應激模型的製備和各樣品組應激及給藥情況均同實例2。(2)體重增加率實驗大鼠在遭受慢性應激刺激後，將出現食慾減退的表現，進食的減少將導致體重增加速率的下降，因此，通過比較柚皮苷組與病理模型組在給藥前後體重增加率的變化情況，可以考察柚皮苷對抗由於大鼠慢性應激剌激導致的消化系統功能受損而引起的體重增加速率下降；考察柚皮苷組與病理模型組給藥前後各組大鼠體重增加率的差異是否具有顯著性，同時給予生理鹽水的空白組和給予陽性對照藥鹽酸氟西汀的陽性對照組進行隨行對照。4.實驗過程在給藥前分別稱量各組大鼠體重，慢性應激刺激28天後，再次稱量各組大鼠體重，考察7柚皮苷組與病理模型組給藥前後各組大鼠體重增加率。大鼠體重增加率的計算方法如下體重增加率=(應激28天後大鼠體重-應激甜大鼠體重)/應激^大鼠體重400%將各組實驗數據用SPSS統計軟體處理，進行t檢驗，考察柚皮苷組與病理模型組大鼠體重增加率是否存在顯著性差異。5.實驗結果經統計，各樣品組大鼠體重增加率情況見表3。表3慢性應激^莫型大鼠各樣品組大鼠體重增加率變化情況樣品組體重增加率(％)空白組63.2病理模型組27.8鹽酸氟西汀組42.9柚皮苷組43.2運用SPSS軟體，進行t檢驗，病理模型組與空白組在給藥前後休重增加率比較存在極其顯著的差異(屍O.Ol)，表明在慢性應激的狀態下，大鼠在沒有藥物幹預下其消化系統功能受到了影響，體重增加速率明顯低於空白組，同時提示慢性應激模型製備成功；柚皮苷組、陽性對照藥組與病理模型組在給藥前後體重增加率比較均存在極其顯著的差異(戶O.Ol)，表明柚皮苷和陽性對照藥鹽酸氟西汀均能對由於慢性應激導致的大鼠體重增加速率下降有顯著的抵抗作用，提示柚皮苷具有抵抗由於抑鬱引起的消化系統功能失常的藥理活性。實例4.慢性應激大鼠蔗糖偏嗜度測定實驗1.實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重200220g，SPF級標準，將動物稱重，編號，選擇健康的大鼠共40隻。按體重大小排序，用隨機分組法分成5組，每組10隻。設空白對照組、病理模型組、陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。2.樣品來源和處理(1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9。/。。(2)病理模型組生理鹽水，NaCl含量0.9。/。。(3)陽性對照組取鹽酸氟西汀用生理鹽水定容於容量瓶中，鹽酸氟西汀濃度為1.8mg/ml，給藥劑量為7.2mg/kg。(4)柚皮苷樣品組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容於容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品純度為95%以上，給藥劑量為8mg/kg。83.實驗方法(1)大鼠慢性應激模型的製備大鼠慢性應激模型的製備和各樣品組應激及給藥情況均同實例2。(2)蔗糖水偏嗜度實驗大鼠在遭受慢性應激刺激後，將出現興趣減退的表現，本實驗在進行慢性應激前首先給大鼠進行蔗糖水偏嗜訓練，建立其對糖水的偏好，在進行慢性應激刺激後，未給抗抑鬱藥物的大鼠會因興趣的缺失導致對庶糖水偏嗜度的下降，因此，通過比較柚皮苷組與病理模型組在給藥前後蔗糖水偏嗜度變化情況，可以考察柚皮苷對抗由於大鼠慢性應激刺激導致的興趣缺失；考察柚皮苷組與病理模型組給藥前後各組大鼠蔗糖水偏嗜度變化率之間是否具有顯著性，同時以給予生理鹽水的空白組和給予陽性對照藥鹽酸氟西汀的陽性對照組進行隨行對照。4.實驗過程在給藥前先對大鼠進行學習訓練:禁食禁水，只給予P/。蔗糖水48h;蔗糖偏嗜度測量訓練結束後正常食水飼養3d,再禁食禁水23h，然後讓大鼠自由飲用2瓶不同的水，其中一瓶為1%蔗糖水，一瓶為自來水。進行lh的飲水量(g)測量，按公式計算蔗糖偏嗜度。大鼠適應環境l周后按蔗糖偏嗜度把40隻大鼠均衡分為4組:慢性應激刺激28大後，再次測量大鼠蔗糖水偏嗜度。同時計算蔗糖偏嗜度變化率蔗糖偏嗜度=蔗糖水飲用量/(蔗糖水飲用量+自來水飲用量)xlOO%蔗糖偏嗜度變化率=(應激28天後蔗糖偏嗜度-應激前蔗糖偏嗜度)/應激前蔗糖偏嗜度xlOO%將各組實驗數據用SPSS統計軟體處理，進行t檢驗，考察柚皮苷組與病理模型組大鼠蔗糖偏嗜度變化率是否存在顯著性差異。5.實驗結果經統計，各樣品組大鼠蔗糖偏嗜度變化率情況見表4。運用SPSS軟體，進行t檢驗，病理模型組與空白組在給藥前後蔗糖偏嗜度變化率比較存在極其顯著的差異(屍O.Ol)，表明在慢性應激的狀態下，大鼠在沒有藥物幹預下導致了其對原有建立的興趣的缺失，蔗糖偏嗜度變化率明顯低於空白組，同時提示慢性應激模型製備成功；柚皮苷組、陽性對照藥組與病理模型組在給藥前後蔗糖偏嗜度變化率比較均存在極其顯著的差異(PO.Ol)，表明柚皮苷和陽性對照藥鹽酸氟西汀均能對由於慢性應激導致的大鼠體重興趣缺失症狀有顯著的抵抗作用，提示柚皮苷具有抵抗由丁抑鬱引起與興趣缺失相關的腦部功能失常的藥理活性。表4.慢性應激模型大鼠各樣品組大鼠蔗糖偏嗜度變化率蔗糖偏嗜度變化率樣品組(％)^空白組iT病理模型組—12.3鹽酸氟西汀組4.9柚皮苷組4.6實例5.慢性應激大鼠排尿量變化測定實驗1.實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重200-220g，SPF級標準，將動物稱重，編號，選擇健康的大鼠共40隻。按體重大小排序，用隨機分組法分成5組，每組10隻。設空白對照組、病理模型組、陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。2.樣品來源和處理(1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9。/。。(2)病理模型組牛理鹽水，NaCl含量0.9。/。。(3)陽性對照組取鹽酸氟西汀用生理鹽水定容於容量瓶中，鹽酸氟西汀濃度為1.8mg/ml，給藥劑量為7.2mg/kg。(4)柚皮苷樣品組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容於容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品純度為95%以上，給藥劑量為8mg/kg。3.實驗方法(1)大鼠慢性應激模型的製備大鼠慢性應激模型的製備和各樣品組應激及給藥情況均同實例2。(2)排尿量變化測定實驗研究表明，下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA軸)參與抑鬱症的發病機制，下丘腦是調節內分泌激素的高級中樞。下丘腦有分泌激素的功能，室上核的MgC細胞主要分泌抗利尿激素，它作用於腎臟，增加水分的重吸收，減少水分的排出，因此，本實驗通過觀察應激前後大鼠排尿量的變化可以在一定程度上反映HPA軸的亢進程度，通過比較柚皮苷組與病理模型組在給藥前後排尿量變化率，可以考察柚皮苷對抗由於大鼠慢性應激刺激導致的HPA軸亢進所導致的排尿量減少的作用；考察柚皮苷組與病理模型組給藥前後各組大鼠排尿量變化率之間是否具有顯著性，同時以給予生理鹽水的空白組和給予陽性對照藥鹽酸氟西汀的陽性對照組進行隨行對照。4.實驗過程在給藥前分別收集各組大鼠12h所產生的尿液，慢性應激刺激28天後，再次收集各組大鼠12h所產生的尿液，考察柚皮苷組與病理模型組給藥前後各組大鼠排尿量變化率。計算時以每100g大鼠體重計，計算方法如下排尿量變化率=(應激28天後每1OOg大鼠體重12h排尿量-應激前每1OOg大鼠體重12h排尿量)/應激前每100g大鼠體重12h排尿量x100%結果得到正數為增加，負數為下降，將各組實驗數據用SPSS統計軟體處理，進行t檢驗，考察柚皮苷組與病理模型組大鼠排尿量變化率是否存在顯著性差異。5.實驗結果經統計，各樣品組大鼠排尿量變化率情況見表5。表5慢性應激模型大鼠各樣品組大鼠排尿量變化率樣品組排尿量變化率(％)空白組^病理模型組-30.2鹽酸氟西汀組-2.9柚皮苷組-17.7運用SPSS軟體，進行t檢驗，病理模型組與空白組在給藥前後排尿量變化率比較存在極其顯著的差異(P<0.01)，表明在慢性應激的狀態下，大鼠在沒有藥物幹預下導致了其由於HPA軸功能亢進而產生排尿量減少的症狀，排尿量變化率明顯低於空白組，同時提示慢性應激模型製備成功；柚皮苷組、陽性對照藥組與病理模型組在給藥前後排尿量變化率比較均存在顯著的差異(屍<100%4.實驗結果柚皮苷對MAO-A活性的抑制作用見表6。表6不同濃度柚皮苷對MAO-A活性的抑制作用C(嗎/ml)3.125^^^Inhibitionrate(0/o)34.2052.5067.2077.0078.2089.7095.90結果表明，對MAO-A活性抑制率達到50%時柚皮苷的濃度為5.82叫/ml，顯示了其具有顯著的抑制MAO-A活性的作用，提示柚皮苷具有抗抑鬱藥理活性。將柚皮苷和藥學上可接受的經水解或酶解生成的苷元和次生苷組成的藥用組合物，還可以包括與藥學上常用的藥用載體組合製備成常用的製劑，如片劑、膠囊、溶液、懸浮液、注射液、滴注液等藥學上可接受的劑型。可採用口服、非腸道或局部途徑給藥。1權利要求1.柚皮苷或其藥學上可接受的經水解或酶解生成的苷元或次生苷在製備抗抑鬱藥物中的應用。2.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於藥物劑型為片劑、膠囊、溶液、懸浮液、注射液、滴注液或凍乾粉針等。全文摘要本發明公開了柚皮苷在製備抗抑鬱藥物中的應用。所述的藥物劑型為片劑、膠囊、溶液、懸浮液、注射液、滴注液等藥學上可接受的劑型。該組合物是由柚皮苷和藥學上可接受的經水解或酶解生成的苷元和次生苷組成的，包括與藥用載體組合製備成各種藥物劑型。該藥物毒性小，無常規抗抑鬱藥的興奮不安、便秘、尿閉、眩暈、嗜睡、震顫等缺點。文檔編號A61K31/7042GK101485674SQ200910009139公開日2009年7月22日申請日期2009年2月20日優先權日2009年2月20日發明者張宏武,李書啟,蘇志恆,鄒忠梅申請人:中國醫學科學院藥用植物研究所